体外诊断试剂生产质量控制要点解读

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/3,*,体外诊断试剂生产和质量控制要点,主讲人:顾燕黎,上海科华生物工程股份有限公司,2020/11/3,1,体外诊断试剂产品介绍,一酶联免疫诊断试剂产品,乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）,二快速诊断试剂产品,人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）,三PCR核酸诊断试剂产品,乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）,四临床化学诊断试剂产品,葡萄糖试剂盒（液体单试剂）（氧化酶法）,2020/11/3,2,一.酶联免疫诊断试剂产品,【产品名称】,乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）,【包装规格】,96人份/盒,【预期用途】,本试剂盒采用酶联免疫法原理检测HBsAg，适用于血清或血浆类标本,。,2020/11/3,3,酶联免疫法反应原理,双抗体夹心法,双抗原夹心法,标本,抗-HBs,抗-HBs-HRP,HBsAg,2020/11/3,4,乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）,的原理,采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。,2020/11/3,5,试剂盒组份,1. 微孔反应板,2. 酶结合物,3. 阳性对照,4. 阴性对照,5. 洗涤液,6. 显色剂A,7. 显色剂B,8. 终止液,9. 封片,10. 说明书,2020/11/3,6,主要生产设备,微孔反应板包被机,微孔反应板全自动封闭生产线,灌封流水线,超声波洗瓶机,全自动进口分装机,生物安全柜,酶标仪,横枕式包装机,2020/11/3,7,生产工艺流程图,合并,分装,纯化,包被,结酶,纯化,配制,配制,配制,抗-HBs血清,酶标用抗-HBs,抗-HBs-HRP,酶结合物,反应板,包板用单抗-HBs,单抗-HBs腹水,正常人血清、阳性血,阴、阳性对照,显色剂、终止液、洗涤液,TMB、硫酸、吐温20,成品,半成品,滴配,半成品检定,成品检定,2020/11/3,8,外购原辅料控制,原辅料必须从合格供应商目录所载厂家购入。,采购的生产用原辅料，均应符合药品的标准、包装材料标准、生物制品规程或其它标准，不得对产品的质量产生不良影响。,2020/11/3,9,自制主要原料生产和质量控制要点,工艺用水,抗原,抗体,酶标记物,2020/11/3,10,基因工程HBsAg生产和质量控制要点,生产工序,质量控制要点,细胞培养,基因工程细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。,无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度，细胞的形态及传代速度。,纯化,收集的细胞培养上清液经抗-HBs 亲和层析柱等纯化。,层析柱填料的使用次数， 所用缓冲液的pH值， 上样、平衡、洗脱速度。,2020/11/3,11,基因工程HBsAg质量标准,效价： ELISA,纯度：采用SDS-PAGE,功能性实验 ：阴性对照、阳性对照、阴性参考品符合率、最低检出量、精密性、稳定性,蛋白浓度：用双缩脲法测定,2020/11/3,12,单抗-HBs生产和质量控制要点,生产工序,质量控制要点,细胞复苏及传代培养,单克隆抗体细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。,无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度。,腹水制备,福氏不完全佐剂免疫，7-10天后,单克隆抗体细胞悬液注射于,F1代,小鼠,，10天后采集小鼠腹水，离心，制得单,抗,-HBs,腹水。,对数生长期细胞接种。,腹水纯化,用制备的单抗,-HBs,腹水，经饱和硫酸铵二步沉淀，经,离子交换层析柱,纯化即为单抗,-HBs,。,层析填料的使用次数， 所用缓冲液的pH值， 上样、平衡、洗脱速度。纯化的得率。