药物检测分析技术课件

Textmasterformate durch Klicken bearbeiten,Zweite Ebene,Dritte Ebene,Vierte Ebene,Fnfte Ebene,Klicken Sie, um das Titelformat zu bearbeiten,Page,356,维生素类药物的鉴别,一、教学目标,目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作,掌握典型维生素类药物的结构特点、性质、分析方法,良好的记录实验现象及数据的习惯,内容：观察维生素类药物的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系,维生素,B1,、,C,、,A,、,E,的结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,药物,加入试剂,现象,维生素,B1,氢氧化钠、铁氰化钾、正丁醇,蓝色荧光,维生素,C,硝酸银试液,黑色沉淀,2,6-,二氯靛酚钠,颜色消失,维生素,E,硝酸，加热,橙红色,（一）维生素,B1,(Thiamine Hydrochloride),1.,结构特点：,三、维生素类药物,氨基嘧啶环,CH,2,噻唑环,(,季铵碱,),（一）维生素,B1,(Thiamine Hydrochloride),2.,化学性质：,硫色素反应：特征反应,紫外吸收：不饱和结构、共轭结构,溶解性：水溶性,与生物碱沉淀试剂反应：含,N,原子,氯化物特性：盐酸盐,三、维生素类药物,三、维生素类药物,（一）维生素,B1,(Thiamine Hydrochloride),3.,分析方法：,性状,吸收系数,246nm,下测定吸光度，吸收系数为,406436,鉴别,硫色素反应 氯化物反应,含量测定,非水溶液滴定法,（二）维生素,C,1.,结构特点,三、维生素类药物,烯二醇结构,酸性,酸性,内酯结构,6,1,2,3,4,5,（二）维生素,C,2.,化学性质,溶解性,：水溶性,酸性,：烯二醇结构,旋光性,：手性碳原子,还原性,：烯二醇,三、维生素类药物,（二）维生素,C,3.,分析方法,性状,比旋度,+20.5+21.5,鉴别,硝酸银反应,银（黑色沉淀）,2,6-,二氯靛酚钠,颜色消失,含量测定,碘量法,三、维生素类药物,三、维生素类药物,含量测定,取本品约,0.2g,，精密称定，加新沸过的冷水,100ml,与稀醋酸,10ml,使溶解，加淀粉指示液,1ml,，立即用碘滴定液（,0.05mol/L,）滴定，至溶液显蓝色，在,30,秒内不褪。每,1ml,碘滴定液,(0.05mol/L),相当于,8.806mg,的,C,6,H,8,O,6,问题：,（,1,）何为约、精密称定？（,2,）为何用新沸过的冷水？,（,3,）为何加稀醋酸？（,4,）为何要“立即”滴定？,（,5,）如何进行计算？,（,6,）如为注射液，加入丙酮，其作用？,10%,千分之一,除氧气,稳定,防止氧化,人血浆中,Vit,C,浓度的,HPLC,法测定,标准溶液制备：,取,V C,对照品约,25mg,，精密称定，置,25ml,量瓶中，加,10%,偏磷酸稀释至刻度，得维生素,C,储备液浓度为,1mg/ml,，,置冰箱中,2,保存，,3,日内可用,。,血浆样品预处理：,取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中,，,3000rpm,离心,5min,；取血浆,0.5ml,，加入,0.5ml 10%,偏磷酸溶液，涡旋混合,0.5min,，离心，分取上清液，置冰箱,2,贮存，直至测定。,稳定性考察：,V C,在血浆中不稳定，在,5%,偏磷酸溶液中也难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离和处理时间。,样品测定：,每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双样本质控样品。,三、维生素类药物,（三）维生素,E,1.,结构特点：合成型或天然型,三、维生素类药物,R,1,R,2,苯并二氢吡喃醇,Vit E (dl-Tocopheryl Acetate),（三）维生素,E,2.,化学性质：,溶解性,：脂溶性,水解性,：酯键,氧化性,：水解后生育酚,紫外吸收,：苯并二氢吡喃醇,三、维生素类药物,（三）维生素,E,3.,分析方法：,性状,比旋度：不低于,+24,吸收系数：,284nm,下，吸收系数为,41.045.0,鉴别,硝酸反应,生育红（橙红色）,检查,生育酚,VE,水解产物,含量测定,气相色谱法,三、维生素类药物,max = 284nm,min = 254nm,检查,生育酚,三、维生素类药物,取,Vit E 0.1g,，加无水乙醇,5ml,溶解后，加二苯胺,试液,1,滴，用硫酸铈滴定液,(0.01mol/L),滴定，消耗硫酸铈滴定液,(0.01mol/L),不得过,1.0ml,。现象：,亮黄,灰紫,含量测定,色谱条件,：,载气,N,2,；,固定液,硅酮（,OV-17,）,；,柱温,265,；,检测器,氢火焰离子化检测器,(FID),；,内标,正三十二烷,系统适应性实验,：,n 500,；,R2,（,USP,：,内标,十六酸十六醇酯,，,R1.0,）,内标液,：,取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成,1.0mg/ml,溶液,对照液,：,取,VitE,对照品,约,20mg,置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液,10ml,，密塞，振摇使溶解，取,13,l,注入,GC,仪，测定，计算校正因子,供试液,：,取,供试品,约,20mg,置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液,10ml,，密塞，振摇使溶解，取,13,l,注入,GC,仪，测定，计算含量。