2020年微生物基础知识培训课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物基础知识及洁净区微生物控制,(201.02.28),一,、,微生物简介,二、微生物的分布,三、微生物的作用及危害,四、微生物的形态结构,五、微生物污染及消毒灭菌,六、,洁净区微生物的控制,一、微生物简介,1、,微生物的定义,（microorganism, microbe）:,微生物是存在于自然界中的,个体微小，结构简单、肉眼看不见，必须借助于显微镜才能看清它们外形的一群低等的、原始的微小生物，如细,菌。,2、,微生物的分类,按其结构、化学组成可分为:,原核类,:,仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、放线菌、支原体、立克次氏体。,真核类,:,细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类,非细胞类,:,体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒,按其致病性可分为:,病原性微生物：有致病性,非病原性微生物：无致病性,3.微生物的五大特点：,个体小，面积大：,小于0.1mm。肉眼不可见。,分布广,种类多（10万多种）,：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等,土壤中的数量最多。,代谢强，转化快：,发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重100010000倍的乳糖；产朊假丝酵母合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍,生长旺，繁殖快：,微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代,适应性强，易变异,（耐药性产生的原因）,二、微生物的分布,1.微生物在自然界的分布：,土壤：,是微生物生活的最适环境，土壤中的微生物又可分为如下几类：,细菌：,占土壤微生物总数的70%90%。,放线菌,：占土壤中微生物含量的5%30%。,霉菌,：主要生活在靠近地面的土壤中，在通气良好的土壤中，霉菌数量很多。,酵母菌,：普通土壤中酵母菌含量很少。,水：,仅次于土壤的微生物分布、定居的第二场所，90%为革兰氏阴性菌，主要有假单胞菌、黄杆菌等。,空气,：,空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘（这类微生物大多数是腐生性的，）还来源于人和动物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，悬浮在大气中。,2.微生物在人体中的分布：,在正常人体皮肤、粘膜及外界相通的各种腔道（如口腔、鼻咽腔、肠道和泌尿道）等部位，存在着对人体无害的微生物群.,部位,常见菌种,皮肤,表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、耻垢杆菌等,口腔,链球菌（甲型或乙型）、乳酸杆菌、螺旋体、梭形杆菌、,白色念球菌、（真菌）表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏,球菌、类白喉杆菌,胃,正常一般无菌,肠道,类杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、厌氧性链球菌、粪链球,菌、 葡萄球菌、白色念球菌、乳酸杆菌、变形杆菌、破,伤风杆菌、产气荚膜杆菌等,鼻咽腔,甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链,球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等,眼结膜,皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等,人体中的微生物,三、微生物的作用及危害,1. 微生物的作用,绝大多数微生物对人和动物是有益的。,微生物已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。,2. 微生物的危害,微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，如人类的许多传染病，如伤寒、结核、病毒性肝炎，鼠疫等。,从药品生产的而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素,。,四、微生物的形态结构,（一）、细菌,细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。,细菌的形态与结构,（1） 球菌,多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形或近似球形。常见的有双球菌、链球菌、葡萄球菌等。,（2） 杆菌,形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。,（3） 螺形菌,菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌。,细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质是细菌的基本结构。,大肠菌群,大肠菌群为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。,生存环境,大肠菌群在自然界中分布广泛，在1546均可生长，最适生长温度为37。在水和土壤中大量存在，对自然环境有较强的抵抗力。主要污染的食品是肉类、水产品、蔬菜等。,85热水13分钟灭菌。,300ppm次氯酸纳溶液 13分钟内杀灭本菌。,金黄色葡萄球菌在自然界中分布广泛，空气、水、地面、物体表面、人和动物的体表、粘膜等处均有存在。,食品药品中生长有金黄色葡萄球菌，是食品药品卫生的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，食后能引起食品中毒。,金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌,繁殖条件,金黄色葡萄球菌能在1245生长繁殖，最适生长温度为37，,特征,伤口化脓的地方、口、鼻子等处繁殖；,污染来源于手指的可能性很高 ；,产生的毒素，非常耐热；,预防：,手指处有伤口、化脓口的人，不要直接接触产品；,彻底对手指进行洗净消毒，佩戴手套，要戴帽子、戴口罩；,杀灭条件,加热8030分钟才能杀死，煮沸可迅速使它死亡,沙门氏菌,沙门氏菌常在动物中广泛传播，人的沙门氏菌感染也非常普遍。世界上沙门氏菌的食物中毒占首位，因此，,检查食品药品中的沙门氏菌非常重要。,生存环境,沙门氏菌在水中不易繁殖，但可生存23周，冰箱中可生存34个月，在25可存活10个月，在自然环境的粪便中可存活12个月。,繁殖条件,沙门氏菌最适繁殖温度为37，在20以上即能大量繁殖，因此，低温储存食品是一项重要预防措施 。,污染渠道,沙门氏菌的来源主要是患病的人和动物，及人和动物的带菌者，其中在肉类中最为多见。,杀灭条件,沙门氏菌对热及外界环境的抵抗力属于中等，,60 2030分钟,75 5分钟即被杀死，,100 立即被杀死。,沙门氏菌,（二）、真菌,真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。,真菌包括单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为,酵母菌,；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称,丝状菌,或,霉菌,。,真菌生长的最适的温度为2228，最适的pH值为46。其繁殖能力强，但生长速度比细菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌对热的抵抗力不强，一般加热6070 1小时即被杀死，但对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，但对2.5碘酒、10甲醛则较敏感。,（三）、病毒,病毒属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。,病毒是体积最小、结构最简单的微生物，它仅有一种核酸（DNA或RNA）作其遗传物质。病毒必须在宿主活细胞内寄生，依靠细胞提供的能量、营养物质及生物大分子合成机制，完成病毒的复制过程。,病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病约75是由病毒引起的。有些病毒传染性强，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。,（,四）、热原与内毒素,热原：是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。,内毒素：是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖和微量蛋白的复合物，具有多种生物活性。,热原包括内毒素 ，内毒素是主要的热原物质,。,在产品检测中，细菌内毒素是检测热原的方法之一。,我厂产品，,脯氨酸检测内毒素-鲎试剂法。,中国药典10EU/g,AJI2002 6EU/g,肌苷检测热原-动物试验法（家兔法）。,消除细菌内毒素的方法,高温破坏法：可用,180,干烤,34h,或,250,干烤,至少60min,。,吸附法：一般选用活性炭。,化学酸碱和氧化法。,离子交换法。,反渗透法。,凝胶过滤法。,注：在产品微检中，无菌生长，不代表无内毒素，细菌死亡后会产生大量内毒素。,五、微生物污染及消毒灭菌,1.药品微生物污染：,药品微生物污染：微生物的产生、附着而给药品带来不良影响。,药品的微生物污染也称染菌。,污染药品的细菌：常见污染药品的细菌是一些生命力较强的细菌，如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌及一些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污染。,药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫、生产操作人员等,2.消毒与灭菌,消毒：,杀死物体上病源微生物的方法，并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。