抗菌药物和药敏试验课件

抗菌抗菌药药物和物和药药敏敏试验试验 编辑课件抗菌药物和药敏试验 编辑课件1第一节 临床常用抗菌药物抗菌抗菌药药物物 是指具有是指具有杀杀菌或抑菌活性菌或抑菌活性的抗生素和化学合成的抗生素和化学合成药药物。物。前者前者是真菌、放是真菌、放线线菌、菌、细细菌等的菌等的代代谢产谢产物，物，后者后者是是经经化学改造的半合化学改造的半合成抗生素和化学合成成抗生素和化学合成药药物。物。编辑课件第一节 临床常用抗菌药物抗菌药物 是指具有杀菌或抑菌活2一、青霉素一、青霉素类类抗生素：抗生素：包括青霉素包括青霉素G G、耐青霉素、耐青霉素酶酶青霉素、青霉素、广广谱谱青霉素青霉素(氨氨苄苄青霉素、青霉素、美洛西林、哌拉西林)等。等。二、二、头孢头孢菌素菌素类类抗生素：抗生素：第一代第一代(头孢唑头孢唑林、林、头孢头孢氨氨苄苄、头头 孢孢拉定拉定)、第二代、第二代(头孢头孢孟多、孟多、头孢头孢西汀，西汀，头孢呋头孢呋新，新，头孢头孢克克 罗罗等等)、第三代、第三代(头孢哌酮头孢哌酮（先（先锋锋必）、必）、头孢头孢三三嗪嗪（菌必治）、（菌必治）、头孢噻肟钠头孢噻肟钠、头孢头孢他他啶啶、头孢唑肟头孢唑肟等等)。第四代第四代如头孢地嗪、头孢噻唑肟、头孢吡肟等。适用于多重耐 药G-杆菌严重 感染，对厌氧菌也有很好的抗菌作用 三、其他三、其他内内酰酰胺胺类类抗生素抗生素 （一）（一）单环单环内内酰酰胺胺类类抗生素抗生素:主要有氨曲主要有氨曲 南和卡芦莫南。南和卡芦莫南。抗菌药物的分类编辑课件一、青霉素类抗生素：包括青霉素G、耐青霉素酶青霉素、抗菌3（二）（二）头头霉素霉素类类和氧和氧头孢烯类头孢烯类抗生素抗生素:主要主要 有有头孢头孢西丁、西丁、头孢头孢替坦、替坦、头孢头孢美美唑唑。（三）碳青霉（三）碳青霉烯类烯类抗生素抗生素:主要有主要有亚亚胺培南、胺培南、米洛培南、必安培南、帕尼培南。米洛培南、必安培南、帕尼培南。（四）（四）内内酰酰胺胺类类抑制抑制剂剂:主要有克拉主要有克拉维维酸酸 舒巴坦和他舒巴坦和他唑唑巴坦。巴坦。所有所有内内酰酰胺胺类类抗生素抗生素都能抑制都能抑制细细胞壁粘胞壁粘肽肽合成合成酶酶，即青霉素，即青霉素结结合蛋白合蛋白（penicillin binding proteins，PBPs），），从而阻碍从而阻碍细细胞壁粘胞壁粘肽肽合成，使合成，使细细菌胞壁菌胞壁缺缺损损编辑课件（二）头霉素类和氧头孢烯类抗生素:主要编辑课件4四、氨基糖苷四、氨基糖苷类类抗生素抗生素 可干可干扰细扰细菌菌蛋白蛋白质质合成合成,主用于主用于对对革革兰兰氏阴性菌氏阴性菌、绿脓绿脓杆菌杆菌等感染等感染 的治的治疗疗 按其来源分按其来源分为为：由由链链霉菌属霉菌属发发酵酵滤滤液提取液提取获获得，有得，有链链霉素、卡那霉素、卡那 霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龙龙霉素、新霉霉素、新霉 素；素；由由小小单单胞菌属胞菌属发发酵酵滤滤液中提取，有液中提取，有庆庆大霉素、福大霉素、福 提霉素；提霉素；半合成半合成氨基糖苷氨基糖苷类类，有阿米卡星、奈替米星、地，有阿米卡星、奈替米星、地 贝贝卡星等。卡星等。编辑课件四、氨基糖苷类抗生素编辑课件5五、五、喹诺酮类喹诺酮类抗生素抗生素 是一种是一种DNA旋旋转转酶酶抑制抑制剂剂，它作用于，它作用于细细菌菌DNA旋旋转转酶酶，干，干扰扰DNA超螺旋超螺旋结结构的解旋，从而阻碍构的解旋，从而阻碍DNA的复的复制。制。第一代第一代 为为窄窄谱谱抗生素，有新抗生素，有新恶恶酸、奈酸、奈啶啶酸和酸和恶恶 喹喹酸。酸。第二代第二代 为为广广谱类谱类抗生素，抗菌抗生素，抗菌强强度依次度依次为环为环丙丙 沙星、氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、沙星、氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、培氟沙星、培氟沙星、诺诺氟沙星。氟沙星。第三代第三代 为为超广超广谱类谱类抗生素，有司帕沙星、妥舒抗生素，有司帕沙星、妥舒 沙星、左氟沙星等。沙星、左氟沙星等。编辑课件五、喹诺酮类抗生素编辑课件6六、大六、大环环内内酯类酯类抗生素抗生素:作用于核糖体作用于核糖体50S亚亚基，抑制基，抑制肽酰肽酰基基转转移移酶酶，阻止阻止转肽转肽作用和作用和mRNA位移，抑制位移，抑制细细菌蛋白菌蛋白质质的的合成。合成。常用的有：常用的有：红红霉素、柱晶白霉素、麦迪霉素、霉素、柱晶白霉素、麦迪霉素、乙乙酰酰螺旋霉素。螺旋霉素。七、四七、四环环素、素、氯氯霉素和林可霉素和林可酰酰胺胺类类抗生素抗生素 （一）四（一）四环环素素为为广广谱谱抗生素，抗生素，能特异性地与能特异性地与细细菌菌核糖体核糖体30S亚亚基的基的A位置位置结结合。合。抗菌活性的抗菌活性的顺顺序序 为为米米诺环诺环素多西素多西环环素美他素美他环环素地美素地美环环素。素。编辑课件六、大环内酯类抗生素:编辑课件7（二）（二）氯氯霉素霉素类类抗生素，包括抗生素，包括氯氯霉素、霉素、甲甲砜砜霉素。