体液蛋白质检验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,体液蛋白质检验,学习目标,学会,血浆主要蛋白质的基本特征和功能；急性时相反应蛋白的概念、种类及其主要临床意义；血浆蛋白质的测定原理及其临床意义。,知道,血浆蛋白质功能与分类；常见相关疾病时血浆蛋白质水平的典型变化特征。,了解,尿液及脑脊液蛋白的检测,体液蛋白质检验,1,血浆蛋白质概述,2,2,体液蛋白质检验,血浆蛋白质的功能,1,.,维持血浆胶体渗透压,2.,运输功能,3.,维持血浆的酸碱平衡,4.,免疫与防御功能,5.,凝血、抗凝血及纤溶等功能,此外，血浆蛋白质还有营养、催化、调控物质代谢作用等功能。,血浆蛋白质概述,血浆蛋白质概述,血浆蛋白质的分类,1,按分离方法分类,盐析法 可将血浆蛋白质分为清蛋白和球蛋白两大类；,电泳法 依据分辨率的不同可将血浆蛋白质分成数条甚至几十条区带，如采用醋酸纤维素薄膜电泳可将血浆蛋白质分为,5,条区带，依次是清蛋白、,1,球蛋白、,2,球蛋白、,球蛋白和,球蛋白。,2,按生理功能分类,根据各种血浆蛋白质生理功能的区别，可以分成不同的类别，详见表,8-1,。,蛋白质,结合珠蛋白,前清蛋白,C-,反应蛋白,1-,抗胰蛋白酶,清蛋白,纤维蛋白原,血浆中几种主要的蛋白质,铜蓝蛋白,转铁蛋白,1,-,酸性糖蛋白,2,-,巨球蛋白,癌胚抗原,甲胎蛋白,血浆蛋白质概述,前清蛋白,(prealbumin,，,PA),由肝细胞合成，因电泳时位于清蛋白前面而得名。,PA,是由,4,个亚基形成的四聚体，分子量,54kD,，在血浆中半寿期约,12,小时。,PA,除可作为组织的修补材料外，还有运载功能。用分辨率高的电泳技术可将,PA,分成,2,3,条区带，其中包括两种运载蛋白：甲状腺素转运蛋白：有调节甲状激腺素代谢的功能，可结合约,10%,的三碘甲状腺原氨酸（,T,3,）和甲状腺素（,T,4,），对,T,3,亲和 力较大，但运输甲状腺激素的作用较甲状腺素结合球蛋白弱；,视黄醇结合蛋白,(retinol-binding protein,，,RBP),：可转运视黄醇（维生素,A,）。,前清蛋白,【,临床意义,】,1,PA,分子量小，半寿期短，在营养不良或肝炎早期时，其含量降低往往早于其他血清蛋白质，因此作为早期肝功能损伤的指标，比清蛋白、转铁蛋白具有更高的敏感性。,2,PA,可用来评估营养状况，,PA,水平在,100,150 mg/L,为轻度缺乏，,50,100 mg/L,为中度缺乏，,50 mg/L,为严重缺乏。,3,PA,是负性急性时相反应蛋白，在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化、创伤等时，血浆中,PA,水平均迅速下降。,前清蛋白,清蛋白,(albumin,，,Alb),是,由,585,个氨基酸残基构成的单链多肽，分子量,66.5 kD,，,pI 4,，半寿期,15,19,天，是血浆中含量最多的蛋白质，约占血浆蛋白总量的,57,68,。在的环境中，每分子可带,200,个以上的负电荷，可作为许多物质的运输载体。,Alb,由肝细胞合成，合成速度受蛋白质摄入量及血浆胶体渗透压的共同调节。正常情况下每天约有,360mg,的,Alb,通过肾小球滤过，但大部分（约,95%,）被肾小管重吸收，在小管细胞中被降解。