,三、维生素类药物,（四）维生素,A,1.,结构特点,三、维生素类药物,9,1,2,3,4,5,6,7,8,Retinol (Vit A alcohol),V,A,acetate,全反式，效价最高,（四）维生素,A,2.,化学性质,溶解性,：脂溶性,不稳定性,：共轭多烯,紫外吸收,：共轭多烯,与三氯化锑呈色,三、维生素类药物,（四）维生素,A,3.,分析方法,鉴别,三氯化锑反应：,含量测定,三点校正法,三、维生素类药物,Vit A,SbCl,3,CHCl,3,(,无水无醇,),蓝色,紫红色,Vit A,含量表示,效价,(I.U./g),三、维生素类药物,A,nm,Vit A sample,pure V,A,acetate,impurities,测定原理,杂质的吸收在,310 340 nm,波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；,物质对光的吸收具有加和性,维生素类药物的鉴别,一、教学目标,目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作,掌握典型维生素类药物的结构特点、性质、分析方法,良好的记录实验现象及数据的习惯,内容：观察维生素类药物的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系,维生素,B1,、,C,、,A,、,E,的结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,药物,加入试剂,现象,维生素,B1,氢氧化钠、铁氰化钾、正丁醇,蓝色荧光,维生素,C,硝酸银试液,黑色沉淀,2,6-,二氯靛酚钠,颜色消失,维生素,E,硝酸，加热,橙红色,（一）维生素,B1,(Thiamine Hydrochloride),1.,结构特点：,三、维生素类药物,氨基嘧啶环,CH,2,噻唑环,(,季铵碱,),（一）维生素,B1,(Thiamine Hydrochloride),2.,化学性质：,硫色素反应：特征反应,紫外吸收：不饱和结构、共轭结构,溶解性：水溶性,与生物碱沉淀试剂反应：含,N,原子,氯化物特性：盐酸盐,三、维生素类药物,三、维生素类药物,（一）维生素,B1,(Thiamine Hydrochloride),3.,分析方法：,性状,吸收系数,246nm,下测定吸光度，吸收系数为,406436,鉴别,硫色素反应 氯化物反应 红外光谱图,含量测定,非水溶液滴定法,（二）维生素,C,1.,结构特点,三、维生素类药物,烯二醇结构,酸性,酸性,内酯结构,6,1,2,3,4,5,（二）维生素,C,2.,化学性质,溶解性,：水溶性,酸性,：烯二醇结构,旋光性,：手性碳原子,还原性,：烯二醇,三、维生素类药物,（二）维生素,C,3.,分析方法,性状,熔点 比旋度,+20.5+21.5,鉴别,硝酸银反应,银（黑色沉淀）,2,6-,二氯靛酚钠,颜色消失,含量测定,碘量法,三、维生素类药物,三、维生素类药物,含量测定,取本品约,0.2g,，精密称定，加新沸过的冷水,100ml,与稀醋酸,10ml,使溶解，加淀粉指示液,1ml,，立即用碘滴定液（,0.05mol/L,）滴定，至溶液显蓝色，在,30,秒内不褪。每,1ml,碘滴定液,(0.05mol/L),相当于,8.806mg,的,C,6,H,8,O,6,问题：,（,1,）何为约、精密称定？（,2,）为何用新沸过的冷水？,（,3,）为何加稀醋酸？（,4,）为何要“立即”滴定？,（,5,）如何进行计算？,（,6,）如为注射液，加入丙酮，其作用？,10%,千分之一,除氧气,稳定,防止氧化,三、维生素类药物,人血浆中,Vit,C,浓度的,HPLC,法测定,标准溶液制备：,取,V C,对照品约,25mg,，精密称定，置,25ml,量瓶中，加,10%,偏磷酸稀释至刻度，得维生素,C,储备液浓度为,1mg/ml,，,置冰箱中,2,保存，,3,日内可用,。,血浆样品预处理：,取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中,，,3000rpm,离心,5min,；取血浆,0.5ml,，加入,0.5ml 10%,偏磷酸溶液，涡旋混合,0.5min,，离心，分取上清液，置冰箱,2,贮存，直至测定。,稳定性考察：,V C,在血浆中不稳定，在,5%,偏磷酸溶液中也难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离和处理时间。,样品测定：,每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双样本质控样品。,三、维生素类药物,（三）维生素,E,1.,结构特点：合成型或天然型,三、维生素类药物,R,1,R,2,苯并二氢吡喃醇,Vit E (dl-Tocopheryl Acetate),（三）维生素,E,2.,化学性质：,溶解性,：脂溶性,水解性,：酯键,氧化性,：水解后生育酚,紫外吸收,：苯并二氢吡喃醇,三、维生素类药物,（三）维生素,E,3.,分析方法：,性状,比旋度：不低于,+24,折光率,吸收系数：,284nm,下，吸收系数为,41.045.0,鉴别,硝酸反应,生育红（橙红色） 红外光谱,HPLC,检查,生育酚,VE,水解产物 有关物质,含量测定,气相色谱法,三、维生素类药物,max = 284nm,min = 254nm,检查,生育酚,三、维生素类药物,取,Vit E 0.1g,，加无水乙醇,5ml,溶解后，加二苯胺,试液,1,滴，用硫酸铈滴定液,(0.01mol/L),滴定，消耗硫酸铈滴定液,(0.01mol/L),不得过,1.0ml,。现象：,亮黄,灰紫,含量测定,色谱条件,：,载气,N,2,；,固定液,硅酮（,OV-17,）,；,柱温,265,；,检测器,氢火焰离子化检测器,(FID),；,内标,正三十二烷,系统适应性实验,：,n 500,；,R2,（,USP,：,内标,十六酸十六醇酯,，,R1.0,）,内标液,：,取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成,1.0mg/ml,溶液,对照液,：,取,VitE,对照品,约,20mg,置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液,10ml,，密塞，振摇使溶解，取,13,l,注入,GC,仪，测定，计算校正因子,供试液,：,取,供试品,约,20mg,置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液,10ml,，密塞，振摇使溶解，取,13,l,注入,GC,仪，测定，计算含量。