白细胞血小板配血试验课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,一、人类白细胞抗原,人类白细胞抗原代表个体特异性,与移植排斥有关的抗原称为,组织相容性抗原或移植抗原,-MHS,编码,MHS,的基因组称为,主要组织相容性复合物,(MHC),人类的,MHC,是首先在白细胞上发现的，称为,人类白细胞抗原,(human leukocyte antigen,，,HLA),一、人类白细胞抗原 人类白细胞抗原代表个体特异性,HLA,的研究历史,最早发现人类白细胞抗原者为,Dausset-1954,年,HLA,不仅仅是白细胞特异性同种抗原。,它是分布广泛的组织抗原。,HLA的研究历史最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1,HLA,的分型命名,血清学分型命名,具有临床意义的,HLA,基因有,A,、,B,、,C,、,DR,、,DQ,、,DP,等位点,(Loci),，每个位点又有若干等位基因，这些基因的产物便是,HLA,抗原。,临床意义比较大的,HLA-A,、,B,、,C,称为,类抗原,HLA-DR,、,DQ,、,DP,称为,类抗原。,HLA的分型命名,HLA,的遗传,单体型遗传,存在基因重组,多态性现象,连锁不平衡,HLA的遗传 单体型遗传,HLA,抗体及抗体检测,临床上,HLA,抗体多由,妊娠、输血或器官移植等免疫产生,HLA抗体及抗体检测,HLA,在医学中的应用,一、,HLA,与输血,HLA,与非溶血性输血反应,HLA,与血小板输注,二、,HLA,与器官移植,(,一,),肾移植,(,二,),骨髓移植,三、,HLA,与亲子鉴定,HLA在医学中的应用 一、HLA与输血,二、血小板血型,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称,血小板相关抗原,另一类为,血小板特异性抗原,二、血小板血型,血小板血型,相关抗原：,主要与红细胞的,ABO,血型系统以及人类白细胞抗原,(HLA),有关,特异性抗原：,由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，在其他细胞和组织上不能发现,血小板血型相关抗原：主要与红细胞的ABO血型系统以及人类白细,血小板血型,血小板表面存在红细胞,ABO,系统,的,A,抗原和,B,抗原,可能是从,血浆中吸附,上的。,是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨之中,在我国，通常进行,ABO,同型血小板输血,血小板血型血小板表面存在红细胞ABO系统的A抗原和B抗原,可,配合性血小板输注,ABO,同型,血小板抗体的筛选,交叉配合试验：确保供受体的血小板型和,HLA,型的配合,配合性血小板输注ABO同型,血小板血型,血小板特异性抗原,具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分,血小板特异性抗原有,6,个血型系统,24,个抗原，正式命名为,HPA-1,、,HPA-2,、,HPA-3,、,HPA-4,、,HPA-5,、,HPA-15,血小板血型 血小板特异性抗原,血小板血型的临床意义,一,.,血小板输注无效性,(PTR),二,.,输血后紫癜,(PTP),三,.,新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜,(NAITP),四,.,血小板的自身免疫作用,-,特发性血小板减少性紫癜,(,简称,ITP),血小板血型的临床意义一.血小板输注无效性(PTR),血小板同种抗体与输血,1.ABO,血型的选择,一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注,ABO,血型配合的血小板,2,Rh,血型的选择,D,阴性的患者，最好要避免用,D,阳性献血者的浓缩血小板。对育龄妇女可以注射,Rh,免疫球蛋白,血小板同种抗体与输血,三、输血前免疫血液学检查,目的,:,供者与患者的血液,三、输血前免疫血液学检查 目的:供者与患者的血液,输血前免疫血液学检查,内容：,患者的病史、标本的核对及处理,供受双方,ABO,、,Rh,血型鉴定,不规则抗体的筛选和鉴定,交叉配血试验,报告和发血,输血前免疫血液学检查内容：,标 本,一、标本采集,二、红细胞悬液的配制,三、标本的保存,标 本一、标本采集,聚凝胺交叉配血技术示意图2,Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集,血小板特异性抗原,HLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。,凝胶技术的原理,目的:供者与患者的血液,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原,与移植排斥有关的抗原称为组织相容性抗原或移植抗原-MHS,HLA抗体及抗体检测,1个IgG分子同时连接两个红细胞,对育龄妇女可以注射Rh免疫球蛋白,HLA与血小板输注,加入受者的血清,如有抗血小板抗体,则和血小板发生特异性结合,D阴性的患者，最好要避免用D阳性献血者的浓缩血小板。,4抗人球蛋白可以同时和两个不完全抗体的FC段结合，从而把红细胞连接在一起。,对育龄妇女可以注射Rh免疫球蛋白,三、输血前免疫血液学检查,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,血小板特异性抗原有6个血型系统24个抗原，正式命名为HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15,标 本,一、标本采集,1,红细胞标本,-ACD,或,CPD,、,(Na,2,-EDTA),抗凝静脉血,少数患者有一种自身抗体,-,不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本,聚凝胺交叉配血技术示意图2标 本一、标本采集,2,血清标本,一般实验避免使用血浆,配血试验用血清,不超过,72,小时,白细胞血小板配血试验课件,二、红细胞悬液的配制,1,、红细胞悬液常用浓度有,2,、,5,和,10,2,、,2,的悬液一般用于滴定抗体效价，,5,的悬液常用于血型鉴定和交叉配血试验，,10,的悬液则用于测定抗体的亲合力。