a色谱理论与气相色谱法

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,色谱法分析法,第一节 概述,第二节 色谱理论基础,第三节 气相色谱法,1,第一节 概 述,色谱法（,Chromatography,）又称“色谱分析”、“色谱分析法”、“层析法”，是一种分离和分析方法,一、色谱法简介,1901,年由俄国植物学家茨维特（,Tswett),提出,最初的认识：分离植物中的色素等有色物质,现代：不再局限于有色物质，也用于分离各种无色物质,2,茨维特使用的色谱原型装置，用来分离植物叶片中的色素。,固定相：,固定于管子中的填充物（碳酸钙）；,流动相：,将色素提取物置于管子上端，靠重力往下流，同时用,石油醚,淋洗；石油醚携带试样混合物流过固定相。,色谱柱：,管子及填充物,叶绿素,A,叶黄素,胡萝卜素,3,色谱分离原理：,当,流动相,中携带的,混合物,流经,固定相,时，混合物中组分与固定相发生,相互作用,。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与,固定相,之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的,分配平衡,，使得各组分在固定相中停留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。,两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础。,4,二、色谱法分类,1,、按两相物理状态分类,气相色谱（气体作流动相），气固色谱、气液色谱,液相色谱（液体作流动相），液固色谱、液液色谱,5,2,、按固定相的形式分类,柱色谱,：固定相装在色谱柱中,(,填充柱色谱和毛细管色谱,),纸色谱,：以多孔滤纸为载体，以吸附在滤纸上的水为固定相,薄层色谱,：以涂渍在玻璃板或塑料板上的吸附剂粉末制成薄层作固定相,6,3,、按分离过程中物理化学原理分类,吸附色谱：,吸附剂表面对不同组分的物理吸附性能差异,分配色谱,：不同 组分在两相中有不同的分配系数,离子交换色谱,：利用离子交换原理,排阻色谱,：利用多孔性物质对 不同大小分子的,过滤,作用,亲和色谱法,：利用与亲和性差异实现分离,按其它原理：,凝胶色谱,，类似排阻色谱，,渗透,原理,超临界流体色谱：,特殊流动相,7,三、色谱法的特点,（,1,）分离效率高复杂混合物，有机同系物、异构体。,（,2,）灵敏度高 可以检测出,10,-6,10,-9,g,的物质。,（,3,）分析速度快,一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。,（,4,）应用范围广 几乎所有的化学物质。,不足之处：,被分离组分（未知物）的定性较为困难。,8,四、色谱分离过程及有关术语,1,、色谱分离过程,A,B,色谱柱,检测器,记录仪,流动相,9,2,、色谱常用术语,色谱图（色谱流出曲线）,试样中的各组分经色谱柱分离后，随流动相依次进入检测器，检测器将各组分浓度的变化转换为电信号，在记录仪上记录为检测器响应随时间的变化的微分曲线，称为色谱流出曲线。,10,（,1,）色谱峰,组分从色谱柱流出，检测器对该组分的响应信号随时间变化所形成的峰形曲线。,特点：当进样少，组分浓度低时，呈高斯分布,11,（,2,）基线,在正常操作条件下，仅用流动相通过色谱柱时，检测器响应信号随时间变化的曲线称为基线。,特点：稳定的基线应为平行于横轴的直线。,Base line,12,（,3,）色谱峰高,色谱峰顶点到基线的垂直距离（高度）称为色谱峰高。,h,13,（,4,）色谱峰的区域宽度,色谱峰的区域宽度是组分在色谱柱中谱带扩张的函数，可以反映色谱柱的分离效能。在能够将组分分开的情况小，峰的区域宽度越窄越好。,度量色谱峰的区域宽度通常有三种方法：,（,i,）标准偏差,：它是,0.607,倍峰高处色谱峰宽度的一半,(EF/2),0.607h,2,E,F,14,（,ii,）半高峰宽,W,1/2,：峰高一半处对应的色谱峰宽,(GH),W,1/2,2.354,G,H,h/2,15,（,iii,）,色谱峰底宽,W,b,：色谱峰两侧拐点作切线与基线交点间,的,距离,(IJ),。