,三、维生素类药物,（四）维生素,A,1.,结构特点,三、维生素类药物,9,1,2,3,4,5,6,7,8,Retinol (Vit A alcohol),V,A,acetate,全反式，效价最高,（四）维生素,A,2.,化学性质,溶解性,：脂溶性,不稳定性,：共轭多烯,紫外吸收,：共轭多烯,与三氯化锑呈色,三、维生素类药物,（四）维生素,A,3.,分析方法,鉴别,三氯化锑反应：,含量测定,三点校正法,三、维生素类药物,Vit A,SbCl,3,CHCl,3,(,无水无醇,),蓝色,紫红色,Vit A,含量表示,效价,(I.U./g),三、维生素类药物,A,nm,Vit A sample,pure V,A,acetate,impurities,测定原理,杂质的吸收在,310 340 nm,波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；,物质对光的吸收具有加和性,巴比妥类药物的鉴别,一、教学目标,目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作,掌握典型巴比妥类药物的结构特点、性质、分析方法,良好的记录实验现象及数据的习惯,内容：观察苯巴比妥的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系,巴比妥类药物的结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,药物,苯巴比妥,司可巴比妥钠,硫喷妥钠,银盐反应,过量，白色沉淀,过量，白色沉淀,过量，白色沉淀,铜盐反应,紫色,沉淀,紫色,沉淀,绿色,沉淀,溴 水,褪色,（一）结构特点,三、巴比妥类药物,环状丙二酰脲类化合物,三、巴比妥类药物,（二）代表药物,(Phenylbarbital),(barbital),三、巴比妥类药物,(Secobarbital),戊巴比妥,(Pentobarbital),三、巴比妥类药物,（三）化学性质,1.,与金属离子反应,a.,与银盐反应,1,5,5,取代的巴比妥类药物,AgNO,3,可溶性,的一银盐,Na,2,CO,3,5,5,取代的巴比妥类药物,AgNO,3,Na,2,CO,3,可溶性,的一银盐,AgNO,3,二银盐,白色沉淀,三、巴比妥类药物,白色难溶性二银盐,AgNO,3,Na,2,CO,3,滴加,AgNO,3,Ag,可溶性一银盐,三、巴比妥类药物,（三）化学性质,1.,与金属离子反应,b.,与铜盐反应,巴比妥类,铜吡啶,显色,巴比妥类,紫色或紫色沉淀,硫巴比妥类,绿色,三、巴比妥类药物,水,吡啶,部分离子化,有色配位化合物,三、巴比妥类药物,（三）化学性质,1.,与金属离子反应,c.,与钴盐反应,巴比妥类药物,+,钴盐 紫堇色,碱性,Co(NO,3,),2,、,CoO,、,Co(Ac),2,异丙胺,无水,甲醇或乙醇,三、巴比妥类药物,（三）化学性质,1.,与金属离子反应,d.,与汞盐反应,巴比妥类药物,+,汞盐白色（可溶于氨试液）,（三）化学性质,2.,弱酸性：,pKa:7.3,8.4,三、巴比妥类药物,一,级,电,离,二级电离,烯醇互变,三、巴比妥类药物,三、巴比妥类药物,（三）化学性质,3.,水解性,巴比妥钠注射液不能预先配制进行加热灭菌，,须制成粉针剂，临用时溶解,三、巴比妥类药物,（三）化学性质,4.,紫外吸收光谱特征,(nm),290,270,250,230,0.5,1.0,1.5,A,巴比妥类药物的紫外吸收光谱,A,B,C,240nm,255nm,A.H,2,SO,4,液,(0.05mol/L,未电离,),B.pH9.9,缓冲液,(,一级电离,),C.pH13NaOH,液,(1mol/L,二级电离,),1,5,5-,三取代巴比妥类药物不存在二级电离，最大吸收波长不变。,（三）化学性质,4.,紫外吸收光谱特征,三、巴比妥类药物,320,280,240,200,0.8,0.5,0.2,(nm),A,238,287,304,硫代巴比妥的紫外吸收光谱,A.HCl,液,(0.1mol/L),B.NaOH,液,(0.1mol/L),三、巴比妥类药物,（三）化学性质,5.,显微结晶,（四）分析方法,1.,鉴别,（,1,）一般鉴别方法,丙二酰脲类,a.,银盐反应,b.,铜盐反应,（,2,）特殊鉴别反应,a.,测定熔点,b.,特殊取代基,三、巴比妥类药物,（四）分析方法,用,不饱和取代基,的鉴别试验,(,司可巴比妥钠,),三、巴比妥类药物,I,2,褪色,Br,2,KMnO,4,（四）分析方法,利用,芳环取代基,的鉴别试验,(,苯巴比妥钠,),a.,硝化反应,b.,硫酸,-,亚硝酸钠反应：,区分苯巴比妥与不含芳环取代的巴比妥类药物,c.,甲醛,-,硫酸反应,三、巴比妥类药物,（四）分析方法,硫元素,反应,(,硫代巴比妥类,),三、巴比妥类药物,（四）分析方法,2.,杂质检查,（,1,）酸度,苯巴比妥,检查,取本品,0.20g,，加水,10ml,，煮沸搅拌,1min,，放冷，滤过后，取滤液,5ml,，,加甲基橙指示液,1,滴，不得显红色,（,2,）乙醇溶液澄清度,（,3,）中性或碱性物质,（,4,）有关物质,（,5,）干燥失重,（,6,）炽灼残渣,三、巴比妥类药物,（四）分析方法,3.,含量测定,（,1,）银量法,(Argentometry),苯巴比妥,三、巴比妥类药物,0.2g,甲醇,40ml,苯巴比妥测定,3%,无水碳酸钠,电位滴定法,(AgNO,3,),（四）分析方法,3.,含量测定,（,2,）溴量法,司可巴比妥钠,含量测定,取本品约,0.1g,，,精密称定,，置,250ml,碘瓶中，加水,10ml,，振摇使溶解，,精密,加溴滴定液（,0.1mol/L,）,25ml,，再加盐酸,5ml,，,立即密塞,并振摇,1min,，在,暗处静置,15min,后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液,10ml,，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（,0.1mol/L,）滴定，,至近终点时，加淀粉指示液,，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每,1ml,溴滴定液（,0.05mol/L,）相当于,13.01mg,的,C,12,H,17,N,2,NaO,3,。