,2020/11/3,13,单抗-HBs质量标准,纯度 ：采用SDS-PAGE法,蛋白含量 ：采用Lowry法,效价 ：ELISA效价,功能性检测：免疫活性、稳定性,2020/11/3,14,多抗-HBs生产和质量控制要点,生产工序,质量控制要点,抗血清制备,用福氏佐剂和纯化HBsAg抗原 制成乳化胶乳剂注射实验动物 ，经多次免疫后，采集动物血清。,动物的选择，乳剂配制的均一性。,纯化,抗血清，经亲和层析柱粗提后，正常人全血清等多种亲和层析柱等纯化制得。,亲和柱的制备及使用次数，所用缓冲液的pH等的控制， 纯化的收率。,2020/11/3,15,多抗-HBs的质量标准,纯度 ：SDS-PAGE法检定,蛋白含量 ：Lowry法,效价 ：对流电泳法测定效价,功能性检测：免疫活性、稳定性,2020/11/3,16,多抗-HBs-HRP生产和质量控制要点,生产工序,质量控制要点,酶的活化,HRP与 NaIO,4,反应，再加入乙二醇制成活化的酶溶液。,辣根过氧化物酶RZ值3.0 及活化时间的控制,酶的偶联,酶溶液液加入抗-HBs抗体,pH,温度及时间的控制,还原,酶反应液加入NaBH,4,溶液还原。,还原时间的控制,纯化,饱和硫酸铵纯化,纯度控制,2020/11/3,17,辣根过氧化物酶质量标准,溶解性 ：应符合要求,PH值 ：应符合要求,活性测定 ：应符合要求,RZ值：应3.0,2020/11/3,18,多抗-HBs-HRP质量标准,免疫活性,稳定性试验,2020/11/3,19,生产工序,生产要点,质量控制点,反应板制备,1,包被液的配制,pH值的控制,2,*反应板的包被,包被液量的准确性，反应板包被放置的温度、湿度及时间的控制,3,反应板的洗涤、加封闭液,液量的准确性,4,*反应板的封闭,房间温度的控制，封闭时间的控制,5,反应板的抽干,抽干机的真空度、温度,6,*铝箔袋的热封,房间的湿度控制，铝箔袋的密封性,7,*反应板的抽检,应符合相关质量要求,反应板制备生,产和质量控制要点,2020/11/3,20,反应板制备,包被液配制,质量控制点：包被缓冲液pH,测定方法：用pH计测定,2020/11/3,21,反应板制备,反应板的包被,质量控制点：,包被液量的准确性,要求：100l/孔,操作：,将待包被的微孔反应板放置传送带上，开始包被，每块包被板应用目测法检查其96孔加液是否完整。前10块包被板检查加液量是否准确，检后的包被板放入报废专用盘内，作报废处理。,连续100块包被板检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100块包被板应抽1块作过程检查。,2020/11/3,22,反应板制备,反应板的包被,质量控制点：,反应板包被放置的温度及时间的控制,要求：,2-8冷库包被过夜。,操作：,包被板应堆放整齐，并用一次性塑料布覆盖。注明产品名称、批号和时间，放入2-8冷库包被过夜。,2020/11/3,23,反应板制备,反应板的洗涤、加封闭液,质量控制点：,液量的准确性,要求:,洗板,液量：,200,l/,孔,封闭,液量：,250,l/,孔,2020/11/3,24,反应板制备,反应板的封闭,质量控制点：,封闭,温度,：37,0.5,封闭时间,：2,小时,操作：,将加好封闭液的包被板整齐堆放在托盘内，注明批号、封闭开始时间和结束时间，放入恒温房。到达规定时间后，迅速取出包被板，转入下一道工序的生产。,2020/11/3,25,反应板制备,反应板的抽干,质量控制点：,抽干机的真空度、温度,要求：,真空度,：,低于,100Pa,，维持,4,小时以上,温度,：20,2,2020/11/3,26,反应板制备,铝箔袋的热封,质量控制点：,房间的湿度：,40%,铝箔袋的密封性：,端面刀封温度2105,中封刀封温度2105,操作：,房间湿度控制：生产操作前提前2小时，打开去湿机进行工作场地去湿，使车间湿度达到40%以下。,铝箔袋的密封性：在线袋袋检。,2020/11/3,27,反应板制备,反应板的抽检,质量标准：,阴性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阳性。,阳性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阴性。,最低检出量：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定， HBsAg adr、adw及ay亚型的最低检出量应符合要求。,精密性：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，CV（%）应不高于15%（n=10）。