,W,b,4,I,J,W,b,16,（,5,）保留值,试样各组分在色谱柱中保留行为的量度。,它反映了组分与固定相之间相互作用的大小,保留时间,t,R,保留体积,V,R,17,（,i,）保留时间,t,R,：试样从进样开始到柱后出现峰极大值所需的时间。相应于试样到达柱末端的检测器所需的时间。,18,（,ii,）死时间,t,0,：不被固定相保留（吸附或溶解）的组分从进样到色谱图上出现峰最大值所需的时间。,t,0,19,（,iii,）调整保留时间,t,R,：,扣除死时间后的保留时间,t,R,t,R,t,0,(iv),保留体积,V,R,：指从进样到出现某组分的色谱峰最大值时所通过流动相的体积。,若色谱柱出口处流动相流量为,F,0,（,ml/min,），则,V,R,t,R,F,0,（,v,）死体积,V,0,：死时间内通过色谱柱流动相的体积,V,0,t,M,F,0,V,0,：实际上是色谱柱内流动相所占的体积。,20,（,vi,）调整保留体积,V,R,：,V,R,V,R,V,0,（,vii,）,相对保留值,2.1,：在相同操作条件下，两组分的调整保留值之比。,21,讨论：,2.1,只与柱温及固定相的性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关。色谱法中，特别是气相色谱法中，广泛使用的定性数据；,2.1,是调整保留值之比，而不是保留值之比；,可表示色谱柱的选择性，,2.1,越大，两组分的,t,R,值相差越大，越易分离；当,2.1,1,时，重叠。,保留值又是色谱分离过程热力学性质的重要参数；,22,从色谱流出曲线，可以得到许多重要信息,（,1,）,色谱峰数目,可以判断试样中所含组分的最少个数。,（,2,）,色谱峰保留值,（或位置）,可以进行定性分析。,（,3,）,色谱峰下的面积或峰高,可以进行定量分析。,（,4,）,色谱峰的保留值及其区域宽度,是评价色谱柱 分离效能的依据。,（,5,）,色谱峰两峰间的距离,是评价固定相和流动相 选择是否合适的依据。,23,第二节 色谱理论基础,24,如某,A,、,B,两个组分的试样,A,B,B,A,要使两组分完全分开，必须满足,（,1,）相邻两个组分分开的距离要明显，也就是说两个组分的保留值要有明显的区别。,（,2,）色谱峰的区域宽度：要窄。区域扩宽的速率应小于区域分离的速率，,25,B,A,作为一个色谱理论，应研究这两个方面：,（,1,）组分在柱中移动的,速率,；,（,2,）组分在移动过程中,区域变宽的程度及其影响因素,。,26,一、塔板理论（,plate theory),（以气,-,液色谱为例）,1,、分配平衡：塔板理论又称平衡理论，也就是说色谱过程可以看成是组分在流动相和固定相之间的分配平衡过程。,A,mobile,A,stationary,（,1,）,分配系数,K,：,在一定温度、压力下，组分在两相间分配达到平衡时的,浓度比,，称为分配系数，用,K,表示，即：,27,分配系数,一定温度下，组分的分配系数,K,越大，即在液相中的浓度大（在液相中停留的时间长），出峰越慢；,试样一定时，,K,主要取决于固定相性质，选择适宜的固定相可改善分离效果；,每个组份在各种固定相上的分配系数,K,不同，试样中的各组分具有不同的,K,值是色谱分离的基础；,某组分的,K = 0,时，即不被固定相保留，最先流出。,28,（,2,）,分配比,k,：,在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相中的,质量之比,，称为分配比，用,k,表示，即：,29,分配比,k,和分配系数,K,之间的关系：,其中：,l,：液相；,g,：气相；,m,：质量；,C,：浓度；,V,：体积,30,讨论：,影响因素：柱温、柱压；,K,与,V,无关，而,k,与固定液的体积又关（,V,l,),；,分配比,k,越大，组分在固定液中的量越多，相当于柱的容量越大，故,k,又称容量因子；,与保留值的关系,;,当某一组分的色谱峰最高点出现时，说明该组分恰好有一半的量洗脱在的流动相中刚好流出柱子（体积,V,R,），其余一半则留在柱内，即留在柱内的流动相（体积为,V,g,）和固定相（体积为,V,l,）中，根据物料等衡原理：,31,调整保留体积,V,R,与分配系数成正比,。