宫颈癌基因E6E7mRNA(南阳讲课)

,Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary,科蒂亚生物,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,宫颈癌基因E6E7mRNA(南阳讲课),HPV癌基因E6/E7mRNA,主要内容,报告解读、处理建议,1,临床意义、适用范围,3,2,主要内容,1,HPV癌基因E6/E7mRNA,1,2,.,型别：,1,2,0,多种（依据,L1 DNA,）,1.,结构：,外壳蛋白：,L1,蛋白（,72,个五聚体），,L2,蛋白（,12,个）。,内部遗传物质：,闭环、双链,DNA,。,（不含 RNA）,3.分类：,依据生物特性、致癌性,高危型,HPV,(,HR-HPV,),：,16,、,18,、,31,、,33,、,35,、,39,、,45,、,51,、,52,、,56,、,58,、,59,、,68,、,66,低危型,HPV,（,LR-HPV,）,：,6,、,11,、,42,、,43,、,44,什么是E6/E7 mRNA ?,L1:,主要衣壳蛋白，是疫苗的主要成分。,L2:,次要衣壳蛋白，是市售抗体的主要识别位点。,E4,：结合并破坏细胞角蛋白网，形成挖空细胞的外观。,E2,：负性调节,E6,和,E7,，维持凋亡和细胞周期的调控。,通常在病毒发生整合时失活。,HPV,的主要致癌基因,E6,通过抑制,p53,而阻断凋亡,E7,通过抑制,pRB,使细胞周期失控,。,X,HPV,的基因片段及功能,E6/E7 mRNA ?,高危亚型,HPV,感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：,E6,和,E7,蛋白。癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（抑癌蛋白如,P53,、,RB,等）相结合，导致细胞周期控制失常，发生癌变。,（人民卫生出版社、妇产科学、,2004,年,1,月第,6,版）,致癌原理,E6/E7 mRNA与宫颈癌的关系,E6、E7mRNA-是宫颈病变开始和进展的必由之路!,HPV,感染在宫颈细胞内的表达过程,基因改变早于细胞改变,E6/E7mRNA：,是致癌基因E6/E7表达的直接产物；,是最终致癌物-E6/E7癌蛋白合成的模板；,是宫颈病变开始和进展的必要条件！,小结,主要内容,1,E6/E7mRNA的临床意义与适用范围,2,高危的HPV感染宫,颈上皮细胞,癌基因E6、E7 mRNA,E6、E7 癌蛋白,E6、E7 癌蛋白与抑癌,蛋白P53、RB等结合,宫颈细胞CIN或癌变,癌基因E6、E7 DNA,HPV病毒学检测,病毒癌基因学检测,细胞形态学检测,HPV L1 DNA,HPV L1 mRNA,HPV L1 蛋白,HPV复制繁殖,HPV,感染后演变路径及宫颈癌筛查,&,诊断方法应用,检测方法,检测靶标,主要检测意义,巴氏涂片,宫颈上皮细胞,提示宫颈细胞已发生的病变情况，筛查的基本方法。主要用于评估现阶段宫颈（病变）情况。,液基细胞学（,TCT,）,HPV,病毒学,HPV,病毒,DNA,提示是否有病毒感染。主要用于评估现阶段宫颈是否有病毒感染。,癌基因E6/E7 mRNA检测,病毒癌基因E6/E7 mRNA,提示病毒,癌基因已经转录表达。,可用于了解人体宫颈细胞或组织癌变的发展趋势。,阴道镜检,宫颈内表面,提示已经发展到宫颈表面的病变及其位置。主要是更直接辅助检查现阶段宫颈（病变）情况。,宫颈活检,宫颈组织,提示宫颈组织病变情况，确诊金标准。,临床意义-,特异性强、阳性预测值高,正常宫颈,感染,HPV,轻度宫颈上皮内瘤变,(CIN ),中度宫颈上皮内瘤变,(CIN ),高度宫颈上皮内瘤变,(CIN ),原位癌浸润癌,依靠免疫力,80%,自行消退,0,6-18,个月,至少,2,年后,5-10,年后,一过性感染,持续性感染,62%,转为正常,16%,进一步进展,22%,维持原状,54%,转为正常,30%,进一步进展,16%,维持原状,100%,HPV,感染致宫颈癌模式图,什么样的感染者会进一步进展呢？哪种检测方法能提示？,E6/E7mRNA检测,1、发现已感染HPV，且癌基因已经表达的宫颈病变高风险,者, 特异性强、阳性预测值高；,2、弥补：细胞学检测敏感性；,HPV,检测特异性；,阴道镜/活检的漏检等。,3、预测发展趋势，指导后续治疗、随访。