,灭菌：,杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。,抑菌：,抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。,防腐：,防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。,无菌：,不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。,3、常用的消毒灭菌法：,物理灭菌法和化学消毒法,物理灭菌方法,热力灭菌法,辐射杀菌法,滤过除菌法,超声波杀菌法,干燥与低温抑菌法,热力灭菌法,：,使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。,干热灭菌法：,采用灼烧或干热空气灭菌。常用方式是把待灭菌的物品均匀的放入烘箱，升温至160，恒温1h。此方法适合玻璃皿，金属用具的灭菌。,湿热灭菌法,利用热蒸汽杀死微生物。相同条件下，,湿热灭菌,效果比,干热灭菌,效果好。这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性，另一方面高温水蒸气对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性，死亡。,高压蒸汽灭菌,：,湿热灭菌法的一种。,高压蒸汽灭菌,是最可靠、最适用、最广泛的灭菌方法。,辐射灭菌法：,是采用辐射进行灭菌消毒。包括可见光、红外线、紫外线、X射线和射线等,。,紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用，265266nm波段杀菌能力最前。紫外线穿透物质的能力差，一般用于空气及物体表面消毒。,电离辐射：高速电子、X射线、,射线，适用于不耐热物品的灭菌，常用于药品和医疗用品的灭菌。,微波：波长1mm1m。,滤过除菌法,用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的。,滤菌器含有微细小孔,0.22微米,只允许液体或气体通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 。,适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。,化学消毒法法：,一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以是消毒的作用，而不是灭菌的作用。,消毒剂：能迅速杀灭病原微生物的药物。,防腐剂：能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物。,消毒剂、防腐剂没有选择性，对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以常用于器械，体表、环境的消毒。,常用的化学消毒剂有：来苏水、碘酒、酒精等,类别,作用机制,常用种类,用途,酚类,蛋白变性，,细胞膜损伤,石炭酸,地面、器具表,面、皮肤消毒,醇类,蛋白变性,75,酒精,皮肤、体温计消毒,氧化剂,氧化、蛋白沉淀,二氧化氯,地面、器具表面、皮肤消毒,过氧乙酸、碘酒,塑料、玻璃器材、皮肤消毒,重金属盐,氧化、蛋白酶变性,红汞、,硫柳汞,皮肤、粘膜、小创伤消毒,表面,活性剂,蛋白变性细胞膜损伤,0.1,新洁尔灭,地面、器具表面、皮肤消毒,化学灭菌法常用消毒剂种类和用途：,洁净区的主要污染源：,空气、制药用水、操作人员、设备，原辅料等，,其中操作人员是主要的污染源。,药品生产质量管理规范中明确规定：洁净区内的人员应严格控制，其工作人员应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净区作业等方面的培训和考核；进进入洁净区的临时外来人员因进行指导和监督。,防止微生物污染的措施：,了解污染源、杜绝污染途径,洁净区洁净技术的的应用及卫生管理,制药用水的质量控制,进行微生物限度检查，控制药品质量,洁净区防污染必须以尘埃粒子和微生物为环境监控对象。,六、洁净区微生物的控制,六、洁净区微生物的控制,洁净区的污染源：尘埃及细菌污染,来自人的尘粒污染占洁净室污染的80%,生产工具和设备引起的污染占15%,洁净区本身和过滤器的缺陷引起的污染占5%,1.1操作人员带来的尘埃粒子：,a,.,成年人产生的皮屑：10万1000万粒子/min；,b,.,操作人员身穿工作服，剧烈活动：产生,100万个粒径0.1 m的微粒,20万个粒径0.5 m的微粒,c,. 交谈1min ，产生1.52.0万粒子,d,.,咳嗽:70万个粒子，喷嚏：140万个粒子,1.2人体微生物分布情况,：,人体部位,微生物种类名称,检出率%,皮肤,表皮葡萄球菌,疮疱丙酸杆菌,类白喉棒杆菌,金黄色葡萄球菌,85100,45100,55,525,鼻和鼻咽,表皮葡萄球菌,金黄色葡萄球菌,类白喉棒杆菌,黏膜炎布兰汉氏球菌,流感嗜血杆菌,90,2085,580,12,12,口腔,表皮葡萄球菌,-溶血链球菌,唾液链球菌,消化链球菌,金黄色葡萄球菌,流感嗜血杆菌,产碱韦荣氏球菌,75100,100,100,占优势,常见,25100,100,口咽部,表皮葡萄球菌,类白喉棒杆菌,-链球菌和非溶血链球菌,金黄色葡萄球菌,3070,5090,2599,3540,大肠,脆弱拟杆菌,产黑素拟杆菌,口腔拟杆菌,具核梭杆菌,坏死梭杆菌,肠球菌,大肠杆菌,100,100,100,100,100,100,100,在洁净区内的人员数量应尽量少，应严格按照,SOP,要求操作以减少尘埃粒子,要有自我约束的概念。