是色谱过程的基本方程，将反映,色谱行为的保留值,（,V,R,、,V,0,、,V,R,）与反映物质性质的,热力学常数,K,联系起来。,32,容量因子,k,是,调整保留时间和死时间之比,，即表示溶质分子花费在固定相中的时间比在流动相中长多少倍。,某组分的,k,越大，保留时间越长，反之亦然。,33,（,3,）色谱基本保留方程（气液色谱）：,色谱柱确定后，,V,g,和,V,l,即为定值，分配系数,K,不同的组分保留值不同，因而在色谱图上有不同位置的色谱峰。,色谱分离的热力学基础,。,34,2.,塔板理论（,plate theory),：,（,1,）塔板模型：将色谱柱假想为一个精馏塔，色谱柱中的固定相形象化为一系列连续的、相等体积的塔板。每一块塔板的高度称理论塔板高度,H,（板高）。,精馏塔模型,35,将色谱分离过程比作蒸馏过程，直接引用处理蒸馏过程的概念、理论和方法来处理色谱过程，即将连续的色谱过程看作是许多小段平衡过程的重复。,36,（,2,）塔板理论的假设：,（,i,）在每一块塔板上被分离组分在两相（气液）间很快达到平衡，然后随载气一个塔板一个塔板的方式向前移动。,对于一根柱长为,L,的色谱柱，则组分在柱中达到平衡的次数,n,为：,n=L/H,n,称为理论塔板数，,H,为每一块塔板的高度。与精馏塔一样，色谱柱的柱效随理论塔板数,n,的增加而增加，随板高,H,的增大而减小,;,37,（,ii,）载气（流动相）进入色谱柱，不是连续的而是脉动式的，每次进气为一个塔板体积；,（,iii,）试样开始时都加在第,0,号塔板上，且试样沿色谱柱方向的扩散（纵向扩散）可忽略不计；,（,iv,）分配系数在各塔板上是常数。,38,（,3,）塔板理论的内容：,（,i,） 当组分在柱中的平衡次数，即理论塔板数,n50,时，可得到基本对称的峰形曲线。对于气相色谱，,n,约为,10,3,10,6,，流出曲线趋近正态分布曲线。,（,ii,）试样进入色谱柱后，只要各组分在两相间的分配系数有微小差异，经过反复多次的分配平衡后，可获得良好的分离。,（,iii,）由塔板理论可导出,n,与半峰宽度或峰底宽度的关系：,39,讨论：,（,i,）,t,R,一定时，峰宽越小，说明,n,越大（,H,越小），色谱柱的效能越高（柱效）。,（,ii,）同一色谱柱，采用不同物质计算可得到不同的理论塔板数。,（,iii,）在实际工作中，从上述两式计算出的,n,和,H,并不能充分反映柱效，因为采用,t,R,，没有扣除死时间，因为,组分在,t,0,时间内不参与柱内分配。,有时候,n,尽管很大，但色谱柱的分离效果并不好，,需引入有效塔板数和有效塔板高度：,40,注意：,由于同一根色谱柱对不同组分的,n,eff,不一样，在评价色谱柱柱效时，要注明是什么物质，也要注明柱温、柱压。,例,1,：已知某组分峰,W,b,40s,，,t,R,=400s,。计算理论塔板数,n.,例,2,：已知一根,1,米长的色谱柱，,n,eff,1600,块，组份,A,在柱上的调整保留时间为,100s,，试求,A,峰的半峰宽和,H,eff,。,41,（,4,）塔板理论的成功与局限：,成功：（,i,）定量地说明了组分在色谱柱中的移动速率；,（,ii,）解释了流出曲线的形状；,（,iii,）提出了计算和评价柱效能高低的常数。,局限,：,（,i,）,只能定性地给出,H,的概念，不能解释,H,受哪些因素的影响,;,（,ii,）,排除了一个重要参数,流动相的速度,u,，因而无法解释柱效与流速关系，更无法提出降低板高的途径,（不能说明在不同流速下，可以测得不同的理论塔板数）。,（,iii,）,做出了四个与实际不相符的假设，,没有考虑组分在柱中受到的动力学因素的影响：如扩散，传质阻力等，不能解释色谱峰变宽的原因。,42,二、速率理论（,rate,theory),：,为了解决塔板理论所不能解决的问题，,1956,年荷兰学者范第姆特（,Van Deemter,）提出了速率理论。