癌症浸润与代谢课件

CancerInvasion&MetastasisLiver Metastasis of Lung Cancer主要内容主要内容一、概述一、概述二、侵袭、转移的定义二、侵袭、转移的定义三、癌转移的条件及特点三、癌转移的条件及特点四、肿瘤转移过程四、肿瘤转移过程五、肿瘤转移的分子机制五、肿瘤转移的分子机制什么是转移？什么是转移？肿瘤侵袭（肿瘤侵袭（Invasion)是指恶性肿瘤细胞离开原发灶而侵是指恶性肿瘤细胞离开原发灶而侵犯邻近组织并继续增殖的过程。犯邻近组织并继续增殖的过程。肿瘤细胞的增殖肿瘤细胞的增殖肿瘤从原发灶脱离肿瘤从原发灶脱离E-钙粘连素下钙粘连素下降降肿瘤细胞的运动性和趋化性肿瘤细胞的运动性和趋化性血管生成与肿瘤侵袭血管生成与肿瘤侵袭侵袭包括四个过程侵袭包括四个过程肿瘤细胞的增殖肿瘤细胞的增殖 Ki67Ki67是一种增殖相关核抗原，检测其表达能特异性识别增是一种增殖相关核抗原，检测其表达能特异性识别增殖的肿瘤或正常细胞。反映细胞增殖活性的殖的肿瘤或正常细胞。反映细胞增殖活性的KiKi 67 67指数指数(Ki67 LI)(Ki67 LI)可作为判断肿瘤生长速度的指标。研究发现，可作为判断肿瘤生长速度的指标。研究发现，传统的反映肿瘤侵袭能传统的反映肿瘤侵袭能力的形态学标志力的形态学标志(如核多形性、细胞不典型性和有丝如核多形性、细胞不典型性和有丝分裂活跃等分裂活跃等)，与垂体腺瘤增殖和侵袭性相关性较低。，与垂体腺瘤增殖和侵袭性相关性较低。而肿瘤生长速度则被认为是反映垂体腺瘤侵袭性的而肿瘤生长速度则被认为是反映垂体腺瘤侵袭性的客观指标客观指标这与其具有高增殖性及高侵袭性有关。本实验应用腺病这与其具有高增殖性及高侵袭性有关。本实验应用腺病毒作为载体介导抑癌基因毒作为载体介导抑癌基因PTENPTEN体外转染人脑胶质瘤细体外转染人脑胶质瘤细胞胞U87U87，检测其细胞增殖力与体外侵袭力的改变，进而探，检测其细胞增殖力与体外侵袭力的改变，进而探讨讨PTENPTEN作为胶质瘤基因治疗靶点的可能性。作为胶质瘤基因治疗靶点的可能性。是恶性肿瘤细胞脱离原发部位，通过是恶性肿瘤细胞脱离原发部位，通过各种渠道转运到不连续的靶组织中继各种渠道转运到不连续的靶组织中继续增殖，形成同样性质肿瘤的过程。续增殖，形成同样性质肿瘤的过程。远隔部位继发瘤形成远隔部位继发瘤形成继发瘤继续生长继发瘤继续生长继发瘤再侵袭转移继发瘤再侵袭转移肿瘤转移肿瘤转移(Metastasis)人类对肿瘤侵袭转移的认识人类对肿瘤侵袭转移的认识肿瘤是高度异质性的细胞群体肿瘤是高度异质性的细胞群体转移是一个多步骤、序贯的复杂转移是一个多步骤、序贯的复杂过程过程 转移的发生是多因素相互作用的转移的发生是多因素相互作用的结果结果 （Fidler,IJ Surgical Oncology Clinics of North America.2001，10（2）：）：257-269）转移有什么特点？转移有什么特点？肿瘤转移特点肿瘤转移特点1.不同肿瘤其转移能力有差异不同肿瘤其转移能力有差异 低转移低转移 基底细胞癌、脊髓瘤、基底细胞癌、脊髓瘤、唾液腺腺样囊性癌、软骨肉瘤、唾液腺腺样囊性癌、软骨肉瘤、高转移高转移 甲状腺滤泡型腺癌、黑甲状腺滤泡型腺癌、黑色素瘤色素瘤2.2.不同类型肿瘤其转移途径不同不同类型肿瘤其转移途径不同淋巴道转移淋巴道转移 癌癌 如肺癌、如肺癌、NPCNPC血道转移血道转移 肉瘤、绒癌、肾癌肉瘤、绒癌、肾癌 前列腺癌等前列腺癌等3.