紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,紫外线诱导枯草芽孢杆,菌突变,第六组小组成员,紫外线诱导枯草芽孢杆,1,实验目的:,学习微生物诱变育种的基本操作方法,实验内容:,1:对枯草芽孢杆菌出发菌株进行处理,制备菌悬液。,2:对紫外线进行诱变处理。,实验目的:,2,实验材料和用具,菌种:枯草芽孢杆菌。,2培养基:淀粉掊养基。,3主要药品:牛肉膏、蛋白胨,Nac、可溶性淀粉、碘液,生理盐,水,4主要器皿:试管、移液管、锥形瓶,量筒、烧杯、紫外灯、离心机、培,养皿等,实验材料和用具,3,技术路线:,材料器具准备,菌悬液制备,紫外线诱变处理,平板制作,稀释菌悬液,稀释涂平板,计算存活率,及致死率,技术路线:,4,操作步骤,菌悬液制备,将枯草芽孢杆菌接种在牛肉膏蛋白胨培养基上,37培养20h,使其活化,取已培养20h的活,化枯草芽孢杆菌斜面一支,用10mL生理盐水,将菌苔洗下,倒入离心管中,离心(3000,r/min)15min,弃上清液,将菌体用无菌生理盐,水洗涤2次,最后制成菌悬液,用血球计数板,在显微镜下直接计数。调整细胞浓度为108/mL,平板制作,将培养基熔化后,冷至45左右倒平板。,www, 3l ian, oom,操作步骤,5,3诱变处理,用物理方法或化学方法,所用诱变剂种类及剂量的选,择可视具体情况决定,有时还可采用复合处理,可获,得更好的结果。本实验用紫外线照射的诱变方法。,(1).紫外线处理打开紫外灯预热20min。取5mL菌悬,液放在无菌的培养皿中,同时制作5份。逐一操作,将培养皿平放在离紫外灯30cm(垂直距离)处,照射,min后打开培养皿盖,开始照射,与照射处理开始进,行搅拌,即时计算时间,照射时间分别为15s、30,min、2min、5min。照射后,诱变菌液在黑暗中保,存12h然后稀释涂菌进行初筛。,(2).稀释菌悬液按10倍稀释至10-6,从10-5和10,6中各取出0.lmL加入到酪素培养基平板中(每个稀释,度均做3个重复),然后涂菌并静置,待菌液渗入培养,基后倒置,于30恒温培养23d,儿的简笔画,3诱变处理,6,4稀释涂平板,取未照射的菌悬液(作为对照)和照射,过的菌悬液各0.5m进行不同程度的稀释。,取最后3个稀释度的稀释液涂于淀粉培养,基平板上,每个平板加稀释液0.1m,用,无菌玻璃刮棒涂匀,培养48h(用报纸包好,平板)。注意在每个平板背后要标明处理时,间、稀释度。,注:枯草芽孢杆菌诱变前:稀释至10-8,10-7,10-6,生理盐水,枯草芽孢杆菌照射1min稀释至10-8,10,7,10-6,生理盐水,枯草芽孢杆菌照射2min稀释至10-8,10-7,10-6,生理盐水,枯草芽孢杆菌照射3min稀释至10-8,10,4稀释涂平板,7,菌落透明圈直径,HC值,菌落直径,正突变菌落数,正突变率,x100%,突变菌落数,致死率对照菌落数-处理后菌落数100%,对照菌落数,菌落透明圈直径,8,王,1:紫外线照射时注意保,护眼睛和皮肤。,意,2:诱变过程及诱变后,的稀释操作在无菌下进行并暗中培养。,事,页,王,9,实验结果分析,实验结论,实验失败,实验结果分析,10,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,11,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,12,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,13,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,14,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,15,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,16,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,17,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,18,紫外线对枯草芽孢杆菌诱变课件,19,