新药研发中药理毒理研究内容与要求

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,新药研发中药理毒理研究内容与要求,西安万隆制药股份有限公司,王震,2012-3-26,第一章 新药评价内容,(,一,),药学研究与评价,(,二,),临床前药理研究,(,三,),临床前毒理学研究,(,四）临床研究与评价,(,一,),药学研究与评价,名称 结构或组份 理化性质,原料药生产工艺,制剂处方及工艺 定性鉴别,含量测定杂质检查,原料药和制剂的稳定性,质量标准草案和起草说明,包装材料和容器的选择依据及质量标准,(,二,),药理研究,主要药效学,二种模型 量效关系 指标客观,阳性对照 空白对照 时效关系,临床给药途径 二种动物,体外试验至少重复,3,次,作用机理,(,全新药,),(,三,),毒理学研究,一般药理,三个剂量 临床途径 时效变化 神经系统 心血管系统 呼吸系统,药代动力学,三个剂量 二种动物 临床途径,8,12,个采样点药动学基本参数 方法学考证,分布排泄,急性毒性,毒性症状,LD,50,，,二种动物 二种途径,长期毒性,三个剂量 临床途径 空白对照，动态观察 中毒症状 中毒剂量 动物选择指标测定二种动物 靶 器 官 安全剂量毒性性质 病理描述 病理照片 统计处理,毒代动力学,三个剂量,6-8,点 主要毒代参数,AUC Cmax Tmax,特殊毒性,遗传 生殖 致癌性,局部毒性,过敏 刺激 光毒 溶血,免疫毒性,(,生物制品,),依 赖 性,作用于,CNS,药物,第二章、毒理学研究,一、毒理学研究的意义,二、毒理学研究的内容及方法,三、急性毒性研究,四、长期毒性研究,五、其他毒性研究,六、特殊毒性研究,七、毒代动力学研究,一、毒理学研究的意义,1,、毒理学研究简介,2,、创新药物的基本要求,3,、,20,世纪重大药害事件,4,、已审批药物的副作用与从市场撤出举例,5,、安全性因素对药物研发的影响,-,致癌性,遗传毒性,生殖毒性 局部耐受性、过敏、,依赖性、免疫毒性,光敏和其它试验等,了解毒性反应剂量、时间、强度、症状、靶器官及可逆性等，,为临床方案提供参考、预测出现的毒性反应，制订临床防护,措施、保证受试者用药安全,毒理学研究,局部用药毒性,全身用药毒性,发现毒理学,一般毒性,特殊毒性,目的,2.,创新药物的基本要求,质控,安全,有效,药物的基本属性（安全性、有效性、稳定性、可控性），在一定意义上，由药物的化学结构所决定 药物分子设计是实现新药创制的主要途径和手段,稳定,3,、,20,世纪重大药害事件,甘 汞：,汞中毒 死亡,585,人,醋 酸 铊：,铊中毒 死亡,1,万人,氨基比林：,粒细胞缺乏症 死亡,2082,人,磺 胺 酏：,肝肾损害 死亡,107,人,非那西丁：,肾损害、溶血 死亡,500,人,碘二乙基锡：,神经毒性、脑炎、失明 死亡,110,人,反 应 停：,海豹样畸形儿,10000,多 死亡,5000,人,异丙肾气雾剂：,严重心律失常、心衰， 死亡,3500,人,氯碘喹啉：,骨髓变性、失明、受害,7856,人，死亡,5%,心 得 宁：,眼,-,皮肤,-,粘膜综合征， 受害,2257,人,4,、已审批药物的副作用与从市场撤出举例（,1990-,）,年份,药物,适应症,/,分类,副作用,1991,Enkald,恩卡尼上市年,抗心律失常药物,作用于心血管，突然死亡,1992,Temafloxacin,替马沙星,抗菌类药,肾损伤,1998,Poslcor(mibefradll),Duract(bronfenac sodium),降血压药,/,钙通道抑制剂,止痛药,致死性相互作用（抑制肝酶）,肝损伤,1999,Tronan,严格限制使用,Raxar,Hismanal,息斯敏,Rotashield,抗生素,喹诺酮抗生素,抗组胺药,轮状病毒疫苗,肝,/,肾损伤,QT,间期延长（致死）,药物相互作用,肠梗阻,2000,Renzulin,Propulsid,Lotonex,治疗,型糖尿病药,烧心,过敏性胃肠综合症,肝损伤,心律不齐,/,致死,缺血性结肠炎,2001,Phenylpropanolamine,baychlor,调节血脂药,降低胆固醇,出血性休克,横纹肌溶解,/,致死,5,、安全性因素对药物研发的影响,药物撤出市场的原因,总撤出的百分率,人体药代试验不恰当,39,临床缺乏疗效,30,动物毒性试验,11,人体副作用,10,经济因素,5,其他,5,二、毒理学研究的内容及方法,1,、,GLP,国际上安全性研究实验室共同遵循的规范,2,、临床前药物安全性评价的主要内容,3,、新药临床前安全性评价的利弊权衡,4,、新药临床安全性再评价的目的,5,、新药临床试验安全性评价的局限性,6,、,2007,年,10,大药物不良反应事件回顾,7,、药物临床安全性再评价主要内容,8,、新药临床阶段安全性评价利弊权衡,9,、药物上市后再评价的目的,10,、药物上市后风险的主要来源,11,、药物的毒副作用与从市场撤出举例,1,、,GLP,国际上安全性研究,实验室共同遵循的规范,提高药品非临床研究的质量；,确保实验资料的真实性、完整性和可靠性；,提高科学数据的质量和有效性，促进实验数据的国家间相互认可；,保证人民用药安全，为人类健康服务。