蛋白质的化学课件

第一章第一章 蛋白蛋白质的化学的化学第一节氨基酸第一节氨基酸第二节蛋白质的共价结构第二节蛋白质的共价结构第三节蛋白质的三维结构第三节蛋白质的三维结构第四节蛋白质的结构与功能第四节蛋白质的结构与功能第五节蛋白质的分离纯化和鉴定第五节蛋白质的分离纯化和鉴定 第一第一节氨基酸（氨基酸（aminoacidaminoacid）一、氨基酸一、氨基酸 蛋白蛋白质的构件分子的构件分子 二、氨基酸的分二、氨基酸的分类三、氨基酸的酸碱化学三、氨基酸的酸碱化学四、氨基酸的化学反四、氨基酸的化学反应五、氨基酸的物理性五、氨基酸的物理性质六、氨基酸的分析分离六、氨基酸的分析分离 一、氨基酸一、氨基酸蛋白蛋白质的构件分子的构件分子（一）蛋白质的水解（一）蛋白质的水解 蛋白蛋白质蛋白蛋白胨多多肽二二肽氨基酸氨基酸 蛋白质和多肽的肽键与一般的酰胺键一样蛋白质和多肽的肽键与一般的酰胺键一样可以被酸碱或蛋白酶催化水解，酸或碱能够将可以被酸碱或蛋白酶催化水解，酸或碱能够将多肽完全水解，酶水解一般是部分水解多肽完全水解，酶水解一般是部分水解.1、酸水解、酸水解常用常用6 mol/L的盐酸或的盐酸或4 mol/L的硫酸在的硫酸在105-110条件下进行水解，反应时间约条件下进行水解，反应时间约20小时。小时。此法的优点是不引起消旋，得到的是此法的优点是不引起消旋，得到的是L-氨基酸。氨基酸。缺点是色氨酸被沸酸完全破坏；含有羟缺点是色氨酸被沸酸完全破坏；含有羟基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有一小部基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有一小部分被分解；天门冬酰胺和谷氨酰胺侧链分被分解；天门冬酰胺和谷氨酰胺侧链的酰胺基被水解成了羧基。的酰胺基被水解成了羧基。2、碱水解、碱水解一般用一般用5 mol/L氢氧化钠煮沸氢氧化钠煮沸10-20小时。小时。由于水解过程中许多氨基酸都受到不同由于水解过程中许多氨基酸都受到不同程度的破坏；产生消旋现象，其产物是程度的破坏；产生消旋现象，其产物是D-型和型和L-型氨基酸的混合物。型氨基酸的混合物。该法的优点是色氨酸在水解中不受破坏该法的优点是色氨酸在水解中不受破坏3、酶水解、酶水解应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。但水解往往不彻底，产物为较小的肽消旋化。但水解往往不彻底，产物为较小的肽段。段。目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶（proteolytic enzyme）或称蛋白酶）或称蛋白酶（proteinase）已有十多种。已有十多种。最常见的蛋白水解酶有以下几种：胰蛋白酶、最常见的蛋白水解酶有以下几种：胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶。糜蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶。（二）（二）-氨基酸的一般结构氨基酸的一般结构蛋白质都由蛋白质都由20种常见氨基酸种常见氨基酸（基本氨基酸）（基本氨基酸）组成。组成。氨基酸的结构通式：氨基酸的结构通式：19种氨基酸具有一级种氨基酸具有一级氨基氨基（-NH3+）和羧基（）和羧基（-COOH）结合到）结合到碳原子（碳原子（C），同时结合到（），同时结合到（C）上）上的是的是H原子和各种侧链（原子和各种侧链（R）；）；Pro具有二具有二级氨基（级氨基（-亚氨基酸）。