肠道杆菌及检验课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,肠道杆菌及检验,肠道杆菌及检验,1,肠道杆菌,(enteric bacilli),的概念:,肠杆菌科,(Enterobacteriaceae),共30个属,120个种,大多为肠道正常菌群,少数为致病菌,一局部在发生移位,或宿主免疫力低下时,可成为条件致病菌。,第一节 概 述,肠道杆菌(enteric bacilli)的概念:,2,正常菌群,致病菌,埃稀菌属,变形杆菌属,克雷伯菌属,肠杆菌属,沙雷菌属,枸橼酸菌属,致病性大肠埃稀菌,志贺菌属,沙门菌属,耶尔森菌属,大肠杆菌 肠外感染,普通变形杆菌:,肠外感染、食物中毒,医院感染,EPEC,.,ETECEIEC,.,EHECEAggEC,肠内感染食物中毒,A群痢疾志贺菌,B群福氏志贺菌,C群鲍氏志贺菌,D群宋内氏志贺菌,急性菌痢,慢性菌痢,中毒性菌痢,伤寒沙门菌甲、乙、丙,鼠伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌肠炎沙门菌,肠热症,食物中毒败血症,小肠结肠炎耶尔森菌 食物中毒,鼠疫耶尔森菌 鼠疫,肠道杆菌,正常菌群致病菌埃稀菌属致病性大肠埃稀菌大肠杆菌,3,共性:,1.形态染色:均为革兰阴性杆菌,无芽孢、有菌毛,局部有荚膜或包膜,大多有周鞭毛(除志贺菌、克雷伯、鼠疫耶尔森菌之外)。,2.营养要求:需氧或兼性厌氧。,3.生化反响:具丰富的酶,生化反响活泼,并各不相同,为鉴定的主要依据。,致病性越强,生化反响能力越弱。,非致病菌(除变形杆菌外)均分解乳糖产酸,致病菌不发酵乳糖。,常用选择培养基:S S (Salmonella-shigella)。,共性:,4,EMB (Eosin-methylene-blue),MAC (Mac Conkey),常用生化反响培养基:KIA MIU,定科试验:革兰阴性杆菌、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐复原试验阳性,4、抗原构造:有多种抗原,菌体抗原(O抗原) :脂多糖,耐热(100不被破坏),有属、种特异性,又有类属抗原和特异性抗原之分,类属抗原可引起交叉反响,凝集为颗粒状。,H抗原 鞭毛蛋白,不耐热(60 30min即可破坏),特异性强,凝集为絮状。,EMB (Eosin-methylene-blue,5,外表抗原:包绕于O抗原的外面的多糖(不耐热),不同细菌有不同的名称(如大肠杆菌及志贺菌的K抗原,沙门菌的Vi抗原),抗原是肠道杆菌血清学分群和分型的依据。,5、遗传变异,S-R变异,H-O变异,耐药性变异,6、传播途径,经消化道以饮食、饮水为媒介,体内感染(免疫力下降、移位),为医院感染主要病原菌群。,外表抗原:包绕于O抗原的外面的多糖(不耐热),不同细,6,7.致病物质:菌毛、内毒素、肠毒素,8.检验方法,标本:肠内标本:新鲜粪便,肠外标本:血液、体液、尿液等,别离培养,血液 肉汤增菌 血平板别离,尿液、伤口分泌物 MAC别离,粪便: SS 、EMB别离,7.致病物质:菌毛、内毒素、肠毒素,7,鉴定依据:,革兰染色,触媒、氧化酶、硝酸盐复原,KIA、 MIU、IMViC ,其他生化反响,血清玻片凝集(鉴定到种、型或血清型),鉴定依据:,8,第二节 埃希菌属,埃希菌属,(,Escherichia,),大肠埃希菌,(E.coli),蟑螂埃希菌,(E.blattae),格森埃希菌(,E.fergusonii),赫尔曼埃希菌,(E.hermannii),伤口埃希菌,(E.vulneris),分布及种类:,第二节 埃希菌属 埃希菌属 (Escheric,9,一、生物学性状,(一)形态染色:,革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛,菌毛,少数有微荚膜。