,2,、临床前药物安全性评价,的主要内容,单次给药毒性试验（急性毒性试验）,重复给药毒性试验（长期毒性试验）,遗传毒性试验,生殖毒性试验,安全性药理学试验（一般药理学）,致癌性试验,药物依赖性试验,特殊毒性试验（过敏性、局部刺激性、溶血性）等,免疫原性试验,毒代动力学实验,临床前研究结果评估：,利,是指药效或疗效，,弊,是指毒性或毒副作用,毒性特点,：（主要症状、毒性大小、靶器官、可逆性）,安全范围,：（,LD,50,/ED,50,、,LOAEL,、,NOAEL,）,LOAEL,(lowest-observed-adverse-effect-level ),出现副反应的最小剂量,NOAEL,（,No Observed Adverse Effect Level,）无可见有害作用水平,同类药比较,：了解程度及优势（有效性和安全性）,适应症背景,：治疗谱、毒性大小（安全范围）、性质和早期可预测性,人体相关性,：注意量化（毒代暴露量）,利弊权衡是一个综合性的评价过程（系统工程）,3,、新药临床前安全性评价的利弊权衡,4,、新药临床安全性再评价的目的,临床前研究结果并不能完全推测临床研究结果，动物模型也不能完全复制出人体发生的疾病。,临床中存在联合用药产生药物相互作用问题。,药物在临床使用中发现毒副作用，需进行毒性机制研究寻找解毒药物。,部分试验可以在药物进行临床研究中才开始进行。,临床研究中有时会出现药物引起的特异质毒性反应。,特需药品免做临床前安全性评价研究的药物。,药品上市前动物毒性研究的局限性,药品上市前人体临床试验伦理范围的局限性,药品上市前人体临床试验科学性研究的局限性,统计发现，在所有的药物临床试验与应用中，不良反应种类出现的概率是：,在一般动物毒性试验中只占左右；,在,期人体耐受试验中只有；,在,、,期临床试验的出现率是；,在,期临床试验时出现；,到市场销售时全部副作用才陆续出现。,5,、新药临床试验安全性评价的局限性,6,、,2007,年,10,大药物不良反应事件回顾,头孢曲松钠的安全使用问题,（与钙使用，婴儿死亡）,静脉输注人免疫球蛋白引起丙肝抗体阳性率增加,甲磺酸培高利特撤市,（心脏瓣膜病）,马来酸替加色罗撤市,(,心肌梗死、脑卒中）,含钆造影剂的安全问题,（肾源性纤维化病）,罗格列酮的安全性受质疑,（心梗和心源性死亡）,注射用甲氨蝶呤、阿糖胞苷中混入长春新碱,（,N,受损）,感冒药禁用于,2,岁或以下儿童,（死亡）,哺乳妇女服用可待因可能导致婴儿发生严重不良反应,硫酸普罗宁与胸腺肽注射剂可引起严重不良反应,7,、药物临床安全性再评价主要内容,药物毒性作用靶器官、药物毒性作用模型的研究,解决由于模型不合适而发生的不良反应，重新设计动,物模型评价药物的毒性作用,药物毒性作用机制,解决小概率毒性作用药物的不良反应，评价没有动物,模型不良反应药物的毒性作用,联合用药的作用机制筛选研究,解决临床上由于联合用药而发生的不良反应,根据新药特点，可在临床阶段提供新药安全性资料,致突变试验、 致癌性试验和,III,段生殖试验，一般可,以在申报,NDA,时提供其研究资料,8,、新药临床阶段安全性评价利弊权衡,评估临床已出现的毒性，和毒性特点以及监测、防治措施。,确定进一步临床和剂量选择方案提供重要信息。,综合相关信息进行利弊权衡，判断能否向临床推进。,根据毒理结果调整临床适应症范围、适应人群或给药方案,综合比较新药与已上市药物之间毒副作用与安全性之间的关系，分析与判断该新药上市的可能性。,9,、药物上市后再评价的目的,新药上市前安全性评价的局限性,病例太少、研究时间太短、试验对象年龄范围太窄、用药对象条件控制太严,药物副反应与安全性的关系,副作用、变态反应、特异质反应、药物依赖性、致癌、致突变、致畸作用,老药的毒、副作用研发成新药的可能性,反应停、长春新碱、阿托品、阿斯匹林、 雌激素,药物再评价与药物命运的关系,限制与撤出使用、医疗事故判断的依据,10.,药物上市后风险的主要来源,已知风险,可避免的,无法避免的,药品缺陷,仿冒制品,可预防的,AEs,损伤或死亡,其他的不确定因素,潜在的、未知的风险,缺失信息，如人种、年龄、性别、药物与药物之间、药物与疾病之间的相互作用等。,不同的问题，应给予相应的解决方法上市后监测与安全性再评价,用药错误,11.,药物的毒副作用与从市场撤出举例（,1990-,）,年份,药 物,适应症,/,分类,副作用,1991,Enkald,恩卡尼上市年,抗心律失常药物,作用于心血管，突然死亡,1992,Temafloxacin,替马沙星,抗菌类药,肾损伤,1998,Poslcor(mibefradll),Duract(bronfenac