,2020/11/3,28,生产工序,生产要点,质量控制点,阴、阳性对照的配制,1,阴性血清的灭活,灭活的时间，温度,2,*阴性对照的配制,检测阴性OD值,3,阳性血清的灭活,灭活的时间，温度,4,*阳性对照的配制,检测阳性OD值,阴、阳性对照制备的生产和质量控制要点,2020/11/3,29,阴、阳性血清的灭活,要求：,灭活时间：1小时,温度：60,操作：将,血清置水浴箱内。随时注意测量血清温度，当血清温度到达60时，开始计时至规定时间止。,2020/11/3,30,阴、阳性对照的配制控制,阴性对照的配制,质控点：阴性对照OD值,要求：OD值0.050,阳性对照的配制,质控点：阳性对照OD值,要求：OD值1.000,2020/11/3,31,通用试剂制备的生产和质量控制要点,生产工序,生产关键点,质量控制点,显色剂、终止液、洗涤液等通用试剂的制备,1,显色剂B的配制,避光配制、分装,溶液配制的pH、电导的控制,配制后12小时内进行分装,2,显色剂A的配制,72小时内进行分装,溶液配制的pH、电导的控制,3,终止液的配制,比重控制,4,洗涤液的配制,pH、电导的控制,2020/11/3,32,显色剂B的配制,质量控制点：,1 溶液配制的准确性,用pH计测定溶液pH值应符合要求,用电导率仪测定溶液电导率应符合要求,2 配制、分装环境：避光,3 配制后溶液分装的即时性：12小时内进行分装,2020/11/3,33,显色剂A的配制,质量控制点：,1溶液配制的准确性,用pH计测定溶液pH值,用电导率仪测定溶液电导率,2配制后溶液存放：72小时内进行分装,2020/11/3,34,终止液的配制,质量控制点：,溶液配制的准确性：,用婆美计测定溶液的比重应符合要求,2020/11/3,35,洗涤,液的配制,质量控制点：,溶液配制的准确性,用pH计测定溶液pH值,用电导率仪测定溶液电导率,2020/11/3,36,酶结合物制备,生产和质量控制要点,生产工序,生产关键点,质量控制点,酶结合物的制备、滴配,1,酶稀释液的配制,pH的控制,2,*酶结合物的滴配,通过比较阳性参考品、阴性参考品、精密性以及最低检出率情况，用方阵滴定法进行EIA法测定确定酶结合物的浓度,2020/11/3,37,半成品检定质量标准,物理检查,试剂空白,阴性对照,阳性对照,阴性参考品符合率,阳性参考品符合率,最低检出量,精密性,稳定性实验,:,2020/11/3,38,试剂的分装、贴签生产和质量控制要点,除菌过滤,质量控制点：,过滤膜的起泡点实验,要求：,滤器灭菌,121,30,分钟；,0.22,m,滤芯泡点,3.5bar,2020/11/3,39,分装,质量控制点：,液量的准确性、试剂瓶的密封性,要求：,分装液量应大于等于标示量,；,分装好的试剂瓶应无漏液现象。,2020/11/3,40,贴签,质量控制点：,批号打印的准确性,要求：,批号等打印正确、清晰,操作：,贴瓶开始后，前30瓶应仔细检查瓶贴质量，包括瓶贴位置，批号等打印是否正确、清晰，粘贴是否牢固、平整等。,合格后，每50瓶抽1瓶进行检查。,2020/11/3,41,合并包装,生产和质量控制要点,生产工序,生产要点,质量控制点,合并包装,1,包装盒的压印,生产日期、批号打印的准确性、清晰度,2,合并,合并组分的齐全性,印刷类包装品的物料平衡,2020/11/3,42,成品检定质量标准,物理检查,试剂空白,阴性对照,阳性对照,阴性参考品符合率,阳性参考品符合率,最低检出量,精密性,稳定性实验,2020/11/3,43,成品入,库,入库,控制点：产品放行报告；入库数,要求：,凭由质量管理部经理签署的成品出厂合格报告，成品检定书办理入库手续，入库数应与成品出厂合格报告中所报数量一致。,2020/11/3,44,P2生物安全实验室管理,人员卫生,进入P2实验室必须加穿洁净防护服，带一次性乳胶手套和一次性口罩。只允许工作人员进入，禁止非工作人员进入实验室。,生物安全柜,实验室的操作严格按操作规程进行操作，对存在感染性或潜在感染性的操作须在生物安全柜内进行。做好相应的消毒、使用记录。,消毒及灭菌,所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具，均需进行消毒处理，能高压的选择121高压灭菌30分钟处理，不能高压的选择1%次氯酸钠消毒。实验中产生的具有感染性或潜在感染性的穿透性利器废物置入黄色塑料利器盒中，其他非利器废物置入黄色医疗废物塑料袋中。,实验室应指定专人负责感染性或存在潜在感染性材料的保藏，做好标识，建立台帐。,2020/11/3,45,二.