,三、巴比妥类药物,何谓？,量具？,为何？,为何？,（四）分析方法,3.,含量测定,（,3,）紫外分光光度法,三、巴比妥类药物,葡萄糖中氯化物、铁盐的检查,一、教学目标,目的：掌握采用纳氏比色管检查药品中一般杂质操作方法,掌握对照法检查杂质遵循的平行原则,良好的记录实验现象及数据的习惯,踏实认真的工作态度,内容：葡萄糖中氯化物、铁盐检查及限量计算,一般杂质检查方法,二、实训内容,操作：氯化物检查,供试品,稀,HNO,3,10ml,H,2,O,Ag,NO,3,1ml,标准溶液,稀,HNO,3,10ml,H,2,O,Ag,NO,3,1ml,暗处放置,5min,(,避免,AgCl,分解,),0.6g,6.0ml,观察到？,注：供试品溶液如带颜色，除另有规定外，可取供试品溶液两份，分别置,50ml,纳氏比色管中，一份中加硝酸银试液,1.0ml,，摇匀，放置,10,分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成,50ml,，摇匀，在暗处放置,5,分钟，作为对照溶液，另一份中加硝酸银试液,1.0ml,与水适量使成,50ml,，摇匀，在暗处放置,5,分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。,操作：铁盐检查,二、实训内容,供试品,2.0g,显色，立即与,同法制成,的,对照溶,液比较,加水溶解,25ml,稀,HCl,4ml,过硫酸铵,50mg,加水稀释,35ml,30%,硫氰酸铵溶液,3ml,加水定容,观察到？,注：如供试管与对照管色调不一致时，可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇,20ml,提取，分层后，将正丁醇层移置,50ml,纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至,25ml,，比较，即得。,思考：,平行,原则：如何通过操作实现？,观察,现象,：混浊？颜色？,如何,比较,：,浊度大小、颜色深浅,限量计算：,二、实训内容,生物碱中特殊杂质检查,一、教学目标,目的：掌握采用,TLC,进行特殊杂质检查操作方法,掌握生物碱类药物的结构特点、性质、分析方法,良好的记录实验现象及数据的习惯,掌握一定娴熟的操作技能,内容：氨茶碱中有关物质的检查,生物碱类药物分类、结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,.,.,供试品：,0.2g+2ml,水，溶解，用甲醇稀释至,10ml,。,10,l,对照品：,1ml,供试品用甲醇稀释至,200ml,。,10,l,色谱条件：,固定相：,GF254,展开剂：正丁醇,-,丙酮,-,三氯甲烷,-,浓氨溶液（,4:3:3:1,）,显色：,254nm,操作,二、实训内容,.,.,供试品溶液如显杂质斑点，与,对照溶液,的,主斑点,比较，,不得更深,。,供试品,对照品,原理：,特殊杂质检查：供试品溶液自身稀释法,杂质未知且不可得,比较方法：供试品,杂质点,与对照品,主斑点,限量计算：,二、实训内容,L=,供试品点样量,对照品点样量,*,100%,是什么成分？,三、生物碱类药物,特点,含,氮碱性,化合物,没有共同母核,多数具有,含氮杂环,结构，少数氮在侧链上（如麻黄碱）,绝大部分存在于植物体内；少数存在于动物体内（如蟾蜍碱）,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,1.,苯烃胺类,*,弱碱性：,烃胺基侧链，仲胺氮,弱碱性,。,游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水,酚羟基特性：,邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；,在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；,在碱性溶液中更易变色。,光学活性：,手性碳原子，具有旋光性,（伪）麻黄碱,秋水仙碱,三、生物碱类药物,*,*,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,2.,托烷类,莨菪烷,(Tropane),莨菪醇,(Tropine),硫酸阿托品,(atropine),氢溴酸东莨菪碱,(scopolamine hydrobromic acid),*,*,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,3.,喹啉类,硫酸奎宁,(Quinine sulfate),硫酸奎尼丁,(quinidine sulfate),盐酸环丙沙星,(ciprofloxacin hydrochloride),喹啉环,喹核碱,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,4.,异喹啉类,吗啡,morphin,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,5.,吲哚类,士的宁,吲哚氮,脂环氮,芳环,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,6.,黄嘌呤类,咖啡因,弱碱性,近中性,三、生物碱类药物,（二）鉴别方法,1.,一般鉴别方法,a.,生物碱沉淀试剂,酸性水溶液中，与重金属盐类和大分子酸类等,沉淀试剂,发生沉淀反应。