,1.3 人体带菌及皮屑情况,项目,部位,数量（个）,细菌,手,前额,头皮,1001000/立方厘米,100010万/立方厘米,100万/立方厘米,皮屑,皮肤表面,皮肤更替,脱落尘粒,1.75平方米,5天一次,7.1亿/天,为保证生产环境的洁净度，应认清人体产生污染的部位，做好措施,出入洁净区的无菌服应尽可能覆盖全身，皮肤暴露部分越少越好，以尽量减少产品的污染。,在洁净区从事药品生产的人员须每年至少进行一次身体检查，有皮肤疾病者、传染病者、体表有伤口者不得进入洁净区。,2.1 洁净室的设计：,表面应光滑平整易于清洁消毒、无死角、无裂缝，不易藏灰尘；,不同洁净度级别的房间应有足够的压差,天花板应密封、穿墙的管道与墙体之间应密封,100级洁净区内应无地漏、其它区域地漏应液封,设置更衣室、缓冲间，并安装过滤器，门设计成连锁,空气流动一般为杂流，上送风下排风，100级为层流,更衣室的洁净度级别应与高级别的房间相同。,2.洁净区洁净技术的应用,2.2洁净区污染的控制,保持房间正压：,洁净级别不同的相邻房间，之间的静压差5Pa,洁净区对外界的静压差10Pa,空气总是由洁净级别高的房间向低的房间流动,对洁净区空气进行净化：,保持空调系统的设计符合洁净区洁净度要求。,保持空调系统的净化功能符合要求。,按规定对洁净区进行消毒、灭菌,保持洁净室联锁装置的正常：,3. 洁净区操作注意事项：,3.1 洁净区人流管理,操作人员进入洁净区应严格按照SOP程序,：,存放个人物品换鞋 穿上洁净拖鞋 脱去外衣 洗手 穿上洁净服 戴上口罩检查手消毒戴上洁净手套进入洁净区,人员离开洁净区程序：,洁净区缓冲间更衣室（脱下工作鞋、换穿拖鞋、脱下口罩、衣、帽）存衣室（洗手、穿上外衣）换鞋间（脱下拖鞋、走出换鞋间）换鞋存放室,维修人员进入洁净区维修工作要求：,必须按进入洁净区的SOP要求进入洁净区。,将工具清洁后从传递窗传入。,在生产状态下，不得从事可能影响产品质量的维修,维修工具必须为专用工具，存放在专用地点，并有标识。,维修用具在使用完后必须马上清洁，并放回指定地点。,不得裸手直接接触药品。,不得高声谈笑，必须戴口罩。,不可穿着洁净服走出更衣室外面，然后再回到洁净区。,洁净区人员工作要求：,个人卫生要求,不得化妆,不得在洁净区内吃饭、喝水。,不得在洁净区内抽烟,不得有可见伤口,不得留长手指甲、戴首饰、,传染病患者不得进入洁净区。,平时生产工作中，如患有腹泻、感冒、咳嗽、不明原因发热或体表有伤口等轻微疾病，不得进入洁净区。,洁净区人员工作要求：,正确的行为和操作：,保持在洁净区内工作，不随意出入洁净区,不随便说话，必要时才说话,不要通过传递窗说话，使用电话,总是戴上口罩以减少来自口腔的污染,机械和设备的维修保养必须有规律的进行,定期对洁净室和洁净室内物品进行清洁,始终保持洁净区的清洁和整齐,良好的行为很关键，请记住：穿着正确、移动正确、行动正确、工作正确,防止不正确的行为和操作：,防止着装不正确而散播身体的粒子，引起污染,防止不戴手套接触物料，引起交叉污染,防止在洁净室内脱去洁净室工作服,防止用手指接触头发或身体的其他部位,防止在患感冒或其他疾病期间进洁净室工作,防止在洁净室内吃、喝、抽烟或读报等,防止在洁净室内戴首饰、手表,防止在洁净室使用错误清洁物料,防止在洁净室内快速地走、移动、转身,防止靠在工作台、产品或其它物料上,防止把手、手臂和手肘放在超净工作台上休息,防止搬运物料的顶部,防止在工作台上滑动物品,3.2 洁净区物流管理,物品进出洁净区应该使用传递窗：,使用前先检查传递窗连锁装置是否正常，,检查传递窗内、外是否清洁，无粉尘，否则，应立即用干净的微湿抹布抹干净才能使用。,同一时间，传递窗只能用于一种物料的传递，在清洁后才能进行另一种物料的传递。,由非洁净区进入洁净区的物料及物品，通过传递窗，须开启紫外灯照射10min。,4.洁净区的清洁和消毒,4.1消毒剂的选择,地面和工作台面消毒-新洁尔灭,不锈钢表面消毒-75%乙醇,手消毒- 75%乙醇,消毒剂应轮换交替使用，避免产生耐药性。如0.1%新洁尔灭和2%来苏水消毒液,4.2正确配制、使用消毒剂,用纯化水配制消毒液,按说明书要求的浓度配制消毒液,不要将剩下的消毒液倒入新配的消毒液中,不要混合不同种类的消毒液,4.3洁净区的清洁：,生产完成后应进行清场，对地面、门窗、用具、设备表面、水池、地漏等进行清洁。,定期对洁净区墙面、地面、天花、排风、地漏及其它辅助装置进全面擦拭和消毒。,定期对洁净区内空气进消毒。,单月使用0.1%新洁尔灭，双月使用2%来苏水对洁净区地面、清洁工具进行消毒。,单月使用0.2%新洁尔灭，双月使用3%来苏水对洁净区地漏进行消毒,4.4洁净区的熏蒸和消毒：,洁净区熏蒸一般使用甲醛和过氧乙酸两种消毒剂（每季度轮流更换）。,甲醛：能破坏细菌繁殖体及许多芽孢、真菌和病毒。甲醛加高锰酸钾产生大量甲醛气体，可使室内消毒。,过氧乙酸：广谱消毒剂，能杀死细菌繁殖体、芽孢、真菌与某些病毒。,4.5洁净区的微生物监控：,洁净区尘埃粒子、沉降菌、浮游菌、控制菌的监控,产品及纯化水的微生物限度监控,本次培训到此结束,谢谢！,