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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,医学实验室认可经验交流会,-,杭州三台山,2011.11.29,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,医学实验室认可经验交流会,-,杭州三台山,2011.11.29,#,浙江大学医学院附属第二医院,检验科 陶志,华,梅毒感染的实验室检测,流程与策略,梅毒流行病学简介,梅毒实验室检测流程,罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果,梅毒实验室检测策略,主要内容,据最新估计，全球每年有,1200,万新发梅毒感染病例，其中,200,万为孕妇,WHO. 2021; WHO. 2021; UNICEF. 2021.,梅毒感染新发病例,(,单位：百万,),全球梅毒流行,现状,梅毒起源于美洲，然后从美洲到西班牙，从欧洲到亚洲印度，1505年从印度传入广东岭南“广东疮，后传到全国各地。,少数民族地区居民梅毒感染率 = 10%,牧区人群梅毒感染率 = 48%,局部城市地区人群梅毒感染率 = 5%,局部农村地区人群梅毒感染率 = 2-3%,此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生教授,我国梅毒流行现状,通过三大措施，梅毒在我国实现根本消灭,健康教育和宣传运动,免费梅毒筛查梅毒血清制动试验、荧光抗体试验,治疗,我国梅毒根本消灭(1950-1964年),作为重大防治成就、学术成就，赢得国际上的广泛认可。,1978年获得全国科学大会奖,发表论文?我国对梅毒的控制和消灭?、?梅毒的传播及在中国的消灭?,此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生教授,我国梅毒流行现状,6,中国梅毒报揭发病趋势,梅毒报告病例数448 620例，居甲乙类传染病第3位,梅毒报病较2021年增长4.41%，隐性梅毒增长的奉献率99.6%,此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心龚向东教授,我国梅毒流行现状,梅毒是一个可以临床治愈的传染病,病例诊断依据,病史,病症,实验室检查,实验室检查结果对梅毒诊断及判愈有决定性意义,我国梅毒流行现状,我国政府梅毒控制相关政策,卫生部于2021年6月3日下发了关于?中国预防与控制梅毒规划2021-2021年?,卫生部2021年2月12日下发?预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案?,国务院2021年1月13日?中国预防控制艾滋病五年行动方案21011-2021年?,2021年1月实施?性病防治管理方法?,梅毒控制主要措施：,提高梅毒实验室检测质量,加强梅毒筛查力度,我国梅毒流行现状,梅毒流行病学简介,梅毒实验室检测流程,罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果,梅毒实验室检测策略,主要内容,常用梅毒实验室检测方法,病原学检测,血清学检测,病原学检查,原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。,方法： 1暗视显微镜检查,2镀银染色法,3核酸检测血液标本？,注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。,病原学检查的临床意义,螺旋体检查是诊断早期梅毒的最正确方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。,如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。,梅毒血清学检测方法,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,非特异性梅毒抗体,梅毒螺旋体抗原血清学试验,特异性梅毒抗体两类方法。,非梅毒螺旋体抗原血清学检测,方法包括：,1快速血浆反响素环状卡片试验 (RPR),2甲苯胺红不加热血清试验TRUST,3性病研究实验室试验 (VDRL)等。,根本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇,抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见,上述方法的敏感性和特异性都根本相似,梅毒螺旋体抗原血清学检测,抗原为梅毒螺旋体特异蛋白包括螺旋体重组特异抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。,感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，那么患者终身阳性。