肝细胞损伤时常用生化试验课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,第七节,肝,细胞损伤时常用,的,生化试验,长征医院 于嘉屏,第七节肝细胞损伤时常用的生化试验,1,一、绪论,1.,重要性,2.,目的,(1),了解损害程度,(2),判断预后,(3),疗效观察,(4),体检,耐受能力,一、绪论,2,3.,分类,蛋白质代谢的试验 脂类代谢的试验,维生素代谢的试验 糖类代谢的试验,酶类代谢的试验 免疫功能试验,胆红素代谢的试验 色素的排泄试验,药物转化功能试验 激素代谢的试验,胆汁酸代谢的试验,3. 分类,3,二、蛋白质代谢试验,(,一,),血清总蛋白、白蛋白与球蛋白测定,1.,原理,总蛋白,-,双缩脲比色法,白蛋白,-,溴甲酚绿比色法,2.,参考值,3.,临床意义,二、蛋白质代谢试验(一)血清总蛋白、白蛋白与球蛋白测定,4,白蛋白测定的临床意义,较少见,：严重腹泻、呕吐引起的脱水，广泛性烧伤，急性大出血,1.,蛋白质摄入不足,：慢性胃肠道疾病，营养不良，妊娠后期，哺乳期,2.,白蛋白合成功能不全,：肝硬化，肝功严重损伤，慢性感染，恶性贫血,3.,蛋白质消耗太多,：甲亢，糖尿病，慢性消耗性疾病，恶性肿瘤,4.,蛋白质丢失增多,:,肾病综合征,严重烧伤,白蛋白测定的临床意义 较少见：严重腹泻、呕吐引起的,5,1.,肝肾疾病,：慢肝，肝硬化，肾病综合征,2.,自身免疫病,：风湿热，系统性红斑狼疮,3.,恶性肿瘤及某些血液病,：多发性骨髓瘤，淋巴细胞性白血病,4.,感染性疾病,：疟疾，丝虫病，血吸虫病,1.,球蛋白减少或缺乏症,2.,使用大量网状内皮系统抑制后，如,6-,巯基嘌呤等化疗后,球蛋白测定的临床意义,1. 肝肾疾病：慢肝，肝硬化，肾病综合征球蛋白测定的临床,6,（,二,）血清蛋白电泳,1.,原理,2.,参考值,3.,临床意义,（三）前白蛋白,（四）血氨,（二）血清蛋白电泳,7,急性,1, ,亚急性, ,慢性或早期肝硬变, ,中期,Alb, ,晚期,急性 1,8,几种疾病的蛋白电泳变化,病名 白蛋白,1 2 ,肾病 ,肝硬化 ,-,桥 ,原发性肝癌 ,AFP ,多发性骨髓瘤 ,慢性炎症 ,无,-,球蛋白血症 ,双白蛋白血症 双峰,几种疾病的蛋白电泳变化,9,(,五,),甲胎蛋白,胚胎期由卵黄囊、胎儿肝合成，胃肠道也能产生少量，肝癌细胞也可重现的癌胚蛋白质。,70kD,，,pI4.75,，,590aa,，单链，含,4,糖，包括甘露糖、半乳糖、乙酰氨基葡萄糖和岩藻糖，形成寡糖链。,(五)甲胎蛋白胚胎期由卵黄囊、胎儿肝合成，胃肠道也能产生少量,10,-,球蛋白区,调节渗透压、抑制细胞免疫反应和体液免疫反应、结合或转运激素以及作为血清蛋白的前体。,孕后第六周开始合成，,13,15,周龄含量最高，,40,周时仅为最高含量的,1,0.1,。,检测方法：琼脂双向扩散、琼脂对流免疫电泳、间接反向血球凝集试验、放射火箭电泳自显影和放射免疫分析。,-球蛋白区,11,对原发性肝癌的诊断意义,1,早期诊断：,升高数十倍至数万倍。,500g/L,者，均可诊为肝癌。,我国自,1971,年普查，无症状体征的亚临床癌在肝癌病人中占,44.7,71.2,，,58.8,为直径,5cm,的小肝癌。,对原发性肝癌的诊断意义,12,2,准确诊断：,ALT,正常，排除妊娠与生殖腺胚胎性肿瘤，,AFP,呈持续阳性一个月，诊断肝癌的准确性可达,100,. AFP200g/L,持续,2,个月者，准确性达,97.7,。,3,对肝癌患者病情和预后判断：,AFP,含量与肿瘤大小成正相关。