,二、红细胞悬液的配制,三、标本的保存,1,血清标本,不稀释的血清标本如加有防腐剂可在,4,保存数月,在一,20,以下可保存数年,如用生理盐水稀释的血清只限当天使用,2,红细胞标本,一般试验用的凝血标本要在,5,天之内使用，以不溶血为准。如用保存液可保存,3,周,用盐水配制的红细胞悬液只能在当天使用,三、标本的保存,供受双方,ABO,、,Rh,血型鉴定,ABO,血型正反定型,Rh,血型鉴定,试管法,供受双方ABO、Rh血型鉴定ABO血型正反定型试管法,抗,A,、抗,B,以外的所有抗体统称为不规则抗体。,常见于多次输血的人群,不规则抗体的筛选和鉴定,抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。不规则抗体的筛选和,不规则抗体的筛选和鉴定,患者血清,+,试剂筛选红细胞,盐水介质,聚凝胺介质,抗人球蛋白介质,不规则抗体的筛选和鉴定患者血清+试剂筛选红细胞,交叉配血试验,受者血清,+,供者红细胞,受者红细胞,+,供者血清,方法,主侧,次侧,盐水介质,聚凝胺介质,抗人球蛋白介质,交叉配血试验受者血清+供者红细胞主侧次侧 盐水介质,（,1,）低离子聚凝胺交叉配血技术,原理：聚凝胺（,Polybrene,），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。,（1）低离子聚凝胺交叉配血技术,25,1,红细胞间有一定间距,2,加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,3,加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺,4,红细胞的非特异性凝集消失,聚凝胺交叉配血技术示意图,1,聚凝胺,枸橼酸钠,1 红细胞间有一定间距2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的,26,加入重悬液减弱了Polybrene的作用,临床上HLA抗体多由妊娠、输血或器官移植等免疫产生,(二)骨髓移植,人类白细胞抗原代表个体特异性,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,（4）血小板配血实验原理示意图（阳性）,凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体,导致试剂红细胞凝集。,HLA与非溶血性输血反应,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。,试剂红细胞和血小板特异性结合,高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，1/300的库血直抗阳性。,Polybrene分子连接到红细胞上,HLA-DR、DQ、DP称为类抗原。,相关抗原：主要与红细胞的ABO血型系统以及人类白细胞抗原(HLA)有关,血小板特异性抗原,1 红细胞上已有不完全抗体致敏,加入Polybrene,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原,HLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。,1,红细胞上已有不完全抗体致敏,2,加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特异性凝集,3,加入枸橼酸钠中和聚凝胺,4,由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性凝集不消失,聚凝胺交叉配血技术示意图,2,聚凝胺,枸橼酸钠,不完全抗体,加入重悬液减弱了Polybrene的作用1 红细胞上已有不完,27,试验分步原理,血清,红细胞悬液,加入,LIM,混合液,Polybrene,受体,血型抗原,IgG,抗体迅速致敏,试验分步原理血清红细胞悬液加入LIM混合液Polybrene,28,试验分步原理,Polybrene,上海市血液中心血,Polybrene,分子连接到红细胞上,加入,Polybrene,试验分步原理Polybrene上海市血液中心血Polybre,29,试验分步原理,离心,Polybrene,拉近红细胞间的距离并造成凝集,1,个,IgG,分子同时连接两个红细胞,试验分步原理离心Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝,30,试验分步原理,加入重悬液减弱了,Polybrene,的作用,重悬液,上海市血液中心血,加重悬液,试验分步原理加入重悬液减弱了Polybrene的作用重悬液上,31,试验分步原理,已被血型抗体致敏的红细胞不会散开,阳性结果,试验分步原理已被血型抗体致敏的红细胞不会散开阳性结果,32,试验分步原理,未被血型抗体致敏的红细胞很快散开,阴性结果,试验分步原理未被血型抗体致敏的红细胞很快散开阴性结果,33,注意事项,按比例加样,致敏时间,观察非特异性凝集,观察结果,关于冷凝集,注意事项按比例加样,34,聚凝胺方法的特点,灵敏：,灵敏度比抗球蛋白方法高,1-20,倍。,速度快：,实验时间,5,分钟左右。,准确：,准确度高于酶试验。,不适合于,Kell,系统抗体的检测，但黄种人群中,Kell,系统抗体极罕见。,操作要求较高,聚凝胺方法的特点灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。