,梅毒螺旋体抗原血清学试验方法,梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA),梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA),梅毒酶联免疫吸附试验ELISA,化学发光免疫分析法CLIA,梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT),荧光螺旋体抗体吸收试验FTA-ABS,梅毒螺旋体蛋白印迹试验WB,梅毒螺旋体免疫学检测的开展历程,1980s,2000,EIA,被,FDA,批准用于确认试验和血液筛查,英国公共健康实验室指南：,EIA,可以作为替代,VDRL/RPR+TPHA,的选择之一,2001,FDA,批准,EIA,用于临床诊断,2021,欧盟指南推荐：,EIA/CIA/TPPA,用于筛查，不再推荐,VDRL/RPR,2021,美国,CDC-APHL,报告：,EIA/CIA,用于筛查,.,European guideline on the management of syphilis 2021,STD treatment guideline 2006 US CDC,2021欧洲梅毒管理指南,自动化的化学发光检测已经用于许多大型的欧洲实验室，尤其适合对无病症的人群和献血者进行高通量的筛查。,该检测流程更能检测非常早期的梅毒感染。,European guideline on the management of syphilis 2021,美国,梅毒检测类型的,变化,化学发光的,测试数量逐年,增加,为何选择,ECLIA/CLIA?,自动化高通量,低本钱高样本量的情况下,更少的实验室职业危害,没有假阴性,结果客观,检测IgM抗体，可用于诊断非常早期的感染,VS,US CDC: reverse sequence syphilis screening,检测原理,:,双抗原夹心法,(,DAGS,),，检测时间,18,分钟,IgG:,样本中，抗,-,TpN17,或抗,-TpN15,抗体,钌标记的,TpN17,TpN47,抗原,9,分钟,测定,IgM:,样本中，抗,-TpN17,或抗,-TpN47,抗体,生物素标记的,TpN17,TpN15,抗原,9,分钟,快速,高效,全自动,电化学发光,(,ECLIA,),免疫检测原理,梅毒流行病学简介,梅毒实验室检测流程,罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果,梅毒实验室检测策略,主要内容,国际,多中心研究,Clinical and Vaccine Immunology January 2021 Volume 22 Number 1,意大利,德国（,3,家中心）,土耳其,中国（华西医院）,泰国,奥地利,全球共,8,家研究中心（,6,个国家）,国际多中心研究,研究设计,Elecsys,Liaison,Serodia,Immulite,Architect,Liaison,Serodia,Immulite,Architect,敏感性评估,特异性评估,Vitros,Enzygnost,样本信息,8079,例,3500,常规样本,225,HIV,91,EBV,10,Lyme,病,4579,献血员,特异性评估,样本来源,干扰样本,928,例,922,阳性,228,合并,HIV,6,阴性,敏感性评估,确诊样本,干扰样本,国家,/,中心,样本量,Elecsys,Liaison,Serodia,Immulite,Architect,TM,德国,lab1,301,100%,100%,100%,德国,lab2,83,100%,100%,98.8%,98.8%,意大利,218,100%,100%,100%,泰国,124,*,100%,100%,中国,202,100%,总体,928,*,100%,100%,100%,99.67%,99.51%,研究结果,敏感性结果,* Elecsys 梅毒检测试剂在所有实验室中的敏感度结果均到达 100%,* 2例样本结果为“不确定，4例为“无反响性,梅毒分期,样本量,确认阳性,Elecsys,I,期梅毒,101,101,100%,II,期梅毒,124,124,100%,隐性梅毒,470,470,100%,未知分期,229,227,*,100%,总体,924,#,922,*,100%,研究结果,梅毒分期样本的敏感性结果,*,Elecsys,梅毒检测试剂在能,100%,检测出不同分期梅毒样本,#,排除,4,例疑似操作错误的样本最终计算结果时排除,2,例确证试验结果为未确定的样本,* 排除,2,例确证试验结果为未确定的样本,样本,Lot P1,Lot P2,Lot P3,常规样本,99.80 %,99.90 %,100.00 %,献血员样本,99.93 %,99.82 %,99.82 %,总体特异性,99.88 %,99.85 %,99.89 %,研究结果,总体特异性结果3批次试剂,* Elecsys 梅毒检测试剂的总体特异性大于 99.85%,研究,结果,特异性结果-献血员样本,* Elecsys 梅毒检测试剂在献血员样本中的总体特异性到达 99.93%,研究结果,特异性结果-常规样本,* Elecsys 梅毒检测试剂在常规样本中的总体特异性到达 99.80%,研究结果,干扰样本结果,*,Elecsys,梅毒检测,试剂在,可能的干扰样本中的敏感性和特异性均更高,EBV (+) / Syphilis (-),特异性,HIV,(+),/ Syphilis (-),EBV-Lyme (+) / Syphilis (-),n=225, 100%,n=81, 100%,n=20, 