与恶性程度相关。,手术或药物治疗有效时，,AFP,含量多下降，复发或恶化时，又上升。,2准确诊断：,13,4,局限性：,占原发性肝癌,30,40,的胆管细胞癌，多为阴性，即使是肝细胞癌也有,10,左右阴性。,一些良性肝病、新生儿、孕妇及胃癌等，出现假阳性的百分率也相应升高。,AFP,异质体：根据对刀豆凝集素,ConA,和小扁豆凝集素（,LCA,）结合能力的不同，,AFP,可分为结合型或非结合型，特别是,LCA,能识别肝癌,AFP,糖链的岩藻糖基。,4局限性：,14,三、胆红素代谢试验,（一）基本概念,1.,胆红素来源,(1),衰老红细胞,(2),幼红细胞,(3),肌红蛋白,2.,间接胆红素,3.,直接胆红素,三、胆红素代谢试验（一）基本概念,15,珠蛋白，,Fe,（代谢池）,衰老红细胞,血红蛋白,血红素,胆绿素,胆红素,（游离,/,非结合,/,间接胆红素）,（不溶于水，不能由肾脏排出）,肝脏,葡萄糖醛酸基转移酶,葡萄糖醛酸,-,胆红素,（结合,/,直接胆红素）,（溶于水，可由肾脏排出）,16,4.,胆红素的正常代谢,4. 胆红素的正常代谢,17,(,二,),黄疸时胆红素代谢异常,1.,溶血性黄疸,2.,肝细胞性黄疸,3.,阻塞性黄疸,(,三,),检测方法,(二)黄疸时胆红素代谢异常,18,血清黄疸指数测定,目测：以,1:10000,稀释度的重铬酸钾为一个单位,2-6,单位,:,正常,7-15,单位,:,隐性黄疸,15,单位,:,巩膜染黄,结果受 溶血、脂血症、药物 的影响,血清黄疸指数测定目测：以1:10000稀释度的重铬酸钾为一个,19,测定胆红素的价值在于,:,(1),发现隐性黄疸,(2),了解黄疸的发展和转化,(3),鉴别黄疸种类,血清胆红素定量试验,血清胆红素定量试验,20,尿中直接胆红素可被碘液氧化成绿色的胆绿素，而被检出。,尿中胆红素定性试验,碘,尿中胆红素定性试验碘,21,在酸性溶液中，尿中尿胆原与对二甲氨基苯甲醛发生反应，形成樱红色化合物。,正常人阴性或弱阳性。,尿胆原定性试验,在酸性溶液中，尿中尿胆原与对二甲氨基,22,四、血清酶学检查,四、血清酶学检查,23,1.,肝细胞内酶生成亢进或低下,2.,肝细胞膜通透性增高,3.,肝细胞变性坏死,4.,酶排出的障碍,5.,激活剂、抑制剂的影响,（一）血清酶活性变化机制,1.肝细胞内酶生成亢进或低下（一）血清酶活性变化机制,24,1.,肝细胞实质性损害：,AST,、,ALT,、,GDH,、,LDH,2.,胆道疾患：,ALP,、,GGT,、,5,-NT,3.,肝脏实质纤维化：,MAO,、,-NAH,4.,肝脏肿瘤：,5,-NPDase,、,ACT,(,二,),诊断肝胆疾病常用酶的分类,1. 肝细胞实质性损害：AST、ALT、GDH、LDH(二),25,1.,转氨酶,丙氨酸氨基转移酶,Alanine aminotransferase,ALT,Glutamic pyruvic transaminase,GPT,天冬氨酸氨基转移酶,Aspartate aminotransferase,AST,Glutamic oxaloacetic transaminase,GOT,(,三,),酶学检查,1.