霉素。（三）林可（三）林可酰酰胺胺类类抗生素，主要有抗生素，主要有盐盐酸酸 林可霉素、克林霉素。林可霉素、克林霉素。八、糖八、糖肽类肽类抗生素抗生素 常用的有万古霉素常用的有万古霉素 和替卡拉宁和替卡拉宁 编辑课件（二）氯霉素类抗生素，包括氯霉素、编辑课件8九、磺胺九、磺胺类药类药物及增效物及增效剂剂分三分三类类：用于全身感染的用于全身感染的药药物，分物，分为为短效、短效、中效、中效、长长效三效三类类，有磺胺甲，有磺胺甲恶唑恶唑，磺胺磺胺嘧啶嘧啶、磺胺甲氧吡、磺胺甲氧吡嗪嗪；肠肠道起作用的道起作用的药药物有柳氮磺胺物有柳氮磺胺啶银啶银、磺胺二甲氧磺胺二甲氧嘧啶嘧啶；局部局部应应用的用的药药物有磺胺米隆、磺胺物有磺胺米隆、磺胺 醋醋酰钠酰钠。编辑课件九、磺胺类药物及增效剂分三类：编辑课件9十、其他合成抗菌十、其他合成抗菌药药 1.1.硝基硝基呋呋喃喃类类 用于用于肠肠道、尿路感染和道、尿路感染和 外用消毒外用消毒 ，有，有呋呋喃坦喃坦啶啶和和呋呋喃喃唑酮唑酮。2.2.硝基咪硝基咪唑类唑类 对厌对厌氧菌有抗菌作用，氧菌有抗菌作用，对对 需氧菌无效，有甲硝需氧菌无效，有甲硝唑唑和替硝和替硝唑唑。编辑课件十、其他合成抗菌药编辑课件10第二第二节节 抗菌抗菌药药物敏感性物敏感性试验试验（ASTAST）一、意一、意义义可可预测预测抗菌治抗菌治疗疗的效果，的效果，“敏感敏感”治治疗疗可能有效；可能有效；“耐耐药药”肯定失肯定失败败；指指导导医生医生选择选择使用抗生素，使用抗生素，ASTAST的的结结果果为为“耐耐药药”，即，即应应更更换药换药物；物；提供所提供所选择药选择药物的依据；物的依据；监测监测耐耐药药性，分析耐性，分析耐药药菌菌变变迁，掌握耐迁，掌握耐药药菌感染菌感染 病流行病学，控制和病流行病学，控制和预预防耐防耐药药菌感染菌感染发发生和流行。生和流行。编辑课件第二节 抗菌药物敏感性试验（AST）一、意义编辑课件11二、二、试验试验常常规规抗菌抗菌药药物物选择选择 在在临临床上将床上将试验药试验药物分成物分成A A、B B、C C、U U四四组组,A A组组 所列的抗生素所列的抗生素为为常常规规首首选药选药敏敏试验药试验药物物,B B组组 为临为临床使用主要抗生素床使用主要抗生素,尤其在医院感染尤其在医院感染时时使用的抗生素，可在下列情况下使用：使用的抗生素，可在下列情况下使用：对对A A组组同同类类抗生素耐抗生素耐药药；标标本来源不同本来源不同时时，如三代，如三代头头孢孢菌素使用于菌素使用于脑脑脊液中的脊液中的肠肠杆菌，磺胺甲杆菌，磺胺甲恶唑恶唑使使用于尿道分离的用于尿道分离的细细菌；菌；多种微生物感染；多种微生物感染；多多部位感染；部位感染；感染流行的控制；感染流行的控制；对对A A组组抗生素抗生素过过敏、耐受或无反敏、耐受或无反应应。编辑课件二、试验常规抗菌药物选择 在临床上将试验药物分成A、B、C、12C C组组 药药物物用于用于对对A A组药组药物耐物耐药药的流行菌株或的流行菌株或 对对A A组药组药物物过过敏的病人和某些不常敏的病人和某些不常见见的的 细细菌菌（如（如肠肠外分离的沙外分离的沙门门菌属或耐万菌属或耐万 古霉素古霉素肠肠球菌）。球菌）。U U组组 仅仅用于尿道中分离的用于尿道中分离的细细菌菌，不作，不作为为尿尿 道外分离菌的常道外分离菌的常规药规药敏敏试验试验。编辑课件C组 药物用于对A组药物耐药的流行菌株或编辑课件13建议非苛氧菌常规药敏试验和报告应考虑的抗菌药物分组细菌A组B组C组U组肠杆菌科氨苄西林头孢唑啉头孢噻吩庆大霉素阿莫西林/克拉维酸或氨苄西林头孢孟多或头孢呋辛头孢吡污头孢美唑头孢哌酮头孢西丁头孢噻污环丙沙星或左氟沙星亚胺培南甲氧苄定氨曲南头孢他啶(可指示产ESBLs)氯霉素卡那霉素奈替米星四环素妥布霉素羧苄西林洛美沙星或氧氟沙星加替沙星氯碳头孢磺胺异恶唑甲氧苄啶呋喃妥因编辑课件建议非苛氧菌常规药敏试验和报告应考虑的抗菌药物分组细菌A组B14 建议非苛氧菌常规药敏试验 和报告应考虑的抗菌药物分组细菌A组B组C组U组 葡 萄 球 菌 属 细 菌苯唑西林青霉素阿奇霉素或克拉霉素或红霉素克林霉素万古霉素泰利霉素利奈唑胺环丙沙星或左氟沙星或氧氟沙星氯霉素庆大霉素利福平四环素罗美沙星或诺氟沙星磺胺异恶唑甲氧苄啶呋喃妥因编辑课件 建议非苛氧菌常规药敏试验 和报告应考虑的抗菌药物分组细菌A15(一）非苛养菌一）非苛养菌药药敏敏试验试验抗生素的抗生素的选选用用 A A组组一一级试验级试验并常并常规报规报告的抗微生物告的抗微生物药药,如葡萄球菌属用苯如葡萄球菌属用苯唑唑西林和青霉素。西林和青霉素。B B组组一一级试验级试验有有选择报选择报告的抗微生物告的抗微生物药药,如如肠肠球菌属用万古霉素球菌属用万古霉素 。C C组组补补充充试验试验有有选择报选择报告的抗微生物告的抗微生物药药，如葡萄球菌属用如葡萄球菌属用氯氯霉素霉素 。U U组组仅仅用于泌尿道的用于泌尿道的补补充充实验实验的抗微生物的抗微生物药药，如葡萄球菌属用洛美沙星和，如葡萄球菌属用洛美沙星和诺诺氟沙星。