sodium),降血压药,/,钙通道抑制剂,止痛药,致死性相互作用（抑制肝酶）,肝损伤,1999,Tronan,严格限制使用,Raxar,格帕沙星,(Grepafloxacin,),Hismanal,息斯敏,Rotashield,轮状病毒疫苗,抗生素,喹诺酮抗生素,抗组胺药,轮状病毒疫苗,肝,/,肾损伤,QT,间期延长（致死）,药物相互作用,肠梗阻,2000,Renzulin,Propulsid,Lotonex,治疗,型糖尿病药,烧心,过敏性胃肠综合症,肝损伤,心律不齐,/,致死,缺血性结肠炎,2001,Phenylpropanolamine,baychlor,调节血脂药,降低胆固醇,出血性休克,横纹肌溶解,/,致死,12.,非临床安全性评价基本原则,把握药理毒理评价的系统性,充分暴露毒性,具体问题具体分析,执行,GLP,（药物非临床研究质量管理规范）,13.,非临床安全性评价全过程质量管理,GRP,-Good Reviewing Practice,GSP,-Good Supply Practice,GUP,-Good Using Practice,GSSP,-Good Storage And Shipping,Practice,GMP,-Good Manufacturing Practice,GLP,-Good Laboratary Practice,GCP,-Good Clinical Practice,药物相关的,GXP,管理,GCP/GLP,药品研制,药品生产,GMP,GSP,药品流通,GUP,药品使用,药品审评,GRP,药物储存,GSSP,14,、药物安全性评价最终目的为临床服务,初步目的,毒理试验本身（试验评价）,1.,毒性反应（定性和定量）,剂量、时间、程度、症状、性质、靶器官以及损伤的可逆性,2.,安全剂量及安全范围,最终目的,向临床过渡（综合评价）,申报临床：,1.,预测人临床用药时的可能毒性，以制定监测、防治措施,2.,推算临床研究的安全参考剂量和安全范围，进行利弊权衡,申报生产：,3.,为说明书提供信息,-,尤其是那些无法在人体试验的动物结果，限制用药人群，帮助利弊权衡。,21/24/26,号,:,过敏性（局部、全身和光敏毒性）、 溶血,性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激,性等主要与局部、全身给药有关的特殊安全性,试验研究和文献资料,22/ /27,号,:,复方制剂中多种成,/,组份药效、毒性、 药代动,力学相互影响的试验资料及文献资料,23/25/22,号,:,致突变试验资料及文献资料,24/26/23,号,:,生殖毒性试验资料及文献资料,25/27/24,号,:,致癌试验资料及文献资料,26/ /28,号,:,依赖性试验资料及文献资料,27/28/21,号,:,动物药代动力学试验资料及文献资料,15,、各类新药申报资料的一般要求,16,、,药品注册管理办法,药品注册药理毒理申报资料,药理毒理研究资料综述,主要药效学试验资料及文献资料,一般药理学的试验资料及文献资料,（）,急性毒性试验资料及文献资料,（）,长期毒性试验资料及文献资料,（）,过敏性（局部、全身、和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等特殊安全性试验资料和文献资料（,）,复方制剂中多种成分药效、毒性、药代动力学相互影响的试验资料和文献资料,致突变试验资料及文献资料（,）,生殖毒性试验资料及文献资料（,）,致癌试验资料及文献资料（,）,依赖性试验资料及文献资料（,）,非临床药代动力学试验资料及文献资料,（）,17.,临床前安全性评价 与临床的差别,研究方案,/,种属,动物,人体,个体数量,大量,个体,个体年龄,青年,各个年龄段,个体健康状况,健康,不定,个体遗传背景,同源,异源,给药剂量,从治疗量到中毒量,治疗量,给药时间,通常每日一次,根据治疗需要,居住条件,统一，最佳,不定,营养,统一，最佳,不定,辅助治疗,无,经常,语言交流,无,广泛,病理组织学,全面,特例,18,、长期毒性试验的给药期限,药物临床疗程,长期毒性试验给药期限,可以支持的临床研究阶段,啮齿类动物,非啮齿类动物,单次给药,2,周,2,周,期、,期、,期,2,周,1,个月,1,个月,期、,期、,期,2,周*,1,个月,1,个月,期,1,个月,1,个月,1,个月,期,3,个月,3,个月,期,3,个月,3,个月,3,个月,期,6,个月,6,个月,期,6,个月,6,个月,6,个月,期,6,个月,9,个月,期,6,个月,6,个月,9,个月,期,6,个月,9,个月,期,19.,安评资料审评中的主要问题,（一）受试物,（二）试验动物,（三）给药途径,（四）给药频率,（五）给药期限,（六）给药剂量,（七）观察指标,（八）观察指标的时间和次数,（九）结果及分析,（十）综合评价,急性（单次给药）毒性,长期（重复给药）毒性,致突变（遗传毒性）,生殖毒性,致癌性,免疫原性,依赖性,毒代动力学,其它毒性（,过敏性、溶血性、光毒性、免疫毒性、药物依赖性等试验）,20,、药物安全性评价研究的范围,受试药物,化学药品：原料、制剂,生物制品：制剂,中药：原料、制剂、浸膏,试验动物,动物同药效试验,啮齿类和非啮齿类两种，如大鼠、犬或猴等。