免疫比浊法检测免疫球蛋白

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/30,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,免疫比浊法检测免疫球蛋白,实验原理,免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，,测定这种折射或吸收后的透射光或散射光,作为计算单位。,2,2020/11/30,免疫比浊法分类,当一束光,线通过溶,液受到光,散射和光,吸收两个,因素的影,响而使光,的强度减,弱,透射比浊法,:,在光源的光路方向（,0,0,）,测量透射光强度和被检测,溶液微粒浓度关系的方法。,散射比浊法,:,在光源的光路方向（,5,0-,96,0,）,角的方向上测量透射光强度,和被检测溶液中微粒浓度关,系的方法。,3,2020/11/30,透射比浊法和散射比浊法光路,检测器,A,检测器,B,IC,I,0,I,I,透射比浊法,散射比浊法,4,2020/11/30,（一）,基本原理,是个极其简单的方法。在抗原过量情况下，与待测样品中相应的,Ig,发生抗原,-,抗体反应，形成可溶性复合物，使反应介质的浊度发生改变。,测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以吸收单位（,A,）或,OD,值表示，,A,值反映了入射光和透射光的比率。待测物中,Ig,含量可通过标准曲线计算得出。,待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，而与透射光呈反比。,反应在,PEG,的作用下，加速复合物的形成。,免疫透射比浊法,5,2020/11/30,透射比浊法测定原理,光 源,诱导剂,6,2020/11/30,样品,光电计,滤光片,光源,透射比浊法测定原理,7,2020/11/30,透射比浊法,的缺陷：,(1),溶液中存在的抗原抗体复合物分子应,足够大,，分子太小则阻挡不了光线的通过。,(2),溶液中的抗原抗体复合物的数量要,足够多,。如果数量太小，溶液浊度变化太小，对光通量影响不大。,(3),透射比浊是依据,透射光减弱,的原理来定量的，因此只能测定抗原抗体反应的第二阶段，检测仍需抗原抗体温育反应时间，检测时间较长。,光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的,光能数量,8,2020/11/30,原理,散射比浊法,在入射光的,一定角度,检测粒子发出的散射光，,散射光的强度与,IC,的含量呈正比,。,9,2020/11/30,散射比浊法测定原理,增 加 散 透 率,: 660nm,测 定 散 射 光,聚集,形成,诱导剂,10,2020/11/30,散射光测定,检测器,(LED),光电计,样品,100 %,0 %,时间,散射光强度,11,2020/11/30,速率散射比浊法,（一）,基本原理,是测定抗原抗体结合反应的动态过程。,所谓速率，是在,单位时间内,抗原抗体结合形成,复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的,速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态,的速率比浊分析。,当仪器测定到某一时,间内形成速率下降时，,即出现,速率峰,，该峰,值的高低，即代表所,测抗原的量。,12,2020/11/30,CONCENTRATION,RATE,在速率峰基础上完成的标准曲线,13,2020/11/30,方法评价：,敏感度高,快速,(,不必达平衡）,抗原抗体结合的动态测定，理论上测定不受本底散射信号的影响,可检测微量样品,14,2020/11/30,原理,2.,终点散射比浊法,让抗原抗体作用一定时间，使其反应,达到平衡,后，测定其,IC,形成的量。,IC,的浊度不再受时间的影响,，但反应,IC,聚合产生絮状沉淀之前，进行浊度测定。,15,2020/11/30,散射比浊法,的缺陷,(1),因为是一次性测定光吸收值，没有考虑每一个待测样本的吸收和散射效果，可测定结果不准确,(2),测定的仍是抗原抗体反应的第二阶段，不适合快速检测。,(3),终点法存在反应本底,，测定样本的含量越低本底比例越大，故在微量测定时，本底的干扰是影响准确测定的重要因素。,16,2020/11/30,影响免疫比浊测定的因素,1,、抗原抗体比例,2,、抗体的质量,抗体的特异性、效价、亲和力,3,、反应的溶液,4,、增浊剂的使用,17,2020/11/30,1,、透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的周期较长。,2,、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。,透射比浊法和散射比浊法优缺点比较,18,2020/11/30,免疫浊度法测定中应注意的问题,1,、伪浊度的影响,伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特异性的交叉反应性杂抗体成分；增浊剂浓度和反应时间掌握不当；样品本身的浊度处理不当；试剂的污染和变质；器材尤其是比色杯等不够清洁等因素。,2,、非特异性散射光的影响,免疫浊度法经常受内源性光散射的干扰，为避免这些非特异性光散射的影响，应用透射比浊法时需保证抗体组分在,3,以下，散射比浊法需保证在 以下。,19,2020/11/30,本实验中应用聚乙二醇的生理特性,聚乙二醇是,中性、无毒,且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物，,聚乙二醇即,PEG,具有高度的亲水性,，在水溶液中有较大的水动力学体积，并且,没有免疫原性,。当藕联到药物分子或药物表面时，可以将其优良性质赋予修饰后的药物分子，,改变它们在水溶液中的生物分配行为和溶解性,，在其修饰的药物周围产生空间屏障，减少药物的酶解，避免在肾脏的代谢中很快消除，并使药物能被免疫系统的细胞识别,。,20,2020/11/30,材料,1.,免疫球蛋白试剂,A,M,G,2.,免疫球蛋白试剂,A,M,G,校准品，蒸馏水,3.,微量加样枪,4.,分光光度仪,21,2020/11/30,结果计算方法,Ig,浓度（,g/L,）,=, Ig,校准浓度（,g/L,）,样本管吸光度,校准管浓度,22,2020/11/30,Thank you !,23,2020/11/30,Thank You !,不尽之处，恳请指正！,