（气液色谱为例）。,内容要点：吸收了塔板理论的概念，并把影响塔板高度的动力学因素结合进去，定量地解释了影响塔板高度的各种因素，导出了塔板高度,H,与载气线速度,u,的关系,(u,L/t,0,),：,43,其中：,A,、,B,、,C,为常数，分别代表涡流扩散项、分子扩散系数和传质阻力系数 。上式即为范第姆特方程式的简化式。由此式可见影响,H,的三项因素：涡流扩散项、分子扩散项和传质阻力项。在,u,一定时，只有,A,B,C,较小时，,H,才能较小，柱效才能较高，反之则柱效较低，色谱峰将扩张。,44,1,、涡流扩散项,A,什么叫涡流？,无阻力平流,有阻力涡流,45,在填充柱中，当组分随流动相（载气）通过填充物向柱出口处迁移时，碰到填充物颗粒的阻碍，其流动方向不断地改变，形成类似,“,涡流,”,的流动。由于填充物的大小、形状不同及填充的不均匀性，使组分各分子在色谱柱中经过的通道直径和长度不等，造成它们在柱中的停留时间不同，使色谱峰变宽。,46,结果：峰变宽,影响因素,：（,1,）填充物的大小、形状,（,2,）填充的均匀程度，空隙的规则,d,p,：固定相的平均颗粒直径；,：固定相的填充不均匀因子。,固定相颗粒越小,d,p,，填充的越均匀，,A,，,H,，柱效,n,。表现在涡流扩散所引起的色谱峰变宽现象减轻，色谱峰较窄。,47,2,、分子扩散项,B/u,：,B,为分子扩散项系数,色谱柱的轴向,样品被载气带入色谱柱后，是以“塞子”的形式存在于色谱柱内很小的一段空间。组分在轴向上（纵向）存在浓度梯度，导致组分分子产生浓差扩散，导致峰变宽。,方向：沿色谱柱的轴向（纵向）,B,的影响因素,：（,1,）柱内填充物,（,2,）组分在气相中的扩散系数,48,B,= 2,D,g,：弯曲因子，反映柱填充物对分子扩散的阻碍程度，一般,=3,）,根据同系物中已知几个组分的保留值可推出同系物中其它组分的保留值。,105,（,ii,）沸点规律：在一定色谱条件下，同族具有相同,C,数的异构体，其保留值的对数值与其沸点成线性。,lgt,R,A,2,T,b,C,2,A,2,、,C,2,为常数，,T,b,为组分的沸点（,K,）,106,（,3,）根据文献保留值定性：没有纯物质的情况下,（,i,）相对保留值定性法：用组分,i,与基准物质,S,的相对保留值,i.s,作为定性指标对未知组分,i,进行定性的方法。,i.s,只与两组分的分配系数有关，固定相性质和柱温确定，,i.s,为定值。,在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保留数据，可以用来进行定性鉴定。,107,（,ii,）保留指数法：又称,Kovats,指数,规定：正构烷烃的保留值指数为其,C,数乘以,100,。,如,C,C,C,C,C,C,，己烷，保留指数,I,为,600,C,C,C,C,C,C,C,，庚烷，保留指数,I,为,700,被测物质的保留指数可采用两个相邻正构烷烃的保留指数进行标定。,108,测定时，将,C,数为,n,和,n,1,的正烷烃加到样品,x,中，进行色谱分析若测得保留时间分别为,t,R,(n),、,t,R,(n+1),、,t,R,(x),，,且,t,R,(n),t,R,(x),t,R,(n+1),、,109,则,x,的保留指数,然后与文献值比较。,110,例题：,60,摄氏度时在角鲨烷柱上正己烷，正庚烷和某组分的调整保留时间分别为,262.1s,、,663.1s,、,359.4s,，求该组分的保留指数，并确定该组分是什么物质。,解：由于,t,R,(6),262.1,，,t,R,(7),663.1,，,t,R,(x,）,359.4,，,n,6,Ix,1006,(lg t,R,(x),lg t,R,(6),)/ (lg t,R,(7),lg t,R,(6),),1006,（,lg359.4,lg262.1,）,/,（,lg663.1-lg262.1,）,644,与文献值比较，可知该组分为苯。,111,定性小结：,（,1,）色谱定性分析的任务是确定色谱图上每一峰所代表的物质。在色谱条件一定时，任何一种物质都有确定的保留时间。