,理由充分，一种相关动物,21.,药物非临床研究,-,共性问题,22.,临床前毒理学评价总的要求,找出毒性剂量,Toxic,d,osage,确定安全剂量范围,S,afety margin,毒性反应,T,oxic reaction,:,性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间,持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性,寻找毒性反应靶器官,Target,O,rgan,毒性反应是否可逆,R,eversibility,确保临床用药安全,（一）试验要求,（二）目的意义,（三）基本内容和要求,（四）急性毒性,LD,50,常用计算方法,（五）有关问题,三、急性毒性试验,（一）试验要求,试验动物,啮齿类,-,小鼠或大鼠 非啮齿类,-,犬或其它,一类药至少必须用二种动物,(,啮齿类及非啮齿类各一种,其中非啮齿类宜用,Beagle,犬,);,其它类酌情用二种动物,小鼠,18-22g,同次体重相差不超过,4g;,大鼠,120-150g,同次体重不超过,20g;,犬用成年犬,各半,（二）,急性毒性试验,目的意义,1,、了解新药急性毒性强度,2,、计算新药相对毒性参数,3,、为临床毒副反应监护提供参考依据,4,、为长期毒性、蓄积性毒性提供依据,5,、为特殊毒性试验选择剂量提供依据,6,、其它方面,1,、新药急性毒性的强度,表,.,化学物质的急性毒性分级标准,(WHO, 1977),毒性分级,ig,大、小鼠,LD50,吸入大、小鼠,LC50,涂皮兔,LD50,人口服可能的,(mg/kg) (ppm) (mg/kg),致死量,(g),极 毒,1 10 5000 10000 2180 1200,*,吸入毒性,LC50,指中毒栏中的浓度,一次中毒,2-4,小时,观察,24,天,新药急性毒性的强度,表,.,欧共体对化学物的毒性分级,动物及给药途径 剧 毒 毒 有 害,大鼠,LD50 ig(mg/kg) 25 25-200 200-2000,大鼠或兔经皮,LD50 (mg/kg) 50 50-400 400-2000,大鼠,LC50 (mg/L/4h 0.5 0.2-2 2-20,2,、相对毒性参数,治疗指数,TI =LD,50,/ED,50,安全系数,SF=LD,5,/ED,95,可靠或确实安全系数,CSF =LD,1,/ED,99,安全范围,SM=(LD,1,/ED,99,-1) X 100%,SED,50,/ED,50,越大越安全,LD,5,基本无害量,ED,95,基本有效量,LD,1,肯定无害量,ED,99,肯定有效量,3.,为临床毒副反应监护提供参考,中毒症状,起始时间,持续时间,恢复时间,对抗试验为临床急救提供依据,急性毒性试验观察动物反应指标,中 毒 部 位 毒 性 症 状 表 现,中枢神经系统 呆滞,:,对刺激反应迟缓、减弱、消失；不安：对刺激反应,过敏、 兴奋；强直：行动姿势改变、叫声异常、震颤、,共济失调,植物神经系统 瞳孔缩小、放大,;,分泌增多，如流涎、流泪,呼 吸 系 统 鼻孔流鼻涕、呼吸缓慢、困难、潮式呼吸、速率加快等,心血管 系统 心动过速、缓慢、心律不齐、心跳过强、微弱,胃 肠 系 统 胀、腹泻、便秘、粪便不成形、粪便黑色,生 殖 系 统 乳腺膨胀、会阴部污浊、阴囊下垂等,皮肤、 毛皮肤发红、松弛、皮疹、毛竖起,粘 膜口腔流粘液、充血、溃疡、出血性紫绀,眼 睛上睑下垂、眼球突出混浊,其 他直肠温度升高、降低；消瘦；拒食等,4,、为长毒、蓄毒试验 选择剂量提供依据,长期毒性剂量设计,LD,50,法,(1/10, 1/50, 1/100),MTD,法,(1, 1/3, 1/10),蓄积性毒性剂量设计,1/10LD,50,然后按等比级数,1.5,倍逐渐递增,5,、为特殊毒性试验选择剂量提供依据,生殖毒性试验高剂量为母鼠,MTD,致突变试验,啮齿类动物微核试验高剂量为,1/2 LD,50,果蝇伴性隐性致死试验的高、低剂量分别为,1/2 LD,50,和,1/4 LD,50,精原细胞染色体畸变试验高剂量应为,1/2 LD,50,动物短期致癌试验高剂量应是,MTD,主要药效学剂量限度、一般药理学和药动学剂量设计也要参考急性毒性的,LD,50,6,、其它方面,系列化合物的合格率分析,(,除理化性质为主外,),也参考,LD,50,复方中药物的相互作用,有时也通过拆方及合用的,LD,50,来判别相互作用的性质,四、长期毒性试验,（一）目的意义,（二）基本内容和要求,1,、,LD50,试验,2,、最大耐受量试验,3,、最大给药量试验,4,、限量试验,（三）长期毒性研究目的,（四）试验方案设计,1-,基本原则,2-,试验动物,3-,给药方案,（一）目的意义,毒性剂量,Toxic dosage,安全范围,Safety margin,毒性反应,Toxic reaction,:,性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间,持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性,毒性反应靶器官,Target organ,毒性反应是否可逆,Reversibility,1-LD50,试验,指动物单次给药后引起,50,动物死亡的剂量。