2.标准病理制片流程

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,-,杨飞城,谢谢聆听,HE染色操作步骤,苏木精 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。,工具/原料,固定液甲醛（福尔马林）,脱水剂酒精,透明剂二甲苯,石蜡,脱蜡剂：二甲苯,至水剂：酒精,染色剂：苏木精水溶液，酒精伊红染色液,生理盐水、蒸馏水、PBS实验必备溶剂,适用范围,组织学、胚胎学、病理学教学与科研。,he染色实验具体步骤,1 取材，固定：固定液甲醛（福尔马林）,从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过05厘米)投入预先配好的固定液中(10福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。,修剪，脱水，透明：脱水剂酒精,透明剂二甲苯,不同组织固定时间不同，固定成功后需要修剪25px*25px*5px，放入包埋盒中，流水冲洗（去除组织中的固定液）30分钟。至于不同浓度的酒精脱水，一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。,浸蜡，包埋：石蜡,将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋，冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。,切片、展片、烤片：,将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为58微米厚。切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45恒温箱中烘干。,脱蜡、至水、染色：,脱蜡剂：二甲苯,脱,水剂：酒精,染色剂：苏木精水溶液，酒精伊红染,染,色液,染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。,苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。,HE染色过程：,1,将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。,2,酸水及氨水中分色，各数秒钟。,3,流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。,4,入70和90酒精中脱水各10分钟。,5,入酒精伊红染色液染色23分钟。,脱水、透明：,染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。,封片,将已透明的切片滴上树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用。,请观看视频,谢谢聆听,