金标产品,【产品名称】,人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体诊断试剂盒(胶体金法),【包装规格】,50人份/盒,【预期用途】,本试剂盒适用于对人血清/血浆或全血中的(HIV1/2)抗体的快速检测。,2020/11/3,46,金标产品检验原理,本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金标记HIVgp160和gp36抗原等，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41、gp36混合抗原和抗体等，当检测进行时，样品中HIV抗体可与金标记HIV抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前移动。,若样品中含有可被检测的HIV抗体，则与检测线预包被的HIV抗原结合形成“金标记HIV抗原HIV抗体HIV包被抗原”复合物而凝聚显色；若样品中没有HIV抗体或HIV抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。,示 意 图,阴性,加样区,加样区,阳性,无效,检测线,质控线,2020/11/3,47,主要组成成份,HIV(1/2)抗体胶体金试纸条/板 50 Tests,样品稀释液（磷酸盐缓冲液） 1瓶4.0ml/瓶,说明书1份,2020/11/3,48,金标产品主要生产设备,点样仪,切割机,核酸蛋白仪,电子防潮箱,全自动喷点系统,划膜机,多功能薄膜封口机,干燥箱,2020/11/3,49,金标产品生产工艺流程图,氯化金,胶体金,标记抗原,HIVgp36,HIVgp160,金标记抗原,金反应垫,烧金,标金,喷金,干燥,包被抗原,HIVgp36,A抗原,检测线包被液,抗HIVgp160单抗,质控线包被液,配制,配制,反应膜,划膜,干燥,试纸大板,组装,试纸条,切割,试纸板,封装,氯化钠等,配制,样品稀释液,待检成品,合并,出厂成品,检定,滴配,滴配,检定,半成品检定,半成品检定,成品检定,分装、帖签,物料,质控点,工序,关键工序,2020/11/3,50,gp160抗原制备的生产和质量控制,生产工序,质量控制要点,细胞培养,取,工程,细胞株，经接种复苏后，进行大规模细胞连续培养，收集培养上清液。上清液经灭活、过滤、超滤，得,浓缩上清液，置,-20,保存。,无菌操作，培养温度，溶氧值，,pH,值，细胞密度，细胞表达水平。,纯化,浓缩,上清液经亲和层析柱纯化，用适宜的缓冲溶液淋洗、洗脱，收集洗脱峰，经浓缩即得纯化的,gp 160,抗原。,层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、淋洗、洗脱速度。,2020/11/3,51,gp160抗原质量标准,物理性状：为澄清溶液,纯度：采用SDS-PAGE,分子量,：免疫活性,稳定性,2020/11/3,52,gp36抗原制备的生产和质量控制,生产工序,质量控制要点,发酵,用,gp36,工程菌发酵，收集菌体。,工程菌诱导温度，工程菌诱导时间。,纯化,菌体经超声破碎，制得粗制,gp36,抗原。粗制,gp36,抗原经亲和层析柱纯化，用适宜的缓冲液进行透析，,经浓缩即得纯化的,gp 36,抗原。,超声破碎时间，层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值控制，上样、淋洗、洗脱速度。,2020/11/3,53,gp36抗原质量标准,纯度,分子量,功能性试验,稳定性,2020/11/3,54,gp41抗原制备的生产和质量控制,生产工序,质量控制要点,发酵,用工程菌发酵，收集菌体。,工程菌诱导温度，工程菌诱导时间。,纯化,超声破碎，制得粗制,gp41,抗原。粗制,gp41,抗原经亲和层析、分子筛等纯化，收集目的蛋白峰，,即得纯化的,gp 41,抗原。,超声破碎时间，层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、淋洗、洗脱速度。,2020/11/3,55,gp41抗原质量标准,纯度：采用SDS-PAGE法检定应符合要求,分子量,功能性试验,稳定性,2020/11/3,56,抗HIV单抗制备的生产和质量控制,生产工序,质量控制要点,细胞复苏及传代培养,单克隆抗体细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。,无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度。