,LD,50,值的意义是：,LD,50,越小表示药物的急性毒性越大。,动物：小鼠、大鼠等,动物与分组：一般,5,组；每组,10,只,雌、雄各半。试验前禁食,给药途径：临床给药途径,观察,14,天，进行大体解剖观察，如有改变,-,病理检查,（二）基本内容和要求,2 -,最大耐受量试验,（,MTD-Maximum-Tolerated Dose,）,指动物单次大剂量给药或在,24,小时内接受多次大剂量受试药物后，动物在短期内出现的与药物相关的毒性反应，但是又不引起动物死亡的最大剂量,动物：小鼠、大鼠、犬等,动物数： 小动物,20,只；大动物,4,只,雌、雄各半。试验前动物应注意禁食,给药途径：临床给药途径,观察,14,天，进行大体解剖观察，如有改变,-,病理检查,（二）基本内容和要求,该试验多用于中药和毒性较小的其它药物研究,指药物以最高浓度和最大容积的给药，剂量可能并未达到最大耐受的剂量，所以该剂量被称为最大给药量。,具体要求可参照最大耐受量试验。,低毒药物，口服给药：,5g,（或,ml,）,/kg,动物数一般,5,只，大鼠禁食一夜，小鼠禁食,4,6,小时，观察,14,天，如无死亡，则无必要进行更高剂量,如动物在,5g/kg,出现死亡，可选择较低剂量,3,、最大给药量试验,4,、限量试验,（二）基本内容和要求,观察动物在给予超过临床剂量（数倍或数十倍）和用药周期（,3-4,倍以上）的情况下所出现的毒性反应,设法发现引起毒性反应的剂量、剂量与毒性之间的关系、中毒表现和程度、主要毒性靶器官或组织及可逆程度等,预测临床研究阶段可能的安全范围和毒性，预先制定防治措施或避免某些有特殊疾病患者的使用，减少临床可能的风险,为临床试验初始剂量和指标的选择等提供重要参数,（三）长期毒性研究目的,通常长毒始于主要药效、安全药理、单次给药毒性、初步药代动力学（如果已经可获得）等试验之后,有些药物侧重比较毒理学的研究，如新的剂型、改变酸根或碱基、改变给药途径等。,（四）试验方案设计,-,基本原则,l,动物的种类,常,用大鼠和犬或敏感动物。创新药一般,2,种以上，雌雄各半。生物制品多用大鼠和猴（种属特异性可特殊）,动物的年龄与数量,大鼠试验,3,月内：,6-8,周龄；,3,月：,5-6,周龄,犬：一般选用性成熟的，,6-10,月；猴：,3.5-4.5,年,根据试验周期长短确定每组动物数。,原则：试验结束时小动物每组动物数应满足统计学要求；,大动物的数应满足毒理学评价要求；,一般大鼠为,10-30,只，雌雄各半；犬、猴至少雌、雄各,3,只；毒性大、周期长数量应增加，考虑恢复期数量。,（四）试验方案设计,实验动物,给药时间,临床给药周期的,3-4,倍。反复、长期或植入的药，,按最长给药时间，即啮齿,- 6,月；非啮齿,-9,月,周期短,-,每天给药；,1,个月,- 6,天,/,周,-,每天给药时间应一致,-,保证动物摄入量的准确性,中药如给药体积大，可将药物分成,2,次,/,日,-,不提倡采用掺食给药，除非有稳定性、均一性,（四）试验方案设计,给药方案,给药剂量,一般,3,个给药剂量组,高剂量,-,动物应出现毒性和个别死亡（,3,月的，,1/3,动物检查中期主要指标；,如发现异常可适当增加检查次数。,（四）试验方案设计,给药方案,五、其他毒性研究,1,、致突变性试验,2,、生殖毒性试验,3,、致癌性试验,4,、,皮肤给药急性毒性试验,5,、皮肤给药的长期毒性试验,6,、皮肤刺激试验,7,、皮肤过敏试验,8,、光敏试验,9,、眼刺激试验,10,、滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验,11,、直肠、阴道用药急毒试验,12,、直肠、阴道用药刺激试验,13,、身体依赖性试验,-,自然戒断试验,14,、身体依赖性试验,-,替代试验,15,、身体依赖性试验,-,催促试验,16,、身体依赖性试验,-,诱导试验,17,、精神依赖性试验,目前建立的遗传毒性试验是研究机体遗传物质受外源性化学物质或其它环境因素作用时对有机体产生的遗传毒性作用。,遗传毒性试验包括体外和体内检测系统。两者应结合进行研究。,体外检测系统包括细菌回复突变、微核试验、哺乳动物细胞染色体畸变等；体内试验包括骨髓微核试验、显性致死试验等。,一类药需要提供实验资料,1,、致突变性试验,（遗传毒性）,概念,评价药物对哺乳动物生殖的影响，推测对人可能的生殖毒性,研究分为三段,I,段（一般生殖毒性）：,是评价对成年动物生育力和早期胚胎发育影响，评价药物对配子成熟，交配行为、受孕、胚胎着床前和着床的影响,II,段（致畸敏感期毒性）：,即妊娠动物在胚胎器官形成期给药，评价药物对亲体、胚胎、胎仔发育影响,III,段（围产期毒性）：,在妊娠动物分娩前后给药，评价胎仔出生前后的发育和孕鼠从妊娠后期至断奶期间给药对妊娠、分娩、哺乳、胚胎、胎仔发育的影响。,根据临床用药次数、适应证和拟用人群决定是否进行该试验,创新药，一般可在申报临床研究前先提供,II,段试验,对于可能只给一次或终身一次（如诊断或外科手术）的药，重复给药研究也许是不必要的。