,清蛋白,【,生理功能,】,1,维持血浆胶体渗透压,2,营养作用,3,维持血液酸碱平衡,4,运输和解毒作用,Alb,生理功能很广泛，因此肝脏对,Alb,合成有很强的代偿能力，如肾病综合症时合成量可以增加到正常时的,3,倍以上。,清蛋白,铜蓝蛋白,(ceruloplasmin,，,CER,或,CP),，又称铜氧化酶，位于,2,-,球蛋白区带，由于含铜而呈蓝色，故名铜蓝蛋白，血浆中铜蓝蛋白携带,90%,的铜离子。主要由肝脏合成。,CER,是铜的运输形式，同时还具有铁氧化酶活性，可使血液中的,Fe,2+,氧化成,Fe,3+,，只有,Fe,3+,才能结合到转铁蛋白上使铁不具毒性且利于运输，故又称亚铁氧化酶。,CER,还具有抗氧化的作用，如能催化多酚和多胺类底物氧化。,CER,的稳定性较差，血液离体后，,CER,可丢失其分子中的铜而发生自行氧化，蛋白质肽链容易被酶水解，因此采集血液标本后应尽快测定，不能立即测定时需置,3,4,下储存，长期储存应置,70 ,。,铜蓝蛋白,【,临床意义,】,1,升高,CER,属于急性时相反应蛋白，在感染、创伤和肿瘤时血浆含量上升，在急性损伤,4,20,天达到高峰。在妊娠、口服雌激素类药物时其含量亦有明显增加。,2,降低,多见于,Wilson,病，是本病最有价值的诊断指标。此外，重度营养不良、严重肝病及肾病综合征时,CER,亦多下降。,铜蓝蛋白,转铁蛋白,(transferrin,，,TRF,或,Tf),又名运铁蛋白，为血浆中主要的含铁蛋白质，由肝及单核吞噬细胞系统合成， 分子量约,76.5 kD,，为单链糖蛋白，含糖约,6,，电泳位置在,-,区带,半寿期约为,7,天。,TRF,主要运输由消化道吸收的铁和,Hb,降解释放的铁，将其运输至骨髓等造血器官，一部分铁以含铁血黄素和铁蛋白的形式储存起来，一部分参与血红蛋白、肌红蛋白等的合成。每分子,TRF,能结合,2,个,Fe,3+,，相当于每毫克,TRF,能运输铁。机体缺铁时血浆中,TRF,含量上升，经铁剂有效治疗后可恢复到正常水平。,转铁蛋白,【,临床意义,】,1,缺铁性贫血时,TRF,升高，而由于铁利用障碍引起的贫血时,TRF,正常或降低，血清,TRF,测定可用于贫血的诊断及贫血类型的鉴别。,2,TRF,是负性急性时相反应蛋白，在急性时相反应时降低；在慢性肝脏疾病、营养不良等疾病时血清,TRF,含量亦降低。,3,妊娠、口服避孕药、注射雌激素类药物等可使,TRF,含量升高。,转铁蛋白,结合珠蛋白,(haptoglobin,，,Hp),又名触珠蛋白、血红素结合蛋白，为一种能与血红蛋白（,Hb,）进行不可逆结合的糖蛋白，含糖量,12%,，电泳时位于,2,球蛋白区带，,MW 85 kD,，是一种急性时相反应蛋白。,Hp,在肝脏合成，降解也在肝脏进行，半寿期为,3.54,天。,Hp,的主要功能是在血浆中与红细胞中释放出的游离血红蛋白不可逆结合，形成稳定的,Hp-Hb,复合物，每分子,Hp,可结合两分子,Hb,。,Hp-Hb,复合物半寿期约,90,分钟，肝细胞能迅速将复合物从血浆中摄取并分解，分解释出的铁可以再利用，这一作用可以防止,Hb,从肾丢失，从而为机体有效地保留铁。,Hp,和,Hb,结合后不能重新被利用。,Hp-Hb,复合物是一种高效的过氧化物酶，能防止脂类的超氧化作用。,结合珠蛋白,【,临床意义,】,1,升高,Hp,为正性急性时相反应蛋白，另外肾病综合征及某些肠道疾病时常常伴有血浆蛋白质的丢失，此时肝脏,Hp,的合成增加，可使血浆,Hp,含量升高。