所以，在相同色谱条件下，通过比较已知物和未知物的保留时间或在固定相上的位置，即可对未知物定性分析。,（,2,）色谱法的,不足之处是被分离组分（未知物）的定性较为困难。,（,3,）将色谱与质谱或其它光谱法联用，是目前复杂混合物中未知物定性的最有效方法。,112,2,、定量分析,依据：,m,i,f,i,A,i,，被测组分的质量与其色谱峰面积成正比。其中,f,i,为比例常数，称为被测组分,i,的定量校正因子。,（,1,）峰面积的测量,i,、对称峰：,ii,、不对称峰：,iii,、积分仪积分法,113,（,2,）定量校正因子,f,i,i,、绝对校正因子：单位面积对应的物质的质量,受仪器和操作条件影响大，应用受限,ii,、相对校正因子：即组分的绝对校正因子与标准物质的绝对校正因子之比。常用苯和正庚烷作基准物质。,相对校正因子可在有关文献上查阅或自测。,若校正因子查不到或不能用，可用组分,i,标样求出,f,i,114,（,3,）定量分析方法,I,、归一化法：若试样中含有,n,个组分，且都出峰，所有组分的含量加和为,100,，则其中组分,i,的质量分数,w,i,为,特点及要求：,归一化法简便、快速、准确；,进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大；,仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。,115,II,、内标法：就是将某标准物质加入到组分中去,操作方法：准确称取样品，加入一定量某种纯物质作为内标，根据测量到的待测组分和内标物质的峰面积及内标物质的质量计算待测组分的质量。,当色谱峰出不齐，或峰面积测定有困难时，试样中其他组分无法定性，仅对其中一种已知组分定量，可用内标法。,116,内标法特点：,1.,内标法的准确性较高，操作条件和进样量的稍许变动对定量结果的影响不大。,2.,每个试样的分析，都要进行两次称量，不适合大批量试样的快速分析。,117,III,、标准曲线法（外标法）,特点及要求：,外标法不使用校正因子，准确性较高，,操作条件变化对结果准确性影响较大。,对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。,c,i,/A,i,= c,s,/A,s,，要求仪器稳定，进样量准确，在色谱峰出不齐或找不到合适的内标物质时，可用此法,118,气相色谱仪主要由哪几部分组成,?,气相色谱中，如何按分离样品的性质选择固定液？,由色谱图上，如何求一些色谱参数：容量因子,(k),、塔板数,(n),、分离度,(R,s,),GC,中，热导检测器与氢焰离子化检测器各有什么特点？,是否物质在色谱柱上停留时间越长越好？,气相色谱定性分析依据有那些,?,气相色谱定量方法有哪几种,?,思考题,119,120,121,气相色谱法与高效液相色谱法的异同点,1,、流动相,GC,：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。,HPLC,：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相极性和,pH,值也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。,2,、分类（按固定相不同）,GC,中，按固定相不同可分为：气,-,固色谱法；气,-,液色谱法。,HPLC,中，按固定相不同可分为：液,-,固色谱法；液,-,液色谱法。,3,、固定相,气固（液固）色谱的固定相：多孔性的固体吸附剂颗粒，如活性炭，活性氧化铝，硅胶等。气液（液液）色谱的固定相：化学惰性的固体微粒（担体），固定液,+,担体。,122,5,、应用范围,GC,：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品,;,但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测占有机物的,20%,HPLC,：适于溶解后能制成溶液的样品,(,包括有机介质溶液,),，不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的,80%,4,、特点,GC,：高效能、选择性好、灵敏度高、操作简单。