转移的器官特异性转移的器官特异性原发瘤原发瘤转移器官转移器官乳腺癌乳腺癌 骨、脑、肾上骨、脑、肾上腺腺前列腺癌前列腺癌 骨骨肺小细胞癌肺小细胞癌 骨、脑、肝骨、脑、肝甲状腺癌甲状腺癌 骨骨肾癌肾癌 骨、肝、甲状骨、肝、甲状腺腺膀胱癌膀胱癌 脑脑睾丸癌睾丸癌 肝肝“Seed and Soil”theory By Paget S.The distribution of secondary growth in cancer of the breastLancet,1889Seed:tumor cell with metastatic potential Soil:microenviroment转移器官特异性的机制转移器官特异性的机制(1)肿瘤细胞表型的差异肿瘤细胞表型的差异 -异质性异质性表现表现细胞表面糖蛋白复合物、抗原、细胞表面糖蛋白复合物、抗原、酶活性、运动能力等酶活性、运动能力等如如 EGFR(-)/EGFR(+)HEx20EBERx20TFCx20HEx20EBERx20TFCx20NPC65HEx60EBERx60TFCx60NPC65（2）组织器官微环境差异）组织器官微环境差异实验证明实验证明不同肿瘤移植于相同器官不同肿瘤移植于相同器官同种肿瘤移植于不同器官同种肿瘤移植于不同器官侵袭转移能力有差异侵袭转移能力有差异如：部位相同如：部位相同 小鼠胃癌、人食管癌小鼠胃癌、人食管癌 不同部位不同部位 皮下、肌肉和腹腔皮下、肌肉和腹腔 继发器官微环境对肿瘤细胞的特继发器官微环境对肿瘤细胞的特殊亲和性殊亲和性 继发器官脉管内皮细胞继发器官脉管内皮细胞 及细胞外基质结构及细胞外基质结构 化学趋化因子作用化学趋化因子作用 器官相关的免疫状态器官相关的免疫状态 各种生长因子作用各种生长因子作用鼻咽癌转移鼻咽癌转移裸鼠模型裸鼠模型 肿瘤发生转移肿瘤发生转移 需要哪些条件？需要哪些条件？三、肿瘤细胞发生转移的条件及三、肿瘤细胞发生转移的条件及转移特点转移特点（一）转移发生的条件（一）转移发生的条件 1.细胞变异细胞变异转移异质性转移异质性瘤细胞遗传不稳定瘤细胞遗传不稳定 异质性演进异质性演进转移亚克隆优势生长转移亚克隆优势生长依据依据转移异质性实验依据转移异质性实验依据1977 FidlerCloneTissue cultureTissue cultureSpontanousSpontanousmetastasismetastasisNine timesNine timesCNE-2Z-H5本实验室进行裸鼠体内筛选高转移癌株：本实验室进行裸鼠体内筛选高转移癌株：BALB/c nude mice2.微环境和机体免疫状态微环境和机体免疫状态（1）毗邻细胞）毗邻细胞 旁分泌各种生长因子，旁分泌各种生长因子，促进肿瘤生长促进肿瘤生长（2）血液流变学改变）血液流变学改变 表现表现 血浆粘稠度及血浆粘稠度及 红细胞密度红细胞密度高高（3）机体的免疫反应）机体的免疫反应（4）细胞粘附性改变）细胞粘附性改变瘤细胞瘤细胞瘤细胞间粘附力下降瘤细胞间粘附力下降瘤细胞瘤细胞细胞外基质细胞外基质(ECM)粘粘附力增高附力增高 肿瘤转移的条件肿瘤转移的条件四、肿瘤转移过程及其影响因素四、肿瘤转移过程及其影响因素Fidler（一）原发瘤的形成与生长一）原发瘤的形成与生长 即正常细胞的转化和生长即正常细胞的转化和生长 受血管生成因子和抑制因子受血管生成因子和抑制因子 共同调控共同调控（二）肿瘤血管生成（二）肿瘤血管生成 始于肿瘤直径达始于肿瘤直径达1-2mm 与宿主血管网互相联系与宿主血管网互相联系（三）肿瘤细胞脱落并侵入基质三）肿瘤细胞脱落并侵入基质 1.