某些激素如皮质激素和雄性激素刺激后，也可使,Hp,合成增加而使血浆含量增高。,2,降低,主要见于各种血管内溶血性疾病，其降低的程度常与病情轻重相一致。,Hp,降低是诊断轻度溶血的一项敏感指标。此外，严重肝病患者由于蛋白质合成能力下降，血浆,Hp,含量亦下降；雌激素可减少,Hp,的合成，妊娠、口服避孕药等会使血浆,Hp,含量降低。,结合珠蛋白,1,-,抗胰蛋白酶,(,1,-antitrypsin,，,1,-AT,或,AAT),主要由肝脏合成，为一条含,394,个氨基酸残基的单链多肽，含糖,10,12,，,MW51kD,，。,AAT,是一种具有蛋白酶抑制作用的急性时相反应蛋白，也称丝氨酸蛋白酶抑制物，是血清中最主要的蛋白酶抑制物，其作用占血清中抑制蛋白酶活力的,90%,以上。,AAT,对蛋白酶的抑制作用有明显的,pH,依赖性，在中性和弱碱性环境活性最大，而当时活性基本丧失。,1-,抗胰蛋白酶,【,临床意义,】,1,升高,AAT,作为正性急性时相反应蛋白，在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化、创伤等情况下含量上升，一般,24,小时后开始升高，,3,4,天达到峰值。妊娠、长期服用可的松、雌激素类药物也可使血浆,AAT,含量升高。,2,降低,血清低,AAT,可发生于胎儿呼吸窘迫症。,AAT,缺陷的一些遗传表型常伴有早年,(20,30,岁,),出现的肺气肿。而某些遗传表型还可引起肝细胞损害，有可能引起肝硬化。,1-,抗胰蛋白酶,1,-,酸性糖蛋白,(,1,-acid glycoprotein,，,1,-AG,或,AAG),主要由肝细胞合成，某些肿瘤细胞或脓毒血症时的粒细胞和单核细胞亦可合成。,MW,约,40 kD,，含糖约,45,，包括等分子的己糖、己糖胺和唾液酸，半寿期为,1,3,天。,AAG,分解代谢首先是唾液酸分子的降解，然后蛋白质部分在肝中很快降解消失。,AAG,是主要的急性时相反应蛋白，急性炎症时上升。,1-,酸性糖蛋白,【,临床意义,】,1,升高,急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化、创伤、急性心肌梗死等情况下大部分伴有,AAG,增高，且升高迅速。溃疡性结肠炎时，,AAG,血浆含量升高是临床诊断最可靠的指标之一。,Cushing,病或用肾上腺皮质激素治疗等情况使糖皮质激素水平升高也可使血浆中,AAG,含量增高。,2,降低,在肝实质病变、营养不良时，由于合成减少而致血中,AAG,降低；通过尿液丢失，或粪便丢失，也可导致血液中,AAG,的含量降低；妊娠、口服避孕药等雌激素水平升高的情况亦可导致,AAG,的合成减少。,1-,酸性糖蛋白,2,-,巨球蛋白,(,2,-macroglobulin, ,2,-MG,或,AMG),由肝细胞及单核吞噬细胞系统合成，是血浆中分子量最大的蛋白质，,MW625800 kD,，由,4,个相同的亚基组成，含糖量约,8,，半寿期约,5,天，但与蛋白水解酶结合为复合物后清除速率加快。,AMG,最突出的特性是能与多种分子和离子结合，尤其是能与不少蛋白水解酶（如胰蛋白酶、,-,胰蛋白酶、凝血酶、纤维蛋白溶酶等）结合抑制这些酶的活性，起到有选择性的保持某些蛋白酶活性的作用。