NIPT项目介绍

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,胎儿染色体非整倍体无创基因检测,(NIPT),深圳市,核子基因科技有限公司,2,背景知识,1,临床产前筛查与诊断方法,2,无创产前基因检测,3,主要内容简介,具体操作流程,4,3,背景知识,1,4,名称,病因,发病率,常染色体,唐氏综合征,21-3,体,1/600-800,Edward,综合征,18-3,体,1/3500-8000,Patau,综合征,13-3,体,1/7000-20000,性染色体,Turner,综合征,XO,1/2500-5000(),克氏综合征,XXY,1/1000(),XXX,综合征,XXX,1/,1,000(),常见染色体疾病,5,唐氏综合征,(Down,s syndrome),又称,“,21-,三体综合征,”,或,“,先天愚型,”,，主要是由于细胞中多出一条,21,号染色体所导致的疾病。,正常人核型,唐氏综合征核型,唐氏综合征概述,6,典型面容,先天性智力低下、精神迟钝,心脏、消化系统、五官的发育异常,骨骼及肌肉发育不全，肌肉无力，身材矮小,唐氏综合征临床表现,7,多发畸形：,容貌特殊，枕骨突出，,95%,以上伴有心脏畸形，胸骨过短，,手指重叠、扭曲,等；,发育障碍：,新生儿常为过期生产，对声响反应微弱，骨骼和肌肉发育不良；,存活困难：,一半以上胎死腹中，,20%,新生儿存活超过两个月，,只有,5-10%,能够存活一年以上。,7,爱德华氏综合征（,T18,）临床特点,8,严重畸形：,患儿的畸形和临床表现要比,21,三体性严重得多，颅面、脑和内脏畸形非常普遍。前额、前脑发育缺陷，如无嗅脑，心室或心房间隔缺损，多囊肾等；,智力障碍：,程度严重，存活较久的患儿还有癫痫样发作；,存活时间短：,45%,的患儿在出生后一个月内死亡，,90%,在,6,个月内死亡，存活至,3,岁者少于,5%,，平均寿命为,130,天。,8,帕陶氏综合征（,T13,）临床特点,9,根据,2004,年我国卫生部妇幼保健与社区卫生司的调查结果，每一新发唐氏病例给家庭带来的直接经济负担是,39.0,万元。每年政府支出约,80,亿元用于患儿的医疗和社会救济。,给家庭带来巨大的心理压力和,精神痛苦，多数患者容易受到,歧视，特殊教育的接受水平普,遍偏低，缺乏生活自理能力和,社会适应能力，生存质量极差。,9,唐氏综合征（,T21,）对家庭和社会的危害,10,遗传因素：家族遗传,生物因素：自身免疫疾病，病毒感染；,物理因素：妊娠时放射线照射，放射性尘埃；,化学因素：药物、农药、工业毒物、食品添加剂；,随着孕妇年龄增加，唐氏综合征患病率显著升高；,唐氏综合征发病机理,唐氏综合征患病几率与人种、生活水准等没有直接联系，任何夫妻，各个年龄段的孕妇，均有怀唐氏儿的几率。,11,临床产前筛查与诊断方法,2,12,产前筛查：,采用,简便、可行、无创,的检查方法， 对,发病率高、病情严重,的遗传性疾病或先天畸形等在分娩前进行检查，检出子代具有出生缺陷高风险的人群。,筛查出可疑者再进一步确诊,，是防止出生缺陷的重要步骤。,产前诊断：,又称宫内诊断或出生前诊断，是通过直接或间接地方法对孕期胎儿性别及健康进行检测，防止具有严重遗传病、智力障碍及先天畸形的患儿出生。,产前筛查,&,产前诊断的定义,血清学筛查,妊娠中期筛查,AFP+hCG+E3 AFP+hCG,AFP+hCG+E3+inhibit,妊娠早期筛查,PAPP-A,-hCG,超声筛查,胎儿颈项透明层（,NT,）,其他超声标志物,13,产前筛查,:,采用简便、可行、无创的检查方法，对发病率高、病情严重的遗传性疾病或先天畸形等在分娩前进行检查，检出子代具有出生缺陷高风险的人群。筛查出可疑者再进一步确诊，是防治出生缺陷的重要步骤,。,唐氏综合征产前筛查与诊断,14,胎儿颈项透明层（,NT,）,NT,15,是指先天性疾病或遗传性疾病在胎儿期的诊断，是利用非侵入性或侵入性手段对胎儿进行的特异性检查，以便在早孕期或中孕期对异常胎儿作出诊断，及时治疗或处理。