100%,敏感性,HIV,(+),/ Syphilis (,+,),n=2,28,%,%,中国,多中心研究,广西,海南,黑龙江,济南,杭州,安徽,武汉,湖南,山西,内蒙古,西安,甘肃,青海,成都,贵州,西藏,乌鲁木齐,北京*,2,南京,上海,长春,昆明,南宁,广州*,2,福州*,2,牵头单位：,四川大学华西医院,王兰兰主任,/,陶传敏教授,研究中心,：,15,家,研究中心,医院名称,主要研究者,负责人,四川大学华西医院,王兰兰,陶传敏,昆明市第三人民医院,李晓非,吕松琴,第四军医大学西京医院,郝晓柯,皇海,首都医科大学附属北京佑安医院,娄金丽,陈俊梅,北京大学第三医院,张捷,崔丽艳,/,梁,永明,吉林大学第一医院,续薇,高丹丹,山东省立医院,张炳昌,邹建文,第二军医大学长海医院,邓安梅,陈园园,浙江大学医学院附属第二医院,陶志华,张松照,江苏省人民医院,潘世扬,徐华国,南方医科大学,南方,医院,裘宇容,袁帅,广东省中医院,黄宪章,黄妩姣,福建省立医院,伍严安,沈菁,广西医科大学附属肿瘤医院,朱波,黄文成,福建医科大学附属第一医院,欧启水,陈静,研究设计,参比方法,1,：,Architect,参比方法,2,：,ELISA,（,2,种品牌）,参比方法,3,：,国产化学发光法,-CLIA,常规随机样本,预留确诊样本,“临界样本*,干扰样本,不一致结果,RIBA免疫印迹,* 临界样本检测结果出现不一致结果可能性较大的区间：,Architect：0.9 COI 5,ELISA：0.75 COI 3,国产化学发光法：0.9 COI 5,样本信息,组别,随机样本,确诊样本,临界样本,干扰样本,总数,Architect,6004,359,76,210,6649,ELISA-1,4820,391,75,411,5697,ELISA-2,2943,253,15,237,3448,CLIA,3655,116,0,62,3833,总数,17422,1119,166,920,19627,4,种比对方法，,4,组,样本,*,所有比对组共收集样本近,2,万例,研究结果,Elecsys,梅毒检测结果的阳性,结果分布,* 在所有常规随机样本中的阳性率,为,%,，剔除传染病院数据后的阳性率,为,%,Cut,例,数,检测结果区间,研究结果,Elecsys与不同比对方法间的一致性,* Elecsys 与所有比对方法在常规随机样本中的一致性到达 99.48%,Elecsys,阳性样本,阴性样本,总体,Architect,83.09%,99.68%,99.30%,ELISA-1,96.12%,99.83%,99.30%,ELISA-2,97.85%,99.66%,99.49%,CLIA,95.15%,99.85%,99.56%,总数,99.48,Elecsys,比对试剂,随机样本结果,随机样本的敏感性和特异性结果,*,Elecsys,在,所有比对组随机样本中的假阳性和假阴性结果均,最少,vs,vs,vs,vs,假阴性 假阳性,假阴性 假阳性,假阴性 假阳性,假阴性 假阳性,研究结果,随机样本的敏感性和特异性结果,* Elecsys 在所有比对组随机样本中的敏感性均到达 100%，特异性也更优异,Elecsys vs. Architect,Elecsys,vs.,ELISA-1,Elecsys vs. ELISA-2,Elecsys,vs.,CLIA,敏感性,100,98.26,100,99.11,100,99.77,100,100,特异性,99.81,99.74,99.93,99.80,99.85,98.56,99.88,99.74,NPV,100,99.97,100,99.96,100,99.85,100,100,PPV,91.27,88.28,98.68,96.12,98.58,97.85,98.18,96.00,研究结果,预留确诊样本的敏感性,* Elecsys 及所有比对试剂均能 100%检测出不同分期确实诊梅毒样本,Elecsys vs. Architect,Elecsys vs. ELISA-1,Elecsys vs. ELISA-2,Elecsys vs.,CLIA,梅毒分期,样本数,Elecsys,Architect,样本数,Elecsys,ELISA-1,样本数,Elecsys,ELISA-2,样本数,Elecsys,CLIA,一期梅毒,20,100 %,100 %,44,100 %,100 %,2,100 %,100 %,无分期信息,二期梅毒,55,100 %,100 %,74,100 %,100 %,24,100 %,100 %,三期梅毒,6,100 %,100 %,24,100 %,100 %,6,100 %,100 %,隐性梅毒,96,100 %,100 %,149,100 %,100 %,56,100 %,100 %,未分期,182,*,100 %,100 %,100,100 %,100 %,165,100 %,100 %,116,100 %,100 %,总数,359,*,100 %,100 %,390,*,100 %,100 %,251,*,100 %,100 %,114,*,100 %,100 %,* 共,6,例样本检测结果不一致，,RIBA,结果为阴性或不确定，计统计时予以剔除。