,2 -,巨球蛋白,【,临床意义,】,1,升高,肝硬化、糖尿病、自身免疫性疾病、慢性肾炎等疾病时,AMG,升高；在低清蛋白血症时，为了维持血浆胶体渗透压，,AMG,也会代偿性的升高；妊娠、口服避孕药亦会引起,AMG,升高，机制不明。,另外，婴幼儿及儿童,AMG,含量约为成年人的,2,3,倍，可能是一种保护机制。,2,降低,见于肺气肿、弥散性血管内凝血、甲状腺功能亢进、急性胰腺炎及前列腺癌等疾病。,2 -,巨球蛋白,C-,反应蛋白,(C-reactive protein,，,CRP),是第一个被认定为急性时相反应的蛋白质。主要由肝细胞合成，,MW115 140kD,，。,CRP,广泛分布于各部分体液中，如血液、胸腹水、心包液、关节液等处，具有类似抗体的功能，能激活补体，促进粒细胞、巨噬细胞的运动和吞噬，有免疫调理作用，表现炎症反应。对血小板凝聚和血块收缩有抑制作用。,CRP,不受红细胞、血红蛋白、脂质和年龄等因素影响，是反映炎症、感染及疗效的良好指标。,C-,反应蛋白,【,临床意义,】,CRP,升高有临床意义。,CRP,反应非常灵敏，在疾病发生,6,12,小时内迅速上升，甚至可达正常时的,2 000,倍。因此，血液中,CRP,的水平可以及时反映病情变化。,但,CRP,特异性差，不适用于单一疾病的诊断。它的临床价值主要是在组织损伤的筛查和监测，以及判断病人是否感染、评估消炎药物的疗效、诊断疾病复发的可能性。,测定,CRP,结合病史有助于某些疾病的随访。,C-,反应蛋白,纤维蛋白原,(Fibrinogen,，,Fib,）,由肝脏合成，是纤维蛋白的前体，分子量,340kD,，,pI5.5,半寿期为,4,6,天。,Fib,与血浆凝固有关，测定方法一般分三类：功能测定法；物理化学法；免疫测定法。三类方法各有优缺点，因此目前临床还无法对测定方法进行统一。,纤维蛋白原,【,临床意义,】,1,血浆,Fib,升高,Fib,是一种正性急性时相反应蛋白，很多情况可引起其浓度升高。生理情况下，月经期及妊娠时,Fib,也可轻度升高。,2,血浆,Fib,降低,原发的血浆,Fib,减少的情况很少见，是罕见的遗传性疾病；继发性,Fib,减少多是由于纤维蛋白溶解酶溶解纤维蛋白，从而消耗体内原有的,Fib,所致，如胎盘早剥，分娩时羊水栓塞引起弥漫性血管内凝血；严重的肝实质损伤，导致,Fib,的合成障碍也会引起血浆,Fib,降低。,纤维蛋白原,癌胚抗原,(carcinoembryonic antigen, CEA),一般情况下是由胚胎胃肠道上皮组织、胰腺和肝合成。是一种多糖蛋白复合物，,45,为蛋白质，,MW180 kD,，通常在妊娠,6,个月内,CEA,含量增高，出生后血清含量已非常低。正常分泌,CEA,的组织有：支气管、唾液腺、胆管、胰管、小肠、尿道、前列腺。成人,CEA,主要是由结肠粘膜细胞分泌到粪便中，每天大约,70mg,，少量吸收入血。,癌胚抗原,【,临床意义,】,1,CEA,属于非器官特异性肿瘤相关抗原，分泌,CEA,的肿瘤大多存在于空腔脏器，如呼吸道、胃肠道、泌尿道等。当,CEA,60g/L,时，可见于结肠癌、直肠癌、胃癌和肺癌。但有些良性疾病,(,肺气肿、直肠息肉、良性乳腺疾病、溃疡性结肠炎等,) CEA,也会升高，需要相互鉴别。,2,CEA,值持续升高，表明有肿瘤残存或疾病有进展；肿瘤治疗有效时，,CEA,会逐渐降低；,CEA,水平再次升高往往意味肿瘤的复发。