亚氨基酸）。L-L-氨基酸的结构通式氨基酸的结构通式从氨基酸的结构通式可以看出：1、构成蛋白质的氨基酸均为L氨基酸。2、除R为H（甘氨酸）外，其余氨基酸均具有旋光性。3、各种氨基酸的区别在于侧基R基上。氨基酸的构型：构成蛋白质的氨基酸除甘氨酸外，均含有碳原子，在空间各原子有两种排列方式：L构型与D构型，它们的关系就像左右手的关系，互为镜像关系，下图以丙氨酸为例：二、氨基酸的分类（一）根据来源分：内源氨基酸和外源氨一）根据来源分：内源氨基酸和外源氨基酸基酸（二）从营养学角度分：必需氨基酸和非（二）从营养学角度分：必需氨基酸和非必需氨基酸必需氨基酸（三）根据是否组成蛋白质来分：（三）根据是否组成蛋白质来分：蛋白质中常蛋白质中常见氨基酸、蛋白质中稀有氨基酸和非蛋白氨基见氨基酸、蛋白质中稀有氨基酸和非蛋白氨基酸酸 1 1、蛋白质中常见氨基酸的结构、蛋白质中常见氨基酸的结构甘氨酸甘氨酸 Glycine 脂肪族氨基酸（中性）脂肪族氨基酸（中性）氨基乙酸氨基乙酸主要区别在侧链主要区别在侧链R基的不同基的不同 氨基酸的结构氨基酸的结构脂肪族氨基酸（中性）脂肪族氨基酸（中性）甘氨酸甘氨酸 Glycine 丙氨酸丙氨酸 Alanine-氨基丙酸氨基丙酸氨基酸的结构氨基酸的结构甘氨酸甘氨酸 Glycine 丙氨酸丙氨酸 Alanine缬氨酸缬氨酸 Valine脂肪族氨基酸（中性）脂肪族氨基酸（中性）-氨基异戊酸氨基异戊酸氨基酸的结构氨基酸的结构甘氨酸甘氨酸 Glycine 丙氨酸丙氨酸 Alanine缬氨酸缬氨酸 Valine亮氨酸亮氨酸 Leucine脂肪族氨基酸（中性）脂肪族氨基酸（中性）-氨基异己酸氨基异己酸氨基酸的结构氨基酸的结构甘氨酸甘氨酸 Glycine 丙氨酸丙氨酸 Alanine缬氨酸缬氨酸 Valine亮氨酸亮氨酸 Leucine异亮氨酸异亮氨酸 Ileucine脂肪族氨基酸（中性）脂肪族氨基酸（中性）-氨基氨基-甲基戊酸甲基戊酸2氨基酸的结构氨基酸的结构甘氨酸甘氨酸 Glycine 丙氨酸丙氨酸 Alanine缬氨酸缬氨酸 Valine亮氨酸亮氨酸 Leucine异亮氨酸异亮氨酸 Ileucine脯氨酸脯氨酸 Proline亚亚氨基酸（杂环）氨基酸（杂环）-吡咯烷基吡咯烷基-羧酸羧酸氨基酸的结构氨基酸的结构甘氨酸甘氨酸 Glycine 丙氨酸丙氨酸 Alanine缬氨酸缬氨酸 Valine亮氨酸亮氨酸 Leucine异亮氨酸异亮氨酸 Ileucine脯氨酸脯氨酸 Proline甲硫氨酸甲硫氨酸 Methionine脂肪族氨基酸（含硫）脂肪族氨基酸（含硫）-氨基氨基-甲硫基丁酸甲硫基丁酸氨基酸的结构氨基酸的结构甘氨酸甘氨酸 Glycine 丙氨酸丙氨酸 Alanine缬氨酸缬氨酸 Valine亮氨酸亮氨酸 Leucine异亮氨酸异亮氨酸 Ileucine脯氨酸脯氨酸 Proline甲硫氨酸甲硫氨酸 Methionine半胱氨酸半胱氨酸 Cysteine脂肪族氨基酸（含硫）脂肪族氨基酸（含硫）-氨基氨基-巯基丙巯基丙酸酸氨基酸的结构氨基酸的结构脂肪族氨基酸（脂肪族氨基酸（碱性碱性）精氨酸精氨酸 Arginine -氨基氨基-胍基戊胍基戊酸酸氨基酸的结构氨基酸的结构脂肪族氨基酸（脂肪族氨基酸（碱性碱性）精氨酸精氨酸 Arginine赖氨酸赖氨酸 Lysine，-二氨基己酸二氨基己酸氨基酸的结构氨基酸的结构碱性碱性氨基酸（杂环）氨基酸（杂环）精氨酸精氨酸 Arginine赖氨酸赖氨酸 Lysine组氨酸组氨酸 Histidine -氨基氨基-咪唑基丙咪唑基丙酸酸氨基酸的结构氨基酸的结构天冬氨酸天冬氨酸 Aspartate 脂肪族氨基酸（酸性）脂肪族氨基酸（酸性）-氨基丁二酸氨基丁二酸氨基酸的结构氨基酸的结构天冬氨酸天冬氨酸 Aspartate 谷氨酸谷氨酸 Glutamate脂肪族氨基酸（酸性）脂肪族氨基酸（酸性）-氨基戊二酸氨基戊二酸氨基酸的结构氨基酸的结构丝氨酸丝氨酸 Serine 脂肪族氨基酸（脂肪族氨基酸（含羟基含羟基）-氨基氨基-羟基丙羟基丙酸酸氨基酸的结构氨基酸的结构丝氨酸丝氨酸 Serine 苏氨酸苏氨酸 Threonine脂肪族氨基酸（脂肪族氨基酸（含羟基含羟基）-氨基氨基-羟基丁羟基丁酸酸氨基酸的结构氨基酸的结构天冬酰胺天冬酰胺 Asparagine脂肪族氨基酸（含酰胺）脂肪族氨基酸（含酰胺）氨基酸的结构氨基酸的结构天冬酰胺天冬酰胺 Asparagine谷酰胺谷酰胺 Glutamine脂肪族氨基酸（含酰胺）脂肪族氨基酸（含酰胺）氨基酸的结构氨基酸的结构芳香族氨基酸芳香族氨基酸苯丙氨酸苯丙氨酸Phenylalanine -氨基氨基-苯基丙苯基丙酸酸氨基酸的结构氨基酸的结构芳香族氨基酸芳香族氨基酸苯丙氨酸苯丙氨酸Phenylalanine酪氨酸酪氨酸Tyrosine -氨基氨基-对羟苯基丙对羟苯基丙酸酸氨基酸的结构氨基酸的结构芳香族氨基酸芳香族氨基酸苯丙氨酸苯丙氨酸Phenylalanine酪氨酸酪氨酸Tyrosine色氨酸色氨酸 TryptophanTrp -氨基氨基-吲哚基丙吲哚基丙酸酸 按按R R基极性分基极性分类2020种常种常见氨基酸氨基酸(1)(1)非极性非极性R R基团氨基酸：基团氨基酸：8 8种种AlaAla Val Val LeuLeu IleIle PhePhe Pro Met Pro Met TrpTrp (2)(2)极性不带电荷极性不带电荷R R基团氨基酸：基团氨基酸：7 7种种Ser Ser ThrThr AsnAsn GlnGln TyrTyr CysCys GlyGly(3)(3)带负电荷带负电荷R R基团氨基酸：基团氨基酸：2 2种种Asp Asp GluGlu(4)(4)带正电荷带正电荷R R基团氨基酸：基团氨基酸：3 3种种LysLys ArgArg His Hisn根根据据R R侧侧链链基基团团解解离离性性质质的的不不同同，可可将将氨基酸进行分类：氨基酸进行分类：1.1.酸酸性性氨氨基基酸酸GluGlu，AspAsp；侧侧链链基基团团在在中中性性溶溶液液中中解解离离后后带带负负电电荷荷的的氨氨基酸。基酸。2.2.碱碱性性氨氨基基酸酸HisHis，ArgArg，LysLys；侧侧链链基基团团在在中中性性溶溶液液中中解解离离后后带带正正电电荷荷的氨基酸。的氨基酸。3.3.中中性性氨氨基基酸酸 侧侧链链基基团团在在中中性性溶溶液液中中不不发发生生解解离离，因因而而不不带带电电荷荷的的氨氨基基酸酸。可分为：可分为：a)a)极极性性氨氨基基酸酸：GlyGly，TyrTyr，CysCys，SerSer，ThrThr，AsnAsn，GlnGln；b)b)非非极极性性氨氨基基酸酸：AlaAla，ValVal，LeuLeu，IleIle，ProPro，PhePhe ，MetMet，TrpTrp 。2.2.蛋白质中几种重要的稀有氨基酸蛋白质中几种重要的稀有氨基酸在在少少数数蛋蛋白白质质中中分分离离出出一一些些不不常常见见的的氨氨基基酸酸，通通常常称称为为不常见蛋白质氨基酸。不常见蛋白质氨基酸。这些氨基酸都是由相应的基本氨基酸衍生而来的。这些氨基酸都是由相应的基本氨基酸衍生而来的。