氟沙星。编辑课件(一）非苛养菌药敏试验抗生素的选用 A组一级试验并常规报告的16(二）苛养菌二）苛养菌药药敏敏试验试验抗生素的抗生素的选选用用A A组组一一级试验级试验并常并常规报规报告的抗微生物告的抗微生物药药,如如肺炎肺炎链链球菌球菌用用红红霉素霉素和青霉素。和青霉素。B B组组一一级试验级试验有有选择报选择报告的抗微生物告的抗微生物药药,如如肺炎肺炎链链球菌球菌用用头头孢噻肟孢噻肟或或头头孢孢曲曲 松松。C C组补组补充充试验试验有有选择报选择报告的抗微生物告的抗微生物药药，如如肺炎肺炎链链球菌球菌用用头头孢呋孢呋辛辛。编辑课件(二）苛养菌药敏试验抗生素的选用A组一级试验并常规报告的抗微17 稀释法和纸片扩散法 稀释法是在体外定量检测抗菌药物抑制待测菌生长活性的方法,抗菌药物在液体或固体培养基中稀释.（一）液体稀释法 原理:以MH（水解 蛋白）液体培养基将抗菌药物做不同浓度的稀释，然后接种待测菌，定量测定抗菌药物抑制或杀死该菌的最低（或最小）抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）。三、三、药敏试验方法编辑课件 稀释法和纸片扩散法 三、药敏试验方法编辑课18材料：抗菌药物(配制见表)培养基：一般采用MH液体培养基。接种菌液的准备：挑取纯培养（平板）的4-5个菌落，种于3-5ml MH液体培养基中，35培养4-6小时；校正菌液浓度，使其相当于0.5个麦氏单位的浊度（1.28x108 cfu/ml）标准，再用MH液体培养基进行1：200的稀释后，在15 min内用完。无菌小试管：10-15支 无菌吸管：35培养箱编辑课件材料：编辑课件19操作步骤：1.取10支小试管，除第一支外，其余每管加于MH培养基1ml.2.吸取抗菌药物原液（1000 g/ml）5.12ml,加入液体培养基4.88ml，混合，吸出2ml加入第一和第二管中，每管加1ml，第二管混合后取出1ml加入第三管，依次类推直至9管，吸取1ml去掉，各管抗菌药物的实际含量依次分别为512、256、128、64、32、16、8、4、2、1 g/ml；另设培养液对照、待测菌生长对照、和质控菌生长对照。3.3.将一定浓度的待测菌悬液依次加入上述各管中，每管0.05ml，混匀。放入35培养箱12-18小时后观察结果。4.4.结果判断：凡无肉眼可见细菌生长的药物最低浓度即为该待测菌的最低抑菌浓度（MIC）;5.再以0.01ml容量接种环无菌管中取出一环种于血平板作次代培养，经35培养过夜后，观察最低药物浓度能杀死99.9%原始种于的细菌者，即为该菌的最低杀菌浓度（MBC）。编辑课件操作步骤：编辑课件20影响因素 1.培养基 pH、渗透压、电解质对结果均有影响。在MH培养基上不生长的细菌除外，一般都用该培养基。2.抗菌药物 必须采用标准粉剂。3.结果观察时间，应在12-18小时之间观察。质量控制：每次试验时应根据待测菌的不同而分别选用：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠艾希菌ATCC25922、粪肠球菌ATCC29212和铜绿假单胞菌ATCC27853等标准菌株在同一实验条件下作平行试验。其结果（MIC）超过或低于预期值范围一个稀释度以上，不应向临床发出报告。编辑课件影响因素编辑课件21 （二）（二）琼琼脂稀脂稀释释法法 原原 理理 琼琼脂脂选择选择法是法是将将药药物混匀于物混匀于琼琼脂培养基脂培养基中中，配制含不同，配制含不同浓浓度度药药物平板，使用多物平板，使用多头头接种接种器接种器接种细细菌，菌，经经孵育后孵育后观观察察细细菌生菌生长长情况，以情况，以抑制抑制细细菌生菌生长长的的琼琼脂平板所含脂平板所含药药物物浓浓度度测测得得 MICMIC。结结果判断果判断 将平板置于暗色、无反光表面上判将平板置于暗色、无反光表面上判断断试验终试验终点，以抑制点，以抑制细细菌生菌生长长的的药药物稀物稀释释度度为为终终点点浓浓度（磺胺可度（磺胺可见见少少许许散在散在细细菌生菌生长长）。）。结结果果报报告告 可用可用 MIC MIC（g/mlg/ml）或用敏感）或用敏感S S）、）、（中介（中介（I I）和耐）和耐药药（R R）报报告。告。编辑课件 （二）琼脂稀释法 原 理 琼脂选择法是将药物混匀于琼22纸纸片片琼琼脂脂扩扩散法散法 （一）（一）试验试验原理原理 将含有定量抗菌将含有定量抗菌药药物的物的纸纸片片贴贴在已接在已接种种测试测试菌的菌的琼琼脂平板上，脂平板上，纸纸片中所含的片中所含的药药物吸收物吸收琼琼脂中水分溶解后不断向脂中水分溶解后不断向纸纸片周片周围围扩扩散形成散形成递递减的梯度减的梯度浓浓度，在度，在纸纸片周片周围围抑抑菌菌浓浓度范度范围围内内细细菌的生菌的生长长被抑制，从而形被抑制，从而形成无菌生成无菌生长长的透明圈即的透明圈即为为抑菌圈。抑菌圈。抑菌圈的大小反映抑菌圈的大小反映测试测试菌菌对测对测定定药药物物的敏感程度，并与的敏感程度，并与该药对测试该药对测试菌的菌的MICMIC呈呈负负相关。