,3,除血液之外，检测其它体液也可对肿瘤有一定的诊断、辅助诊断、疗效观察及预后判断等作用，如尿液,CEA,含量测定可作为判断膀胱癌及预后的参考，胆汁和胰液内,CEA,含量可用于诊断胆道癌和胰腺癌。,癌胚抗原,甲胎蛋白,(-fetoprotein,，,AFP),为甲种胎儿球蛋白的简称。主要来自胚胎的肝细胞和卵黄囊，为一条含有,590,个氨基酸残基的单链多肽糖蛋白，,MW6570 kD,，平均为,68 kD,，半寿期,5,天。电泳位于清蛋白和,1,-,球蛋白之间。,AFP,是胎儿血液中的主要蛋白质，妊娠,16,周时达到高峰，以后逐渐降低，出生时血液中的浓度仅为高峰期的,1%,左右，出生后,6,个月至,1,年，逐渐降至健康成人水平。,甲胎蛋白,【,临床意义,】,1,诊断肝癌,AFP,被认为是原发性肝癌的特异性的肿瘤标志物。,80,以上原发性肝癌患者血清中,AFP,含量明显增高，目前在中国、非洲等许多国家都将,AFP,作为肝癌的筛查指标。,2,其它肿瘤,AFP,含量升高还见于胃癌、肺癌、胰腺癌等肿瘤。,3,其他疾病,病毒性肝炎、肝硬化等情况下，血清,AFP,水平也可升高，但,95%,以上肝硬化患者血清,AFP,200g/L,。,4,.,肝癌预后判断,AFP,500g/L,，胆红素,34mol/L,的病人预后差，存活期时间短；血清,AFP,急剧升高提示肝癌转移；术后,AFP,200g/L,提示有残存癌体或有转移。,5,产前诊断羊水,AFP,含量测定可用于胎儿产前监测，当羊水,AFP,高于正常时，提示胎儿畸形或死胎；,85%,脊柱裂及无脑儿的母体在妊娠,16,18,周时血液,AFP,升高，测定母体的,AFP,有诊断价值，但要和临床信息相结合，以免出现假阳性的错误。,甲胎蛋白,急性时相反应与急性时相反应蛋白,在急性炎症、组织损伤、心肌梗死、烧伤等急性疾病时，血浆中许多蛋白质浓度会发生明显改变，有些蛋白质浓度升高，有些蛋白质浓度降低，随着病情的好转，这些蛋白质又逐渐恢复至正常。这种现象称为,急性时相反应,(acute phase reaction,，,APR),，而这些浓度发生变化的蛋白质则称为,急性时相反应蛋白,(acute phase protein,，,APP),。,APR,是机体防御功能的一部分，,APP,浓度变化的幅度与以上病理状态的严重程度以及时间进程有关，但缺乏特异性。,疾病时血浆蛋白质的变化,血浆蛋白质概述,疾病时血浆蛋白质的变化,表,8-4,几种疾病时血浆蛋白质的变化,注：,为升高，,为明显升高，,为降低，,为明显降低，,N,为正常，,为缺失,血浆蛋白质概述,33,第三节 核苷酸代谢紊乱,核苷酸是核酸的基本组成单位。嘌呤核苷酸合成和分解中最多见的代谢紊乱是高尿酸血症，并由此导致痛风。嘧啶核苷酸从头合成途径中的酶缺陷可引起乳清酸尿症，但临床应用很少，故不在本章介绍。,34,嘌呤核苷酸分解,35,二、高尿酸血症,由尿酸排泄障碍或嘌呤代谢紊乱引起。,人体内缺乏尿酸酶，尿酸无法再分解，通过肾脏排出体外。,体液尿酸浓度的高低取决于体内嘌呤合成量、食入量和尿酸排出量之间的平衡状态。,肾脏尿酸排泄减少或,体内嘌呤来源过多均可,导致高尿酸血症。,（一）高尿酸血症和痛风的概念,血清尿酸浓度超过参考值上限称为高尿酸血症，即男性和绝经后女性大于,420mol/L,，绝经前女性大于,350mol/L,。