转氨酶(三)酶学检查,26,丙氨酸氨基转移酶, ALT,谷丙转氨酶, GPT,丙氨酸,酮戊二酸,ALT,丙酮酸谷氨酸,丙酮酸,NADH LDH,乳酸,NAD,丙氨酸氨基转移酶, ALT 谷丙转氨酶, GPT丙氨酸,27,天冬氨酸氨基转移酶, AST,谷草转氨酶, GOT,天冬氨酸,-,酮戊二酸,AST,草酰乙酸+,谷氨酸,草酰乙酸,NADH MDH,苹果,酸,NAD,天冬氨酸氨基转移酶, AST 谷草转氨酶, GOT天冬氨酸,28,Aspartate Transaminase, AST, GOT, EC 2.6.1.1,天冬氨酸,:-,酮戊二酸氨基转移酶 天冬氨酸,+ -,酮戊二酸 草酰乙酸,+,谷氨酸,ASTs, ASTm,天冬氨酸氨基转移酶同工酶,Aspartate Transaminase, AST,29,天冬氨酸,+ -,酮戊二酸 草酰乙酸,+,谷氨酸 草酰乙酸,+,固蓝,B,紫红色酶带确定,: ASTs,球蛋白区,ASTm,球蛋白区参考值,:,仅见非深染的,ASTs,酶带,AST,同工酶电泳法测定原理,天冬氨酸 + -酮戊二酸 草酰乙酸 + 谷氨酸,30,ASTs(,或,ASTm),抗,ASTs(,或抗,ASTm),PEG,参考值,: ASTm 4.5 2.6 U/L,，,ASTs 22.9 4.1 U/L,离心沉淀,测上清液,AST,AST,同工酶免疫沉淀法测定原理,ASTs(或ASTm)抗ASTs(或抗,31,1.,AMI:,总,AST 6,8h48,60h4,5d ASTm:,亚细胞水平损害 晚,5h 3,7d: ASTm/,总,AST 25.7%,我院,: ASTm: 12h36h120h,死亡,: ASTm 84.9 57.8 U/L,存活,: 24.7 16.3 U/L2.,肝病,:,急、慢性肝炎,活动性肝硬变,ASTm,，评价 预后,3.,肿瘤,:,局灶性肝恶性变,ASTs:ASTm=1:14.,肌营养不良,AST,同工酶临床评价,1. AMI: 总AST 68h4860h,32,转氨酶测定的临床意义,急性肝炎,:,早期诊断,预后,AST/ALT,比值,ALT,与黄疸分离,:,重症肝炎,ALT,与,AFP,关系,:,肝炎,: AFP, ALT,肝硬化,: AFP,低水平升高,肝癌,: AFP,进行性升高,转氨酶测定的临床意义急性肝炎: 早期诊断, 预后,33,器官或组织,AST ALT,心肌,7800 450,肝脏,7100 2850,骨骼肌,5000 300,肾脏,4500 1200,胰腺,1400 130,脾脏,700 80,肺,500 45,红细胞,15 7,血清,1 1,AST,，,ALT,在人体组织中的相对活性,器官或组织 AST ALT,34,AST/ALT,比值,AST/ALT,正常人,1.15,， 急性病毒性肝炎早期 或轻型肝炎时,0.56,（,3.0,AST/ALT比值AST/ALT 正常人,35,转氨酶测定的临床意义,急性肝炎,:,早期诊断,预后,AST/ALT,比值,ALT,与黄疸分离,:,重症肝炎,ALT,与,AFP,关系,:,肝炎,: AFP, ALT,肝硬化,: AFP,低水平升高,肝癌,: AFP,进行性升高,转氨酶测定的临床意义急性肝炎: 早期诊断, 预后,36,乳酸脱氢酶同工酶,Lactate Dehydrogenase, LDH, LD, EC 1.1.1.27 L-,乳酸,:NAD,氧化还原酶,pH8,9.8,乳酸,+,NAD,+,丙酮酸,+,NADH,+,H,+,pH7.4,7.8,LDH 1,5 H, M, MW 140,000. LDH 1,2:,心肌,肾,红细胞,LDH 3:,肺,脾,胰,甲状腺,肾上腺,淋巴结,LDH 4,5:,骨骼肌,肝,LDH x:,睾丸,精子,乳酸脱氢酶同工酶Lactate Dehydrogenase,37,LDH,同工酶电泳法测定原理,月,无无,日,乳酸,NAD,甲,(,紫蓝色,),LDH PMS,丙酮酸,NADH,NBT,LDH同工酶电泳法测定原理 月无无日乳酸,38,琼脂糖电泳法参考值,LDH1 28.4,5.3%,LDH2 41.0,5.0%,LDH3 19.0,4.0%,LDH4 6.6,3.5%,LDH5 4.6,3.0%,琼脂糖电泳法参考值LDH1 28.4 5.3%,39,1,6-,己二醇能特异地抑制乳酸脱氢酶中的,M,亚基,在控制,1,6,-,己二醇的浓度和抑制时间的条件下,可将,LDH,2,5,全部抑制灭活,而直接测定,LDH,1,活力。