白血病免疫分型-课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,编辑版ppt,*,白血病免疫分型,1,编辑版ppt,白血病免疫分型1编辑版ppt,正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。,白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。由于白血病细胞具有肿瘤细胞的特征，其抗原表达又不完全同于正常血细胞，常可出现某些抗原缺乏、过度表达、系列交叉表达某一系列或阶段不应有的抗原，这又增加了白血病免疫分型的复杂性。白血病,/,淋巴瘤的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。,2,编辑版ppt,正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细,早年曾用过的荧光显微镜或,APAAP,方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（,FCM,）。流式细胞术（,FCM,）白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（,McAb,）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。因为,FCM,能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。,另一个重要理由是至今尚未发现白血病,/,淋巴瘤的特异抗原。所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。抗原表达与其相应系列,/,阶段的血细胞无明显差异。与形态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。,3,编辑版ppt,3编辑版ppt,单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。因此，近年来主张用设门（,gating,）方法。即用,CD45,与侧向角（,sidescatter,SSC,），对数取样后可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细胞群，其理论依据是,CD45,是所有白细胞的抗原。其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（,blasts,）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达,CD45,。,SSC,反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞,SSC,最高，依次为单核细胞，淋巴细胞，,blasts,，红细胞。以,CD45/SSC,双参数，对数取样时即可把各细胞群区分出来。若同时加上一个，二个甚或三个荧光标记的单抗，则很容易识别非正常细胞群所表达的抗原。这样可以排除正常细胞的干扰。在幼稚细胞低的情况下或检测残存白血病时尤为必要,FCM,分析白血病免疫表型时，测量细胞数量一般在,10000,50000,细胞之间，而且快速、特异、准确，重复性好，能区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值。,4,编辑版ppt,单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。因此，近年来主张用设,一 白细胞分化抗原,白细胞分化抗原（,leukocyte differentiation antigen,，,LDA,）,指血细胞在分化成熟为不同谱系（,lineage,） 、分化的不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记。,它们大都为跨膜分子，由胞外区、跨膜区和胞浆区组成；有些以,糖基磷脂酰肌醇,（,GPI,）,“,锚,”,在细胞膜上；,它们大都是蛋白或糖蛋白，少数为碳水化合物,5,编辑版ppt,一 白细胞分化抗原白细胞分化抗原（leuk,二,CD,的概念、,CD,分子的分 类、功能及应用,CD,：用以单克隆抗体鉴定为主的聚类分析法，将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分化群（,Cluster of differentiation,，,CD,）。,并以此代替分化抗原以往的命名,。,在许多情况下，单克隆抗体及其识别的相应抗原都用同一个,CD,序号。,迄今为止，人,CD,分子的序号已从,CD1,命名至,CD371,，可大致划分为,14,个组。,6,编辑版ppt,二 CD的概念、CD分子的分 类、,7,编辑版ppt,7编辑版ppt,CD,分子的功能,：,（,1,）免疫应答过程中参与免疫细胞的相互识别；免疫细胞识别抗原、活化、增殖和分化；免疫效应功能的发挥；,（,2,）参与造血细胞的分化和造血过程的调控；,（,3,）参与炎症的发生；,（,4,）参与细胞的迁移如肿瘤细胞的转移等。