,血液尿酸浓度增高到一定程度时，可出现尿酸盐结晶形成和沉积，并引起特征性急性关节炎、痛风石、慢性关节炎、关节畸形、慢性间质性肾炎和尿酸性尿路结石，即为痛风。,（二）痛风的发生机制,血液或滑囊液中的尿酸钠浓度达到饱和状态，将出现结晶沉淀。,在体温,37,、,时，尿酸钠的溶解度约为,420mol/L,，而在,30,时为,268mol/L,。,饱和状态的尿酸钠，与血浆特异性,1,、,2,球蛋白结合后，仍具有一定的稳定性。,遇有下列情况即可使尿酸钠呈微小结晶析出：,血浆,1,、,2,球蛋白减少,局部,pH,降低,局部体温降低,（二）痛风的发生机制,尿酸钠结晶易沉淀在血管较少、粘多糖含量较丰富的软骨、关节腔内及其他结缔组织中。,运动时这些组织容易发生缺氧，糖酵解加速和乳酸产生增多，,pH,降低。,运动、饮酒、应激、局部损伤等都可诱发这些部位的尿酸钠结晶形成及急性炎症发作。,尿酸钠结晶可吸附,IgG,，在补体参与下诱发多型核白细胞吞噬作用，促使白细胞膜破裂，释放各种炎症介质，导致组织发生炎症反应。,（三）高尿酸血症和痛风的生物化学诊断及治疗,1.,高尿酸血症及其类型的判断,（,1,）尿酸排泄量,普通饮食,4800mol/24h,低嘌呤饮食,3600mol/24h,为生成过多型,血清蛋白质测定,脑脊液蛋白质测定,体液蛋白质电泳分析,尿液蛋白质测定,体液蛋白质检验,测定蛋白质时利用蛋白质特有的结构或性质：,重复的肽链结构；,分子中均含有氮原子；,与色素结合的能力；,沉淀后借浊度或光折射测定；,酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收,一 、体液总蛋白,42,（一）总蛋白测定方法学概述,凯氏定氮法：,参考方法,双缩脲法：,是临床测定血清总蛋白首选的常规方法,酚试剂法,紫外吸收法,染料结合法 氨基黑、丽春红、考马斯亮蓝、邻苯,三酚红钼,比浊法,一 、体液总蛋白,血清蛋白质的测定,血清总蛋白测定,1,凯氏定氮法,1883,年由,Kjeldahl,首创，根据蛋白质含氮量比较恒定（约占,16%,）这一元素组成特点，,即,1,克氮相当于克蛋白质,通过测定样品中氮量来换算蛋白质的含量。该法结果准确，精密度高，是,TP,测定的参考方法，但由于操作复杂、用时长，影响因素较多，目前多用于蛋白质标准物的定值和常规方法的校准。,2,双缩脲法,是目前实验室测定血清,TP,的首选方法。测定原理是蛋白质分子的两个肽键,(-CO-NH-),在碱性条件下能与,Cu,2+,作用生成紫红色络合物，在,540nm,波长处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白质的含量成正比，由此计算,TP,的含量。由于此反应与两分子尿素缩合形成的产物,双缩脲,(H,2,N-CO-NH-CO-NH,2,),在碱性环境下与,Cu,2+,作用形成紫红色的反应类似，故称为双缩脲反应。,44,（二）总蛋白测定方法学评价,凯氏定氮法,优点：,准确度高，回收率达,101.54 %,；,精,密度好，,CV%,为,0.85%,缺点：,操作流程长，程序复杂。各种蛋,白质含氮量在疾病状态差异较大,等，,但平均为,16%,比较准确。,该法主要用作血清蛋白质标准品定值及参考性工作，血清总蛋白常规测定中很少使用。,45,（二）总蛋白测定方法学评价,双缩脲法,优点：,显色稳定性好，干扰物质少，试剂单一，方法简便,缺点：,灵敏度较低,干扰物质：,主要为右旋糖酐，其与反应混合液中的铜和酒石酸结合形成沉淀，影响测定结果的准确度。