相关。编辑课件纸片琼脂扩散法 （一）试验原理编辑课件23编辑课件编辑课件24(二二)材料材料1 1抗菌抗菌药药物物纸纸片片 选择选择直径直径为为6 635mm35mm，吸水量吸水量为为20l20l的的专专用用药药敏敏纸纸片用逐片用逐 片加片加样样或浸泡方法使每片含或浸泡方法使每片含药药量达量达规规 定所示。含定所示。含药纸药纸片密封片密封贮贮存存2288 且不超且不超过过1 1周。周。2 2培养基培养基 水解酪蛋白（水解酪蛋白（MHMH）培养基是）培养基是 兼性兼性厌厌氧菌和需氧菌氧菌和需氧菌药药敏敏试验标试验标准培准培 养基，养基，44保存。保存。编辑课件(二)材料1抗菌药物纸片 选择直径为635mm，编辑课件25（三）方法：三）方法：1.1.用用0 05 5麦氏比麦氏比浊标浊标准的菌液准的菌液浓浓度，度，在在琼琼 脂表面均匀涂片脂表面均匀涂片,在在15min15min内接种完内接种完毕毕。2.2.将含将含药纸药纸片片紧贴紧贴于于琼琼脂表面脂表面,35,35孵育孵育18h18h后后阅读结阅读结果。果。（四）（四）结结果判断和果判断和报报告告 用精确度用精确度为为1mm1mm的游的游标标卡尺量取抑菌圈卡尺量取抑菌圈直径。根据直径。根据NCCLSNCCLS标标准，准，作出作出“敏感敏感”,“”,“耐耐药药”和和“中介中介”的的判断。判断。编辑课件（三）方法：编辑课件26纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC g/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感丁胺卡那霉素 30g 14 15-16 17 32 16 氨苄青霉素 测肠杆菌 10g 11 12-13 14 32 8 测葡萄球菌 10g 28 29 测嗜血杆菌 10g 19 20 4 0.25 测肠球菌 10g 16 16 2编辑课件纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准抗菌药物与细菌 27 E E 试试 验验 （一）原理（一）原理 E E试试条是一条条是一条 5mm50mm 5mm50mm的无孔的无孔试剂载试剂载体，一面固定有体，一面固定有预预先制先制备备的，的，浓浓度呈度呈连续连续指数增指数增长长稀稀释释抗生素，另一面有抗生素，另一面有读读数和判数和判别别的刻度。将的刻度。将E E试试条放在条放在细细菌接种菌接种过过的的琼琼脂脂平板上，平板上，经经孵育孵育过过夜，夜，围绕试围绕试条明条明显显可可见见椭圆椭圆形抑菌圈，圈的形抑菌圈，圈的边缘边缘与与试试条交点的刻条交点的刻度度浓浓度即度即为为抗生素抑制抗生素抑制细细菌的特定菌的特定浓浓度度,又又称抑制称抑制浓浓度（度（ICIC），它与），它与MICMIC呈高度相关。呈高度相关。编辑课件 E 试 验 28编辑课件编辑课件29（二）（二）细细菌接种和加菌接种和加样样 使用厚度使用厚度为为4mmMH4mmMH琼琼脂平板，用脂平板，用0.50.5麦氏麦氏浓浓度的度的对对数期菌液涂布，待数期菌液涂布，待琼琼脂平板完全脂平板完全干燥，用干燥，用E E试验试验加加样样器将器将试试条放在已接种条放在已接种细细菌的平板表面，菌的平板表面，试试条全条全长应长应与与琼琼脂平板脂平板紧紧 密接触，密接触，试试条条MICMIC刻度面朝上刻度面朝上浓浓度最大度最大处处靠靠平板平板边缘边缘。编辑课件（二）细菌接种和加样编辑课件30 （三）（三）结结果判断和果判断和报报告告 读读取取椭圆环椭圆环与与E E试验试试验试条的交界点条的交界点ICIC值值。与与NCCLSNCCLS的稀的稀释释法法MICMIC参考参考值值高度相关。高度相关。编辑课件 （三）结果判断和报告编辑课件31四、四、药药物敏感物敏感试验结试验结果解果解释释“敏感敏感”即表示即表示测试测试菌可被菌可被测测定定药药物物常常规剂规剂量量 给药给药后后在体内达到的血在体内达到的血药浓药浓度度所抑制所抑制“耐耐药药”即表示即表示测试测试菌菌不能被在体内感染部位不能被在体内感染部位 可能达到的抗菌可能达到的抗菌药药物物浓浓度所抑制度所抑制，临临 床治床治疗疗无效。无效。“中介中介”者提示者提示该细该细菌菌对对常常规规用用药药体液或体液或组织组织 中的中的药药物物浓浓度的反度的反应应率低于敏感株率低于敏感株，使用高于正常使用高于正常给药给药量有量有疗疗效效。编辑课件四、药物敏感试验结果解释“敏感”即表示测试菌可被测定药物常32五、自五、自动动化化仪仪器器检测检测 Viter ViterATBATB系系统统和和MicroscanMicroscan是半是半自自动动或全自或全自动细动细菌菌鉴鉴定和定和药药敏系敏系统统，通通过过系系统统中中药药敏敏专专家系家系统统可可报报告分离告分离菌的菌的药药敏敏结结果。果。编辑课件五、自动化仪器检测 ViterATB系统和Micros33 第三节 细菌耐药性和产生机制一、一、细细菌的耐菌的耐药药性性 对对某种抗菌某种抗菌药药物敏感物敏感细细菌菌变变成成对该药对该药物物耐受称耐受称细细菌耐菌耐药药性。