,方法,有创,/,无创,孕周,描述,绒毛活检术,有创,1013,1%3%,流产率,99%,检出率,羊膜腔穿刺术,有创,1621,0.5%1%,流产率,99%,检出率,经腹脐静脉穿刺术,有创,2028,0.5%1%,流产率,99%,检出率,优点：核型分析可以作为产前诊断的金标准。,缺点：损伤性；存在流产、宫内感染等风险,对医生的技术要求高，工作效率很难,提高。,产前诊断,产前诊断方法,16,绒毛穿刺取样,（,chorionic villus sampling, CVS,）,羊水穿刺,（,amniocentesis,）,脐带穿刺,（,pencutaneous umbilical blood sampling, PUBS,）,绒毛活检术,10-13,周,绒毛组织,20mg,（细胞培养或生化检查）,适用：高龄孕妇和高危孕妇孕早期诊断。,干扰：胎盘嵌合体,流产率,1%-3%,其他风险：胎儿肢体发育缺陷等,17,羊膜腔穿刺术,16-21,周,20mL,羊水（细胞培养或其他检测）,适用：高龄孕妇和高危孕妇孕中期诊断,干扰：母血污染,流产风险,0.5%-1%,其他风险：羊水泄露、母体血管损伤、宫内感染等,18,经腹脐静脉穿刺术,20-28,周,脐血,1-2ml,，只需培养,48h,适用,:,高龄孕妇和高危孕妇孕晚期诊断,干扰：母血污染,胎死宫内、早产率,0.5%-1%,其他风险：穿刺失败、胎儿心动影响等,19,20,在产前筛查和产前诊断之间缺少一个技术补充，它要具有产前诊断的高准确性，同时又具有安全、简便、无创的特点-基因水平,方法,侵入性,孕周,技术特点,产前筛查,孕妇外周血生化筛查,非侵入性,11-13+6,14-20+6,5%,假阳性率，,40%,漏诊*,超声颈部透明带,非侵入性,11-13+6,5-10%,假阳性率，技术要求高,产前诊断,绒毛取样,侵入性,10-13+6,1-5%,流产率,羊水穿刺,侵入性,16-21,0.5-1%,流产率,脐静脉血穿刺,侵入性,20-28,1-2,流产率,产前筛查和诊断的方法对比,21,无创产前基因检测,3,一,无创技术的理论基础与检测原理,二 技术开发进程与临床实践,22,理论基础,孕妇外周血中存在胎儿,DNA,23,胎儿,DNA,的来源和特点,来源：,1,胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被,母体免疫系统破坏，胎儿,DNA,残留下来；,2,胎儿细胞凋亡；,3,胎盘滋养层细胞的凋亡,基本特点：,1,含量有一定的变化规律。妊娠第,4,周开,始可检出胎儿游离,DNA,，随着孕周增加,而增加，存在个体差异，平均浓度,7.5%,；,2,分娩后短时间内消失，平均半衰期为,16.3min (4-30min),，,2h,就无法检出，,前次妊娠情况不影响再次妊娠检测结果；,3 DNA,片段较小，平均,166bp,左右。常规技,术很难检测,图,1,临床试验数据浓度随孕周变化趋势,（内部数据,）,无创染色体非整倍体：不同检测技术比较,理论模型（基于测序的无创检测）,母亲,Chr 21,：,95,2=190,母体外周血中,Chr 21=190+10=200,以,21-,三体为例：,100 DNA,单位,/,毫升血浆。其中，,95,个单位来源于母亲，,5,个单位来源于胎儿,通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量，经过计数与比较： 正常胎儿 或者,21-,三体胎儿,正常胎儿,Chr 21,：,5,2=10,母亲,Chr 21,：,95,2=190,21-,三体胎儿,Chr 21,：,5,3=15,母体外周血中,Chr 21=,190+,15=205,27,27,已知参照序列,（,Chr 21#.,）,测序获得的,核酸片段,（,reads),测序数据比对示意图,真实测序数据展示,荧光信号,-,碱基序列,（数字信号）,Instrument PC,Analysis PC/cluster,国际应用进展（基于测序的无创,DNA,检测）,国际、国内同类型临床应用研究显示：基于测序的无创,DNA,检测技术，对于,T21,、,T18,、,T13,，均具有极高的检出率与准确性,一,无创技术的理论基础与检测原理,二 技术开发进程与临床实践,30,31,检测技术概述,胎儿染色体非整倍体无创,DNA,检测,（,NIFTY,）：,通过采集,5 ml,孕妇外周血，提取其中游离,DNA,并采用第二代高通量测序技术进行测序，通过生物信息分析，得出胎儿患,“,染色体非整倍体,”,的风险率。