,研究结果,预留干扰样本,干扰样本类型：,HBV,，,HCV,，,HIV,，,EBV,，自身免疫病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤，其他肿瘤，妊娠,Elecsys vs. Architect,仅在,多发性骨髓瘤,样本中发现：,Elecsys: 1FP,Architect: 1FP,Elecsys vs. ELISA-1,仅在,HIV,和肿瘤,样本中发现：,Elecsy: 3FP,ELISA: 1FP,Elecsys vs. ELISA-2,仅在,HBV,和,HIV,样本中发现：,ELISA: 1FP/1FN,各组共收集920例干扰样本，仅出现8例假阳或假阴结果，根本无干扰,*,FN: false negative FP: false positive,研究结果,预留“临界样本,* Elecsys 在所有比对组临界样本中的假阳性和假阴性结果更少,Elecsys vs. Architect,Elecsys vs. ELISA-1,Elecsys vs. ELISA-2,结果区间,样本数,Elecsys,Architect,样本数,Elecsys,ELISA-1,样本数,Elecsys,ELISA-2,=1.0,70,6 FP,28 FP,44,10,FP,19 FP,9,2 FP,3 FP,总数,72,6 FP,28 FP,71,15 FP,19FP/2FN,15,3 FP,3 FP,*,FN: false negative FP: false positive,* 临界样本检测结果出现不一致结果可能性较大的区间：,Architect：0.9 COI 5,ELISA：0.75 COI 3,国产化学发光法：0.9 COI 5,具有最正确的灵敏度与特异性,灵敏度为100% MCE结果,特异性为MCE结果,有效检出不同分期的梅毒感染,即用型试剂,18,分钟出检测结果,仅需,10,ml,样本量,高精密度,室,间、仪器间、批内、批间精密度高,无灰区,准确区分样本，无需重测,平安,高效,可靠,Elecsys,Syphilis,免疫,检测,降低确诊试验需求,优化工作流程,较高的血清转换特异性,降低传播,风险,提高,检测,速度,提高效率，节省本钱,梅毒流行病学简介,梅毒实验室检测流程,罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果,梅毒实验室检测策略,主要内容,梅毒实验室检测策略,初筛试验：,EIA/TPPA(TPHA),46,CLIA,+,/EIA,+,/TPPA(TPHA),-,或,CLIA,+,/,EIA,+,/TPPA(TPHA),-,CLIA,+,/EIA,+,/TPPA(TPHA),+,RPR Titer,确认试验：,IgG immunoblot,anti-treponemal IgM test,梅毒排除,RPR Titer 1:32,梅毒活动期,不能排除梅毒活动期,+,+,-,-,European guideline on the management of syphilis 2021,梅毒实验室检测策略,方法选择依据,敏感性、特异性试剂评估,操作流程可及性,试剂的价格、结果时间可接收性,47,初筛,目的和方法选择,标准化梅毒实验室检测要求,根据目的选择检测方法及检测策略。,可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验,。,非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,梅毒活动期诊断,治疗监测：因治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,神经梅毒确诊：,VDRL,试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据，但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅毒。,梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,梅毒实验室检测初筛试验,不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。,TPPA,等,梅毒螺旋体抗原血清试验,不能作为疗效观察的指标。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义,梅毒活动期鉴别诊断,治疗监测：早期梅毒一期、二期经足量规那么抗梅毒治疗后,一期梅毒1年后转为阴性,二期梅毒2年后转为阴性。,晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反响仍为阳性。,两个特殊人群的梅毒诊断,老年人:,老年人群特别是80岁以上的梅毒抗体阳性率要高于其他人群，但许多梅毒螺旋体抗原血清试验和/或非梅毒螺旋体抗原血清试验呈阳性的老年病例并没有明显的临床病症。这可能是既往感染或隐性感染的情况，也可能是检测方法的假阳性所致，但一般情况下很难明确区分。实验室应明确记录检测结果，并建议临床根据实际情况进行处理,孕妇,晚期妊娠时，少数情况下可突然出现梅毒特异性抗体和/或反响素阳性，应提醒临床注意既往梅毒感染复发或假阳性的可能性，并进行随访观察,THANK YOU FOR YOUR ATTENTION !,
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