此外胆红素、血红蛋白、脂浊、某些抗菌素和铵盐等也可干扰结果。,46,优点：,呈色灵敏度较高，达到双缩脲法的,100,倍左右，有利于检出较微量的蛋白质。,缺点：,费时较长，试剂配制复杂，且专一性较差，大部分具有还原性的物质均有不同程度的干扰作用。,因酪氨酸各蛋白,质,比例不一，以酪氨酸为标准差异较大。,酚试剂法,（二）总蛋白测定方法学评价,47,优点：,简便而常用，因未加任何试剂和处理，可保留制剂的生物活性，多用于纯化的蛋白质样品。,缺点：,准确性不如双缩脲法，因而不能作为常规方法广泛使用。,紫外吸收法,（二）总蛋白测定方法学评价,芳香族氨基酸,280nm,吸收峰：但因为各种蛋白质中芳香族氨基酸的含量与比例不同而有较大差异；且尿酸和胆红素在,280nm,附近也有干扰，故该法的准确性和特异性有限；高度灵敏要稀释 。,肽键,220,225nm,强吸收峰： 但太高而需要大量稀释 。,酸性环境蛋白质带正电荷，可与染料阴离子反应而产生颜色改变。,染料有氨基黑、丽春红、考马斯亮蓝、邻苯三酚红钼等，前两种常作血清蛋白电泳的染料。,考马斯亮蓝可用于尿液、脑脊液等定量测定，虽简便和灵敏，但比色杯对染料有吸附作用。,48,（二）血清总蛋白染料结合法测定原理,49,氨基黑、丽春红,常作为血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳或琼脂糖凝胶电泳的染料。,氨基黑,对不同蛋白质的结合力不一致,(,清球相差,20 %,),，因此,在临界浓度时可能,会,对临床判断带来误诊,。,丽春红,对清球蛋白质的结合力较一致,且色质鲜艳,但灵敏度较低,适合,染色后扫描定量。,（二）,染料结合法测定方法学评价,50,考马斯亮蓝,常用于需更高呈色灵敏度的蛋白电泳中，也可用于测定尿液、脑脊液等的蛋白质。,优点：,简便、快速、灵敏。,缺点：,不同蛋白质与染料的结合力不一致，且试剂对比色杯有吸附作用,不适宜自动化分析。,（二）染料结合法测定方法学评价,血清总蛋白测定,【,参考区间,】,健康成年人,65,85g/L,。,【,临床意义,】,1.,血清,TP,升高,血液浓缩,严重呕吐、腹泻、高热、大量出汗、休克及慢性肾上腺皮质功能减退等疾病时由于水分丢失而使血液浓缩，,TP,浓度可明显升高。,合成增加,多见于球蛋白合成增加。,2,血清,TP,降低,营养不良,合成障碍,血液稀释,丢失过多,其它,机体代谢加快、结核、肿瘤等情况时也可能引起,TP,降低。,血清蛋白质的测定,体液蛋白质检验,血清蛋白质的测定,血清清蛋白测定,测定,Alb,的方法中，目前实验室应用最广的是染料结合法。,【,原理,】,在酸性环境下，清蛋白解离带有正电荷，能与带有负电荷的染料结合产生颜色反应，而球蛋白则结合外源性染料很少，因此可以在不分离清蛋白、球蛋白的情况下直接测定血清,Alb,的含量。,与,Alb,结合的染料有多种，其中,溴甲酚绿,(bromcresol green, BCG),和,溴甲酚紫,(bromcresol purple, BCP),是最常用的两种，其中溴甲酚绿,(BCG),法是测定血清,Alb,的推荐方法。