性。它可分它可分为为天然耐天然耐药药和和获获得性耐得性耐药药，前者，前者是通是通过过染色体染色体DNADNA突突变变而致，后者往往是由而致，后者往往是由质质粒、噬菌体及其他粒、噬菌体及其他遗传遗传物物质质携携带带外来外来DNADNA片段片段导导致致产产生的耐生的耐药药性。性。编辑课件 第三节 细菌耐药性和产生机制一、细菌的耐药性编辑课件34 突突变变可由可由细细菌自菌自发产发产生或在生或在X X线线等物理因等物理因素或化学物素或化学物质诱导产质诱导产生，一般只生，一般只对对一种或两一种或两种相似种相似药药物耐物耐药药，在，在细细菌耐菌耐药药性上不占主要性上不占主要地位。地位。获获得性耐得性耐药药可通可通过过接合、接合、转转化。化。转导转导、转换转换形式形式产产生耐生耐药药 。编辑课件 突变可由细菌自发产生或在X线等物理因编辑课件35二、二、细细菌耐菌耐药药性的生物化学机制性的生物化学机制 1.1.产产生生内内酰酰胺胺酶酶，水解，水解药药物物内内酰酰 胺胺环环而失去抗菌活性。而失去抗菌活性。2.2.产产生生钝钝化化酶酶使抗生素失活，使抗生素失活，钝钝化化酶酶有三有三类类：氨基糖苷氨基糖苷类钝类钝化化酶酶 ；氯氯霉素乙酸霉素乙酸转转移移酶酶；红红霉素霉素酶酶和其他和其他灭灭活活酶酶。编辑课件二、细菌耐药性的生物化学机制 1.产生内酰胺酶，水解药363.3.青霉素青霉素结结合蛋白合蛋白改改变变，导导致致对对抗生素的抗生素的 亲亲和力下降和力下降 。4.4.药药物作用靶位的改物作用靶位的改变变使抗生素不易使抗生素不易结结 合合产产生耐生耐药药性。性。5.5.抗菌抗菌药药物渗透障碍物渗透障碍，如外膜蛋白减少，如外膜蛋白减少 和和药药物外排作用等。物外排作用等。6.6.代代谢谢途径的改途径的改变变 。编辑课件3.青霉素结合蛋白改变，导致对抗生素的编辑课件37第四节 细菌耐药性检测 一、一、特殊菌特殊菌耐耐药药性表型性表型检测检测（一）（一）耐耐药筛选试验药筛选试验：琼琼脂脂筛选试验筛选试验 以以单单一一药药物物单单一一浓浓度度检测检测某种某种细细菌的耐菌的耐药药性。性。在含一定在含一定浓浓度度测试药测试药物的特殊培养上，点种物的特殊培养上，点种0.50.5麦麦氏比氏比浊浊度直接菌落配制度直接菌落配制细细菌菌悬悬液，液，3535孵育孵育24h24h后后观观察平板上是否有菌落生察平板上是否有菌落生长识长识要有要有1 1个菌落生个菌落生长长，均均视为视为耐耐药药。临临床上常用于床上常用于对对耐甲氧西林葡萄球菌耐甲氧西林葡萄球菌、耐耐 万古霉素万古霉素肠肠球菌，球菌，对庆对庆大霉素或大霉素或链链霉素高水平霉素高水平 耐耐药药的的肠肠球菌的球菌的检测检测。编辑课件第四节 细菌耐药性检测 一、特殊菌耐药性表型检测编辑课件38（二）折点敏感（二）折点敏感试验试验仅仅用特定抗生素用特定抗生素浓浓度（敏感、中介或耐度（敏感、中介或耐药药折点折点MICMIC）而不使用）而不使用测测定定MICMIC时时所用系列所用系列对对倍抗生素倍抗生素浓浓度度测试细测试细菌菌对药对药物的敏感性称物的敏感性称折点敏感折点敏感试验试验。当。当选择选择区分中介和耐区分中介和耐药药折折点点值药值药物物浓浓度度时时，若两种抗，若两种抗药药物物浓浓度培养度培养基均生基均生长长可判断可判断为为耐耐药药；如在两种；如在两种药药物物浓浓度均不生度均不生长则为长则为敏感；敏感；仅仅在在较较低低药药物物浓浓度度培养基中生培养基中生长长提示提示为为中介。中介。编辑课件（二）折点敏感试验仅用特定抗生素浓度（敏感、中介或耐药编辑课39（三）双相（三）双相纸纸片片试验试验 挑取血平板上菌落，稀挑取血平板上菌落，稀释释成成0.50.5麦氏麦氏浓浓度菌液。均匀涂布于度菌液。均匀涂布于MHMH平板。中央平板。中央贴贴上阿莫上阿莫西林西林/克拉克拉维维酸酸纸纸片，在距片，在距该纸该纸片片25mm25mm处处分分别贴头孢噻肟别贴头孢噻肟或或头孢头孢曲松、曲松、头孢头孢他他啶啶和氨曲和氨曲南等南等药药敏敏纸纸片作片作为为指示指示剂剂，3535孵育孵育18h18h观观察察结结果。果。若指示若指示剂剂在朝向阿莫西林在朝向阿莫西林/克拉克拉维维酸方向酸方向有抑菌圈有抑菌圈扩扩大的大的现现象（象（协协同同现现象），象），则说则说明明待待检检菌菌产产生超广生超广谱谱内内酰酰胺胺酶酶。编辑课件（三）双相纸片试验 挑取血平板上菌落，稀释成0.540（四）自（四）自动动化化仪仪器器 自自动动化化仪仪器器MicroscanMicroscan有有测测定抗菌定抗菌药药物抑物抑菌的菌的MICMIC值值功能。功能。原理原理是先是先测测定定细细菌菌对对抗生素的抗生素的MICMIC值值，当当头孢头孢他他啶啶与与头孢头孢他他啶啶十克拉十克拉维维酸的酸的MICMIC比比值值或或头孢噻肟头孢噻肟与与头孢噻肟头孢噻肟十克拉十克拉维维酸的酸的MICMIC比比值值大于或等于大于或等于8 8（即（即3 3个个对对倍稀倍稀释释度）即判度）即判定定为为此此细细菌菌产产生生ESBLESBL。