,35,（,2,）微柱凝胶技术,（2）微柱凝胶技术,36,2红细胞标本 一般试验用的凝血标本要在5天之内使用，以不溶血为准。,凝胶技术的原理,2）结果可保存 凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,交叉配合试验：确保供受体的血小板型和HLA型的配合,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原,2）结果可保存 凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。,不规则抗体的筛选和鉴定,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原,准确：准确度高于酶试验。,临床上HLA抗体多由妊娠、输血或器官移植等免疫产生,供受双方ABO、Rh血型鉴定,临床上HLA抗体多由妊娠、输血或器官移植等免疫产生,1 红细胞上已有不完全抗体致敏,4 红细胞的非特异性凝集消失,2不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结合（致敏）。,三、输血前免疫血液学检查,(一)肾移植,（4）血小板配血实验原理示意图（阳性）,微柱凝胶技术,2红细胞标本 一般试验用的凝血标本要在5天之内使用，以,37,凝胶技术的原理,反应室,外管壁,反应室底孔,内套管壁,凝胶或,玻璃珠,亲和凝胶,试剂或,盐水,特殊粘液,凝胶技术的原理反应室外管壁反应室底孔内套管壁凝,38,凝胶技术的原理：,A,、,反应室：,下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。,B,、,试剂或盐水层：,红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层液体中的试剂反应。,C,、,粘液,：,亲和柱中有一层粘液，作用与,“,试剂或盐水层,”,相同。,凝胶技术的原理：A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中不,39,1,）敏感：,在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。,2,）结果可保存,凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。,3,）操作技术要求较低：,凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。,4),无需洗涤的抗球蛋白试验：,优点：,1）敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。优点,40,缺点：,凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。,高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，,1/300,的库血直抗阳性。,缺点：凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。,41,2,不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结合（致敏）。,3,加入抗人球蛋白,1,红细胞彼此之间有一定的间距,4,抗人球蛋白可以同时和两个不完全抗体的,FC,段结合，从而把红细胞连接在一起。,（,3,）抗人球蛋白交叉配血法示意图,2不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结,42,1.,试剂红细胞,(,表面标有抗血小板抗体,),2.,加入供者血小板,3.,试剂红细胞和血小板特异性结合,4.,加入受者的血清,如有抗血小板抗体,则和血小板发生特异性结合,5.,凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体,导致试剂红细胞凝集。,（,4,）血小板配血实验原理示意图（阳性）,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体)2.加入供者血小板3,43,1.,试剂红细胞,(,表面标有抗血小板抗体,),2.,加入供者血小板,3.,试剂红细胞和血小板特异性结合,4.,加入受者的血清,如血清中无抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗人球蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。,血小板配血实验原理示意图（阴性反应）,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体)2.加入供者血小板3,44,白细胞血小板配血试验课件,45,HLA,的研究历史,最早发现人类白细胞抗原者为,Dausset-1954,年,HLA,不仅仅是白细胞特异性同种抗原。,它是分布广泛的组织抗原。,HLA的研究历史最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1,HLA与血小板输注,1个IgG分子同时连接两个红细胞,一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注ABO血型配合的血小板,血小板输注无效性(PTR),2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注ABO血型配合的血小板,高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，1/300的库血直抗阳性。