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,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2019/7/19,#,单击此处编辑母版标题样式,实验五,GUS,染色检测基因瞬时表达,二零一二,.,九,1,报告基因,gus,基因(,-,葡萄糖苷酸酶基因)是目前转基因植物中应用最为广泛的报告,基因,。,-,葡萄糖苷酸酶,是一个水解酶,以,-,葡萄糖苷酸,酯类物质为底物,其反应产物可以用多种方法检测出来。,绝大多数植物没有葡萄糖苷酸酶的背景活性,因此,gus,作为报告基因广泛应用在植物基因工程中。,标记基因为,gus,的常用商业载体:,pBI121,2,组织化学法检测,以,5-,溴,-4-,氯,-3-,吲哚,-,葡萄糖苷酸(,X-Gluc,)作为反应底物,将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞,被转入了,g,us,基因,并表达出,Gus,,,适宜的条件下,该酶就可将,X-Gluc,水解生成蓝色产物。这是由其初始产物经氧化二聚作用形成的靛蓝染料,它使具,Gus,活性的部位或位点呈现蓝色,用肉眼或在显微镜下可看到,且在一定程度下根据染色深浅可反映出,Gus,活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织,甚至单个细胞内的表达情况。,gus,基因,转拟南芥的,GUS,检测结果,3,Gus,染色,将,拟南芥的幼苗或成年植株的组织浸泡于染色缓冲液中,置于真空罐,中,0.5Mbar,抽真空,10 min,,使染液充分渗入到组织的内部,然后置于,37,浸泡,过夜。移去染液,用,0.1 mol/L,的磷酸缓冲液,(pH7.0),冲洗,2-3,次。再用,70%,的乙醇脱色,更换乙醇,2-3,次,记录并拍照,。,侵染后的烟草叶片和注射烟草叶片也用同样的方法处理,4,瞬时表达与稳定表达,W38,侵染叶片,NB,侵染叶片,NB,侵染下胚轴,NB,注射叶片,拟南芥,1,拟南芥,2,拟南芥,3,拟南芥,4,拟南芥,5,瞬时表达,稳定,表达,5,实验报告,实验目的,实验原理(简略写),实验方法,实验结果及分析(最重要),思考题(最后一次课给),切勿相互抄袭,支持原创,如有雷同后果自负!,6,
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