石蜡切片法四染色、封藏一、实验原理1染色细胞

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,实验十五 石蜡切片法（四） 染色、封藏,一、实验原理,1.,染色,：细胞和组织的不同结构之所以能被染成各,种不同的颜色，是由于染料对它们所起的物理与化学,综合作用的结果。,(1) 物理作用：如渗透作用、吸收作用、吸附作用等。,(2) 化学作用：是因为细胞内含有酸性和碱性物质可,分别与染料中的阳离子和阴离子互相结合，这种反应,使组织细胞染上颜色。,以常用的苏木精-伊红对染法为例：细胞核内含有酸,性物质，易与碱性染料苏木精中有染色作用的阳离子结,合，细胞核被染上蓝色。细胞质含有碱性物质，易与酸,性染料伊红中有染色作用的阴离子结合，细胞质被伊红,染上粉红色。,2,封藏,：封藏是使已经透明的材料保存在适合折光率,的封藏剂中，使材料能在显微镜下清晰的显示出来，,并能长期保存。,二、试剂与器材,1.,试剂：各级酒精（50%、 70%、 85%、 95%、,100%）、1/2二甲+1/2无水乙醇、二甲苯、,埃利希氏苏木精染液、1%曙红水溶液、,中性树胶.,2.器材： 镊子、 解剖针、 染色缸、显微镜。,三、实验程序,1. 染色的一般方法,由于要染的切片包在石蜡之中，而所用的染色剂又,常常为水溶液，因此在染色之前，必须再度复水，石,蜡切片在二甲苯中溶去石蜡，经过各级酒精，下降至,水，经染色后需再脱水，上升到二甲苯透明然后封藏。,苏 木 精伊 红 （简称 H.E）对染法,(1) 二甲苯脱蜡5-10min。,(2) 二甲苯与纯酒精等量混液5min。,(3) 纯酒精，95%、85%、70%、50%酒精各2min。,(4) 蒸馏水2min。,(5) 埃利希氏苏木精染色液20-30min。,(6) 水洗(换几次，共约5min)。,(7) 1%盐酸酒精分化数秒钟(如染色合适，此步可取消)。,(8) 自来水洗数秒至1min。,(9) 氨水中“蓝化”34s。,(10) 蒸馏中漂洗5min(换一次)。,(11) 1%伊红水溶液15min。,(12) 70%酒精数秒。,(13) 80%、95%、纯酒精(2次）各2min。,(14) 纯酒精与二甲苯等量混合液5min。,(15) 二甲苯510min。,(16) 封藏: 封藏于中性树胶中。,2. 封藏的方法,在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从,二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在,切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再,进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，,稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下，,避免产生气泡。,四、注意事项,1、脱蜡应彻底；,2、水洗时水流不能太急；,3、“分色”、“蓝化”时间要掌握好；,4、脱水要彻底；,5、适量滴加封藏剂。,五、实验结果,细胞核蓝色，细胞质粉红色。,六、思考题,在染色、封藏过程中容易出现哪些不正常现象？,应如何解决？,附：冰冻切片法,冰冻切片法具有制片速度快并能完整保存细,胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等）的优,点，常用于临床上的病理快速诊断及细胞化学的,制片。,一、操 作 程 序,1. 取 材：取新鲜的组织。,2. 固 定：组织固定于10%中性福尔马林,冰冻切片。,3. 切 片： (1) 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度，调整切片角度，安装切片刀。,(2) 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到,冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。,(3) 将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移,近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷,板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出,后染色观察。,4. 染色显示脂类的苏丹黑B法：,(1)组织固定于10%中性福尔马林或10%钙福尔马林液，,冰冻切片。,(2) 于70%酒精略洗。,(3)苏丹黑B染液5-15分钟。,(4) 70%酒精洗去多余染料。,(5) 稍水洗。,(6) 甘油明胶或阿拉伯糖胶封盖。,结果：脂滴染为蓝至黑色。,