,常用试剂：,I,2,KI,鞣酸,碘化铋钾 硅钨酸,碘化汞钾,生物碱与碘化,铋钾反应显色,三、生物碱类药物,（二）鉴别方法,1.,一般鉴别方法,b.,熔点测定：生物碱、衍生物,c.,显色反应：生物碱固体,+,显色试剂颜色,常用显色剂：浓,H,2,SO,4,、浓,HNO,3,、钼硫酸,d.,紫外分光光度法：,max,、,E,e.,TLC,法：,Rf,（二）鉴别方法,2.,特征鉴别方法,a.,双缩脲反应,-,苯烃胺类,b.Vitaili,反应,-,托烷类,c.,绿奎宁反应,-,喹啉类,d.,紫脲酸胺反应,-,黄嘌呤类,e.,甲醛,-,硫酸反应,-,吗啡（异喹啉）,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,溶剂种类,适用范围,常用溶剂,酸性,有机弱碱,冰醋酸,碱性,有机弱酸,二甲基甲酰胺,两性,酸,/,碱,甲醇,惰性,酸,/,碱,甲苯、氯仿、丙酮,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,在,水中碱性较弱,，不能顺利地进行中和滴定,（滴定突跃不明显，难以判断滴定终点）,BH,+,A,-,+,HClO,4,BH,+,ClO,4,-,+,HA,游离碱类盐,被置换出的弱酸,当,HA,酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低,HA,的酸性，使反应顺利地完成。,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,供试品,+,冰醋酸,10,ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加,5%,醋酸汞的冰醋酸液,3,ml5ml,结,果,HClO,4,滴定,空白试验校正,指示剂,碱性溶液,pK,b,10,，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,a.,适用范围,主要用于,K,b,10,-8,的有机碱盐的含量测定,K,b,为,10,-8,10,-10,时，宜选冰醋酸作为溶剂；,K,b,为,10,-10,10,-12,时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；,K,b,10,-12,时，应用醋酐作为溶剂。,三、生物碱类药物,咖啡因,(pK,b,=14.2),三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,b.,酸根影响,冰醋酸中酸性：,高氯酸,氢溴酸硫酸盐酸硝酸,消除,HX,干扰的方法：,加,Hg(Ac),2,，,如,量不足终点不明显，结果偏低,c.,滴定剂稳定性,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,d.,终点指示方法,：,常用电位法和,指示剂,法,结晶紫,Crystal Violet,（,CV,）,紫,蓝,蓝绿,黄绿,黄,（碱性区）,（酸性区）,终点的颜色应用电位法校准。,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,2.,提取酸碱滴定法,a.,原理,（三）含量测定方法,2.,提取酸碱滴定法,b.,讨论,碱化试剂,常用的碱化试剂,NaOH,、,NH,3,、,Na,2,CO,3,、,NaHCO,3,、,Ca(OH),2,、,MgO,等。,对碱化试剂的要求,碱化试剂碱性大于生物碱的碱性,，即碱化试剂的,pK,b,生物碱的,pK,b,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,2.,提取酸碱滴定法,b.,讨论,提取溶剂：氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂。,氯仿,：,比重大，易于分离,对大部分生物碱都有较大的溶解度,不燃烧，使用安全,氯仿在碱性下受热很容易分解，尤其是碱性较强时更容易分解,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,2.,提取酸碱滴定法,b.,讨论,指示剂的选择：选择在酸性范围内变色的指示剂。甲基红、溴酚蓝。,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,3.,酸性染料比色法,UV,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,3.,酸性染料比色法,影响因素：,水性最佳,pH,值：,使得,BH,+,和,In,-,最多,酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量,有机溶剂的选择：,提取效率高，,氯仿最理想,水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分,酸性染料里面的有色杂质,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,3.,酸性染料比色法,示例,氢溴酸东莨菪碱片的含量测定,精密量取对照品溶液和供试品溶液各,2ml,，分别置预先精密加入三氯甲烷,10ml,的分液漏斗中，各加,溴甲酚绿,溶液,4ml,，振摇提取后，静置使分层；分取,三氯甲烷,液，照紫外,-,可见分光光度法，在,420nm,波长处分别测定吸光度，计算，即得。,（三）含量测定方法,4.,紫外,-,可见分光光度法,直接紫外测定,萃取后紫外测定,萃取,-,双波长分光光度法,5.HPLC,6.LC-MS/MS,三、生物碱类药物,生物碱中特殊杂质检查,一、教学目标,目的：掌握采用,TLC,进行特殊杂质检查操作方法,掌握生物碱类药物的结构特点、性质、分析方法,良好的记录实验现象及数据的习惯,掌握一定娴熟的操作技能,内容：氨茶碱中有关物质的检查,生物碱类药物分类、结构特点、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,.,.,供试品：,0.2g+2ml,水，溶解，用甲醇稀释至,10ml,。,10,l,对照品：,1ml,供试品用甲醇稀释至,200ml,。