,(二)培养特性,普通平板:中等大小,圆形凸起,光滑灰白色。,血平板:某些菌株呈溶血,S S、MAC平板:,分解乳糖产酸呈粉红色菌,落,EBM:兰紫色菌落,有金属光泽,液体培养基:混浊生长,一、生物学性状(一)形态染色:革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛,10,S S 大肠埃希菌,S S 大肠埃希菌,11,中国蓝 产气肠杆菌,中国蓝 产气肠杆菌,12,(三)生化反响,分解葡、乳、麦、甘,产酸产气,蔗糖因株而易,I M Vi C:+ + , 脲酶:,肠内感染菌株:不发酵 / 缓慢发酵乳糖,KIA,MAC中可产碱。,(四)抗原构造: 有O、H和 K三种,O 抗原是血清学分型的根底,约170种。,H 抗原大于56种,血清型的表示式:O:K:H ,如: O111:K58:H2; O157:H7,(三)生化反响,13,(五)抵抗力:,自然界水中存活数周或数月。,胆盐、煌绿可抑制其生长,对氯霉素、链、庆大酶素敏感。,易产生耐药性:,出现了产超广谱-内酰胺酶(Extended-Spectrum -lactamase : ESBLs)菌株,那么对第三代头孢菌素(头孢噻肟、头孢他定、头孢哌酮、头孢曲松等)耐药。,产ESBLs的革兰阴性菌除了大肠埃希菌之外,常见的还有阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜绿假单孢菌,(五)抵抗力:,14,(一) 致病物质:,K抗原,菌毛 ETEC的菌毛称,定植因子(CFA),毒素:括内毒素和外毒素(肠毒素),肠毒素,不耐热肠毒素(heat labile toxin, LT),6530min可破坏耐热肠毒素(heat stable toxin, ST),(二)所致疾病,1、时机感染:移位到肠外组织、器官,引起化脓性,感染,如泌尿系统感染、胆囊炎、腹膜炎等。,2、肠内感染: 腹泻(轻微腹泻霍乱样腹泻),二、致病性,(一) 致病物质:不耐热肠毒素(heat labile to,15,肠产毒型大肠埃希菌,(entertoxigenic E coli, ETEC),肠致病型大肠埃希菌,(enteropathogenic E. coli, EPEC),肠侵袭型大肠埃希菌,(enteroinvasive E. coli, EIEC),肠出血型大肠埃希菌,(enterohemorrhagic EHEC),肠聚集型大肠埃希菌,(enteroaggrehative E coli EAggEC),致病性大肠杆菌:,肠产毒型大肠埃希菌(entertoxigenic E c,16,引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征,菌株 侵袭部位 疾病与病症 致冰机制,旅行者腹泻,婴幼儿腹泻,水样,伴恶心呕吐、腹痛、脱水、低热,肠毒素致大量分泌液体、电解质,婴幼儿腹泻,水样或粘液便,发热,恶心呕吐,粘附、破坏上皮细胞,志贺样腹泻,水样致脓血便,含红、白细胞、黏液,发热腹痛,侵袭和破坏肠粘膜上皮细胞,出血性结肠炎,水样便以血便,剧烈腹痛,低热,HUS等,溶原性噬菌体编码SLT-I或II中断肠黏膜上皮细胞蛋白质合成,婴儿腹泻,持续水样便,呕吐,低热,脱水,聚集性黏附上皮细胞,阻断液体吸收,小肠,小肠,结肠,结肠,小肠,ETEC,EPEC,EIEC,EHEC,FAggEC,引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征菌株 