,腹水制备,福氏不完全佐剂免疫，7-10天后,单克隆抗体细胞悬液注射于,F1代,小鼠,，10天后采集小鼠腹水，离心，制得单,抗,-HIV,腹水。,对数生长期细胞接种。,纯化,用制备的,抗HIV 单抗腹水,，经亲和,层析柱,纯化等即得,抗HIV 单抗,。,层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、平衡、洗脱速度。,2020/11/3,57,单抗质量标准,纯度,分子量,功能性检测,稳定性试验：,37,放置15天，检测上述标本，可达到上述功能性检测标准,。,2020/11/3,58,金反应垫制备的生产和质量控制要点,生产工序,生产关键点,质量控制点,金反应垫的制备,1,胶体金的制备,颜色、波长的控制,2,*金标抗原的制备,pH值、颜色、波长的控制,3,*滴配,适当地调整两种金标抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。,4,*喷金,包被量的控制,5,抽干,真空度、时间的控制,6,保存,避光、干燥的控制,2020/11/3,59,金反应垫的制备,胶体金的制备,控制点：胶体金,颜色、波长的控制,要求：,胶体金,颜色,：,红色,；,波长,：,528,4nm,2020/11/3,60,金反应垫的制备,金标抗原的制备,质量控制点：GP160和GP36抗原标记时,pH值、颜色、波长的控制,要求：用PH计测定，,pH值,：,6-7,；,颜色,：红色,波长,：,533,4nm,2020/11/3,61,金反应垫的制备,滴 配,质量控制点：,金标抗原的灵敏度和特异性,要求：通过HIV快速诊断试剂国家参考品,测定方法：,适当地调整两种金标抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。,用HIV快速诊断试剂国家参考品检验，应符合要求。,2020/11/3,62,金反应垫的制备,喷 金,质量控制点：,包被液量的准确性,要求：2l/mm,方法：,将待包被的玻璃纤维放置于面板，开始包被，每张玻璃纤维应用目测法检查加液是否完整。连续5张玻璃纤维检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100张,金反应垫,应抽1张作过程检查。,2020/11/3,63,金反应垫的制备,金反应垫的抽干,质量控制点：,真空度、时间的控制,要求：,真空度,：低于,100Pa,时间,：维持2小时以上,2020/11/3,64,金反应垫的保存,质量控制点：金反应垫的存放,要求：避光、干燥（湿度,30%,）,操作：,用目测法检测保存金反应垫的铝箔袋的密封性。,存放金反应垫的干燥柜 每天监测湿度2次。,金反应垫的制备,2020/11/3,65,金反应膜制备,生产和质量控制要点,生产工序,生产关键点,质量控制点,金反应膜制备,1,质控线包被液的配制,pH值及浓度的控制,2,检测线包被液的配制,pH值及浓度的控制,3,*包被抗原滴配,适当地调整抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。,4,*划膜包被,点样量的控制、质控线及检测线间距的控制,5,抽干,真空度、时间控制,6,保存,避光、湿度的控制,2020/11/3,66,金反应膜制备,质控线包被液的配制,控制点： 包被缓冲液,pH值及,包被,浓度,要求：,包被缓冲液,pH值,：,用pH计测定,包被,浓度,：,用核酸蛋白仪检测其蛋白浓度应符合要求,2020/11/3,67,金反应膜制备,检测线包被液的配制,质量控制点： 包被缓冲液,pH值及,包被,浓度,要求：,包被缓冲液,pH值,：,pH计测定,包被,浓度,：,用核酸蛋白仪检测其蛋白浓度应符合要求,2020/11/3,68,金反应膜制备,包被抗原滴配,控制点：,包被抗原滴配的灵敏度和特异性,要求：通过HIV快速诊断试剂国家参考品,测定方法：,适当地调整抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。,用国家参考品检验，应符合要求。,2020/11/3,69,金反应膜制备,划膜包被,控制点：,点样量、质控线及检测线间距,要求：点样量0.5-1.5l/mm ；两线间距5-6.5mm,操作：,将待包被的硝酸纤维素膜放置于轨道，用卡尺检测质控线和检测线出样管的间距，符合要求后开始包被。观察包被液体出样情况，连续5分钟无异常，则进入正常包被过程。正常包被过程中每卷金反应膜抽1张进行检查。