编辑课件（四）自动化仪器 自动化仪器Microscan有测定抗菌41二、二、内内酰酰胺胺酶酶检测检测 1.1.头孢头孢哨哨噻噻吩吩滤纸滤纸片法片法 用接种用接种环环挑取受挑取受试试菌于商品化菌于商品化头孢头孢哨哨噻噻 吩吩滤纸滤纸片上，于片上，于1010分分钟钟内由黄色内由黄色转变为转变为 红红色即阳性色即阳性结结果，示果，示产产色色头孢头孢菌素的菌素的 内内酰酰胺胺环环被被酶酶打开。打开。编辑课件二、内酰胺酶检测编辑课件42 2.2.碘淀粉碘淀粉测测定法定法 用接种用接种环环挑取受挑取受试试菌混于青霉素溶液中，菌混于青霉素溶液中，室温下振室温下振摇摇3030分分钟钟。加入淀粉液后，再加。加入淀粉液后，再加 入碘液，溶液入碘液，溶液变蓝变蓝，继续继续振振摇摇。若。若检测检测菌菌 产产生生酶酶，则则可水解青霉素可水解青霉素内内酰酰胺胺环变环变 为为青霉素青霉素噻唑噻唑酸，后者与碘酸，后者与碘结结合，使碘淀合，使碘淀 粉复合物粉复合物转变为转变为无色，无色，1010分分钟钟之内之内蓝蓝色消色消 失者失者为产为产酶酶株。株。编辑课件 2.碘淀粉测定法 编辑课件43四、特殊耐四、特殊耐药药菌菌检测检测 （一）耐甲氧西林葡萄球菌（一）耐甲氧西林葡萄球菌检测检测1 1定定义义 对对1g1g苯苯唑唑西林西林纸纸片的抑菌圈直径片的抑菌圈直径 10mm10mm，或其，或其MICMIC4g4gmlml的的金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌；对对1g1g苯苯唑唑西林抑菌圈直径西林抑菌圈直径17mm17mm，或，或MIC MIC 0 05g5gmlml的的凝固凝固酶酶阴性葡萄球菌阴性葡萄球菌；都称耐甲西林葡萄球菌（都称耐甲西林葡萄球菌（MRSMRS）。）。编辑课件四、特殊耐药菌检测 （一）耐甲氧西林葡萄球菌检测编辑课442 2临临床意床意义义 MRS MRS不不论论其体外其体外药药敏敏试验结试验结果，所有果，所有的的内内酰酰胺胺类药类药物物和和内内酰酰胺胺内内酰酰胺胺酶酶抑制抑制剂剂均无均无临临床床疗疗效效；绝绝大多数的大多数的MRSMRS常示多重耐常示多重耐药药，包括，包括氨基糖苷氨基糖苷类类、大、大环环内内酯类酯类、四、四环环素素类类。编辑课件2临床意义 MRS不论其体外药敏试验结果，所有编辑课45（二）耐青霉素肺炎（二）耐青霉素肺炎链链球菌球菌检测检测1.1.定定义义 当当对对1 g1 gmlml苯苯唑唑西林西林纸纸片抑菌片抑菌 圈圈20mm20mm或或MICMIC0 006 g06 gmlml互互应视应视 为为耐青霉素肺炎耐青霉素肺炎链链球菌（球菌（PRSPPRSP）。）。2.2.临临床意床意义义PRSPPRSP对对氨氨苄苄西林、氨西林、氨苄苄西林西林 舒巴坦、舒巴坦、头孢头孢克克肟肟、头孢唑肟头孢唑肟，临临床治床治 疗疗的的疗疗效很低。但效很低。但应检测对头孢应检测对头孢曲松、曲松、头孢噻肟头孢噻肟和美咯培南的和美咯培南的MICMIC以判断是否以判断是否对对 这这些抗生素敏感。些抗生素敏感。编辑课件（二）耐青霉素肺炎链球菌检测1.定义 当对1 gml苯唑46（三）耐万古霉素（三）耐万古霉素肠肠球菌球菌检测检测1 1定定义义 对对 30g 30g万古霉素万古霉素纸纸片抑菌圈直片抑菌圈直 径径 14mm 14mm或其或其 MIC MIC32g32gmlml应视应视 为为耐万古霉素耐万古霉素肠肠球菌（球菌（VREVRE）。）。2 2临临床意床意义义 对对青霉素敏感的青霉素敏感的VREVRE可用青霉可用青霉 素和素和庆庆大霉素大霉素联联合治合治疗疗，若，若对对青霉素耐青霉素耐 药药而不是高水平耐氨基糖苷而不是高水平耐氨基糖苷类类可用壁霉可用壁霉 素素庆庆大霉素。大霉素。编辑课件（三）耐万古霉素肠球菌检测1定义 对 30g万古霉素纸片47（四四）超广超广谱谱内内酰酰胺胺酶酶肠肠杆菌科杆菌科细细菌菌检测检测 1 1定定义义 超广超广谱谱-内内酰酰胺胺酶酶就就是能水解青霉素是能水解青霉素、头孢头孢菌素菌素及及单单胺胺类类的的酶酶，主要由，主要由克雷伯菌克雷伯菌和和大大肠肠埃埃希菌希菌、肠肠杆菌杆菌等等细细菌菌产产生。生。编辑课件（四）超广谱内酰胺酶肠杆菌科细菌检测编辑课件48 初初筛试验筛试验 使用使用1 1种以上种以上药药物，其抑菌物，其抑菌环环直径直径满满足以下条件：足以下条件：对对 头孢头孢泊泊肟肟、头孢头孢他他啶啶（10ug10ug片）抑菌圈片）抑菌圈 22mm 22mm 或或 氨曲南、氨曲南、头孢噻肟头孢噻肟（30 ug30 ug片）片）27mm 27mm 为为初初筛试验筛试验阳性即阳性即为产为产ESBLESBL菌株。菌株。确确证试验证试验 经经头孢头孢他他啶啶（30ug30ug片）、片）、头孢头孢他他啶啶克拉克拉维维酸（酸（303010ug10ug）；）；头孢噻肟头孢噻肟30ug30ug、头孢噻肟头孢噻肟克拉克拉维维酸（酸（303010ug10ug）两两组组中任何一中任何一组药组药物加克拉物加克拉维维酸与不加克拉酸与不加克拉维维酸相比，酸相比，其抑菌其抑菌环环增大增大5mm5mm者，判断者，判断为产为产ESBLESBL菌株。