,8,编辑版ppt,CD分子的功能：8编辑版ppt,CD,分子的临床应用,CD,单克隆抗体可用于,（,1,）阐明某些疾病的发病机制；,（,2,）广泛应用于多种疾病的免疫诊断；,（,3,）治疗移植排斥反应和肿瘤等疾病；,9,编辑版ppt,CD分子的临床应用9编辑版ppt,10,编辑版ppt,10编辑版ppt,11,编辑版ppt,11编辑版ppt,CD20,分子,结构与分布,：单链跨膜蛋白，仅表达于,B,细胞， 早期即表达，分化为浆细胞后消失,功能,：,（,1,）参与和调节,B,细胞信号转导、生长和分化。,（,2,）直接参与调节跨膜,Ca,2+,的流动。,12,编辑版ppt,CD20分子结构与分布：单链跨,三 免疫分型常用的免疫标志及其意义,13,编辑版ppt,三 免疫分型常用的免疫标志及其意义,白血病系列分化抗原,T,淋巴细胞白血病：,CD3,、,CD5,、,CD7,。,B,淋巴细胞白血病：,CD10,、,CD19,、,CD22,。,NK,淋巴细胞白血病：,CD16,、,CD56,、,CD57,。,髓系白血病：,CD13,、,CD14,、,CD33,、,MPO,（髓过氧化物酶）。,红白血病：,GlyA,（血型糖蛋白,A,）。,巨核细胞白血病：,CD41,、,CD42,、,CD61,。,14,编辑版ppt,白血病系列分化抗原T淋巴细胞白血病,白血病系列非特异性抗原,CD34,、,HLA,DR,为早期细胞抗原，无系列特异性，可与,CD38,联合运用于免疫分型。一般而言，干,/,祖细胞,CD34,、,HLA,DR,、,CD38,，原始细胞,CD34,、,HLA,DR,、,CD38,，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）,CD34,、,HLA,DR,、,CD38,。,15,编辑版ppt,白血病系列非特异性抗,白血病分化阶段抗原,T,细胞抗原：,CD4,、,CD8,。,B,细胞抗原：,CD10,、,Cy,（胞浆,链）、,SmIg,（表面膜免疫球蛋白）、,CD38,和,CyIg,（胞浆免疫球蛋白）、,CD11C,。,16,编辑版ppt,白血病分化阶段抗原16编辑版ppt,白细胞共同抗原,CD45,为白细胞共同抗原，但原幼细胞表达量比成熟淋巴细胞低，幼红细胞不表达。用,SSC/CD45,PerCP,双参数分析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。用两个系列或阶段特异性,McAb,加,CD45,进行三色免疫荧光染色，经,FSC,、,SSC,、,McAbl-FITC,、,McAb2-PE,、,CD45,PerCP,五参数分析，可特异地分析原幼白血病细胞的免疫表型而不受成熟细胞的干扰。,17,编辑版ppt,白细胞共同抗原CD45为白细,四 白血病免疫分型,急性髓系细胞白血病,18,编辑版ppt,四 白血病免疫分型,MO,Mo,blasts,有低的,SSC,和,FSC,。在,CD45,SSC,图上出现在淋巴细胞位置上，至少表达一个特异性标志如,CD13,或,CD116,，但,MPO,比,CD13,与,CD33,更灵敏。一般淋系标志阴性，但也可表达,CD7,或,CD4,。,Mo,blasts,一般,HLA,DR,、,CD34,阳性，有些研究表明,CD7,与,CD34,共表达在,AML,且预后差。,19,编辑版ppt,MO Moblasts有低的SSC和FSC。在CD4,M1,流式上,M1,与,M0,相似不易区分，,M1,一般,CD13,、,CD33,、,HLA,DR,，但,CD34,表达少于,M0,，可能表达部分,CD15,。,M2,M2,与,M1,要区别是成熟度增加，,blasts,减少，,CD15,较,M1,较显著，,CD34,弱于,M1,，,CD13,有时表达强于,CD33,，多数病例,HLA,DR,（,-,）。,CD45,SSC,图显示从髓系,blast,区至成熟骨髓细胞区的连续细胞带，,CD45,SSC,图有助于确定,blasts,比例。,20,编辑版ppt,20编辑版ppt,M3,高颗粒性，具较高的,SSC,，但,CD45,较成熟细胞少，多数情况,HLA,DR,（,-,）或表达减少，,CD34,少于,M2,、一般,CD13,弱（），可有,CD2,表达。,21,编辑版ppt,M3 高颗粒性，具较高的SSC，但CD45较成熟细胞少，,M4,与,M5,两型表型相似，但,M4,较,M5,表达更多的,CD34,（），较之,M0,、,M1,，,M4,与,M5,有更大的,FSS,和,SSC,，,CD45,SSC,图上，成熟,C,出现在单核区，重要的表型为,CD13,、,CD33,、,HLA,DR,、,CD14,和,CD15,，,CD33,可表达强于,CD13,，,CD33,（）、,CD13,（）、,CD34,（）很可能为,M5,，但只出现在少数病人中，部分,M5,可见,CD56,（）。,22,编辑版ppt,M4与M5 两型表型相似，但M4较M5表达更多的CD3,M6,M6,较少见且特征不明显，一般,HLA,DR,，,CD34,、,CD13,、,CD33,阳性，,CD45,SSC,图显示主要为红系成份。,M7,巨核细胞白血病，在,AML,中少于,1,。一般,CD61,（,Gpa,）和,/,或,CD41,（,Gpb-a,）阳性，而注意由于血小板粘附在,blasts,上造成的假阳性，可以用流式双色分析在,EDTA,存在下，测,pb/a,与,CD34,以减少激活血小板的粘附。