瘤细胞瘤细胞 粘附能力改变粘附能力改变 同质型粘附力低同质型粘附力低 异质性粘附力高异质性粘附力高易易侵袭转移侵袭转移细胞粘附力与转移关系细胞粘附力与转移关系细胞系细胞系同质粘附同质粘附%转移率转移率%LA1 91.29 0LAD 88.5 16LA5 72.5 32 CNE2L4 63 13CNE2L2 92 100异质粘附异质粘附%瘤细胞间桥粒减少瘤细胞间桥粒减少瘤细胞表面负电荷增加瘤细胞表面负电荷增加钙粘蛋白钙粘蛋白表达水平下降表达水平下降瘤细胞表面受体改变瘤细胞表面受体改变瘤细胞表面纤维连接蛋白减少瘤细胞表面纤维连接蛋白减少有关影响因素有关影响因素2.瘤细胞表面负电荷增加瘤细胞表面负电荷增加实验表明：实验表明：细胞系细胞系电泳率电泳率转移率转移率%MFC-C-64 0.73m/sec/v/cm 7.5MFC-C-38 0.83 m/sec/v/cm 31.4CNE2L4 0.76 m/sec/v/cm 13CNE2L2 1.36 m/sec/v/cm 1003.瘤细胞运动能力增强瘤细胞运动能力增强 细胞系细胞系 36h (m/h)转移率转移率%LA1 198 0LAD 285 16LA5 316 32 CNE2L4 16.94 13CNE2L2 28.94 100v刺激瘤细胞运动而抑制其生长，刺激瘤细胞运动而抑制其生长，如如TGF,干扰素等干扰素等参与调控肿瘤细胞运动的因子参与调控肿瘤细胞运动的因子v促进瘤细胞运动与生长，如促进瘤细胞运动与生长，如 EGF,肝细胞生长因子等肝细胞生长因子等v刺激肿瘤细胞运动和侵袭的因子，刺激肿瘤细胞运动和侵袭的因子，如：自分泌运动因子如：自分泌运动因子(AMF)4.瘤细胞产生蛋白水解酶增加瘤细胞产生蛋白水解酶增加主要包括主要包括 血浆纤维蛋白溶解酶原激活物血浆纤维蛋白溶解酶原激活物（Plasminogen activators,PA)组织蛋白酶组织蛋白酶(cathepsins)基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs）（四）瘤细胞进入脉管系统四）瘤细胞进入脉管系统新生脉管管壁不完整新生脉管管壁不完整瘤细胞通过运动、粘附、侵袭血瘤细胞通过运动、粘附、侵袭血管基底膜而进入脉管管基底膜而进入脉管（五）瘤细胞与脉管粘附及瘤栓形成五）瘤细胞与脉管粘附及瘤栓形成循环中的瘤细胞互相粘连或与血循环中的瘤细胞互相粘连或与血小板粘附形成瘤栓。小板粘附形成瘤栓。瘤细胞通过粘附分子介导与内皮瘤细胞通过粘附分子介导与内皮细胞粘附（选择素、整合素及其细胞粘附（选择素、整合素及其受体等）受体等）但瘤细胞与内皮细胞粘附有异质但瘤细胞与内皮细胞粘附有异质性性（六）瘤细胞穿出血管（六）瘤细胞穿出血管内皮细胞内皮细胞层损伤层损伤内皮下基内皮下基底膜暴露底膜暴露瘤细胞瘤细胞粘附粘附降降 解解基底膜基底膜瘤细胞瘤细胞运动进运动进入间质入间质（七）转移灶生长及再侵袭转移七）转移灶生长及再侵袭转移瘤细胞与靶器官的实质细胞粘附瘤细胞与靶器官的实质细胞粘附瘤细胞和靶器官分泌各种生长因瘤细胞和靶器官分泌各种生长因子刺激瘤细胞增殖子刺激瘤细胞增殖新生血管形成新生血管形成微小转移的概念微小转移的概念v19711971年年 HuvosHuvos 直径直径22 FisherFisher直径直径1.31.3v19801980年年 BlackBlack直径小于受累淋巴结的直径小于受累淋巴结的20%20%作为标准作为标准v19931993年国际抗癌联盟年国际抗癌联盟(UICC)1(UICC)12 2v目前目前,直径直径20.05)VEGF165 2.050.03(P0.01)VEGF145 2.730.15(P0.05)VEGF121 1.650.01(P0.05)低氧诱导低氧诱导低氧诱导低氧诱导VEGF VEGF 蛋白表达蛋白表达蛋白表达蛋白表达 (Western-Blot)(Western-Blot)VEGF in hypoxic cells was(2.200.07)-fold of that in normoxic cells.