实验一微生物培养基配制和灭菌

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物学实验,1,课堂纪律,严格遵守实验室规章制度,严肃课堂纪律,不允许无故旷课、早退,迟到,工作服,2,进入微生物实验室的注意事项,1.,进入实验室必须穿白大褂,2.,实验室内不准吃东西,3.,在实验室内不要趴在桌子上,4.,实验完成后值日生留下做好清洁工作,（,值日工作实行组长负责制，纳入实验成绩）,5.,离开实验室前洗手,6.,实验现象要隔天观察的实验，必须要按时到实验室记录实验现象,3,实验安排,实验一 微生物培养基的配制和灭菌,实验二 微生物的纯培养技术,实验三 显微镜油镜的使用及细胞形态的观察,实验四 土壤、水的细菌学检查,实验五 放线菌、霉菌及酵母菌的形态观察,实验六 环境因素对微生物的影响,实验七 微生物生理生化反应观察,实验八 微生物遗传实验,4,实验报告要求,一个实验，一份实验报告，有连续性的实验等到做完后再写实验报告。,实验报告内容：,1.,实验项目名称,2.,实验目的,3.,实验原理,4.,实验步骤,5.,实验结果与分析（即使实验失败也要写好分析）,6.,思考题,5,实 验 一,微生物培养基的配制和灭菌,6,一、实 验 目 的,了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。,掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。,（一）培养基的配制,7,二,.,实 验 原 理,1.,培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。不同微生物对营养物质的要求各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的,pH,值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。,8,培养基按成分可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基；按物理状态可分为固体培养基、半固体培养基（,0.2%,0.5%,的琼脂）和液体培养基；按用途可分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等,。,9,培养基,是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。,培养基简介,碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水,营养物质的浓度要适宜,营养物质之间的配比要适宜,培养基的,pH,值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要适宜。,10,细菌：,pH 7.08.0,放线菌：,pH 7.58.5,酵母菌：,pH 3.86.0,霉菌：,pH 4.05.8,藻类：,pH 6.07.0,原生动物：,pH 6.08.0,初始,pH,通常培养条件：,11,培养基的种类,按照培养基的物理状态可分为,1.,液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。,2.,固体培养基：在液体培养基中加入,2%,左右的凝固剂的固体状态的培养基。,3.,半固体培养基：在液体培养基中加入,0.20.5%,凝固剂而成的半固体状培养基。,12,琼脂是最优良的凝固剂，自,1880,年开始用于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。,13,实验室的常用培养基：,细菌： 牛肉膏蛋白胨培养基,；,放线菌：高氏,1,号合成培养基培养；,酵母菌：麦芽汁培养基；,霉菌： 查氏合成培养基；,14,称量,-,配置,-,调节,pH,值,-,过滤,-,分装,-,灭菌,1.,称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。,培养基配制的基本步骤,15,2.,配调 向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。,如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。,如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。,16,3.,调节,pH,值 培养基溶解均匀并冷却至室温时用,pH,试纸测,pH,，然后根据要求加酸或碱（一般用,1molHcl,和,1molNaOH,），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然,pH,时，不用调节。,4.,过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。,17,5.,分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。,分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（,1,）斜面：装量为管长的,1/4-1/5,。