,抑制法测定,LDH,1,原理,1,6-己二醇能特异地抑制乳酸脱氢酶中的M亚基,40,将待测血清与抗,LDH,5,抗体温育,抗体与血清中含有,M,亚基的,LDH,2,5,结合,沉淀免疫复合物,测定上清液中的,LDH,1,活力。,免疫沉淀法测定,LDH,1,原理,将待测血清与抗LDH5抗体温育, 抗体与血清中,41,1,. AMI:,总,LDH: 12,18h3d7,14d LDH,1,: 6h24h LDH,1,/LDH,2,=1 24h,轻症,:,总,LDH,正常,同工酶有变化 同时有心衰、心源性休克, LDH,5,%,总,LDH:,敏感性,95.8%,特异性,89.3% LDH,1,:,敏感性,86%,特异性,91.3% LDH,1,/LDH,2,:,敏感性,91.6%,特异性,92.7%,LDH,同工酶临床评价,1. AMI: 总LDH: 1218h,42,2.,肝病,:,急肝,: LDH1,2, LDH5,肝硬化,: LDH2, LDH5,肝癌：,LDH1,，,LDH2,，,LDH3,，,LDH5,；,3.,肿瘤,:,M 100% LDH5 93.7% LDH4 66.1% LDH34.,生,殖细胞恶性肿瘤和肾胚细胞瘤,:,LDH1, 1 2,2. 肝病: 急肝: LDH1,2, LDH5,43,肝细胞损伤时常用生化试验课件,44,肝细胞损伤时常用生化试验课件,45,LDH,同工酶常见谱型分析,1. LDH1,和,LDH2,增加：,涉及组织损伤：,AMI,、心肌炎、心肌缺氧、肾梗塞。,涉及溶血的疾病：,恶性贫血、自身免疫性溶血性贫血、,镰形细胞性贫血、地中海贫血、,血肿吸收、手术引起的溶血、,夜间阵发性血红蛋白尿。,？,LDH同工酶常见谱型分析？,46,2. 5,种同工酶都增加,但,LDH5,相对地增加最大,:,肝损伤,:,肝炎、胆汁淤积。,骨骼肌伤,:,外伤、广泛性外科手术引起骨骼肌伤、,坏死和炎症、进行性肌营养不良,缺氧,2.,47,3. LDH2,、,LDH3,、,LDH4,中间带增加,:,肺、胰、脾、淋巴结和唾液腺坏死和炎症。,血小板增多或组织凝血酶原激酶样物质进入血流引起的损伤。,4. LDH1,，,LDH5,同时增加：,心肝同时受累,3. LDH2、LDH3、LDH4中间带增加:,48,Alkaline phosphatase,ALP, AKP, EC3.1.3.1,磷酸单酯磷酸水解酶,磷酸单酯,+H2O,磷酸,+,酚（醇）,膜结合糖蛋白,肝，骨，肾，肠，胎盘，胆汁，白细胞,碱性磷酸酶,Alkaline phosphatase,碱性磷酸酶,49,ALP,基因,三种遗传基因控制,胎盘,ALP,，肠,ALP,，肝,/,骨,/,肾,ALP,糖链结构差异,ALP基因,50,碱性磷酸酶,(,ALP,或,AKP),磷酸对硝基苯,H,2,O,ALP,对硝基酚磷酸,碱性磷酸酶( ALP或AKP) 