在较高剂量下，缩短处理期似乎更合适。,2,、生殖毒性试验,致癌试验,检测受试药物对动物的潜在致瘤性,药物是否进行该试验应在获得一定的相关信息后才能确定,人群最长用药的时间及遗传毒理学、重复给药毒性等相关结果,重复给药毒性试验可能显示受试药物具有免疫抑制特性、激素活性或,考虑对人类是一种危险因子时，都应慎重考虑进行有关的致癌试验。,如：,-,药物拟用于非肿瘤病人的辅助治疗或非癌症疾病的重复给药使用,-,临床连续给药时间大于,6,个月应进行该试验,-,治疗慢性和复发性疾病而经常间断使用药物,-,有明确遗传毒性的化合物；,-,其构效关系提示有潜在的致癌性的药物,-,在连续重复给药的毒性试验中有癌前期病变的证据,-,重复给药滞留的母体化合物或其代谢产物导致局部组织或病生理改变,-,较长时间接触的药物，如缓慢释放药物也应考虑进行该试验,-,内源性肽类、蛋白质是否需要进行该研究需作特殊考虑,-,超生理水平,3-1,、致癌性试验,以下情况进行致癌试验尤为重要：,1,）产生的生物学作用与天然产物明显不同；,2,）由于修饰导致产品结构与天然产物相比有明显不同；,3,）在人体局部或全身的浓度（即药理学水平）明显增加。,对于抗肿瘤药物是否进行该试验，可考虑以下因素：,-,如果用药人群的生存期较短（,2,3,年），则不要求,-,如用于晚期全身治疗的抗肿瘤药物一般不需要进行,，但当该药物疗效较好，能明显延长生命时，应考,虑有关继发性肿瘤的问题，应进行致癌性研究,3-2,、致癌性试验,目的,:,观察短期接触受试物后皮肤的毒性反应,动物,:,家兔、豚鼠或大鼠，各半，家兔体重,kg,豚鼠,300g,大鼠,200g,左右,给药前,24h,将动物背部脊柱两侧毛脱掉,去毛范围约相当于体表面积的,10%,左右, (,家兔约,150cm,2,左右,豚鼠、大鼠约,40cm,2,左右）,药物：膏剂、液体或粉末。粉末需用赋形剂（如羊毛脂、凡士林等）混匀，以保证受试物与皮肤有良好的接触,剂量,：,3,个，组距,0.65,0.85,。家兔每组只，豚鼠或大鼠每组,10,只并设赋形剂或空白对照组,方法,：将受试物均匀涂敷于脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物。,24h,后去除，每日观察，连续,7-14,天。观察动物体重、皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化。若有死亡则进行尸检，当有肉眼可见病变，则需进行病检,判断：试验结果与对照组比较判断,4,、,皮肤给药急性毒性试验,5.,皮肤给药的长期毒性试验,目的,：观察经皮渗透产生的异常反应和可逆程度，找到靶器官,动物,：家兔,(2kg, 6,只,/,组,),，豚鼠,(300g,，,10,只,/,组,),或大鼠,(200g,，,10,只,/,组,),，各半。给药前,24h,动物背部脊柱两侧脱毛，面积同急毒,受试物,：同急性毒性试验,剂量,：个，要求同大鼠口服长毒试验，并设赋形剂或空白对照组，若用受试物剂量超过有效浓度,20,倍以上，仍未见动物有不良反应或死亡时，则只须设一个高剂量组,方法,：受试物均匀涂敷,每次至少接触,h,，临床用药疗程的倍以上时间连续给药。部分动物应于停药后继续观察,-,周，,检测指标,：除每日观察皮肤、临床变化及皮肤病理学检查外，其血液学、血液生化指标和病理学检查项目同大鼠长期毒性试验要求,判断,：实验结果应写明安全剂量、中毒剂量、中毒表现、中毒靶器官及中毒的可逆程度等,6,、皮肤刺激试验,目的,：观察刺激反应情况,动物,：首选家兔,(2kg,左右,),，其次为豚鼠,(300g,左右,),。药前,24h,脱毛，家兔每侧脱约,50cm,2,，豚鼠每侧脱约,20cm,2,受试物,：同急性毒性试验,方法,：只家兔或只豚鼠，在受试物区、对照区和破损皮肤区（脱毛后），一次或多次将受试物,ml,或,1 g,涂于受试物区，赋形剂则涂于对照区。,24h,后去除。观察,1,、,24,、,48,和,72h,涂抹部位有无红斑和水肿等，变化的恢复情况和时间多次给药则每日涂抹一次，连续一周，其余均与一次给受试物的方法和要求一致,结果评价,：每只动物试验结果进行刺激反应评分，计算出平均分值进行刺激强度评价,皮肤刺激反应评分,刺激反应 分值,红斑,:,无红斑,0,勉强可见,1,中度红斑,2,严重红斑,3,紫红色红斑并有焦痂形成,4,水肿,:,无水肿,0,勉强可见,1,皮肤隆起轮廓清楚,2,水肿隆起约,1mm,并范围扩大,4,皮肤刺激强度评价,强度 分值,无刺激性,0.5,轻度刺激性,2.0,中度刺激性,6.0,7,、皮肤过敏试验,目的,:,观察免疫系统反应在皮肤上的表现,动物,：豚鼠各半,(250-300g),。给药前,24h,背部两侧脱毛，脱毛区每侧约,3 x 3 cm,2,受试物,：若受试物是膏剂或液体，直接试验。若为固体粉末，则用水或赋形剂（如羊毛脂、凡士林、橄榄油等）混匀,阳性致敏物,：,2,4-,二硝基氯代苯配成,1%,的致敏浓度和,0.1%,的激发浓度,方法,：分受试物组，空白对照组，阳性对照组，每组,10,只（各半）,1.,致敏接触,：将受试物,0.1-0.2ml(,),涂在左侧脱毛区，持续,6h,。