其其中中重重要要的的有有4-4-羟羟基基脯脯氨氨酸酸、5-5-羟羟基基赖赖氨氨酸酸、N-N-甲甲基基赖赖氨氨酸酸、和和3,5-3,5-二二碘碘酪酪氨氨酸酸等等。这这些些不不常常见见蛋蛋白白质质氨氨基酸的结构如下。基酸的结构如下。3.3.非蛋白氨基酸非蛋白氨基酸广泛存在于各种细胞和组织中，呈游离或广泛存在于各种细胞和组织中，呈游离或结合态，但并不存在蛋白质中的一类氨基结合态，但并不存在蛋白质中的一类氨基酸，大部分也是蛋白质氨基酸的衍生物。酸，大部分也是蛋白质氨基酸的衍生物。H H2 2N-CHN-CH2 2-CH-CH2 2-COOH H-COOH H2 2N-CHN-CH2 2-CH-CH2 2-CH-CH2 2-COOH-COOH-丙氨酸丙氨酸-氨基丁酸氨基丁酸三、氨基酸的酸碱化学三、氨基酸的酸碱化学 1.1.氨基酸的兼性离子形式氨基酸的兼性离子形式 氨基酸的两个重要性质：氨基酸的两个重要性质：氨基酸晶体的熔点氨基酸晶体的熔点 高（高（200200 C C）；氨基酸使水的介电常数增高。）；氨基酸使水的介电常数增高。H H +H H3 3N-C-COON-C-COO-R R 氨基酸在水溶液中或在晶体状态时都以氨基酸在水溶液中或在晶体状态时都以兼性兼性离子离子形式存在。形式存在。2.2.氨基酸的两性解离氨基酸的两性解离在不同的在不同的pHpH条件下，两性离子的状态也随之发生变化。条件下，两性离子的状态也随之发生变化。pH1710净电荷+10-1正离子两性离子负离子等电点pI在同一个氨基酸分子上带有能放出质子的在同一个氨基酸分子上带有能放出质子的NH3+正离正离子（酸）和能接受质子的子（酸）和能接受质子的COO-负离子（碱），为负离子（碱），为两性电解质。两性电解质。在酸性溶液在酸性溶液 k k1 1 在晶体状态或水溶液中在晶体状态或水溶液中 k k2 2 在碱性溶液中在碱性溶液中 中的氨基酸中的氨基酸 的氨基酸的氨基酸 的氨基酸的氨基酸 R R+R R R R-k k1 1=R R H H+/R R+k k2 2=R R-H H+/R R k k1 1 和和k k2 2 分别是分别是COOHCOOH和和+H H3 3NN的表观解离常数。的表观解离常数。表观解离常数可用测定滴定曲线方法求得（拐点）。表观解离常数可用测定滴定曲线方法求得（拐点）。当当 R R=R R+时，时，pH=p kpH=p k1 1,当当 R R=R R-时，时，pH=pkpH=pk2 2 丙氨酸的解离：丙氨酸的解离：N+H3 N+H3 OH-Ala H+H3C C COOH H3C C COO-+H+K1=Ala+H H Ala+Ala N+H3 NH2 OH-Ala-H+H3C C COO-H3C C COO-+H+K2=Ala H H Ala Ala-K K 1 1、K K 2 2分别代表分别代表-COOHCOOH和和-NH-NH3+3+的表观解的表观解离常数，若侧链离常数，若侧链R R基有可基有可解离的基团，其表观解解离的基团，其表观解离常数用离常数用K K R R表示。表示。酸性溶酸性溶液中液中两性离两性离子状态子状态 丙氨酸的滴定曲线：丙氨酸的滴定曲线：1.00.500.51.00713pK1=2.34pI=6.02pK2=9.69Ala+Ala+AlaAlaAla Ala-Ala-ABpHHClNaOH丙氨酸的滴定曲线l当当1mol/L1mol/L的丙氨酸溶于的丙氨酸溶于水时，溶液的水时，溶液的pHpH约为约为6 6，此，此时丙氨酸为两性离子状态时丙氨酸为两性离子状态Ala Ala 物质的表观解离常数可以用测物质的表观解离常数可以用测定滴定曲线的实验方法求得。