侵袭部位,17,三、微生物学检验,(一)标本采集,(二)检验程序及方法,三、微生物学检验,18,麦康凯琼脂,蛋白胨 20g,氯化钠 5g,琼脂 20-25g,蒸馏水 1000ml,乳糖 10g,1%中性红水溶液 5ml,胆盐 5g (或牛胆酸钠 4g与去氧胆酸钠1g),麦康凯琼脂,19,肉膏汤琼脂,(pH7.4),100ml,乳 糖 1g,1%中国蓝水溶液,(灭菌),1%玫瑰红酸乙醇溶液 1ml,注1.中国蓝与玫瑰红酸在酸碱溶液中的反响(见表);此培养基pH约为7.4,制好后应呈淡紫红色。过碱呈蓝色,均不适用。,指示剂 酸性 碱性,中国蓝 蓝色 微蓝至无色,玫瑰红酸 黄色 红色,2.玫瑰红酸能抑制革兰氏阳性细菌的生长,但对大肠杆菌没有抑制作用, 故粪便标本接种量不宜太多。,3.多数肠道致病菌不分解乳糖,其菌落为透明或半透明、淡红色;大肠杆菌分解乳糖产酸,形成大而浑浊的蓝色的菌落。,4.中国蓝水溶液需煮沸或高压灭菌分钟后应用;玫瑰红酸是乙醇溶液,无需灭菌,但加热应避开火焰。,中国蓝琼脂,肉膏汤琼脂(pH7.4) 10,20,MAC 不长,MAC 不长,21,伊红美蓝琼脂 (EMB琼脂),肉膏汤琼脂,(pH7.4),100ml,乳 糖 1g,2%伊红水溶液,(灭菌),2ml,0.5%,美蓝水溶液,(灭菌),1ml,伊红美蓝琼脂 (EMB琼脂),22,配方一,配方二,配方三,配方四,牛肉膏,5,5,牛心浸液,1000,肉膏液,850,胨,5,7.5（胨）,5,乳 糖,10,15,10,10,胆盐,10（粗制）,10（透析）,150（ml）（牛胆汁）,8.5（混合）,硫代硫酸钠,12,5,11,8.5,枸橼酸钠,12,15,11,8.5,枸橼酸铁,0.5,1,枸橼酸铁铵,1,4,磷酸氢二钠,5,4,琼 脂,25,18,20,13.5,煌 绿,0.33,0.33,1.0,0.33,中性红,22.5,37,70,25,水,1000,1000,SS琼脂 (,四种配方,),配方一 配方二 配方三,23,蛋白胨 10g 葡 萄 糖 1g,氯化钠 5 g 乳 糖 10g,牛肉膏 3 g 硫代硫酸钠,琼 脂 16g 硫酸亚铁,水 1000ml 0.4%酚红 6ml,双糖铁培养基,双糖铁培养基,24,肠道杆菌及检验课件,25,血 液,肉糖增菌,血平板别离,脓汁、痰、分泌物、尿,粪便、直肠拭子,MAC、EMB别离,37 1824H,可疑菌落,涂、染、检,肠道外感染,肠道感染,初步鉴定,菌落特征、革兰染色 KIA、 MIU,最终鉴定:系统生化反响,报 告,ETEC,生化反响肠毒素测定,EPEC EIEC EHEC,血清玻片凝集,血 液 肉糖增菌血平板别离脓汁、痰、分泌物、尿粪便、直肠,26,大肠埃希菌的初步鉴定,KIA,MIU,斜面 底层 产气 H2S,动力 吲哚 脲酶,M VP C,触媒,氧化酶,硝酸盐,A A +/- +/- + + + +,K A + + + ,+ +,K A + + ,+ +,K A + +/- + + ,+ +,大肠埃希菌的初步鉴定 KIA,27,肠道杆菌及检验课件,28,肠道杆菌及检验课件,29,肠道杆菌及检验课件,30,MAC,MAC,31,MAC,MAC,32,EMB,EMB,33,肠道杆菌及检验课件,34,肠道杆菌及检验课件,35,