第天和第,14,天，同法各重复一次,2.,激发接触,：末次致敏后,14,天，将受试物,0.1-0.2ml (,),涂于右侧脱毛区，阳性对照用,0.1%2,4,二硝基氯代苯，,h,后去除，即刻观察，然后于,24,、,48,、,72h,再次观察过敏反应情况,结果评价,：结果按皮肤反应评分标准评分，根据试验组与对照组豚鼠皮肤反应的差别，判断受试物对皮肤过敏反应性质,可用致敏率,(,红斑或水肿的动物例数,/,受试动物总数,),判断致敏强度,皮肤过敏反应评分标准,皮肤反应 分值,红斑形成：,无红斑 ,轻度红斑 ,中度红斑 ,重度红斑 ,水肿性红斑 ,水肿形成：,无水肿 ,轻度水肿 ,中度水肿 ,重度水肿 ,致敏率分类,致敏率（,%,） 反应强度,10,弱致敏性性,20,30,轻度致敏性,40,60,中度致敏性,70,80,高度致敏性,90,100,极度致敏性,8,、光敏试验,有些受试物皮肤涂抹后遇光照可引起光敏反应,若其化学结构或某些组成（包括药物和赋形剂）文献报导有光敏作用者应作光敏试验,其化学结构和已知光敏剂相似者也应做光敏试验,皮肤给药毒性试验有关问题,设立赋形剂对照组，赋形剂各种指标、规格等均应符合药用规格,受损皮肤的用药，急毒、长毒等毒性试验也宜以模拟破损皮肤进行,高剂量符合制剂工艺要求，以剂型允许配制浓度和允许给药容量给药。不能将外用药厚厚地涂在皮肤上,9,眼刺激试验,目的：观察眼睛接触受试物后产生的刺激反应,动物：家兔只，体重,2,3kg,受试物：液体或膏剂均可直接滴入或涂敷,剂量：用原液或原膏剂，不必稀释，每只眼睛滴入,0.1ml,或涂敷,0.1g,以内,方法：滴入或涂敷于动物一侧眼结膜囊内，另一侧作为空白（或赋形剂）对照。给药后使眼睛被动闭合,5,10,分。记录给药后,6,、,24,、,48,、,72h,至,7,天眼的局部反应情况,临床用药超过一周的受试物要进行多次给药刺激试验，连续给药一周以上,结果评价：将每只动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应的分值相加，即是一只受试动物眼刺激反应的总积分。把每个受试动物的刺激反应积分的总和除以动物数，就是该受试物对眼刺激性的最后分值，以此判定受试物刺激程度,9,眼刺激试验,眼刺激试验,-,角膜评分,无混浊 ,散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见,1,半透明区易分辨，虹膜模糊不清,2,出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，,瞳孔大小勉强看清,3,角膜不透明，由于混浊，虹膜无法辨认,4,眼刺激试验,-,虹膜评分,正常 ,皱褶明显加深，充血，肿胀，,角膜周围轻度充血，瞳孔,对光仍有反应 ,出血，肉眼可见坏死，对光无,反应（或出现其中一种反应） ,眼刺激试验,-,结膜评分,.,充血（指睑结膜、球结膜部位）,血管正常 ,血管充血呈鲜红色 ,血管充血呈深红色，血管不易分辨,弥漫性充血呈紫红色 ,.,水肿,无水肿 ,轻微水肿（包括瞬膜） ,明显水肿，伴有部分眼睑外翻,水肿至眼睑近半闭合 ,水肿至眼睑超半闭合 ,.,分泌物,无分泌物 ,少量分泌物 ,分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着 ,分泌物使整个眼区潮湿或粘着 ,眼刺激试验,-,结膜评分,眼刺激性评,刺激程度 积 分,无刺激性 ,轻度刺激性 ,中度刺激性 ,强度刺激性 ,10.,滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验,目的,：观察一次滴入或吸入后所产生的毒性反应和死亡情况,动物,：大鼠、豚鼠或家兔。各半，大鼠、豚鼠体重在,250-300g,、家兔在,2.5kg,左右,受试物,：液体或粉末剂,剂量,：个剂量，组距,0.65-0.85,为宜。设赋形剂或空白对照组。若大剂量组（超过临床预计用量的,50,倍以上）未出现死亡情况时，则只须设一个高剂量组,方法,：大鼠或豚鼠每组,10,只，家兔每组只，各半。滴入或吸入药后，至少接触小时，给药后即刻观察及,7-14,天观察动物全身状况、体重、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化，若出现死亡则病检,结果判断,：试验结果与对照组比较。如能测出,LD,50,值则按急性毒性试验要求计算,11.,直肠、阴道用药,急毒试验,目的,：观察直肠或阴道一次接触受试物后，由吸敷所产生的毒性反应和死亡情况,受试物,：栓剂、液体或膏剂。,剂量,：个，组距,0.65-0.85,，须设赋形剂或空白对照组,方法,：家兔每组只，大鼠每组,10,只。将受试物置入,h,。即刻观察,7-14,天，观察全身状况，体重、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化。