菌株。2.试验方法 同K-B法编辑课件 初筛试验2.试验方法 同K-B法编辑课件49单纸片扩散法（初筛试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上贴头孢他啶(Ceftazidime,CAZ)、头孢噻肟(Cefotaxime,CTX)、头孢曲松(Ceftriaxone,CRO)、氨曲南(Aztreonam,ATM)、头孢泊肟(Cefprozil,CPD)纸片，置35过夜培养，若抑菌环直径CAZ22mm、CTX27mm、CRO25mm、ATM27mm、CPD22mm时可疑为产ESBLs菌株。编辑课件单纸片扩散法（初筛试验）编辑课件50双纸片增效法（确认试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上分别贴头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸、头孢曲松/克拉维酸、氨曲南/克拉维酸、头孢泊肟/克拉维酸纸片，置35过夜培养后量取抑菌环直径，与单纸片平皿对照，若加克拉维酸纸片较未加克拉维酸纸片抑菌环直径5mm，即为ESBL阳性。编辑课件双纸片增效法（确认试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于513 3临临床意床意义义 产产ESBLESBL克雷伯菌和大克雷伯菌和大肠肠埃希埃希 菌不菌不论论其体外其体外药药物敏感物敏感试验结试验结果如何，果如何，对对青霉素、青霉素、头孢头孢菌素和氨曲南治菌素和氨曲南治疗疗无无 效。效。编辑课件编辑课件52第五节 抗分枝杆菌药物敏感性试验 一、抗分枝杆菌一、抗分枝杆菌药药物物 第一第一线药线药物物为为异烟异烟肼肼、利福平、吡酸胺、利福平、吡酸胺、乙胺丁醇和乙胺丁醇和链链霉素；霉素；第二第二线药线药物包括物包括对对氨基水氨基水杨杨酸、乙硫异酸、乙硫异 烟胺、烟胺、环丝环丝氨酸、卷曲霉素、卡那氨酸、卷曲霉素、卡那 霉素、丁胺卡那霉素和利福布丁。霉素、丁胺卡那霉素和利福布丁。编辑课件第五节 抗分枝杆菌药物敏感性试验 53二、二、结结核分枝杆菌和核分枝杆菌和缓缓慢生慢生长长分枝分枝杆菌体外抑菌杆菌体外抑菌试验试验 （一）（一）结结核分枝杆菌体外核分枝杆菌体外药药敏敏试验试验指征指征 首次分离的分枝杆菌需做首次分离的分枝杆菌需做药药敏敏试验试验，有助于，有助于合理用合理用药药和和监测药监测药物敏感性。物敏感性。另外另外经过经过三个月正三个月正规规治治疗疗，标标本分离培养仍本分离培养仍为为阳性患者，或感染的阳性患者，或感染的严严重疾患（如播散性重疾患（如播散性结结核核病和病和结结核性核性脑脑膜炎）以及来自高耐膜炎）以及来自高耐药药流行区的患流行区的患者，均者，均须须做体外做体外药药敏敏试验试验。编辑课件二、结核分枝杆菌和缓慢生长分枝杆菌体外抑菌试验 （一）结核541 1培养基培养基 Middlebrook7H10 Middlebrook7H10琼琼脂添加油脂添加油 酸、白蛋白、葡聚精触酸、白蛋白、葡聚精触酶酶是慢生菌比例是慢生菌比例 法的推荐培养基；法的推荐培养基；2 2药药敏敏试验药试验药物物 抗菌抗菌药药物直接来自厂商，物直接来自厂商，不能用治不能用治疗疗的抗的抗结结核核药药物作物作为试验为试验用用 药药。药药物原液物原液浓浓度至少度至少为为1000g/ml1000g/ml，2020贮贮存期存期6 6个月。个月。编辑课件1培养基 Middlebrook7H10琼脂添加油编辑553 3细细菌接种菌接种直接直接比例比例法法药药敏敏试验试验采用涂片阳性患者采用涂片阳性患者标标本；接种物是充分消化、无本；接种物是充分消化、无杂杂菌菌污污染染的的标标本本,接种菌液的稀接种菌液的稀释释方法如下：方法如下：抗酸染色（抗酸染色（1000 1000）未）未见细见细菌，菌，荧荧光染光染色（色（450450）2525，菌液不稀，菌液不稀释释。抗酸染。抗酸染色（色（10001000）l l1010，荧荧光染色（光染色（450450）2525250250，菌液稀，菌液稀释释或或 10 101 1，10102 2。编辑课件3细菌接种直接比例法药敏试验采用涂片阳性患者编辑课件56观观察含察含药琼药琼脂格脂格细细菌生菌生长长情况用以情况用以4 4 表示：（：表示：（：5050100100个菌落；个菌落；2 2：100100200200个菌落；个菌落；3 3：200200500500个菌落；个菌落；4 4 ：500500个以上菌落）。若个以上菌落）。若测试测试菌生菌生长长数大于数大于对对照格菌落数照格菌落数1 1，即判，即判读为读为耐耐药药菌。菌。