*Independent Samples T-Test:t=8.944,P0.05)VEGF165 2.050.03(P0.01)VEGF145 2.730.15(P0.05)VEGF121 1.650.01(P0.05)低氧诱导低氧诱导低氧诱导低氧诱导VEGF VEGF 蛋白表达蛋白表达蛋白表达蛋白表达 (Western-Blot)Western-Blot)VEGF in hypoxic cells was(2.200.07)-fold of that in normoxic cells.*Independent Samples T-Test:t=8.944,P0.05（四）蛋白水解酶与肿瘤转移四）蛋白水解酶与肿瘤转移1.纤维蛋白溶解酶原激活剂及其纤维蛋白溶解酶原激活剂及其抑制剂抑制剂(PA and PAI)(1)PA的分类与功能的分类与功能 分组织型分组织型(t-PA)和尿激酶型和尿激酶型 (u-PA)为不同的基因产物，结构相似，为不同的基因产物，结构相似，单链丝氨酸蛋白酶。单链丝氨酸蛋白酶。参与肿瘤侵袭转移过程，包括细参与肿瘤侵袭转移过程，包括细胞分化、血管生成、细胞迁移、胞分化、血管生成、细胞迁移、基质降解等。基质降解等。luPAmRNA246bpMCNE-2Z CNE-2Z-H5CNE-2Z-H5-9图图1 uPA在鼻咽癌细胞中的表达在鼻咽癌细胞中的表达图图2 各各鼻鼻咽咽癌癌细细胞胞RT-PCR结结果果uPA mRNA与与GAPDH mRNA灰度比值灰度比值 包括包括PAI-1,2,3 PAI-1为糖蛋白为糖蛋白，52KD,PAI-2分子量分子量46.6KD,为为u-PA抑制剂抑制剂 在多数肿瘤中高表达，提示在多数肿瘤中高表达，提示 预后好。预后好。(2)PAI的分类与功能的分类与功能图图5 PAI-1 mRNA在鼻咽癌细胞中的表达在鼻咽癌细胞中的表达图图6 各各鼻鼻咽咽癌癌细细胞胞RT-PCR结结果果PAI-1 mRNA与与GAPDHmRNA灰度比值灰度比值 (1)分类与结构分类与结构 为为Zn 依赖的内肽酶，包括依赖的内肽酶，包括 胶原酶胶原酶(collagenase)明胶酶明胶酶(gelatinase)基质溶素基质溶素(tromitysinase)膜型膜型MMP(MT-MMPs)2.基质金属蛋白酶及其抑制剂基质金属蛋白酶及其抑制剂(MMPs/TIMPs)能降解能降解ECMECM中所有成份中所有成份。诱导和促进新生血管形成。诱导和促进新生血管形成。调节瘤细胞的粘附。调节瘤细胞的粘附。免疫组化检测鼻咽癌组织中免疫组化检测鼻咽癌组织中MMP-2,MMP-9,LMP-1的表达情况的表达情况慢性鼻咽炎鼻咽癌淋巴结转移癌MMP-2MMP-9（五）五）机体免疫与转移机体免疫与转移（1）NK细胞细胞 为第一道防线，无需抗原刺激为第一道防线，无需抗原刺激 可杀伤瘤细胞。可杀伤瘤细胞。实验依据：实验依据：1、参与控制转移的免疫细胞、参与控制转移的免疫细胞清除清除NK细胞细胞 小鼠小鼠环环磷酰磷酰胺胺移植肿瘤于小鼠移植肿瘤于小鼠转移早转移早 裸小鼠裸小鼠T细胞缺陷，细胞缺陷，NK细胞存在细胞存在移植肿瘤于小鼠移植肿瘤于小鼠转移率正常转移率正常 先天无先天无NK NK Bejge Bejge 小小鼠转移早鼠转移早（2）巨噬细胞）巨噬细胞 其活性与转移抑制能力呈正相关其活性与转移抑制能力呈正相关实验表明：实验表明：巨噬细胞抑制剂巨噬细胞抑制剂促进转移促进转移巨噬细胞激活剂巨噬细胞激活剂减少转移减少转移（3）T细胞细胞Ts细胞细胞 促进肿瘤生长与转移促进肿瘤生长与转移Th细胞细胞 增强杀伤增强杀伤T细胞的作用细胞的作用杀伤杀伤T细胞细胞 抑制和杀伤瘤细胞抑制和杀伤瘤细胞问题与展望：问题与展望：转移各步骤和不同微环境中癌细胞基因表转移各步骤和不同微环境中癌细胞基因表达谱变化尚难确定。