OMEGA kit

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,质粒,DNA,的抽提,E.Z.N.A.,TM,Plasmid Mini Kit I,原理,此试剂盒采用碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的,DNA,。,细菌的准备,接种含特定质粒的大肠杆菌过夜培养于含特定抗生素的,LB,培养液中。,实验步骤：,1.,取,1.5ml,过夜培养的菌液，加入离心管中，,10000 rpm,离心,1min,，倒掉上清。再加入,1.5ml,菌液，重新富集一次。,向留有菌体沉淀的离心管中加入,250ul,溶液,P1,，使用涡漩仪使细菌沉淀全部悬浮。,向离心管中加入,250ul,溶液,P2,，温和的（勿剧烈震荡）上下翻转,4-6,次使菌体充分裂解，室温下放置至菌液变清亮粘稠，时间不应超过,5min.,向离心管中加入,350ul,溶液,P3,，立即温和地上下翻转,6-8,次，充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。,14000 rpm,离心,10min,。,向吸附柱中加入上清（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸入沉淀。,10000 rpm,离心,1min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。重复此操作直至上清全部加入吸附柱。,6.,向吸附柱中加入,500ul Buffer HB,，,10000 rpm,离心,1min,，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。,再向吸附柱中加入,700ul DNA Wash Buffer,，,10000 rpm,离心,1min,，倒掉收集管中的废液。重复一次。,将吸附柱重新放回收集管中，,13000 rpm,离心,2min,。,9.,将吸附柱置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加,50ul,洗脱缓冲液,EB,，室温放置,1min,13000 rpm,离心,1min,，将质粒溶液收集到离心管中。,10.,分别点,1ul,和,5ul,的样品于胶中，电泳检测所提取质粒的质量。,