编辑课件观察含药琼脂格细菌生长情况用以4 编辑课件576 6质质量控制量控制结结核分枝杆菌核分枝杆菌 H37RV ATCC 27294 H37RV ATCC 27294为为一一线线、二二线药线药的敏感的敏感质质控菌株；控菌株；H37RV ATCC35820H37RV ATCC35820为链为链霉素耐霉素耐药质药质控菌株；控菌株；H37RV ATCC35822H37RV ATCC35822为为异烟耐异烟耐药质药质控菌株；控菌株；H37RV ATCC35826H37RV ATCC35826为环丝为环丝氨酸耐氨酸耐药质药质控菌株；控菌株；H37RV ATCC35827H37RV ATCC35827为为卡那霉素耐卡那霉素耐药质药质控菌株；控菌株；编辑课件6质量控制结核分枝杆菌 H37RV ATCC 27294为58三、快速生三、快速生长长分枝杆菌体外分枝杆菌体外药药敏敏试验试验 快速生快速生长长分枝杆菌是在合适的固体培养分枝杆菌是在合适的固体培养基上孵育基上孵育5 57 7天内能肉眼可天内能肉眼可见细见细菌菌落生菌菌落生长长。人人类类感染密切相关的有感染密切相关的有3 3种：偶种：偶发发分枝杆菌、分枝杆菌、龟龟分枝杆菌、分枝杆菌、龟龟分枝分枝亚亚种和种和脓肿亚脓肿亚种。种。药药物敏感物敏感试验试验操作方法基本同需氧和兼操作方法基本同需氧和兼性性厌厌氧菌。氧菌。编辑课件三、快速生长分枝杆菌体外药敏试验 快速生长分枝杆菌是在59第六节 厌氧菌体外抑菌试验由于由于厌厌氧菌感染系内源性感染，氧菌感染系内源性感染，厌厌氧氧菌菌药药物敏感性物敏感性稳稳定，一般不做体外定，一般不做体外药药敏敏试验试验。下述情况下述情况应应考考虑药虑药敏敏试验试验：明确明确厌厌氧菌引起的氧菌引起的严严重感染；重感染；已确已确证证的的厌厌氧菌感染，氧菌感染，经验经验性的性的选药选药治治疗疗未能奏未能奏效；效；需需长长期用期用药药的的厌厌氧菌感染。氧菌感染。编辑课件第六节 厌氧菌体外抑菌试验由于厌氧菌感染系内源性感染，厌氧编60厌厌氧菌体外氧菌体外药药敏敏试验试验的基本原理和方的基本原理和方法与需氧菌相同，只是在培养基、操法与需氧菌相同，只是在培养基、操作作环环境和培养条件等境和培养条件等应应根据根据厌厌氧菌的氧菌的特定需要特定需要变动变动。培养基。培养基为为布氏血布氏血琼琼脂脂再加人再加人补补充充剂剂 5g/ml 5g/ml氯氯化血化血红红素素,5 5脱脱纤维纤维羊羊,1g/ml Vit K,1g/ml Vit K。厌厌氧氧孵育条件孵育条件 ，质质控菌株控菌株为为脆弱脆弱类类杆菌杆菌ATCC25285ATCC25285。编辑课件厌氧菌体外药敏试验的基本原理和方编辑课件61第七节 抗真菌药物敏感性试验 一、抗真菌一、抗真菌药药物物 分成三分成三类类：多多烯类烯类抗生素抗生素 如两性霉素如两性霉素B B、制、制 霉菌素、曲古霉素等；霉菌素、曲古霉素等；毗咯毗咯类类 包括包括酮酮康康唑唑、伊曲康、伊曲康唑唑、氟康氟康唑唑、克霉、克霉唑唑、益康、益康唑唑等；等；其他其他类类 如氟胞如氟胞嘧啶嘧啶。编辑课件第七节 抗真菌药物敏感性试验 62二、抗真菌二、抗真菌药药物敏感性物敏感性试验试验 操作同抗菌操作同抗菌药药物敏感性物敏感性试验试验，原，原则为则为：提供两种以上有相当活性的抗提供两种以上有相当活性的抗 真菌真菌药药物的可信物的可信测测量方法；量方法；和体内的活性具有相关性，可和体内的活性具有相关性，可 预测预测治治疗疗的效果；的效果；可用来可用来监监控敏感群体菌株耐控敏感群体菌株耐药药 性性发发生；生；可可预预期研究新期研究新药药的潜在治的潜在治疗疗效能。效能。编辑课件二、抗真菌药物敏感性试验 操作同抗菌药物敏感性试验，63抗酵母菌的抗酵母菌的药药物敏感性物敏感性试验试验1 1培养基培养基 含谷氨酸胺和含谷氨酸胺和PHPH指示指示剂剂、不含碳酸不含碳酸氢钠氢钠，RPMI 1640RPMI 1640为试为试 验验用的培养基。用的培养基。2.2.药药物原液配制物原液配制 来自来自药药厂，不能厂，不能 使用使用临临床床应应用的用的药药物，原液物，原液1010倍倍 于最高于最高试验浓试验浓度，度，6060贮贮存。存。编辑课件抗酵母菌的药物敏感性试验1培养基 含谷氨酸胺和PH指示剂、643 3接种菌液制接种菌液制备备 沙氏沙氏琼琼脂培养基脂培养基3535 孵育孵育24h,24h,传传代两次，保代两次，保证纯证纯种，以种，以 RPMll640 RPMll640稀稀释释成成2102103 3CFUCFUmlml。药药 液液对对倍稀倍稀释为试验时释为试验时用量。用量。4.4.试验时应试验时应有生有生长对长对照和阴性照和阴性对对照。照。编辑课件3接种菌液制备 沙氏琼脂培养基35编辑课件655.5.结结果判断果判断 观观察各管（孔）生察各管（孔）生长长情情 况。二性霉素况。二性霉素B B的的MICMIC为为抑制抑制测试测试菌菌 肉眼可肉眼可见见生生长长的最低的最低药药物物浓浓度。度。5FC5FC 和吡咯和吡咯类类通常采用通常采用 80 80MICMIC判断判断标标准。准。6.6.质质量控制量控制 采用采用标标准菌株作准菌株作为为每次每次测测 定定质质控菌株，其控菌株，其MICMIC应应在在预预期期值值范范围围 内（内（g/ml）。）。编辑课件5.结果判断 观察各管（孔）生长情编辑课件66