定滴定曲线的实验方法求得。利用利用Handerson-HasselbalchHanderson-Hasselbalch公式公式pH=pH=pkpk+质子受体质子受体/质子供体质子供体，已知已知pkpk1 1 pk pk2 2 ，可求出任一，可求出任一pHpH下一下一种氨基酸的各种离子的比例。种氨基酸的各种离子的比例。氨基酸的等电点氨基酸的等电点（isoeletric point）及其计算及其计算氨氨基基酸酸的的等等电电点点：当当外外液液pHpH为为某某一一pHpH值值时时，氨氨基基酸酸处处于于兼兼性性离离子子状状态态，氨氨基基酸酸分分子子中中少少数数解解离离时时，所所含含的的-NH-NH3 3+和和-COO-COO-数数目目正正好好相相等等，即即氨氨基基酸酸净净电电荷荷为为0 0。氨氨基基酸酸在在电电场场中中既既不不向向正正极极也也不不向向负负极极移移动动，这这一一pHpH值值即即为为氨氨基基酸的等电点，简称酸的等电点，简称pIpI。氨氨基基酸酸等等电电点点的的计计算算：侧侧链链不不含含离离解解基基团团的的中中性性氨氨基基酸酸，其其等等电电点点是是它它的的pKpK1 1和和pKpK2 2的的算算术术平平均均值值：pIpI =(pK(pK1 1+pK+pK2 2)/2)/2 同同样样，对对于于侧侧链链含含有有可可解解离离基基团团的的氨氨基基酸酸，其其pIpI值值也也决定于决定于两性离子两边的两性离子两边的pKpK值值的算术平均值。的算术平均值。酸性氨基酸：酸性氨基酸：pIpI=(pK=(pK1 1+pKpK R-COOR-COO-)/2)/2 硷性氨基酸：硷性氨基酸：pIpI=(pK=(pK2 2+pK+pKR-NH2 R-NH2)/2)/2 对侧链不解离的氨基酸，如对侧链不解离的氨基酸，如GlyGly k k1 1=R R H H+/R R+k k2 2=R R-H H+/R R 在在pIpI，R R-=R R+k k1 1.k.k2 2=H H+2 2 pH=pH=（pkpk1 1+pk+pk 2 2）/2=/2=pIpI 对侧链解离的氨基酸，如对侧链解离的氨基酸，如AspAspAspAsp+Asp Asp Asp Asp-Asp Asp k k1 1 k k2 2 k k3 3在在pIpI时，主要以时，主要以AspAsp存在，存在，AspAsp-和和 Asp Asp+很小且相等，很小且相等，AspAsp 可忽略。可忽略。k k1 1=AspAsp H H+/AspAsp+k k2 2=AspAsp-H H+/AspAsp pIpI=（p kp k1 1+p k+p k 2 2）/2/2如如LysLysLysLys+LysLys+LysLys LysLys-k k1 1 k k2 2 k k3 3在在pIpI时，主要以时，主要以LysLys存在，存在，LysLys-和和 LysLys+很小且相等，很小且相等，LysLys+可忽略。可忽略。pIpI=（pkpk2 2+p k+p k 3 3）/2/2二十种氨基酸的二十种氨基酸的pK，及等电点及等电点3.3.氨基酸的甲醛滴定氨基酸的甲醛滴定用途用途：可以用来直接测定氨基酸。可以用来直接测定氨基酸。（滴定终点由（滴定终点由12左右移至左右移至9附近附近,即酚酞的变色区域即酚酞的变色区域)羟甲基衍生物羟甲基衍生物等电点等电点:1.1.某氨基酸的等电点即为该氨基酸某氨基酸的等电点即为该氨基酸两性离子两性离子两两边的边的pKpK值和的一半。值和的一半。2.2.