磷酸对硝基苯H2O,51,同工酶测定方法,物理学方法（电泳、层析）,选择性灭活法（抑制剂，热变性）,免疫学方法,同工酶测定方法物理学方法（电泳、层析）,52,电泳染色原理,-萘磷酸钠+H,2,O-萘酚+磷酸钠,-萘酚+固蓝B紫色,酶定位,肝ALP：,2,骨ALP：,2,-,肝骨混合带：,2,-,肠ALP与胎盘ALP：-,胆汁ALP：,1,参考值,：,肝，骨,电泳染色原理,53,热稳定性试验,ALP,同工酶,5610min(%) 6510min(%),骨,0.195 0,肝,1.778 0,肠,69.581.3 00.95,胎盘,90.799 8794,热稳定性试验ALP同工酶 5610min(%),54,抑制剂的敏感试验,3.8mol/L,尿素, 9.9mmol/L,苯丙氨酸,尿素,-ALP/,总,ALP=0.1-0.2,肝,ALP,尿素,-ALP/,总,ALP=0.01-0.09,骨,ALP,苯丙,-ALP/,总,ALP0.6,胎盘,ALP,苯丙,-ALP/,总,ALP0.7,非胎盘,ALP,抑制剂的敏感试验3.8mol/L尿素, 9.9mmol/,55,生理性增加：骨生长、妊娠、脂肪餐后,病理性增加：,1.,肝损伤,2.,成骨性损伤,3.,肿瘤,4.,胆汁淤积,ALP,测定的,临床意义,生理性增加：骨生长、妊娠、脂肪餐后ALP测定的临床意义,56,有助于黄疸的鉴别,1. 80%,的阻塞性黄疸,ALP,升高，,ALT,仅轻度升高,2.,肝细胞性黄疸,ALT,很高，,ALP,正常或稍高。,3.,肝内局限性胆道阻塞时，,ALP,明显升高，,ALT,无明显增加，胆红素不高。,有助于黄疸的鉴别 1. 80%的阻塞性黄疸ALP升高,57,血清,ALP,增高机制,膜,胆汁,从膜分离,透入血中,肿瘤细胞合成,炎症刺激邻近肝细胞产生,ALP,成骨细胞增生,血清ALP增高机制膜胆汁从膜分离透入血中,58,ALP,同工酶的临床意义,胆汁型,ALP:,肝外阻塞性黄疸,转移性肝癌 阳性率高,;,肝内胆汁淤积,原发性肝癌 阳性率低,.,胎盘型,ALP:,测定胎盘功能的指标,ALP同工酶的临床意义胆汁型ALP:,59,胆汁型,ALP,在肿瘤肝转移中的阳性率,肿瘤 总例数 肝转移 胆汁型,ALP,的阳性数,例数,(%),有肝转移 无肝转移,肺癌,77 56(72.7) 50 (89.3) 6 (28.6),结肠癌,62 44(70.9) 40 (90.9) 4 (22.2),胃癌,49 24(48.9) 20 (83.3) 4 (16.0),胰头癌,32 31(96.9) 29 (93.5) 1 (100),乳腺癌,24 15(62.5) 13 (86.7) 2 (22.2),骨癌,19 4(21.1) 4 (100.0) 0 ( 0.0),前列腺癌,15 7(46.6) 4 (57.1) 2 (25.0),胆汁型ALP在肿瘤肝转移中的阳性率肿瘤 总例数 肝,60,研究的非肝癌肿瘤病人,278,例，肿瘤肝转移有,181,例，胆汁型,ALP,对诊断肿瘤肝转移的灵敏度为,88.9,，特异性为,79.1%,。因此胆汁型,ALP,对监测肿瘤肝转移具有较高的价值。,61,胎盘,ALP,：,妊娠最后三个月时在血清中增加很快，分娩前突然下降，产生,3,4,天即消失一半，作为胎盘功能好坏的指标。,胎盘ALP：,62,骨,ALP,：,：,病理性成骨、破骨、生长发育,不能用于鉴别非恶性骨病的恶性肿瘤骨转移，但骨肿瘤的阳性率高。,肠,ALP,：,正常胃及食道粘膜无,ALP,，当肠腺化生时，,ALP,可以增高，此种,ALP,证明是肠,ALP,，对早期发现胃癌有所帮助。,骨ALP：,63,类胎盘,ALP,：,Regan ALP,：常见于睾丸、卵巢和胰腺癌,Nagao ALP,：胰尾部腺癌和转移性胆管腺癌,认为这些类胎盘,ALP,是胎盘型,ALP,在癌组织的异位合成。