达谱变化尚难确定。肿瘤临床诊断、疗效评价及预后判断的敏肿瘤临床诊断、疗效评价及预后判断的敏感标记物有待确定。感标记物有待确定。高通量技术平台的建立将为肿瘤转移研究高通量技术平台的建立将为肿瘤转移研究带来新的希望。带来新的希望。策略策略针对肿瘤细胞（针对肿瘤细胞（严打：严打：应用各种应用各种细胞毒药物）细胞毒药物）针对瘤细胞生存微环境（针对瘤细胞生存微环境（整治环整治环境境）二、抗转移治疗的新策略二、抗转移治疗的新策略抗转移治疗的新方法抗转移治疗的新方法1.1.抑制肿瘤血管生成抑制肿瘤血管生成 即针对肿瘤血管形成的某些即针对肿瘤血管形成的某些因子及其关键步骤进行干预因子及其关键步骤进行干预 抑制血管内皮细胞活化类抑制血管内皮细胞活化类药物，如药物，如RhuMAb VEGF，FLK-1(DC101)(2)抑制血管内皮细胞的分裂与抑制血管内皮细胞的分裂与 迁移迁移,如如Angiostatin(血管抑素），血管抑素），endostatin（内（内皮抑素），皮抑素），TNP-470(3)抑制基底膜或细胞外基质降解类药抑制基底膜或细胞外基质降解类药物物 (4)封闭整合素功能类药物封闭整合素功能类药物2.细胞粘附分子抑制剂与抗转移细胞粘附分子抑制剂与抗转移 （1）阻止粘附信号的传递）阻止粘附信号的传递 蛋白酪氨酸激酶蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂（抑制剂（Genistein)（3）增强）增强E-cadherin介导的同质介导的同质粘附粘附（2）抑制）抑制Integrins 依赖性的粘附依赖性的粘附 如如 环孢霉素等环孢霉素等3.3.蛋白酶抑制剂的应用蛋白酶抑制剂的应用（1）MMPs抑制剂抑制剂 a.Batimastat 为人工合成的小分子为人工合成的小分子MMP 抑制剂，能与抑制剂，能与MMP活性基活性基 团结合，能抑制团结合，能抑制MMP-2,9等等 b.Marimastas 为第二代人工合成为第二代人工合成MMP抑制剂，抑制剂，副作用小，病人耐受好等，能抑副作用小，病人耐受好等，能抑制多种制多种MMP活性活性 （2）uPA 抑制剂如抗抑制剂如抗uPA抗体抗体及多肽及多肽4.基因治疗基因治疗1.定义定义 基因治疗基因治疗 将正常的外源基因将正常的外源基因导入生物体或人体靶细胞内导入生物体或人体靶细胞内以弥补所缺失的基因、或关以弥补所缺失的基因、或关闭、降低异常表达的基因，闭、降低异常表达的基因，以达到治疗疾病的目的。以达到治疗疾病的目的。增强宿主抗癌免疫增强宿主抗癌免疫 恢复或增强抑癌基因的功能恢复或增强抑癌基因的功能 阻断癌基因阻断癌基因 增强化疗和放疗敏感性增强化疗和放疗敏感性 细胞基因杀伤效应细胞基因杀伤效应2.肿瘤转移基因治疗的策略肿瘤转移基因治疗的策略3.基因治疗的途径基因治疗的途径1.ex vivo 途径途径:将人体细胞从体内取出将人体细胞从体内取出,基基因改造因改造,再移植到人体中再移植到人体中.自体自体,同种异同种异体体,异种细胞异种细胞,同种异体或异种组织和器同种异体或异种组织和器官等官等.2.in vivo 途径途径:直接将基因转移到人体中直接将基因转移到人体中,如如DNA注射注射,口服口服,喷雾等喷雾等.