在氨基酸等电点以上任何在氨基酸等电点以上任何pHpH，AAAA带净的负电带净的负电荷，在电场中向阳极移动；在氨基酸等电点荷，在电场中向阳极移动；在氨基酸等电点以下任何以下任何pHpH，AAAA带净的正电荷，在电场中向带净的正电荷，在电场中向阴极移动。阴极移动。3.3.在一定在一定pHpH范围中，溶液的范围中，溶液的pHpH离离AAAA等电点愈远，等电点愈远，AAAA带净电荷愈多。带净电荷愈多。四、氨基酸的化学反应四、氨基酸的化学反应 亚硝酸盐反应亚硝酸盐反应烃基化反应烃基化反应酰化反应酰化反应脱氨基反应脱氨基反应西佛碱反应西佛碱反应成盐成酯反应成盐成酯反应成酰氯反应成酰氯反应脱羧基反应脱羧基反应叠氮反应叠氮反应侧链反应侧链反应四、氨基酸的化学反应四、氨基酸的化学反应1 1 与与茚茚三三酮酮反反应应用途用途：常用于氨基酸的定性或定量分析。常用于氨基酸的定性或定量分析。茚三酮茚三酮水合茚三酮水合茚三酮+NH3+NH3弱酸弱酸紫色脯氨酸与茚三酮反应的产物：脯氨酸与茚三酮反应的产物：N N+黄色化合物黄色化合物四、氨基酸的化学反应四、氨基酸的化学反应 2 2 2 2 成成成成肽肽肽肽反反反反应应应应用途用途：是多肽和蛋白质生物合成的基本反应。是多肽和蛋白质生物合成的基本反应。四、氨基酸的化学反应四、氨基酸的化学反应 AAAADNFB+DNFB+多肽多肽 蛋白蛋白 3 3、与与2 2、4 4-二二硝硝基基氟氟苯苯反反应应-用途用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨末端氨基酸基酸.亦称亦称SangerSanger反应反应弱碱弱碱DNP-AADNP-AADNP-DNP-多肽多肽DNP-DNP-蛋白蛋白+HF+HF酸解酸解DNP-AADNP-AA（有机相）（有机相）+游离游离AAAA（水相）（水相）（黄色）（黄色）黄色黄色四、氨基酸的化学反应四、氨基酸的化学反应 4、与与苯苯异异硫硫氰氰酸酸酯酯反反应应用途用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨末端氨基酸基酸.亦称亦称EdmanEdman反应反应弱碱弱碱 AAAAPITC+PITC+多肽多肽 蛋白蛋白 AAAAPTCPTC多肽多肽 蛋白蛋白硝基甲烷中硝基甲烷中与酸作用与酸作用PTH-AA+PTH-AA+少一个少一个AAAA的多肽或蛋白的多肽或蛋白（乙酸乙酯）（乙酸乙酯）PTH-AAPTH-AA四、氨基酸的化学反应四、氨基酸的化学反应 5、与丹磺酰氯反应用途用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基酸末端氨基酸.DNS+DNS+AA AA 多肽多肽 蛋白蛋白弱碱弱碱DNS-DNS-AA AA 多肽多肽 蛋白蛋白酸酸DNS-AA+DNS-AA+游离游离AAAA（乙醚抽提，有荧光）（乙醚抽提，有荧光）6侧侧链链基基团团的的化化学学性性质质巯基（巯基（-SH-SH）的性质）的性质羟基的性质羟基的性质咪唑基的性质咪唑基的性质(1)(1)MillonMillon反应：反应：检测检测TyrTyr或含或含TyrTyr的蛋白质的反应。的蛋白质的反应。MillonMillon试剂：试剂：汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。产物：产物：红色的化合物。红色的化合物。(2)(2)FolinFolin反应：反应：检测检测TyrTyr或含或含TyrTyr的蛋白质的反应。的蛋白质的反应。FolinFolin试剂：试剂：磷钼酸、磷钨酸混合溶液。磷钼酸、磷钨酸混合溶液。产物：产物：蓝色的钼蓝、钨蓝。