,体液蛋白质检验,溴甲酚绿,表,8-5,两种染料结合法测定血清,Alb,含量的优缺点比较,体液蛋白质检验,血清蛋白质的测定,血清清蛋白测定,【,参考区间,】,成人：,35,50 g/L,；,4,14,岁儿童：,38,54 g/L,【,临床意义,】,1.,血清,Alb,升高,主要见于严重腹泻、呕吐、出汗造成的脱水及休克等原因引起血浆浓缩而导致的假性,Alb,增高（,Alb,的绝对值并没有升高）；或者一次性静脉输入过量清蛋白，迄今为止尚未见到真性单纯,Alb,升高的疾病。,2,血清,Alb,降低,临床意义同,TP,，但许多时候血清,Alb,与,TP,降低的程度不一致。,体液蛋白质检验,血清蛋白质的测定,血清球蛋白测定,目前临床实验室血清,球蛋白,(globulin,，,G),的结果多采用计算法，即血清总蛋白与血清清蛋白的差值即为血清球蛋白的含量，并可同时计算出清蛋白与球蛋白的比值，即,A/G,值，公式如下：,球蛋白,(g/L)=,总蛋白,(g/L),清蛋白,(g/L),A/G =,清蛋白,(g/L)/,球蛋白,(g/L),【,参考区间,】 20,30g/L,；,【,临床意义,】,血清球蛋白浓度升高可见于：,1,自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、风湿热等；,2,炎症或急慢性感染，如病毒性肝炎、结核病、疟疾、麻风病、黑热病、血吸虫病等；,3,恶性,M,蛋白血症，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤等。,体液蛋白质检验,56,血清蛋白电泳典型异常图谱,A,正常电泳图,B,双清蛋白血症,C,清蛋白缺乏症,D,肾病综合征,E,肝硬化（,-,桥）,F,急性炎症,尿液蛋白质的测定,尿液总蛋白定量测定,【,参考区间,】 24h,尿蛋白定量,【,临床意义,】,正常人尿液中含有极少量的蛋白质，当尿蛋白定性为阳性，,24h,尿蛋白定量超过时，称为蛋白尿。,体液蛋白质检验,尿蛋白试纸对比色板,体液蛋白质电泳分析,脑脊液总蛋白定量测定,目前,CSF,蛋白质定量测定方法包括邻苯三酚红钼络合显色法、浊度法、考马斯亮蓝,G-250,比色法、酚试剂法等，其中全国临床检验操作规程推荐采用的是前两种。,【,参考区间,】,成人：腰池,200,400 mg/L,小脑延髓池,100,250 mg/L,脑室,50,150 mg/L,蛛网膜下腔,150,400 mg/L,【,临床意义,】,测定,CSF,蛋白质主要用于观察血脑屏障对血浆蛋白质的通透性或鞘内分泌的免疫球蛋白是否增加。,CSF,蛋白质含量升高是血脑屏障功能障碍的标志。,体液蛋白质检验,血清蛋白质电泳,蛋白电泳分析是一种定性分析，是粗略估计各种区带之间蛋白质的比例以及分析是否有特殊的蛋白成份。,常用的分析方法是根据各区带蛋白质所占的百分比,(%),进行分析，也可将各区带的百分比与血清总蛋白浓度相乘后，得到绝对浓度,(g/ L),后进行分析。,当疾病发生时，血清蛋白质电泳后的区带的数目以及百分比会发生变化。,尿液蛋白质电泳,尿液蛋白质电泳可以将尿液蛋白质按分子大小进行分离，根据各组分的出现与否判断肾脏损伤的部位和程度，较为全面地反映肾脏的整体情况。,目前尿液蛋白质电泳多采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,(SDS-PAGE),。,体液蛋白质电泳分析,体液蛋白质检验,正常人,肾病综合征,肝硬化,谢 谢！,谢谢大家！,结 语,