,技术定位：,高精度产前筛查方法,检测流程,现场咨询与知情同意,是,血浆分离,血浆游离,DNA,测序,随访,/,常规诊断,(,绒毛膜穿刺、羊水穿刺等,),32,提取血浆,DNA,测序,定位,覆盖深度统计,覆盖深度,Cov-chrN =,参考序列染色体,N,上有效测序片段总数,样品染色体,N,上有效测序片段总数,AACGT-,CGATA-,TAGGC-,ATCGC-,生物信息比对,Chr6,Chr18,ChrX,Chr21,Chr7,Chr13,Chr11,ChrY,50bp,统计值计算,(t-,值,L-,值,),确认胎儿是否为,T21,T18,T13,测试样本,ChrN,的关联,t-Score,样本的覆盖深度,参考样本的修正覆盖深度,参考样本的标准差,L值 =,对数（样品正常可能性值）,对数（样品患病可能性值）,=,技术流程,正常,21-,三体,34,普通筛查胎儿患,T21,、,T18,或,T13,高风险的孕妇,取外周血并编号,用,NIFTY,来分析胎儿,21,号、,18,号和,13,号染色体,羊水穿刺,/,核型分析,双盲测试,统计灵敏度和特异性,结果分析,临床研究（双盲,),2024/9/13,总数,孕妇相关信息,中位数,(,岁,),33,高龄孕妇,(35,岁,),1217(35.1%),1824,岁,(,例, %),297(8.6%),2529,岁,(,例, %),1026(29.6%),3034,岁,(,例, %),804(23.2%),3539,岁,(,例, %),960(27.7%),40,岁,(,例, %),257(7.4%),不详,(,例, %),120,(3.5%),抽血孕周,中位数,(,周,),19,范围,(,周,),6-40,12,周,(,例, %),48(1.4%),13,-,16,周,(,例, %),132(3.8%),17,-,20,周,(,例, %),1677(48.4%),21,-,24,周,(,例, %),1256(36.3%),25,-,28,周,(,例, %),155(4.5%),29,周,(,例, %),71(2.0%),不详,(,例, %),125,(3.6%),B,超发现染色体异常畸形,(,例,),27(0.8%),唐筛信息,已做,高风险,(,例, %),1365(39.4%),已做,低风险,(,例, %),232(6.7%),未做,(,例, %),1867(53.9%),临床研究（双盲,),36,检出高风险险样本数,总例数,T21,T18,T13,样本总数（例）,3000,150,51,9,核型分析（例）,3000,149,50,9,假阳性,（例）,-,1,1,0,假阴性,（例）,-,0,0,0,检出率,-,100%,100%,100%,假阳性率,-,0.035%,0.034%,0.00%,阳性预测值,-,99.33%,98.04%,100%,假阴性率,-,0%,0%,0%,阴性预测值,-,100%,100%,100%,临床研究（双盲,),37,具体操作流程,4,通过采集,5 ml,孕妇外周血，提取其中游离,DNA,采用第二代高通量测序技术进行测序，通过生物信息分析，得出胎儿患“染色体非整倍体”的风险率。,检测范围：,可以用于检测,21,、,18,、,13,等染色体非整倍体。,可作为一种产前筛查技术，极低的假阳性率大幅降低创伤性产前诊断比例，缓解临床压力。