,2020/11/3,70,金反应膜制备,金反应膜的抽干,质量控制点：,真空度、时间的控制,要求：,真空度,：低于,100Pa,时间,：维持2小时以上,2020/11/3,71,金反应膜制备,金反应膜的保存,控制点：,金反应膜,存放,要求：避光、干燥（湿度,30%,）,操作：,用目测法检测保存金反应膜的铝箔袋的密封性。,存放金反应膜的干燥柜 每天监测湿度2次。,2020/11/3,72,样品稀释液制备生产和质量控制要点,样品稀释液的,配制,质量控制点：,pH值,要求：用pH计进行测量,2020/11/3,73,试纸大板的组装及分装生产和质量控制要点,生产工序,生产关键点,质量控制点,试纸大板的组装及分装,1,*试纸大板的装配,加样垫、金反应垫、金反应膜、吸水纸等各组分衔接的控制,2,*试纸条的切割,试纸条切割宽度的控制,3,CT盒的组装,试纸条完整性的检验,4,装铝箔袋,铝箔袋的密封性,2020/11/3,74,试纸大板的组装及分装,试纸大板的装配,质量控制点：,加样垫、金反应垫、金反应膜、吸水纸等各组分,应,衔接紧密,2020/11/3,75,试纸大板的组装及分装,试纸,条,的,切割,质量控制点：,试纸条切割宽度,要求：,3002mm*8mm,2020/11/3,76,试纸大板的组装及分装,CT盒的组装,质量控制点：应检查,试纸条的完整性,2020/11/3,77,试纸大板的组装及分装,控制,装铝箔袋,质量控制点：,铝箔袋,应,密封,2020/11/3,78,样品稀释液的配制、分装及贴签,生产工序,生产关键点,质量控制点,样品稀释液的制备,1,配制,溶液配制pH的控制,2,分装、灯检,液量的准确性，分装液量应不低于标示量,3,标签打印,批号打印的准确性及清晰度,2020/11/3,79,合并包装的生产和质量控制要点,质量控制点：,1.包装盒的批号打印准确、清晰。,2.合并组分的齐全性，物料的损耗是否符合规定要求。,2020/11/3,80,成品检验质量标准,外观 ：试纸条外观平整，材料附着牢固。每条宽不小于3mm。,物理检查：膜面无破损、划痕。,阴性参考品符合率 ：应符合要求,阳性参考品符合率 ：应符合要求,最低检出限参考品符合率：应符合要求,精密性试验：应符合要求,滤血功能：应符合要求,稳定性试验：试剂盒各组分置3715天 ，应符合性能要求。,2020/11/3,81,三.PCR核酸诊断试剂产品,【产品名称】,乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）,【包装规格】,32人份/盒,【预期用途】,本试剂盒采用PCR技术、实时荧光探针技术、用于对临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸DNA的定量检测。,2020/11/3,82,PCR诊断试剂的原理,本品系由乙型肝炎病毒特异性引物、荧光探针、以及Taq酶等成分组成，采用PCR体外扩增的方法，用过荧光信号的变化，定量检测人血清或血浆标本中的HBV DNA。,2020/11/3,83,【试剂盒组份】,样品处理液A,样品处理液B,HBV PCR反应液A,HBV PCR反应液B,HBV PCR反应液C,工作标准品,工作标准品,工作标准品,工作标准品,阴性对照,2020/11/3,84,生产工艺流程图,Tris、PEG 6000、氯化钠、辛酸钠、EDTA-Na,2,样品处理母液,引物、探针、Taq酶、dNTP、UNG酶,样品处理试剂,样品处理液A,样品处理液B,PCR工作母液,PCR扩增反应试剂,PCR反应液A,PCR反应液B,PCR反应液C,基因工程菌株,工作标准品质粒,配制,配制,配制,配制,培养、抽提,工作标准品,工作标准品,工作标准品,工作标准品,HBV DNA阴性血,阴性对照,配制,配制,分装,待检半成品,半成品检定,半成品,待检成品,贴签、合并,出厂成品,成品检定,物料,工序,关键工序,质控点,功能性试验,工作参数标定,2020/11/3,85,PCR产品生产和质量控制要点,生产工序,质量控制点,原辅料的检验,主要原辅料按质量标准要求进行检验，合格才能用于生产,提取试剂的配制及分装,配制完成的试剂立即分装 ，分装的装量准确性控制,扩增试剂的配制及分装,配制完成的试剂应立分装 ，分装的装量准确性控制,*工作标准品的制备,工作标准品的定标,半成品检定,应符合相应标准,成品检定,应符合相应标准,2020/11/3,86,工作标准品的定标,根据测定的HBV质粒含量，取适量HBV质粒用模拟血清稀释后，以质控参考品为标准进行标定，使最终稀释浓度为约10,7,Copies/ml，即为工作标准品。