,类胎盘ALP：,64,ALP,糖链,恶性肿瘤所产生的胎盘,ALP,和肝,ALP,的糖链不同于正常器官所产生的,ALP,的糖链。,正常器官的糖链改变成为肿瘤特有的糖链，与细胞的恶性转化有关。,ALP糖链恶性肿瘤所产生的胎盘ALP和肝ALP的糖链不同于正,65,-,Glutamyltransferase,-GT, GGT, EC2.3.2.2.,-谷氨酰-多肽:氨基酸-谷氨酰基转移酶,谷胱甘肽+氨基酸-谷氨酰氨基酸+,Cys-Gly,膜结合糖蛋白,肾,:,胰,:,肝,=44:13:4,尿,血,-,谷氨酰基转移酶,-Glutamyltransferase, -GT, G,66,GGT,基因,人类基因组中有一,GGT,基因家族,Courtay,证实人基因组中含有多个,GGT,基因组序列,GGT基因人类基因组中有一GGT基因家族,67,-,谷氨酰环化转移酶,氨基酸,5,羟脯氨酸,2H,2,O,ATP,ADP,Pi,谷氨酸,ATP,ADP,Pi,合成酶,-,谷氨酰半胱氨酸,ATP,ADP+Pi,GSH,合成酶,谷氨酰半胱氨酰甘氨酸,-,谷氨酰转移酶,氨基酸,半胱氨酰甘氨酸,甘氨酸,半胱氨酸,H,2,O,肽酶,细胞外,膜,细胞内,-,谷氨酰循环及其对氨基酸的转移作用,-,谷氨酰,-,氨基酸,-谷氨酰环化转移酶氨基酸5羟脯氨酸2H2OATPADP,68,-,谷氨酰,基,转,移,酶,(,-GT,或,GGT),谷氨酰,对硝基苯胺双甘肽,-GT,谷氨酰,基双甘肽对硝基苯胺,-谷氨酰基转移酶 (-GT或GGT),69,电泳染色原理,-,谷氨酰萘胺,+ Gly-Gly,-谷氨酰-,Gly-Gly +,萘胺,-萘胺,+,固蓝B紫红色,酶定位,GGT1: 白前,白区,GGT2：白后,1,区,GGT3：,1,后,2,区,GGT4：,2,后,区,GGT5：后,区,参考值：,GGT1，GGT2：+,电泳染色原理,70,当,ALP,增高时可用于鉴别此增高的,ALP,是来源于肝还是骨，此点在孕妇尤为重要,.,确定酒精和某些药物对肝脏潜在危险性。,-GT,同工酶电泳发现,-GT,4,增高与血清胆红素增高密切相关，出现,-GT,1,者均有肝功能异常,。,-GT,临床评价,当ALP增高时可用于鉴别此增高的ALP是来源于肝还,71,肝、胆、胰疾患,GGT,增高原因,传染性肝炎、慢性肝炎及肝硬化呈轻度或中度升高，阻塞性黄疸显著升高，胆汁性肝硬化、胆管炎显著升高，胰头癌,/,肝癌显著升高。,胆汁和胰腺中,GGT,很高，这些脏器患病时胆汁或胰腺排出受阻，导致反流入血。,增高的胆汁酸溶解与细胞膜相结合的可溶性,GGT,，使之进入血流。,肝细胞损伤也使位于微粒体内的,GTT,释放增加。,肝、胆、胰疾患GGT增高原因传染性肝炎、慢性肝炎及肝硬化呈轻,72,肿瘤时,GGT,增高原因,1.,个体发育的逆转,2.,适应癌细胞代谢需要，有利于解毒和氨基酸转运，满足癌细胞对营养的需要。,肿瘤时GGT增高原因 1. 个体发育的逆转,73,甲亢、酒精性肝炎、前列腺癌、糖尿病患者血清,GGT,也可增高,甲亢、酒精性肝炎、前列腺癌、糖尿病患者血清GGT也,74,垂直板不连续梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,GGT,同工酶,45,例,47,例,41,例,39,例,47,例,垂直板不连续梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析GGT同工酶 4,75,