线粒体和液泡系的活细胞染色

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,线粒体和液泡系的活细胞染色,Experiment 10,【,实验目的,】,1,掌握细胞超活染色制作光镜标本的方法,2.,了解线粒体和液泡系的基本形态、数量和分布,【,实验原理,】,活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而不影响细胞生命活动的一种染色方法。活染技术可用于研究生活状态下的细胞形态结构及生理和病理变化。活体染色包括体内活染和体外活染两类。体外活染又称为超活染色，是从活的动植物体分离出组织小块或部分细胞，以染液浸染，使得染料选择性结合在细胞的特定结构上而显色。,詹纳斯绿,B,（,Janus,green B,）和中性红（,neutral red,）两种碱性染料毒性小，是活体染色最重要的染料，对于线粒体和液泡系各具专一性。,线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿,B,是线垃体的专一性活体染色剂，这是因为线粒体内的细胞色素氧化酶系可使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在线粒体周围的细胞质中染料被还原为无色的色基。,细胞内凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基复合体、溶酶体、微体、吞噬泡等。中性红是液泡系专一的活体染色剂，可将活细胞中液泡系染成红色，中性红染色可能与液泡中的某些蛋白有关。,【,实验材料,】,一、材料和标本,:,小鼠、线粒体超活染色标本,二、器材和仪器,:,显微镜、手术器械、解剖盘、小平皿、载玻片、盖玻片、吸水纸、吸管、牙签等。,三、试剂,: l/5000,詹纳斯绿,B,和,l/3000,中性红混合染液、,Ringer,氏液,(,哺乳类用,),、,【,实验内容,】,一、口腔上皮细胞线粒体的超活染色,1.,在洁净的载玻片上滴,2-3d,詹纳斯绿,B,和中性红混和染液。,2.,用消毒牙签在口腔颊部刮取口腔黏膜上皮，在染液中搅匀，染色,15min,。,3.,盖上盖玻片后镜检。可见细胞质中散在的被染成亮绿色的短杆状或颗粒状线粒体。,二、小鼠肝细胞的超活染色,1.,小鼠颈椎脱臼处死，迅速打开腹腔，剪取肝脏边缘较薄的组织，置于含,Ringer,液的平皿中，挤压去除组织中的血液，洗涤,2-3,次后吸去,Ringer,氏液。,2.,平皿内加詹纳斯绿,B,和中性红混和染液，注意让组织块上表面微露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，使线粒体着色。,3.,染色,25-30min,，可见组织块边缘染成蓝色。将组织块用,Ringer,氏液洗涤,1,次后转移至载玻片上，用镊子将组织块拉碎，使部分细胞或细胞群从组织块脱离分散。,4.,去除稍大的组织块，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，盖上盖玻片，镜检。可见肝细胞中含量丰富的线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。,【,作 业,】,一、绘图：人口腔上皮和小鼠肝细胞的超活染色结果。,二、线粒体和液泡系活体染色的原理是什么？,