,然后将工作标准品进行10倍系列梯度稀释，稀释后为工作标准品、工作标准品、工作标准品。,2020/11/3,87,质量标准,阴性对照：阴性对照的检测结果应为阴性，,工作标准品： 工作标准品Q1Q4的测定值符合下表的范围，并且其线性相关系数|r|0.950。,工作标准品 已知拷贝数（IU/ml） 拷贝数允许范围（IU/ml）,Q1（工作标准品）K110,7,3.54K110,6,2.83K110,7,Q2（工作标准品）K210,6,3.54K210,5,2.83K210,6,Q3（工作标准品）K310,5,3.54K310,4,2.83K310,5,Q4（工作标准品）K410,4,3.54K410,3,2.83K410,4,阴性参考品符合率：,检测国家标准品，对8份阴性参考品检测结果不得出现假阳性。,阳性参考品符合率：,检测国家标准品，对9份阳性参考品检测结果不得出现假阴性。,最低检出限：,检测国家标准品中，线性和灵敏度参考品L0L5必须检出，L6仅供参考。与标准值的线性回归系数R97.0%。,精密性：,测定公司工作标准品10次，定量结果的变异CV10%。若以Ct计算，CV值小于15（n10）。,2020/11/3,88,四.临床化学诊断试剂产品,【产品名称】,葡萄糖试剂盒（氧化酶法）,【预期用途】,本试剂盒用以测定人血清中葡萄糖的含量。,2020/11/3,89,生化产品的包装规格,规格1（240ml）,R1:2*80ml R2:1*80ml 校准液:1*3ml,规格2（210ml）,R1:2*70ml R2:1*70ml 校准液:1*3ml,规格3（288ml）,R1:2*96ml R2:6*16ml 校准液:1*3ml,规格4（480ml）,R1:10*32ml R2:10*16ml 校准液:2*5ml,规格5（180ml）,R1:10*12ml R2:10*6ml 校准液:1*5ml,规格6（300ml）,R1:4*50ml R2:2*50ml 校准液:1*3ml,规格7（150ml）,R1:2*50ml R2:2*25ml 校准液:1*3ml,规格8（180ml）,R1:4*30ml R2:4*15ml 校准液:1*3ml,规格9（270ml）,R1:3*60ml R2:3*30ml 校准液:1*3ml,规格10（1680ml）,R1:2*70ml*8 R2:1*70ml*8 校准液:1*3ml*8,规格11（1440ml）,R1:2*80ml*6 R2:1*80ml *6校准液:1*3ml*6,2020/11/3,90,葡萄糖试剂盒（氧化酶法）的检测原理,葡萄糖+O,2,+H,2,O,GOD,葡萄糖酸+H,2,O,2,H,2,O,2,+苯酚+4-氨基安替比林,POD,醌亚胺+H,2,O,2020/11/3,91,生产工艺流程图,待检成品,成品 入库,原辅料,R1、R2、校准品溶液,半成品检验,原辅料检验,配制,分装,灯检,贴签合并包装,成品检验,2020/11/3,92,试剂盒组份,R1试剂,R2试剂,校准液,2020/11/3,93,【生产和质量控制要点】,生产工序,质量控制点,原辅料的检验,按质量标准要求对主要原辅料进行检验，合格才能用于生产,R1试剂的配制,PH值控制,R2试剂的配制,PH值控制,*校准品的制备,校准品的定值,半成品检验,按照质量标准中的半成品检验项目进行检验,*分装,应加强不同规格产品分包装的清场，防止混批,成品检验,应符合相应的质量标准,2020/11/3,94,质量标准,检验项目,标准,试剂空白吸光度,纯化水或生理盐水作为空白标本，重复测定两次，计算吸光度平均值,精密度,批内变异，批间相对极差,准确度,取质控血清，重复测定三次，取平均值，测定结果应在该质控血清规定的范围内,分析灵敏度,测定试剂盒所附标准液,，,在一定波长处，计算吸光度与空白吸光度之差,线性范围,将,葡萄糖配成一定的浓度,然后用生理盐水按稀释,以每个稀释度作为标本,按标准实验操作步骤进行测定,对理论值和实测值进行回归计算,要求试剂盒在标本浓度时，整个反应呈线性,。,校准液,取次级参考物作为校准品，以待测校准液作为样本进行测定,重复三次,取均值，计算相对偏差,反应速度,取血清标本，加入试剂混匀，连续监测。根据其连续吸光度图谱，计算每分钟的吸光度变化值。,最低检测限,用待测试剂盒按标准操作步骤，以生理盐水作标本，多次测定 计算平均值及标准差，以平均值加三倍的标准差（,X+3SD,）作为最低检测限。,2020/11/3,95,谢谢！,2020/11/3,96,