,10,l,色谱条件：,固定相：,GF254,展开剂：正丁醇,-,丙酮,-,三氯甲烷,-,浓氨溶液（,4:3:3:1,）,显色：,254nm,1.,点样：点样量相同，位置在同一水平线上，不得破坏硅胶表面,如需重复点样：前一次点样溶剂挥干后，在同一位置点样,展开前需挥干溶剂,2.,展开剂配制：小体积展开剂用刻度吸管量取,3.,展开：用展开剂平衡展开缸,不要移动,展至距硅胶板边缘,0.5-1cm,停止,4.,结果显示：展开剂挥干后再观察,先日光灯、再紫外灯、最后显色剂,5.,结果判断：点圆而集中，无拖尾,二、实训内容,操作,二、实训内容,.,.,供试品溶液如显杂质斑点，与,对照溶液,的,主斑点,比较，,不得更深,。,供试品,对照品,原理：,特殊杂质检查：供试品溶液自身稀释法,杂质未知且不可得,比较方法：供试品,杂质点,与对照品,主斑点,限量计算：,二、实训内容,L=,供试品点样量,对照品点样量,*,100%,是什么成分？,三、生物碱类药物,特点,含,氮碱性,化合物,没有共同母核,多数具有,含氮杂环,结构，少数氮在侧链上（如麻黄碱）,绝大部分存在于植物体内；少数存在于动物体内（如蟾蜍碱）,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,生物碱碱性强弱一般规律是：,季铵碱类脂肪胺类,NH,3,芳胺、,N-,芳杂环酰胺类,盐酸小檗碱,芳胺,咖啡因,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,1.,苯烃胺类,*,弱碱性：,烃胺基侧链，仲胺氮,弱碱性,。,游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水,酚羟基特性：,邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；,在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；,在碱性溶液中更易变色。,光学活性：,手性碳原子，具有旋光性,（伪）麻黄碱,秋水仙碱,三、生物碱类药物,*,*,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,2.,托烷类,莨菪烷,(Tropane),莨菪醇,(Tropine),硫酸阿托品,(atropine),氢溴酸东莨菪碱,(scopolamine hydrobromic acid),*,*,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,3.,喹啉类,硫酸奎宁,(Quinine sulfate),硫酸奎尼丁,(quinidine sulfate),盐酸环丙沙星,(ciprofloxacin hydrochloride),喹啉环,喹核碱,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,4.,异喹啉类,吗啡,morphin,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,5.,吲哚类,士的宁,吲哚氮,脂环氮,芳环,三、生物碱类药物,（一）结构与性质,6.,黄嘌呤类,咖啡因,弱碱性,近中性,三、生物碱类药物,（二）鉴别方法,1.,一般鉴别方法,a.,生物碱沉淀试剂,酸性水溶液中，与重金属盐类和大分子酸类等,沉淀试剂,发生沉淀反应。,常用试剂：,I,2,KI,鞣酸,碘化铋钾 硅钨酸,碘化汞钾,生物碱与碘化,铋钾反应显色,三、生物碱类药物,（二）鉴别方法,1.,一般鉴别方法,b.,熔点测定：生物碱、衍生物,c.,显色反应：生物碱固体,+,显色试剂颜色,常用显色剂：浓,H,2,SO,4,、浓,HNO,3,、钼硫酸,d.,紫外分光光度法：,max,、,E,e.,TLC,法：,Rf,（二）鉴别方法,2.,特征鉴别方法,a.,双缩脲反应,-,苯烃胺类,b.Vitaili,反应,-,托烷类,c.,绿奎宁反应,-,喹啉类,d.,紫脲酸胺反应,-,黄嘌呤类,e.,甲醛,-,硫酸反应,-,吗啡（异喹啉）,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,溶剂种类,适用范围,常用溶剂,酸性,有机弱碱,冰醋酸,碱性,有机弱酸,二甲基甲酰胺,两性,酸,/,碱,甲醇,惰性,酸,/,碱,甲苯、氯仿、丙酮,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,在,水中碱性较弱,，不能顺利地进行中和滴定,（滴定突跃不明显，难以判断滴定终点）,BH,+,A,-,+,HClO,4,BH,+,ClO,4,-,+,HA,游离碱类盐,被置换出的弱酸,当,HA,酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低,HA,的酸性，使反应顺利地完成。,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,供试品,+,冰醋酸,10,ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3,ml5ml,结,果,HClO,4,滴定,空白试验校正,指示剂,碱性溶液,pK,b,10,，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,a.,适用范围,主要用于,K,b,10,-8,的有机碱盐的含量测定,K,b,为,10,-8,10,-10,时，宜选冰醋酸作为溶剂；,K,b,为,10,-10,10,-12,时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；,K,b,10,-12,时，应用醋酐作为溶剂。