血清学基础培训课程培训课件

血清学基血清学基础础培培训课训课程程In vivo reactions活体中的反应:抗体与入侵细胞结合，补体与抗体结合，导致入侵细胞裂解2血清学基础培训课程一、什么是血清学反应一、什么是血清学反应l血清学反应是指相应的抗原与抗体在体外体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。3血清学基础培训课程1、什么是抗原、什么是抗原l抗原（A substance that causes production of an antibody directed against itself）是指能刺激机体免疫系统产生免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等免疫应答产物，并能与之发生特异性结合的物质。产生的相应抗体与抗原结合，形成抗原抗体复合物，产生免疫反应，从而保护机体不受抗原侵害而造成破坏。一般抗原都是外来物体，如细菌、病毒、寄生虫等。4血清学基础培训课程2、什么是、什么是抗体抗体l机体受外来抗原物质刺激后，产生的一种与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白(Ig)被分为G，A，M,E,D等几类.最典型的抗体是IgG,有Y型三维结构,包含两套重链和轻链。5血清学基础培训课程IgG抗体的结构抗体的结构及与抗原的反应及与抗原的反应l 6血清学基础培训课程二、血清学反应的一般特点：二、血清学反应的一般特点：l1、抗原抗体的结合具有特异性，但有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。l2、抗原抗体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的。l3、抗原抗体的结合是按一定比例进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应。7血清学基础培训课程l4、血清学反应大体分为两个阶段进行，但其间无严格界限。第一阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原抗体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。8血清学基础培训课程抗体攻击抗原（中间是抗原）抗体攻击抗原（中间是抗原）9血清学基础培训课程最适比例示意图最适比例示意图10血清学基础培训课程三、血清学反应的类型l1）凝集反应）凝集反应l2）沉淀反应）沉淀反应l3）补体结合反应）补体结合反应11血清学基础培训课程1、Agglutination凝集反应凝集反应l颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutination reaction）。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应稀释抗体。lAgglutination is the process by which particulate antigen such as cells are aggregated to form large,visible aggregates if the specific antibody is present.12血清学基础培训课程）直接凝集反应）直接凝集反应l颗粒性抗原如细菌和细胞与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应(Direct agglution reaction)。13血清学基础培训课程a.玻片凝集法玻片凝集法l是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。如将含有白叶枯病菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即为阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定14血清学基础培训课程一种塑料试验板一种塑料试验板15血清学基础培训课程b.试管凝集法试管凝集法l是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其效价。因为要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，37，24小时后观察，血清最高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价。16血清学基础培训课程试管凝集法示意图试管凝集法示意图17血清学基础培训课程c.Microtiter Agglutination微皿板（96孔板）凝集法凝集法l1)Microtiter plates are plastic and usually contain 96 wells2)More efficient way to do assay as opposed to tubes18血清学基础培训课程微皿板凝集法示意图凝集法示意图19血清学基础培训课程）间接凝集反应）间接凝集反应l将可溶性抗原（抗体）先吸附在一种与免疫无关的，颗粒状微球表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在有电解质存在的条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应(Indirect agglutination)。由于载体增大了可溶性抗原的反应面积。当载体上有少量抗原与抗体结合。就出现肉眼可见的反应，敏感性很高。20血清学基础培训课程2、沉淀反应、沉淀反应可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。Precipitation involves combination of soluble antibody with soluble antigen to produce insoluble complexes.21血清学基础培训课程）环状沉淀反应：）环状沉淀反应：l是一种定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面出现白色的沉淀圆环。22血清学基础培训课程环状沉淀反应示意图环状沉淀反应示意图23血清学基础培训课程）絮状沉淀反应：）絮状沉淀反应：l将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者比例适当时，会出现肉眼可见的絮状沉淀，此为阳性反应。24血清学基础培训课程3、Complement Fixation补体结合反应lComplement fixation is the triggering of the classical complement pathway due to combination of antigen with specific antibody.l1)A very senstitive assay2)Used in a number of research application3)Somewhat difficult to control25血清学基础培训课程补体结合反应补体结合反应l补体结合反应(Complement fixation reaction)是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。补体无特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应。如果补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就会出现溶血现象，如果与细菌及相应抗体复合物结合，就会出现溶菌现象。其试验原理是补体不单独和抗原或抗体结合。如果出现溶菌，是补体与待检系统结合的结果，说明抗原抗体是相对应的，如果出现溶血，说明抗原抗体不相对应。此反应操作复杂，敏感性高，特异性强，能测出少量抗原和抗体，所以应用范围较广。26血清学基础培训课程补体结合反应示意图补体结合反应示意图27血清学基础培训课程四、实用血清学检测方法四、实用血清学检测方法l除上述玻片凝集法、环状沉淀法外最常用的有琼脂扩散法、ELISA、免疫电泳法和免疫荧光法免疫电泳法和免疫荧光法28血清学基础培训课程1、琼脂扩散法、琼脂扩散法l利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体对应，且二者比例合适，在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀线。每对抗原抗体可形成一条沉淀线。有几对抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种类型。单向扩散是一种定量试验。可用于免疫蛋白含量的测定。而双向扩散多用于定性试验。由于方法简便易行，常用于测定分析和鉴定复杂的抗原成分。29血清学基础培训课程琼脂单扩散试验示意图琼脂单扩散试验示意图30血清学基础培训课程琼脂双扩散试验结果琼脂双扩散试验结果32血清学基础培训课程Agar gel diffusion testl左图示抗体与样本都起反应l右图示抗体只与一个样本反应33血清学基础培训课程2、ELISA enzyme linked immuno-sorbent assay酶联免疫结合法 1)One of the most sensitive reactions 2)Easy to set up and run3)Commonly used in diagnostic applications34血清学基础培训课程双抗体夹心双抗体夹心ELISA法示意图35血清学基础培训课程双抗体夹心双抗体夹心ELISA法示意图36血清学基础培训课程双抗体夹心双抗体夹心ELISA捕获试验37血清学基础培训课程3、Immunoelectrophoresis免疫电泳法l1)Provides some comparative information2)May tell you the number of antigens in a preparation38血清学基础培训课程免疫电泳法示意图39血清学基础培训课程免疫电泳法结果40血清学基础培训课程强反应与弱反应41血清学基础培训课程4、Immunofluorescence免疫荧光法l1)Often used with the fluorescent microscope2)Compounds fluoresce in the presence of uv light42血清学基础培训课程免疫荧光法示意图43血清学基础培训课程免疫荧光法结果44血清学基础培训课程免疫荧光法结果45血清学基础培训课程免疫荧光法结果46血清学基础培训课程