若出现死亡时应做病检,结果判断,：与对照组比较判断。必要时算,LD,50,目的,：观察直肠、阴道的刺激反应,动物,：同上述急性毒性试验,受试物,：栓剂、液体或膏剂,分组,：给药组、赋形剂组和空白对照组。每组家兔只，大鼠只,方法,：受试物置入,h,，,24h,后处死动物。取出局部直肠或阴道组织。观察有无充血、红肿等现象，若有变化需进行病检,12.,直肠、阴道用药,刺激试验,目的,：观察直肠、阴道的刺激反应,动物,：同上述急性毒性试验,受试物,：栓剂、液体或膏剂,分组,：给药组、赋形剂组和空白对照组。每组家兔只，大鼠只,方法,：受试物置入,h,，,24h,后处死动物。取出局部直肠或阴道组织。观察有无充血、红肿等现象，若有变化需进行病检,多次给受试物则一般每日一次，连续天，于末次给药后,24h,处死动物并观察,结果判断,：试验结果与对照组比较判断,腔道用药毒性试验要特别注意既要符合剂型要求，又要考虑腔道可给容量,13.,身体依赖性试验,-,自然戒断试验,-,连续给药后突然停药，观察戒断症状，与同类的代表药作对比，判断受试药的依赖性潜力,-,动物：小、大鼠和猴。小鼠体重,20-24g,，每组,20,只，大鼠体重,180-220g,，每组,10,只,猴体重,3-5kg,，每组,3,5,只， 各半,-,剂量：,2,3,，须设赋形剂对照和阳性药对照,(,吗啡，苯巴比妥或巴比妥,),。低剂量用,ACD,；高剂量组依赖性潜力低的药物应选用接近毒性反应的剂量，毒性低的药物选用,MTD,。药物可采用恒量或剂量递增的方式给予,-,连续给药后突然停药，观察戒断症状，与同类的代表药作对比，判断受试药的依赖性潜力,-,动物：小、大鼠和猴。小鼠体重,20-24g,，每组,20,只，大鼠体重,180-220g,，每组,10,只,猴体重,3-5kg,，每组,3,5,只， 各半,-,剂量：,2,3,，须设赋形剂对照和阳性药对照,(,吗啡，苯巴比妥或巴比妥,),。低剂量用,ACD,；高剂量组依赖性潜力低的药物应选用接近毒性反应的剂量，毒性低的药物选用,MTD,。药物可采用恒量或剂量递增的方式给予,13.,身体依赖性试验,-,自然戒断试验,-,连续给药后突然停药，观察戒断症状，与同类的代表药作对比，判断受试药的依赖性潜力,-,动物：小、大鼠和猴。小鼠体重,20-24g,，每组,20,只，大鼠体重,180-220g,，每组,10,只,猴体重,3-5kg,，每组,3,5,只， 各半,-,剂量：,2,3,，须设赋形剂对照和阳性药对照,(,吗啡，苯巴比妥或巴比妥,),。低剂量用,ACD,；高剂量组依赖性潜力低的药物应选用接近毒性反应的剂量，毒性低的药物选用,MTD,。药物可采用恒量或剂量递增的方式给予,-,观察指标：镇痛药在停药前,24h,及停药后,48h,内每隔,4h,观察记录外观体征和行为活动、植物神经系统机能变化，并称重。镇静催眠药在停药前一天及停药后的,1,至,2,周内每天观察动物的外观体征和行为活动及自发惊厥发生率,-,外观体征和行为活动包括：应激性、神情过敏,(,猴,),、饮食、睡眠、自发运动活动、攻击性、警觉程度、神经反射、竖尾、震颤、惊厥、呼吸、体温、体重,-,植物神经系统机能变化：腹泻、流涎、流泪、恶心、呕吐、瞳孔大小,-,资料记录及整理：,动物应写明种属、性别、生产合格证号、记录体重、实验室温度及湿度,受试物应写明生产批号、配制方法,戒断症状用记分法统计，对检测指标和体重、惊厥发生率等应设计合理的图表显示。实验结果进行统计处理,14.,身体依赖性试验,-,替代试验,-,给予动物代表药,(,如吗啡、巴比妥或苯巴比妥,),产生身体依赖性后，停止给药，替之以受试药，观察记录动物是否发生戒断症状及发作程度,-,动物：参照,“,自然戒断试验,”,-,剂量：参照,“,自然戒断试验,”,-,给药途径：腹腔注射、灌胃或,“,药掺食,”,(drug admixed food,DAF),法给予代表药使产生身体依赖性，然后停止给代表药，以同样给药方式给予不同剂量的受试药,观察及记录替代期间动物的戒断行为和体重变化,-,镇痛药的观察期为停止吗啡前,24h,和停药后,48h,内，每,4h,观察一次；镇静催眠药的观察为停止代表药前一天和停药后的,1,2,周内，每天观察一次,-,采用,1,2,种给药途径，必须有一种与临床用药途径相同,-,观察指标：参照,“,自然戒断试验,”,-,资料记录与整理：参照,“,自然戒断试验,”,15.,身体依赖性试验,-,催促试验,-,概念,：短时期内给予动物大剂量受试药，然后注射受体对抗剂，观察和记录是否出现戒断症状及其程度。此法只适用于有竟争性受体对抗剂的阿片类药物,-,动物,：参照,“,自然戒断试验,”,-,剂量,：除低剂量组一般采用临床剂量的,1,至,2,倍外，余同,“,自然戒断试验,”,-,给药途径,：猴的实验应采用与临床给药途径相同；大、小鼠的实验选用二种给药途径，其中必须有一种与临床用药途径相同,-,给药期限,：猴连续给药,30,60,天，上、下午各一次，大、小鼠连续给药,3,5,天,-,停药后给予阿片受体对抗剂，常用纳洛酮，亦可用环丙羟丙吗啡。观察给