,三、生物碱类药物,咖啡因,(pK,b,=14.2),三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,b.,酸根影响,冰醋酸中酸性：,高氯酸,氢溴酸硫酸盐酸硝酸,消除,HX,干扰的方法：,加,Hg(Ac),2,，,如,量不足终点不明显，结果偏低,c.,滴定剂稳定性,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,1.,非水溶液滴定法,d.,终点指示方法,：,常用电位法和,指示剂,法,结晶紫,Crystal Violet,（,CV,）,紫,蓝,蓝绿,黄绿,黄,（碱性区）,（酸性区）,终点的颜色应用电位法校准。,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,2.,提取酸碱滴定法,a.,原理,（三）含量测定方法,2.,提取酸碱滴定法,b.,讨论,碱化试剂,常用的碱化试剂,NaOH,、,NH,3,、,Na,2,CO,3,、,NaHCO,3,、,Ca(OH),2,、,MgO,等。,对碱化试剂的要求,碱化试剂碱性大于生物碱的碱性,，即碱化试剂的,pK,b,生物碱的,pK,b,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,2.,提取酸碱滴定法,b.,讨论,提取溶剂：氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂。,氯仿,：,比重大，易于分离,对大部分生物碱都有较大的溶解度,不燃烧，使用安全,氯仿在碱性下受热很容易分解，尤其是碱性较强时更容易分解,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,2.,提取酸碱滴定法,b.,讨论,指示剂的选择：选择在酸性范围内变色的指示剂。甲基红、溴酚蓝。,三、生物碱类药物,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,3.,酸性染料比色法,UV,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,3.,酸性染料比色法,影响因素：,水性最佳,pH,值：,使得,BH,+,和,In,-,最多,酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量,有机溶剂的选择：,提取效率高，,氯仿最理想,水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分,酸性染料里面的有色杂质,三、生物碱类药物,（三）含量测定方法,3.,酸性染料比色法,示例,氢溴酸东莨菪碱片的含量测定,精密量取对照品溶液和供试品溶液各,2ml,，分别置预先精密加入三氯甲烷,10ml,的分液漏斗中，各加,溴甲酚绿,溶液,4ml,，振摇提取后，静置使分层；分取,三氯甲烷,液，照紫外,-,可见分光光度法，在,420nm,波长处分别测定吸光度，计算，即得。,（三）含量测定方法,4.,紫外,-,可见分光光度法,直接紫外测定,萃取后紫外测定,萃取,-,双波长分光光度法,5.HPLC,6.LC-MS/MS,三、生物碱类药物,细菌内毒素检查,一、教学目标,目的：掌握采用鲎试剂法,凝胶法进行细菌内毒素检查的方法,掌握抗生素类药物结构、性质、分析方法,具有踏实认真的工作态度,内容：细菌内毒素的检查方法,抗生素类药物结构、性质、分析方法,二、实训内容,操作：,供试品,（,s,）,阳性对照,（,PC,）,供试品阳性对照（,PPC,）,阴性对照（,NC,）,对象,供试品,2,供试品,+,2,BET,水,表现,凝胶，不完整,凝胶，不脱落,凝胶，不脱落,凝胶，不完整,结果,+,+,三、抗生素类药物,抗生素,（,antibiotics,）,在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称,分类,内酰胺类,(,青霉素类、头孢菌素类,),氨基糖苷类,(,链霉素、庆大霉素、依替米星,),四环素类,(,四环素、金霉素、土霉素,),大环内酯类,(,红霉素、螺旋霉素、麦迪霉素,),多烯大环类,(,制霉菌素、两性霉素,B),多肽类,(,多黏菌素、放线菌素,),来源,生物合成（发酵）,化学合成或半合成,特点,化学纯度较低,活性组分易发生变异,稳定性差,三、抗生素类药物,三、抗生素类药物,抗生素质量分析,生物学法、物理化学法,鉴别,：理化方法、微生物法,检查,：水分、,pH,值、异常毒性、热原、,细菌内毒素,、降压物质等,含量,/,效价测定,：,微生物法,： 与临床疗效吻合,灵敏度高，结果直观，适用范围广；但操作复杂费时，误差大,理化方法,：准确度与专属性较高,且操作简便；但与临床疗效有偏差,三、抗生素类药物,（一）,内酰胺类,1.,结构与性质,氢化噻唑环,青霉素类：,母核,6,氨基青霉烷酸,（一）,内酰胺类,1.,结构与性质,酸性,：羧基，,pKa 2.5-2.8,，与碱成盐,手性,C,（旋光性）,紫外吸收：苯环取代基,不稳定性：,内酰胺环，干燥条件较稳定，溶液不稳定,三、抗生素类药物,三、抗生素类药物,（一）,内酰胺类,1.,结构与性质,氨苄西林,阿莫西林,青霉素（苄青霉素）,（,penicillins,）,三、抗生素类药物,（一）,内酰胺类,1.,结构与性质,氢化噻嗪环,母核：,7,氨基头孢菌烷酸,三、抗生素类药物,（一）,内酰胺类,1.,结构与性质,头孢氨苄,头孢拉定,头孢羟氨苄,头孢噻吩钠,三、抗生素类药物,（一）,内酰胺类,1.,结构与性质,酸性,：羧基，,pKa 