experiment5菌种保藏

上传人:ll****x 文档编号:243380565 上传时间:2024-09-22 格式:PPT 页数:11 大小:169KB
返回 下载 相关 举报
experiment5菌种保藏_第1页
第1页 / 共11页
experiment5菌种保藏_第2页
第2页 / 共11页
experiment5菌种保藏_第3页
第3页 / 共11页
点击查看更多>>
资源描述
单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,微生物菌种保藏,1,一、实验目的及要求,1.,了解并掌握菌种保藏的常用方法及其优缺点。,2.,学习斜面传代保藏方法、液体石蜡保藏方法、冷冻干燥保藏方法。,2,二、实验器材,1.,大肠杆菌、酵母菌、放线菌和青霉菌斜面。,2.,无菌水、液体石蜡、脱脂奶粉、,10%HCl,、干冰、,95%,乙醇、,Nacl,、移液器、接种环、安瓿管、冰箱、冷冻真空干燥装置、酒精喷灯、三角烧瓶,(250mL),。,3,三、操作步骤,(,一,),斜面传代保藏法,l,斜面接种 将待保藏的菌种用接种环以无菌操作法移接至相应的试管斜面上,细菌和酵母菌宜采用对数生长期的细胞,而放线菌和丝状真菌宜采用成熟的孢子。,2,贴标签 取各种无菌斜面试管数支,将注有菌株名称和接种日期的标签贴上,贴在试管斜面的正上方,距试管口,2,3cm,处。,4,3,培养 细菌,37,恒温培养,18,24h,,酵母菌于,28,30,培养,36,60h,,放线菌和丝状真菌置于,28,培养,4,7d,。,4,保藏 斜面长好后,可直接放入,4,冰箱保藏。为防止棉塞受潮长杂菌,管口棉花应用牛皮纸包扎,或换上无菌胶塞。,酵母菌、霉菌、放线菌及有芽抱的细菌可保存,2,6,个月,移种一次;而不产芽孢的细菌最好每月移种一次。,5,(,二,),液体石蜡保藏法,l,液体石蜡灭菌 在三角瓶中装入适量液体石蜡,塞上棉塞,牛皮纸包扎,,12l,湿热灭菌,30min,,然后置,105,110,烘箱中,lh,,以除去石蜡中的水分,备用。,2,接种培养 同斜面传代保藏法。,3,加液体石蜡 用无菌滴管吸取液体石蜡以无菌操作加到已长好的菌种斜面上,加入量以高出斜面顶端约,1cm,为宜。,4,保藏 棉塞外包牛皮纸,将试管直立放置于,4,冰箱中保存。霉菌、放线菌、有芽孢细菌可保藏,2,年左右,酵母菌可保藏,1,2,年,一般无芽孢细菌也可保藏,1,年左右。,6,(,三,),冷冻干燥保藏法,1,准备安瓿管 选用内径,5mm,,长,10.5cm,的硬质玻璃试管,用,10%HCl,浸泡,8,10h,后用自来水冲洗多次,最后用去离子水洗,1,2,次,烘干,将印有菌名和接种日期的标签放人安瓿管内,有字的一面朝向管壁。管口加棉塞,,121,灭菌,30min,。,2,制备脱脂牛奶 将脱脂奶粉配成,20%,乳液,然后分装,,121,灭菌,30min,,并作无菌试验。,3,准备菌种 选用无污染的纯菌种,培养时间:一般细菌为,24,48h,,酵母菌为,3d,,放线菌与丝状真菌,7,10d,。,7,4,制备菌液及分装 吸取,3mL,无菌牛奶直接加入斜面菌种管中,用接种环轻轻搅动,再用手摇动试管,制成均匀的细胞或孢子悬液。用无菌长滴管将菌液分装于安瓿管底部,每管装,0.2mL,。,5.,预冻 将安瓶管浸入装有干冰和,95%,乙醇的预冷槽中,,(,此时槽内温度可达,-40,-50),,冷冻,1h,左右,即可使悬液冻结成固体。,8,6.,真空干燥 保持安瓿管内的悬液仍呈固体状态。开启真空泵后,使被冻结的悬液开始升华,冻结样品逐渐被干燥成白色片状,此时使安瓿管脱离冰浴,在室温下,(2530),继续干燥。,7,封口样品 干燥后继续抽真空达,1.33Pa,,在安瓿管棉塞的稍下部位用酒精喷灯火焰灼烧,拉成细颈并熔封,然后置,4,冰箱内保藏。,9,四、注意事项,1,从液体石蜡封藏的菌种管中挑菌后,接种环在火焰上灭菌时要先在火焰边烤干再直接灼烧,以免菌液四溅,引起污染。,2,真空干燥过程中安瓿管内样品应保持冻结状态,以防止抽真空时样品产生泡沫而外溢。,3,熔封安瓿管时注意火焰大小要适中,封口处灼烧要均匀,若火焰过大,封品处易弯斜,冷却后易出现裂缝而造成漏气。,10,五、实验报告,1,结果,2,试述各种菌种保藏方法的优、缺点。,11,
展开阅读全文
相关资源
正为您匹配相似的精品文档
相关搜索

最新文档


当前位置:首页 > 图纸专区 > 课件教案


copyright@ 2023-2025  zhuangpeitu.com 装配图网版权所有   联系电话:18123376007

备案号:ICP2024067431-1 川公网安备51140202000466号


本站为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,本站只是中间服务平台,本站所有文档下载所得的收益归上传人(含作者)所有。装配图网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。若文档所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知装配图网,我们立即给予删除!