,Polybrene分子连接到红细胞上,Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集,2 加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特异性凝集,1个IgG分子同时连接两个红细胞,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,D阴性的患者，最好要避免用D阳性献血者的浓缩血小板。,加入重悬液减弱了Polybrene的作用,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原,4 红细胞的非特异性凝集消失,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原,1个IgG分子同时连接两个红细胞,患者的病史、标本的核对及处理,配合性血小板输注,ABO,同型,血小板抗体的筛选,交叉配合试验：确保供受体的血小板型和,HLA,型的配合,HLA与血小板输注配合性血小板输注ABO同型,血小板同种抗体与输血,1.ABO,血型的选择,一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注,ABO,血型配合的血小板,2,Rh,血型的选择,D,阴性的患者，最好要避免用,D,阳性献血者的浓缩血小板。对育龄妇女可以注射,Rh,免疫球蛋白,血小板同种抗体与输血,标 本,一、标本采集,1,红细胞标本,-ACD,或,CPD,、,(Na,2,-EDTA),抗凝静脉血,少数患者有一种自身抗体,-,不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本,标 本一、标本采集,试验分步原理,加入重悬液减弱了,Polybrene,的作用,重悬液,上海市血液中心血,加重悬液,试验分步原理加入重悬液减弱了Polybrene的作用重悬液上,注意事项,按比例加样,致敏时间,观察非特异性凝集,观察结果,关于冷凝集,注意事项按比例加样,微柱凝胶技术,微柱凝胶技术,C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。,HLA与非溶血性输血反应,灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。,HLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。,D阴性的患者，最好要避免用D阳性献血者的浓缩血小板。,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,加入重悬液减弱了Polybrene的作用,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,HLA与血小板输注,HLA抗体及抗体检测,2）结果可保存 凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。,加入Polybrene,供受双方ABO、Rh血型鉴定,在我国，通常进行ABO同型血小板输血,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原,一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注ABO血型配合的血小板,加入重悬液减弱了Polybrene的作用,C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。,1红细胞标本-ACD或CPD、(Na2-EDTA)抗凝静脉血,4抗人球蛋白可以同时和两个不完全抗体的FC段结合，从而把红细胞连接在一起。,试剂红细胞和血小板特异性结合,凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体,导致试剂红细胞凝集。,2不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结合（致敏）。,具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分,目的:供者与患者的血液,准确：准确度高于酶试验。,3）操作技术要求较低：凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。,对育龄妇女可以注射Rh免疫球蛋白,高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，1/300的库血直抗阳性。,C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。,A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。,1血清标本 不稀释的血清标本如加有防腐剂可在4保存数月,在一20以下可保存数年,临床上HLA抗体多由妊娠、输血或器官移植等免疫产生,HLA与血小板输注,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,2Rh血型的选择,加入受者的血清,如血清中无抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗人球蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。,准确：准确度高于酶试验。,凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。,缺点：,凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。,高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，,1/300,的库血直抗阳性。,C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。4,