,HPLC,：高压、高速、高效、高灵敏度。,123,6,、分离机理,（,1,）,GC,：,GC,一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。,（,2,）,HPLC,：,HPLC,是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送,;,色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。,概括为：,气固色谱的分离机理,:,吸附与脱附的不断重复过程； 气液色谱的分离机理： 气液,(,液液,),两相间的反复多次分配过程。液固色谱的分离机理：溶质分子和溶剂分子对吸附剂活性表面的竞争吸附。,124,7,、仪器构造,（,1,）,GC,：由载气系统、进样系统、色谱柱、检测系统和数据处理系统组成。进样系统、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。,（,2,）,HPLC,：高效液相色谱仪主要由进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。,8,、进样器,HPLC,为平头进样针，,GC,为尖头进样针。,9,、色谱柱长,（,1,）,GC,通常几米到几十米。（气相色谱由于载气的相对分析量较低，分子间隙大，故粘度低，流动性好，组分在气相中流动速度快，因此可以增加柱长，以提高柱效）。,（,2,）,HPLC,通常为几十到几百毫米。,10,、样品柱前变化,GC,的样品在柱前必须变为气体（气化室汽化），而,HPLC,的样品在柱前则无变化。,125,11,、所用检测器,HPLC,主要为：紫外检测器，荧光检测器、示差折光检测器等；,GC,主要为：氢火焰离子化检测器（,FID,）,热导检测器（,TCD,）,电子捕获检测器（,ECD,）,火焰光度检测器（,FPD,）,氮磷检测器（,NPD,）等。,12,、死时间,GC,过程中，只要载气流速稳定就可以进样分析，而,HPLC,过程中，通常需要平衡一段时间后再进样分析，特别是进行梯度洗脱后柱子平衡时间较长。,13,、操作温度,GC,：加温操作,HPLC,：室温,;,高压,(,液体粘度大，峰展宽小,),HPLC,通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。而,GC,则不能，因为室温变动幅度较大，使,GC,基线漂移严重而无法分析，所以必须精确控制温度。,126,它们的理论基础同为“两相及两相的相对运动”，且它们在保留值、分配系数、分配比、分离度、塔板理论、速率理论方面是一致的，但其中有细微的区别，现比较如下：,气相色谱法中流动相的性质对分配系数影响不大，液相色谱法中流动相的种类对分配系数却有较大的影响。,127,气相色谱和液相色谱的速率方程,同样表示为,：,H = A + B/u + Cu,H,：理论塔板高度，,u,：流动相的线速度,(cm/s),其中,A,涡流扩散项（,在,HPLC,中涡流扩散相用,He,表,示），（,1,）,A = 2dp,dp,：固定相的平均颗粒直径,：固定相的填充不均匀因子,（,2,）,B/u ,分子扩散项,B = 2 D,g,液相色谱法中称为纵向扩散项，表示为,Hd,，,因液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项,B/U,较小，可以忽略不计，但是，分子扩散相在气相色谱法中却是很重要的，这一项不可忽略。,（,3,）,C u ,传质阻力项,传质阻力包括气相传质阻力,C,g,和液相传质阻力,C,L,即：,C =,（,C,g,+ C,L,） ，,在液相色谱法中分为固定相传质阻力项和流动相传质阻力项。,GC,中这三项与柱效存在一定的关系：,载气流速高时： 传质阻力项是影响柱效的主要因素，流速,，柱效,。,载气流速低时： 分子扩散项成为影响柱效的主要因素，流速,柱效,。,128,129,