实验十细菌生化实验-微生物实验

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实 验 十,细菌生化实验,1,一、实验目的,1、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。,2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。,3、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。,4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。,5、了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。,2,二、实验原理,1、微生物对生物大分子的分解利用,淀粉水解：,淀粉酶,油脂水解,：脂肪酶,明胶液化,：蛋白酶,石蕊牛乳试验,：产酸、产碱、胨化、酸凝固等。,2、糖发酵试验,产酸：,溴甲酚紫指示剂,大肠杆菌：,产气肠杆菌：,产气,：杜氏小管检测,大肠杆菌：,产气肠杆菌：,3、IMViC试验,3,IMViC试验,吲哚试验：,甲基红试验（M.R.试验）：,伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验）：,柠檬酸盐试验：,色氨酸酶：,色氨酸,吲哚对二甲基氨基苯甲醛,玫瑰吲哚（红色）,大肠杆菌：,产气肠杆菌：,产酸能力：,强，甲基红变红；弱：甲基红不变色,大肠杆菌：,阳性,产气肠杆菌：,阴性,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,2,3-,丁二醇,乙酰甲基甲醇,OH,二乙酰精氨酸的胍基,红色化合物,大肠杆菌：,阳性,产气肠杆菌：,阴性,能否利用柠檬酸作为碳源,大肠杆菌：,阴性,产气肠杆菌：,阳性,4,三、实验材料,1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌（,Pseudomonas aeruginosa,），普通变形杆菌（,Proteus vularis,），产气肠杆菌。,2、培养基：固体油脂培养基，固体淀粉培养基，明胶培养基试管，石蕊牛奶试管，尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支，普通变形杆菌（内装有倒置的德汉氏小管） ，蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养基，醋酸铅培养基。,3、溶液或试剂：革兰氏染色用卢氏碘液（Lugols iodine solution），甲基红指示剂，40% KOH，5% -萘酚，乙醚，吲哚试剂等。,4、仪器或其他用具：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，试管架。,5,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验,淀粉水解试验,培养基：,淀粉培养基平板,菌种：,大肠杆菌和枯草芽孢杆菌,方法：,平板上划“十”字接种,注意：,接种前在平板底部作记号；“十”字不要太大,油脂水解试验,培养基：,油脂培养基平板,菌种：,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,方法：,平板上划折线接种,注意：,接种前在平板底部作记号,明胶液化试验,培养基：,试管明胶培养基,菌种：,大肠杆菌或 产气肠杆菌,方法：,穿刺接种,注意：,20,培养,石蕊牛乳试验,培养基：,试管石蕊牛乳培养基（,2,支）,菌种：,粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌,方法：,斜面划线接种,注意：,观察结构注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化现象是连续出现的。,6,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验,2、糖发酵试验,培养基：,葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基（内装杜氏小管）（各,3,支）,菌种：,大肠杆菌和产气肠杆菌,方法：,分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基,7,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验,2、糖发酵试验,3、IMViC试验,8,IMViC试验,试验名称,培养基名称,菌种名称,接种方式,接种,管数,吲哚试验,蛋白胨水培养基,大肠杆菌和产气肠杆菌,液体,1,甲基红试验,葡萄糖蛋白胨培养基,液体,1,伏普试验,葡萄糖蛋白胨培养基,液体,1,柠檬酸盐试验,柠檬酸盐培养基,斜面,1,9,五、实验报告,1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“”表示阳性，“”表示阴性。,2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气，“”表示不产酸或不产气。,3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果，以“+”表示阳性反应。“”表示阴性反应。,4、不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？,10,五、实验报告,5、假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？,6、为什么大肠杆菌的甲基红反应阳性，而产气肠杆菌为阴性？这个试验与伏普试验最初底物与最终产物有何异同之处？,7、说明在硫化氢试验中醋酸铅的作用，可以用哪种化合物代替醋酸铅？,11,