蓝色的钼蓝、钨蓝。(3)(3)坂口反应：坂口反应：检测检测ArgArg或含或含ArgArg的蛋白质的反应。的蛋白质的反应。坂口试剂：坂口试剂：萘酚的碱性次溴酸钠溶液。萘酚的碱性次溴酸钠溶液。产物：产物：砖红色的沉淀。砖红色的沉淀。侧链反应（颜色反应）：侧链反应（颜色反应）：(4)(4)PaulyPauly反应：反应：检测检测HisHis、TyrTyr及含及含HisHis、TyrTyr蛋白质蛋白质的反应。的反应。试剂：试剂：对氨基苯磺酸盐酸溶液、亚硝酸钠、碳酸钠混合对氨基苯磺酸盐酸溶液、亚硝酸钠、碳酸钠混合溶液溶液产物：产物：橘红色的化合物。橘红色的化合物。(5)(5)乙醛酸的反应：乙醛酸的反应：检测检测TrpTrp或含或含TrpTrp蛋白质的反应。蛋白质的反应。当当TrpTrp与乙醛酸和浓硫酸在试管中叠加时，产生分层与乙醛酸和浓硫酸在试管中叠加时，产生分层现象，界面出现紫色环。现象，界面出现紫色环。(6)(6)CysCys的反应：的反应：CysCys或含或含CysCys蛋白质与亚硝基亚铁氰酸蛋白质与亚硝基亚铁氰酸钠在稀氨的溶液中，产生一种红色的化合物。钠在稀氨的溶液中，产生一种红色的化合物。蛋白质的化学修饰：蛋白质的化学修饰：是指在较温和的条是指在较温和的条件下，以可控制的方式使蛋白质与某种件下，以可控制的方式使蛋白质与某种试剂（称化学修饰剂）起特异反应，以试剂（称化学修饰剂）起特异反应，以引起蛋白质中个别氨基酸侧链或功能团引起蛋白质中个别氨基酸侧链或功能团发生共价化学改变。发生共价化学改变。五、氨基酸的物理性质五、氨基酸的物理性质 除甘氨酸外，氨基酸含除甘氨酸外，氨基酸含有一个手性有一个手性-碳原子，碳原子，因此都具有旋光性因此都具有旋光性。比比旋光度是氨基酸的重要旋光度是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据。各种氨基酸的重要依据。1.氨基酸的旋光性氨基酸的旋光性2.2.氨基酸的光吸收氨基酸的光吸收构成蛋白质的构成蛋白质的2020种氨基种氨基酸在可见光区都没有光酸在可见光区都没有光吸收，但在吸收，但在远紫外区远紫外区(220nm)(220nm)均有光吸收。均有光吸收。在在近紫外区近紫外区(220-(220-300300nm)nm)只有酪氨酸、苯只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。光的能力。酪氨酸的酪氨酸的 maxmax275nm275nm，苯丙氨酸的苯丙氨酸的 maxmax257nm257nm，色氨酸的色氨酸的 maxmax280nm.280nm.3.3.高熔点高熔点4.4.一般均溶于水，溶于强酸、强碱；不溶一般均溶于水，溶于强酸、强碱；不溶于乙醚。于乙醚。5.5.氨基酸一般有味氨基酸一般有味六、氨基酸的分析分离六、氨基酸的分析分离纸层析（分配层析的一种）纸层析（分配层析的一种）分配柱层析分配柱层析分配薄层层析分配薄层层析离子交换层析离子交换层析气液层析气液层析高效液相层析高效液相层析作作业:1.按按R基团的极性基团的极性(非极性非极性,极性不带电荷极性不带电荷,极性极性带负电荷带负电荷,极性带正电荷极性带正电荷)对对20中常见氨基酸进中常见氨基酸进行分类行分类,分别写出各氨基酸的结构式及三字符分别写出各氨基酸的结构式及三字符.2.计算下列溶液的计算下列溶液的pH值值:(1)0.1mol/L Gly与与0.05mol/L NaOH 的等体积的等体积混合液混合液.(2)0.1mol/L Gly与与0.05mol/L HCl的等体积混的等体积混合液合液.