有如普通治有如普通治疗药物疗药物,商业化发展方向所在商业化发展方向所在.基因治疗的ex vivo 途径基因治疗就与打针和吃药一样基因治疗就与打针和吃药一样.基因治疗的基因治疗的in vivo 途径途径举例举例 nm23 geneTIMP gene转染转染高转移癌细胞高转移癌细胞转移能力降低转移能力降低三、肿瘤侵袭转移研究的基本三、肿瘤侵袭转移研究的基本策略与技术策略与技术（一）研究策略（一）研究策略整体水平：人癌动物模型整体水平：人癌动物模型自发性癌症动物模型自发性癌症动物模型诱发性癌症动物模型诱发性癌症动物模型可移植性癌症动物模型（裸鼠，可移植性癌症动物模型（裸鼠，SCID小鼠）小鼠）转基因癌症动物模型转基因癌症动物模型细胞水平（细胞培养、杂交瘤技术等）细胞水平（细胞培养、杂交瘤技术等）裸小鼠特征：裸小鼠特征：外观无毛，裸体，皮肤薄，发育迟缓。外观无毛，裸体，皮肤薄，发育迟缓。无胸腺无胸腺T细胞功能欠缺细胞功能欠缺无细胞毒效应，无移植排斥无细胞毒效应，无移植排斥成年鼠成年鼠NK细胞活性增加细胞活性增加抵抗力低抵抗力低11号染色体突变号染色体突变SCID小鼠特征小鼠特征(Severe Combined Immune Deficency)外观正常外观正常16号染色体突变，号染色体突变，T、B缺陷缺陷免疫学特征为免疫学特征为T、B细胞明显减少细胞明显减少细胞水平（细胞培养技术等）细胞水平（细胞培养技术等）组织水平研究组织水平研究分子水平研究分子水平研究染色体水平染色体水平DNA水平水平RNA水平水平蛋白水平蛋白水平（二）高通量技术在肿瘤研究中（二）高通量技术在肿瘤研究中的应用的应用1.常用分子生物学技术的应用常用分子生物学技术的应用 重组重组DNA技术技术PCR,RT-PCR,PCR-SSCPSouthern blot,Northern blotWestern blot2.高通量技术的应用高通量技术的应用染色体、染色体、DNA水平水平(Genomics):比较比较基因组杂交基因组杂交(CGH)RNA水平水平(Transcriptomics):差异差异显示显示(DD-PCR),抑制消减杂交抑制消减杂交(SSH)，基因表达系列分析基因表达系列分析(SAGE),基因芯基因芯片片(cDNA array).蛋白质水平蛋白质水平(Proteomics):2-D gels比较基因组杂交比较基因组杂交(Comparative Genomic Hybridization,CGH)CGH 原理：原理：将两种不同荧光标将两种不同荧光标记的基因组记的基因组DNA等比例与正常分等比例与正常分裂中期染色体竞争杂交，分析每裂中期染色体竞争杂交，分析每条染色体上荧光强度比率，推测条染色体上荧光强度比率，推测待检待检DNA拷贝数变化。拷贝数变化。基本方法：基本方法：正常中期染色体制备正常中期染色体制备基因组基因组DNA分离分离DNA标记标记杂交和染色杂交和染色荧光镜检和图象分析荧光镜检和图象分析Tissue MicrodissectionequipmentsTissue MicrodissectionAnalysis of single cell by immunohistochemical stain(p53)V.Sequence analysis to detect mutationsIV.Stimulated PCR from single cellsIII.Microdissection of stained single cellsII.p53 Immunohistochemical stainingI.Ethanol