2.5-2.8,，与碱成盐,手性,C,：,旋光性,紫外吸收,不稳定性：,内酰胺环，干燥条件较稳定，溶液不稳定,三、抗生素类药物,（一）,内酰胺类,2.,鉴别,a.,色谱法：,HPLC,（,t,R,）、,TLC,（,R,f,）,b.,光谱法：,UV,、,IR,三、抗生素类药物,三、抗生素类药物,（一）,内酰胺类,3.,杂质检查,聚合物、有关物质、异构体等,a.,聚合物：头孢他啶中聚合物测定,HPLC,b.,有关物质与异构体：头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查,HPLC,4.,含量测定,HPLC,三、抗生素类药物,（二）氨基糖苷类,1.,结构与性质,a.,碱性（氨基）：临床应用其硫酸盐,b.,溶解度（氨基、羟基）：水溶性,c.,旋光性（糖）：多个手性碳,d.,稳定性（苷）：强酸、碱条件均可水解,链霉素,(Streptomycin),三、抗生素类药物,（二）氨基糖苷类,2.,鉴别,坂口反应,麦芽酚反应,N-,甲基葡萄,糖胺反应,三、抗生素类药物,（二）氨基糖苷类,2.,鉴别,a.,坂口反应,链霉胍特有反应,b.,麦芽酚反应,链霉糖特有反应,链霉素,OH,-,水解,8-,羟基喹啉,NaOBr,或,-,萘酚,链霉胍,橙红色,OH,-,分子重排,Fe,3+,H,+,链霉素,链霉糖,麦芽酚,紫红色,（二）氨基糖苷类,2.,鉴别,c.,N-,甲基葡萄糖胺反应,3.,杂质检查：,TLC,、,HPLC,三、抗生素类药物,链霉素,水解,N-,甲基葡萄糖胺,乙酰丙酮,OH,-,吡咯衍生物,对二甲氨基苯甲醛,H,+,红色,（二）氨基糖苷类,4.,含量测定,微生物检定法,HPLC,法,三、抗生素类药物,（三）,四环素类类,1.,结构与性质,三、抗生素类药物,A,B,C,D,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,三、抗生素类药物,（三）,四环素类,1.,结构与性质,两性：,-OH,酸性、,N(CH,3,),2,碱性,旋光性：,UV,和荧光：,与金属离子络合：酚羟基、烯醇基,不稳定性：,A,A,pH2.06.0,三、抗生素类药物,（三）,四环素类,2.,鉴别,HPLC,TLC,IR,UV,显色法,结构,性质,分析方法,苯环,紫外吸收,紫外分光光度法,酰胺,易水解,-,内酰胺,不稳定，易水解,羧基,酸性，成盐,酸碱滴定法,结构,性质,分析方法,苯环,紫外吸收,紫外分光光度法,酰胺,易水解,-,内酰胺,不稳定，易水解,羧基,酸性，成盐,酸碱滴定法,-p-,共轭，紫外吸收,紫外分光光度法,地西泮片溶出度测定,一、教学目标,目的：掌握溶出度的测定方法,掌握制剂质量检查项目、意义、方法,具有团结协作的精神,内容：溶出度测定方法,制剂质量检查项目、方法,二、实训内容,操作：溶出度测定,方法：第一法,篮法,溶出介质,：盐酸溶液（,91000,）,800ml,转速,：,100,转,/,分钟,溶出时间,：,20,分钟,紫外条件,：续滤液测定，检测波长：,242nm,，吸收系数：,1018,限度要求：,75%,溶出度测定结果：？,三、制剂质量检查,示例,地西泮片,检查,其他 应符合,片剂项下有关的各项规定,（附录, A,）,重量差异,崩解时限,发泡量,分散均匀性,微生物限度,符合制剂质量要求,三、制剂质量检查,其他剂型,注射剂,：装量、装量差异、可见异物、无菌、细菌内毒素,胶囊剂,：装量差异、崩解时限,颗粒剂,：粒度、干燥失重、装量差异、溶化性,丸剂：重量差异、溶散时限,（一）重量差异,1.,操作：,中国药品检验标准操作规范,2.,判断标准,合格,：均未超出限度，超出限度不得多于,2,片，且均未超出限度,1,倍,三、制剂质量检查,平均重量,重量差异限度,0.30g,以下,7.5%,0.30g,或,0.30g,以上,5%,三、制剂质量检查,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,N,2L,2L,符合规定,符合规定,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,N,不符合规定,W,S,L,L,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 N,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,N,W,S,L,L,2L,2L,W,S,L,L,2L,2L,W,S,L,L,2L,2L,不符合规定,（二）崩解时限,1.,操作：,中国药品检验标准操作规范,2.,仪器：,三、制剂质量检查,可升降金属支架：上下移动距离为,55,2mm,，往返频率为每分钟,30,32,次。,吊篮,水浴缸,盛有溶剂的烧杯,（二）崩解时限,2.,仪器,三、制剂质量检查,（二）崩解时限,2.,仪器,三、制剂质量检查,三、制剂质量检查,（二）崩解时限,3.,判断标准,介质：,371,，规定溶出介质（不同剂型）,判断：,合格,：初试：,6,片，全部崩解,复试：初试有,1,片不能完全崩解，另取,6,片复试，全部崩解,（三）溶出度检查,1.,操作：,中国药品检验标准操作规范,2.,仪器,三、制剂质量检查,三、制剂质量检查,（三）溶出度检查,2.,仪器,三、制剂质量检查,（三）溶出度检查,3.,判断标准,合格：,6,片，每片溶出量按标示量计算，均不低于规定限度（,Q,）,6,片，有,12,片低于规定限度,Q,，但不低于,Q,-10%,，平均溶出量不低于,Q,6,片，有,12,片低于规定限度,Q,，,Q,-20%,1,片,Q,-10%,，平均溶出量不低于,Q,时；另取,6,片复试，初、复试的,12,片，有,13,片低于规定限度,Q,，,Q,-20%,1,片,Q,-10%,，平均溶出量不低于,Q,三、制剂质量检查,（四）可见异物检查,1.,操作：,中国药品检验标准操作规范,2.,仪器,三、制剂质量检查,（四）可见异物检查,3.,判断标准,合格：,溶液型,20,支均未检出可见异物。,20,支仅有,1,支检出，复试,20,支均未检出,混悬型,20,支未检出色块、纤毛,溶液型非静脉用注射液、注射用无菌粉末、注射用无菌原料,按国务院药品监督管理部门有关规定执行,地西泮片溶出度测定,一、教学目标,目的：掌握溶出度的测定方法,掌握制剂质量检查项目、意义、方法,具有团结协作的精神,内容：溶出度测定方法,制剂质量检查项目、方法,二、实训内容,操作：溶出度测定,方法：第一法,篮法,溶出介质,：盐酸溶液（,91000,）,800ml,转速,：,100,转,/,分钟,溶出时间,：,20,分钟,紫外条件,：续滤液测定，检测波长：,242nm,，吸收系数：,1018,限度要求：,75%,溶出度测定结果：？,二、实训内容,取样位置：,在,转篮顶端至液面的中点,，距溶出杯内壁不小于,10mm,处,二、实训内容,取样位置的固定：针头和针垫的选择,溶出介质,900mL,1000mL,500mL,600mL,针头,短针,短针,长针,长针,针垫,薄垫,厚垫,薄垫,厚垫,三、制剂质量检查,示例,地西泮片,检查