（,2,）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的,1/3,。（,3,）三角瓶：装量不超过容积,1/2,。,18,6.,灭菌 塞棉塞，包扎，灭菌。 高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于,100,度的蒸汽温度。,19,牛肉膏蛋白胨,固体,培养基配方：,牛肉膏,0.3g,蛋白胨,1g,氯化钠,0.5g,琼脂,1.5g,水,100mL pH 7.27.4,灭菌,121,，,20min,牛肉膏蛋白胨,半固体,培养基配方：,琼脂,0.3g,牛肉膏蛋白胨,液体,培养基配方：,琼脂,0g,20,牛肉膏蛋白胨培养基的配制,1,、固体培养基（平板制作）,2,、固体培养基（斜面制作）,2,、半固体培养基,3,、液体培养基,三,.,操作步骤及本次实验具体安排,21,（一）平板固体培养基制作,（,由第,1,2,3,4,组同学各做,2X100ml,）,1.,称取一定量的,营养琼脂,到,250ml,的三角瓶中,.,2.,加入,100mL,水,.,3.,塞上硅胶塞,用牛皮纸包扎好,;,4.,高压蒸汽灭菌,5.,灭菌后,当培养基冷却至,50,左右时,倾注平皿,(,每,100ml,可制备,5-6,个平皿,),6.,凝固后放冰箱备用,22,（二）斜面培养基制作（,由第,5,6,组同学各做,25,支斜面培养基,）,1.,称取一定量的,营养琼脂,到,100ml,的三角瓶中,.,2.,加入,100mL,水,.,3.,放入水浴锅内溶解,.,4.,在空试管内倒入,2,3mL,已经溶解好的培养基，,【,注意尽量不要让培养基沾到试管口,】,塞好硅胶塞,.,5.,放入烧杯中,高压蒸汽灭菌,.,6.,摆斜面,凝固后放冰箱备用,.,23,用于活化菌种，,或培养菌种的斜面,用于保存菌种的斜面,24,搁置斜面,当培养基冷却至,50,左右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。,25,（三）半固体培养基制作（,由第,7,8,组同学各做,25,支半固体培养基,）,1.,按牛肉膏蛋白胨半固体培养基配方称取相应成分到,250ml,的三角瓶中,.,2.,加入,100mL,水,.,3.,放入水浴锅内溶解,.,4.,在空试管内倒入,2,3mL,已经溶解好的培养基，,【,注意尽量不要让培养基沾到试管口,】,塞好硅胶塞,.,5.,放入烧杯中,高压蒸汽灭菌,.,6.,凝固后放冰箱备用,.,26,牛肉膏蛋白胨半固体培养基,按下列配方及方法配制,牛肉膏,: 0. 3g,蛋白胨,: 1g,NaCl: 0.5g,琼脂,: 0.3g,水,: 100ml,pH:,7.0-7.2,放入水浴锅内溶解后,分装到试管中,灭菌备用,.,27,（四）液体培养基制作（,由第,9,10,组同学各做,25,支液体培养基,）,1.,按牛肉膏蛋白胨液体培养基配方称取相应成分到,250ml,的三角瓶中,.,2.,加入,100mL,水,.,3.,充分溶解,.,4.,在空试管内倒入,2,3mL,已经溶解好的培养基，,【,注意尽量不要让培养基沾到试管口,】,塞好硅胶塞,.,5.,放入烧杯中,高压蒸汽灭菌,.,6.,冷却后放冰箱备用,.,28,牛肉膏蛋白胨液体体培养基,按下列配方及方法配制,牛肉膏,: 0. 3g,蛋白胨,: 1g,NaCl: 0.5g,水,: 100ml,pH:,7.0-7.2,放入水浴锅内溶解后,分装到试管中,灭菌备用,.,29,各组任务：,第,1-4,组配制固体培养基，制平板；,第,5.6,组配制固体培养基，制斜面；,第,7,8,组配制半固体培养基；,第,9,10,组配制液体培养基。,30,注：试管加棉塞,(,最好,),培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。加棉塞时，应使棉塞长度的,2/3,在试管口内，如下图所示,。,31,任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。,常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。,本实验培养基的灭菌常使用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的。,（二）培养基的灭菌,32,高压蒸气灭菌,一般培养基,:,1.05 Kg/cm,2, 121.3, 15-30 min,含糖培养基,:,0.56 Kg/cm,2, 112.6 , 15-30 min,培养基的灭菌,33,器皿的灭菌：,干热空气：,160,，,2,小时,无菌室的消毒：,紫外光,化学药物熏蒸（苯酚；高锰酸钾,+,甲醛）,34,灭菌锅,湿热灭菌使用的设备,35,操作过程,加水,装锅,盖盖,加热,当压力升为,0.5kg/cm2,时排放冷空气,正式升压,保压（,1.1kg/cm2,，,121,，保持,20-30min,）,停止加热,自然降压至零,排放余汽,开盖,取出灭菌物品,趁热摆斜面,检验灭菌效果。,36,本次实验报告内容,记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。,37,思考题,培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌,?,若不能及时灭菌应如何处理,?,已灭菌的培养基如何进行无菌检查,?,38,实 验 报 告,下次实验时上交,39,