微生物的分离纯化

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,模块,2,微生物的纯培养技术,任务,2,微生物的分离纯化,在自然界中，微生物呈混合状态存在，要想获得所需菌种，则必须把它们从中分离出来并加以纯化培养。,分离,：将特定的微生物个体从群体中或从混杂的微生物群体中分离出来的技术叫作分离。,纯化,：在特定环境中只让,1,种来自同一祖先的微生物群体生存的技术叫作纯化。,概念,分离技术主要是稀释和选择培养。,稀释：,是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群体，使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞，并使此单细胞增殖为一个新的群体。最常用的为,平板划线法和稀释涂布法,。,选择培养：,如果所要分离的微生物在混杂的微生物群体中数量极少或者增殖过慢而难以稀释分离时，需要结合使用选择培养法，即选用仅适合于所要分离的微生物生长繁殖的,特殊培养条件,来培养混杂菌体，改变群体中各类微生物的比例，以达到分离的目的。,概念,实验操作,（一）,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,称量,溶化,灭菌,倒平板,计算,（二）接种纯化大肠杆菌,实验操作,（一）,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,称量,溶化,灭菌,倒平板,接种方法有：,计算,（二）接种纯化大肠杆菌,实验操作,（一）,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,称量,溶化,灭菌,倒平板,接种方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,计算,（二）接种纯化大肠杆菌,稀释平板分离法,：,将待分离样品做系列稀释，使样品中的微生物细胞充分分散。取合适稀释度的样品与培养基混合，培养出现菌落。如稀释度适合在培养基平板上即可出现的单个菌落。,平板划线分离法,：,用无菌接种环挑取待分离材料，在平板培养基表面划线,稀释而,获得单菌落的方法。,实验原理,细菌的接种工具,接种针,接种环,涂布器,1.,平板划线接种法：,目的：使混合的细菌呈,单个分散,生长，形成单个菌落，以获得,纯菌,。,方法,分区划线法,：适用于含菌量较多的标本,连续划线法,：适用于含菌量较少的标本,菌落,当单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，便会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。,分区划线生长现象,连续划线生长现象,1.,平板划线法,讨论,每次使用接种环之前都要进行灼烧，为什么？,讨论,1.,操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上,可能存在的微生物污染培养物；,每次划线前灼烧,接种环,是为了杀死上次划线结束后，接种环上残,留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直,接来源于上次划线的末端，,从而通过划线次数的,增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便,得到菌落。,划线结束后灼烧接种环，能及时杀死,接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染,操作者。,讨论,2,.,以免接种环温度太高，杀死菌种。,讨论,2,.,以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.,划线后，线条末端细菌的数目比线条起,始处要少，,每次从上一次划线的末端开始,，,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐,步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来,的菌落。,2.,稀释涂布法,2.,稀释涂布法,（,1,）,系列稀释操作,：,2.,稀释涂布法,（,1,）,系列稀释操作,：,依次,1mL,，注意更换移液管,充分混匀,（,2,）,涂布平板操作,系列稀释,1,个,225mL,无菌水,2,个,9ml,无菌水,得,10,-1,25g,或,25mL,样品,10,-2, 10,-3,的菌悬液,1ml,稀释涂布平板法,2.,稀释,涂布法,倒平板，待平板冷却凝固后再加样,取菌,悬液,2.,稀释,涂布法,将菌液均匀涂布分散,37,倒置培养,按浓度捆成一摞,恒温,37,培养,平板菌落计数,讨论,讨论,提示：,应从操作的各个细节保证“无菌”。,例如，,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸,管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒,精灯火焰周围；等等。,