,23,编辑版ppt,M6 M6较少见且特征不明显，一般HLADR，CD34、,急性淋巴细胞白血病,ALL,是儿童中最常见的恶性肿瘤，约占全部肿瘤的,25,，在成人，,ALL,约占急性白血病的,25,，我们将,ALL,分为,B,祖细胞型，,CD10,或,CD10,，前,B,细胞型，,B,细胞型，,T,细胞型,24,编辑版ppt,急性淋巴细胞白血病ALL是儿童中最常见,B,祖细胞型,ALL,：在幼儿约占,ALL,的,65,70,，青少年为,55,60,，人为,50,。在儿童，约,90,病例,CD10,，在幼儿只有少于,50,病例,CD10,，,blasts,一般,FSC,、,SSC,很少，是,FAB,标准的,L1,或,L2,，一般,TdT(+)HLA-DR(+),，,CD19(+),，此型又分为,2,个亚型，,CD10,和,CD10,，前者预后好，多数病例,CD24,，,CD34,，,CD20,表达随成熟度增加而增加，,B,祖细胞被定义为,sIg-,。,25,编辑版ppt,B祖细胞型ALL：在幼儿约占ALL的6570，青少年为,前,B,细胞型,ALL,：此亚型约占儿童,ALL,的,25,，细胞一般为,CD19,，,CD24,，,HLA,DR,，胞浆,CD22,，,CD10,，,TdT,随,CD20,变化，,CD34,多为阴性，前,B,亚型被认为比,B,祖型预后更差，这与,t(1,；,19),出现相关并由此产生,E2A,PBX1,融合蛋白，它的表型为,CD19,、,CD10,、,CD9,，不同程度,CD20,表达，,CD34,，确认此表型有助于诊断基因上不确定的病例。,26,编辑版ppt,前B细胞型ALL：此亚型约占儿童ALL的25，细胞一般为C,B,细胞型,ALL,：成熟,B,细胞型,ALL,约占,ALL2,5,，,B,细胞型,ALL,较之,B,祖细胞型,ALL,有更大的,FSC,和,SSC,，在,CD45,SSC,图上出现在淋巴和单核细胞区域，即,FAB,标准的,L3,，表型为,CD19,、,CD20,、,CD22,、,CD24,且,sIg,（多数为,IGM,）多数病例,CD10,。但成熟抗原及,sIg,使之区别于更早的,B,系,ALL,，极少数成熟,B,细胞,ALL,无,FAB,L3,形态。,27,编辑版ppt,B细胞型ALL：成熟B细胞型ALL约占ALL25，B细,T-ALL,：多数病例有大的,FSC,、,SSC,，在,CD45,SSC,图上可能出现在淋系未成熟细胞和髓系未成熟细胞或单核细胞区，多数表现为胸腺亚型，最常见亚型为皮质晚期表达，,CD1,、,CD2,、,CD5,、,CD7,、,CD4/CD8,双阳与极少膜表面,CD3,、,TdT,多为阳性。另一常见亚型为皮质早期表达,CD2,、,CD5,、,CD7,、,TdT,强表达。髓质期亚型表达,CD2,、,CD5,、,CD7,、与,CD3,CD4,/CD3+CD8+,很少见,TdT,表达。前,T,细胞亚型，表达,CD7,胞浆,CD3,且无其它,T,细胞抗原，,T,细胞肿瘤的特征是丧失,T,细胞抗原而表现出其它异常抗原组合。,28,编辑版ppt,T-ALL：多数病例有大的FSC、SSC，在CD45SSC,杂合型白血病：随着流式技术的广泛应用，我们发现许多病例并不能严格划分为淋系或髓系，真正的双表型病人多为,t(9,；,22),或（,11q23,），现在杂合型的误诊率很高。最常导致误诊的原因是在分析中未能排除非白细胞，过度强调弱的非特异性结合，忽略了某些抗体缺乏系特异性，最重要的系特异性抗原在,B,系、,T,系、髓系分别为,CD22,、,CD3,和,MPO,。,29,编辑版ppt,杂合型白血病：随着流式技术的广泛应用，我们发现许多病例并不能,慢性粒细胞白血病,由于慢性期显著的细胞分化，在,CD45,SSC,图上除了髓系细胞占主导外，只显示一个正常骨髓像，,CML,可确诊，,CML,起病与发展相对缓慢，慢性期的持续,1,年左右最终发展为加速期和急变期。流式细胞技术对急变期亚型的诊断具有极高价值。直接影响到治疗效果。,急变期,CML,主要表现为髓系，偶为淋系，髓性急变可表现出多种形态包括未分化细胞。淋性急变具典型形态特征，为,CD10,B,祖细胞,ALL,极少有,T,细胞型,ALL,。,30,编辑版ppt,慢性粒细胞白血病30编辑版ppt,慢性淋巴细胞白血病,CLL,细胞主要为较正常淋巴细胞稍大的小淋巴细胞。,免疫分型主要为：,SIgM,、,SIgD,弱表达，部分患者,FMC7,弱表达，,B,系抗原为,CD19,、,CD20,、,CD43,、,CD79a,与,CD5,共表达，,CD23,表达使得,CLL,区别于套细胞淋巴瘤，即（,CLL,：,CD23,，,MCL,：,CD23,），,CD10,、,CD11c,和,CD25,、,CD20,常弱表达，尽管,CLL,起病慢，但,CLL,病人的生存率变化很大，有染色体异常的病人预后不良，最常见的三联体,trisony12,、,14q,、,13q,、,11q,，免疫表型上没有特异的变化。,CD38+,预后不好。,对于免疫表型不典型，特别是积分,4,需要进行,CCND-1,的免疫组化染色和或利用,FISH,检测,t(11,14),从而与,MCL,鉴别。,31,编辑版ppt,慢性淋巴细胞白血病CLL细胞主要,谢 谢 ！,32,编辑版ppt,谢 谢 ！32编辑版ppt,