,提供关键的癌变信息，治疗更及时，预防更有效！,小 结,适用范围,（不局限于,30,岁以上人群）,：,1、筛查：,细胞学+ E6/E7 mRNA检测；,2、辅助诊断：,（1）细胞学+E6/E7 mRNA检测；,（2）若HPV（+） E6/E7 mRNA检测；,（3）病理组织+ E6/E7 mRNA检测。,3、手术后及随访时:,组织学+癌基因,E6/E7 mRNA,；,细胞学+ E6/E7 mRNA检测。,TCT,结果正常的女性，在正常筛查间隔内一定是安全的吗？,TCT,结果：,ASCUS,，如何评估风险？,直接镜检,&,活检：过度检查？,随访：漏诊？,30,岁以下妇女，感染率高，清除率高，,HPV,（,+,）率高，该如何评估风险？,筛查,常见问题,.,Intracellular Human Papillomavirus E6, E7 mRNA Quantification Predicts CIN 2 + in Cervical Biopsies Better Than Papanicolaou Screening for Women Regardless of Age. Arch Pathol Lab Med. 2012,；,13,6:956-960.,E6/E7 mRNA检测；,联合,TCT,筛查,基因改变早于细胞形态改变，辅助提高细胞学敏感性，,ASC-US,分流,30岁以下女性筛查效率。,筛查应用,C,IN1风险评估？随访时间确定,。,C,INII-III,的患者，手术方式 术后随访。,特殊病例：未生育女性、妊娠女性？,随访间隔？,辅助诊断,常见,问题,：,正常宫颈,感染,HPV,轻度宫颈上皮内瘤变,(CIN ),中度宫颈上皮内瘤变,(CIN ),高度宫颈上皮内瘤变,(CIN ),原位癌浸润癌,依靠免疫力,80%,自行消退,0,6-18,个月,至少,2,年后,5-10,年后,一过性感染,持续性感染,62%,转为正常,16%,进一步进展,22%,维持原状,54%,转为正常,30%,进一步进展,16%,维持原状,100%,HPV,感染致宫颈癌模式图,预测性能,ASCUS & LSIL,者，,2,年内跟踪诊断至,CIN2+,女性：,HPV E6,、,E7 mRNA,作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的,69.8,倍。,HPV DNA,作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的,5.7,倍。,Tor Molden etc. Predicting CIN2+ when detecting HPV mRNA and DNA by PreTect HPV-Proofer and consensus PCR: a 2-year follow-up of women with ASCUS or LSIL Pap smear. International Journal of Cancer. Int. J. Cancer, 2005,114: 973,976.,E6/E7 mRNA,检测,辅助活检后人群的后续处理，提高诊断水平：,组织学CIN1，建议采用E6/E7mRNA检测：,E6/E7mRNA检测阳性，建议缩短随访时间；,E6/E7mRNA检测阴性，建议根据医嘱随访。,组织学CIN2+，建议采用E6/E7mRNA检测：,E6/E7mRNA检测阳性，建议积极治疗；,E6/E7mRNA检测阴性，建议保守治疗，密切随访。,辅助诊断应用,手术后残端是否会残留病毒？复发的可能性多大？,术后随访间隔是多久，确定依据是什么？,术后随访,常见,问题,：,Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test.,Leep,锥切术成功后检测剩余,/,复发的宫颈疾病：,mRNA HPV,检测可能发挥的作用。,14%-70%,的阳性切缘患者,5-15%,的干净切缘患者,存在复发宫颈疾病的风险。,E6/E7,mRNA,检测的随访,Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test. Current Pharmaceutical Design 2013,19,1450-1457.,术后，,mRNA,（,+,）比,mRNA,（,-,）复发的几率更高,n=116,（,CIN,患者经,LEEP,刀治疗后）,E6/E7 mRNA,检测，,辅助术后的后续处理：,手术后，病理组织学诊断+E6/E7mRNA检测,术后随访，细胞学+E6/E7mRNA检测。