,技术概述,39,1,、技术优势：,无创,：采集,5ml,孕妇外周血,安全,：避免胎儿宫内感染或流产,早期,：,12,孕周即可检测，最佳孕周（,12-24,周）,准确,：采用新一代测序技术，结合生物信息分析,无创产前基因检测技术优势,40,所有孕周,12,周的孕妇；（最佳检测孕周：,12-24,周）,适应群体,年龄达,35,岁或以上的,高龄孕妇,拒绝,做羊水穿刺者,孕早、中期血清筛查,21,三体,风险临界者（,1/300-1/1000),孕早期超声提示胎儿异常,有,穿刺禁忌症,孕妇,(,胎盘前置、流产征兆、感染乙肝、,HIV,、,TP,等,),IVF,、习惯性流产及其他原因,“,珍贵儿,”,错过有创产前诊断的孕妇,检测对象：,特别适合群体：,41,不能检测,双胞胎及以上多胎,；,不适合检测,染色体的微缺失、微重复以及结构异常（嵌合体型、易位型）,;,孕妇前期接受过,异体输血、移植手术、干细胞治疗等，而引入外源,DNA,，会影响检测结果,;,孕妇本人为,“,染色体非整倍体,”,患者,，不适合进行该项检测；,夫妇双方或一方为,染色体结构异常者,不适合进行该项检测；,目前局限性,样本采集、储存及运输,2024/9/13,42,标本采集流程,孕妇填写知情同意书、送检单并领取保险卡,分离血浆,孕妇抽血、,贴条码,(,一一对应）,寄送样本,接收样本,1,、干冰寄送样本,10,公斤,/2-3,天、避免反复冻融,2,、每例样本对应,4,管血浆。,孕妇必填基本信息并签名,医生解答疑问,1,、采用,5mLEDTA,抗凝管,2,、条码分别贴送检单、知情同意书 采血管、,2.0mLEP,管,1,、,4,8h,内离心,2,、,4,1600g,离心,10min,3,、,4,16000g,离心,10min,1,、检查样品是否合格,2,、录入信息（,SOP,双人复核）,缴费,编号原则：,PDB12+,医院代 码,+5,位流水号,全血样本量：,5 mL,采血管：,专用采用管,样本标识：,血液采集后，在样本采集管上,标明孕妇姓名、年龄及孕周,。,样本保存：常温下保存。,注意：送检过程中不能冰冻。,样本采集,2024/9/13,44,检测报告及解释,2024/9/13,45,检测报告,正常报告,结果解释,1,、低风险：说明胎儿患染色体非整倍体的风险很低，建议继续妊娠并进行常规产检；,2,、高风险,:,说明胎儿患某种染色体非整倍体的风险很高，建议进行羊水或者脐血穿刺；,3,、准确率,99%,。,检测报告,延迟报告,结果解释,1,、质控不过关：可能是实验的原因或者样本本身问题，重新进行实验；,2,、数据波动，值偏高但没达到标准：重新进行实验；,3,、胎儿浓度低：重新上机。,以上情况通过重新实验如果解决不了的话会要求重新抽血。,其它情况解释,1,、除,21,、,18,、,13,号染色体之外的其它染色体数目异常，建议临床医生结合临床经验、,B,超结果及其它检测结果综合评判，如果也出现其它检测结果异常（如,B,超发现畸形等）建议进行羊水或者脐血穿刺。,2,、性染色体异常：建议结合临床经验和孕妇的意见进行处理。,基本知识,知情同意书,/,送检单签署,：需与受检者及其家属作良好沟通，告知该检测的重要性、临床意义及潜在的风险，指导受检者签署知情同意书,2.,送检单必填信息,：送检单位、送检医生、送检医生联系电话、采集日期、受检者姓名、年龄、孕周、,B,超检查结果。,3.,身份及准备情况核对,：仔细核对送检单和受检者的基本信息，确保一致；检查受检者是否按照医嘱准备，并向其解释操作目的以取得配合。,4.,样本标识,：在采集管上贴上样本唯一条码， 并注明受检者姓名等信息，确保与送检单一致。,5.,血液收集,：外周血,5ml,，孕妇正常饮食作息。,6.,血液运输与保存,：常温下保存，不能冰冻送检。,7.,报告时间,：,7,个工作日。,8.,检测费用,：￥,2500.00,50,签约后，无创产前在医院运行的基本流程图,妇产科医生与孕妇沟通确认,填写送检单,/,知情同意书、保险告知书（孕周大于,24,，填写补充条款）,医生开具产前检测单、孕妇缴费,抽血（ 专用管,5ML,血液，）护士登记,送样,谢 谢！,深圳市核子基因科技有限公司,地址：,深圳市南山区学苑大道,1001,号南山智园,A7,栋,12,楼,网址：http:/www.dna,hezi,.com/,