fixation/paraffin embeddingBreastColonLaser Capture Microdissection(LCM)应用：应用：确定肿瘤染色体区确定肿瘤染色体区DNA扩增与丢失扩增与丢失对肿瘤进行分期与分级对肿瘤进行分期与分级诊断与鉴别诊断诊断与鉴别诊断预后与治疗反应预后与治疗反应RNA水平水平(Transcriptomics)研究研究差异显示差异显示(Differential display PCR,DD-PCR)原理：原理：基因差异表达基因差异表达用用oligo-dT引导逆转录，再用随机引物引导逆转录，再用随机引物和逆转录（锚定引物）扩增和逆转录（锚定引物）扩增cDNA片段，片段，PAGE胶分离，比较胶上差异条带识别胶分离，比较胶上差异条带识别差异表达基因。差异表达基因。操作步骤操作步骤样品样品RNA分离分离反转录成反转录成cDANPCR扩增扩增电泳电泳结果分析结果分析抑制削减杂交抑制削减杂交(SSH)样品样品1 1样品样品2 2基因芯片基因芯片原理与操作步骤原理与操作步骤在固相支持物上合成在固相支持物上合成/印迹探针阵列印迹探针阵列样品（样品（DNA/mRNA）标记标记样品与芯片杂交样品与芯片杂交激光扫描、计算机分析表达谱激光扫描、计算机分析表达谱蛋白质组技术（蛋白质组技术（Proteomics)表达蛋白质组学和功能蛋白质组学表达蛋白质组学和功能蛋白质组学蛋白质双向电泳（蛋白质双向电泳（2-D gel)图像采集与计算机分析图像采集与计算机分析质谱技术质谱技术蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术2-D gelsProtein arraysSummary:Tumor samplesGenomicstranscriptomicsproteomicsDelectionAmplificationMethylationMutation(CGH array)Protein profiles(2-D gelMass spectrometryprotein microarrayMolecular classificationBiomarkersTarget therapyGene profiles(cDNA microarray,SAGE)Tissue/cellsTissue arraysCell arraysNature is beautiful Research is fascinating 主要参考文献主要参考文献1.曾益新主编，曾益新主编，肿瘤学，肿瘤学，人民卫生出人民卫生出 版社：版社：1999，第一版，第一版2.汤钊猷主编，汤钊猷主编，现代肿瘤学现代肿瘤学，上海医，上海医 科大学出版社科大学出版社,2001，第二版，第二版3.陈意生等主编陈意生等主编,肿瘤分子细胞生物肿瘤分子细胞生物学学,人民军医出版社：人民军医出版社：2002，第一版，第一版3 3、高进主编，、高进主编，癌的侵袭与转移癌的侵袭与转移基础研究与临床基础研究与临床，北京医科大学，北京医科大学中国协和医科大学出版社，中国协和医科大学出版社，19961996，第一版，第一版4 4、鄂、鄂 征主编，征主编，癌变机理研究癌变机理研究，北京出版社，北京出版社，19991999，第一版，第一版5、近期有关肿瘤研究新文献、近期有关肿瘤研究新文献 Cancer,Cancer Research Nature,Science 国外医学国外医学.肿瘤学分册肿瘤学分册 .分子生物学分册分子生物学分册 .生理病理科学与临床分册生理病理科学与临床分册癌症癌症,中华肿瘤杂志等等。中华肿瘤杂志等等。