,术后随访应用,病例分析,-30岁已婚女性,2013.12.3体检：,E6/E7mRNA(+),低度风险,TCT,正常,未进行干预性治疗，3个月复查,2014.3.25 细胞学：ASC-US,E6/E7mRNA(+),高度风险,术后病检结果：宫颈1点、6点慢性宫颈炎，部分区域呈湿疣性改变；12点处小灶区域CIN2,LEEP,3: 2012.9,月，广东一家医院，一病人,66,岁,TCT HSIL,，,E6,、,E7mRNA,检测阴,性，,TCT,阅片老师认为那个标本报告为癌都不为过，所以进行活检，但,活检结果为,CIN1-2,级，临床医生对活检不满意，并考虑到该病人年龄,比较大，行使锥切后活检，活检结果,CIN1,。,1,：,2012.3,月，河北一医院对一,LEEP,术后,45,岁病人加做,E6,，,E7mRNA,检,测，发现拷贝值为,2,万多，两周后重新取样检测，发现,E6,E7 mRNA,检测仍有一万多拷贝，于是重新取样活检，发现切缘为,CIN3,级。,2,：,2012.7,月浙江余姚市一医院，一病人,HPV,检测阴性，,TCT,检测正常，,E6,、,E7mRNA,检测一万多拷贝，主任对该检测结果质疑，对该病人进行,活检，病理结果,CIN2,3,级。,病例,主要内容,1,报告解读及处理建议,3,细胞学,E6,、,E7,mRNA,结果解读,临床处理建议,正常,-,未检测到癌基因转录。,1,年后复查细胞学和,E6/E7 mRNA,。,+,癌基因转录，未观察到细胞形态的改变。,酌情进行阴道镜检或,6,个月后复查细胞学和,E6/E7 mRNA,。,ASC-US,-,未检测到癌基因转录。,6-12,个月复查细胞学和,E6/E7 mRNA,。,+,癌基因已经开始转录，细胞形态处于转变期。,异常,-,癌基因此时处于转录不活跃状态。,+,癌基因已经开始转录，细胞形态已经明显改变，处于细胞形态改变状态。,阴道镜,/,活检,如无病变，半年后复查,E6/E7 mRNA,如,E6/E7 mRNA,（,+,），查细胞学,细胞学,ASC-US,阴道镜检,如,E6/E7 mRNA,（,-,），半年后查,E6/E7 mRNA+,细胞学。,阴道镜,/,活检,无病变：严密随访,CIN2+:,相应手术治疗,组织学,E6,、,E7,mRNA,结果解读,临床处理建议,CIN1,-,未检测到癌基因转录。,立即用病理标本的石蜡切片做E6/E7mRNA检测,+,癌基因处于转录活跃状态，进展风险较大。,1、建议用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为,治疗的辅助指标。,2、严格随访或进行积极处理（如冷冻、电灼的病灶处理,CIN2/3,-,癌基因处于转录不活跃状态。,1、立即用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为治疗的辅助指标。 2、临床处理请参照宫颈癌诊治指南。,3、建议术后6个月进行细胞学及E6/E7 mRNA检测。,+,癌基因处于转录活跃状态，进展风险较大。,1、建议用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为治疗的辅助指标。 2、临床处理请参照指南,如宫颈切除或消融。建议积极处理及严格随访。,3、建议术后6个月残端进行细胞学及E6/E7 mRNA检测。,E6/E7 mRNA（-），6个月复查细胞学及E6/E7 mRNA检测。,E6/E7 mRNA（+）、6个月复查细胞学ASCUS或E6/E7 mRNA(+)，建议积极处理,如冷冻、电灼或LEEP。,报告单解读阴性,报告单解读阳性,取样方法,一、细胞样本,二、组织样本,石蜡切片： 厚度3-5um切片4-10片,宫颈上皮脱落细胞 同TCT,可与TCT共用 （一般5-10ml，不少于3ml）,小结,高危HPV的E6/E7致癌基因表达产生E6/E7癌蛋白是宫颈癌的关键病因。,E6/E7mRNA：,是E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宫颈癌变的必由之路！,E6/E7mRNA检测：,筛查、辅助诊断、术后随访。,检测取样：,脱落细胞同TCT,组织取样：石蜡切片,感谢您的倾听！,祝：身体健康,工作顺利,心想事成！,