硅胶柱层析技术课件

硅胶柱硅胶柱层析技析技术1精选课件 常常说的的过柱子柱子应该叫柱叫柱层析分析分离，也叫柱色离，也叫柱色谱。我。我们常用的是以常用的是以硅胶或氧化硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。作固定相的吸附柱。其其实硅胶柱硅胶柱层析技析技术也可以称也可以称作硅胶吸附柱色作硅胶吸附柱色谱技技术2精选课件色色谱法，又称法，又称层析法。是一种以分配平衡析法。是一种以分配平衡为机理机理的分配方法。色的分配方法。色谱体系包含两个相，一个是固定体系包含两个相，一个是固定相，一个是流相，一个是流动相。当两相相相。当两相相对运运动时，反复多，反复多次的利用混合物中所含各次的利用混合物中所含各组分分配平衡性分分配平衡性质的差的差异，最后达到彼此分离的目的。异，最后达到彼此分离的目的。色色谱法按固定相的状法按固定相的状态可分可分为柱色柱色谱、平板色、平板色谱和棒色和棒色谱三种，而三种，而实验室中最常用的是柱室中最常用的是柱层析和析和薄薄层层析，以及它析，以及它们之之间的配合的配合应用。用。3精选课件柱层析1、吸附色、吸附色谱的原理的原理 在一定条件下，硅胶与被分离物在一定条件下，硅胶与被分离物质之之间产生作用，生作用，这种作用主要是物种作用主要是物理和化学作用两种。物理作用来自于硅胶表表面与溶理和化学作用两种。物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之分子之间的范的范德德华力；化学作用主要是硅胶表面的硅力；化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物基与待分离物质之之间的的氢键作用。作用。2、操作步、操作步骤2.1 硅胶准硅胶准备 硅胶一般硅胶一般选用用250-400目目(即即40-63m直径的硅胶直径的硅胶颗粒粒)，根据，根据Rf选用用硅胶的用量。硅胶的用量。2.2 实验仪器准器准备 一支玻璃色一支玻璃色谱柱柱,一个一个铁架台架台,烧杯杯,锥形瓶形瓶,径口直径径口直径较大的玻璃漏斗大的玻璃漏斗,一支玻璃棒一支玻璃棒,等。等。4精选课件2.3 装柱装柱2.3.1 吸附吸附剂的加入的加入干法：将吸附干法：将吸附剂一次加入色一次加入色谱管，振管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管管壁使其均匀下沉，然后沿管壁壁缓缓加入开始加入开始层析析时使用的流使用的流动相，或将色相，或将色谱管下端出口加活塞，管下端出口加活塞，加入适量的流加入适量的流动相，旋开活塞使流相，旋开活塞使流动相相缓缓滴出，然后自管滴出，然后自管顶缓缓加加入吸附入吸附剂，使其均匀地，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附适度的吸附层。操。操作作过程中程中应保持有充分的流保持有充分的流动相留在吸附相留在吸附层的上面。的上面。湿法：将吸附湿法：将吸附剂与流与流动相混合，相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐拌以除去空气泡，徐徐倾入色入色谱管管中，然后再加入流中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色洗下，使色谱柱表面柱表面平整。平整。俟填装吸附俟填装吸附剂所用流所用流动相从色相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面柱自然流下，液面将与柱表面相平相平时，即加，即加试样溶液。溶液。5精选课件2.3.2试样的加入的加入 将将试样溶于溶于层析析时使用的流使用的流动相中，再沿色相中，再沿色谱管壁管壁缓缓加入。注意勿加入。注意勿使吸附使吸附剂翻起。翻起。或将或将试样溶于适当的溶溶于适当的溶剂中，与少量吸附中，与少量吸附剂混匀，再使溶混匀，再使溶剂挥发去尽去尽后使呈松散状；将混有后使呈松散状；将混有试样的吸附的吸附剂加在已制加在已制备好的色好的色谱柱上面。如柱上面。如试样在常用溶在常用溶剂中不溶解，可将中不溶解，可将试样与适量的吸附与适量的吸附剂在乳在乳钵中研磨混中研磨混匀后加入。匀后加入。6精选课件2.4洗脱洗脱 除另有除另有规定外，通常按流定外，通常按流动相洗脱能力大小，相洗脱能力大小，递增增变换流流动相的品种相的品种和比例，分和比例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再著减少或不再含有含有时，再改，再改变流流动相的品种和比例。操作相的品种和比例。操作过程中程中应保持有充分的流保持有充分的流动相留在吸附相留在吸附层的上面。的上面。2.5 检测2.5.1 初步初步检测 当冲洗溶当冲洗溶剂流出一定量后，可流出一定量后，可对流出液流出液进行初步行初步检测，并且将，并且将锥形瓶形瓶更更换成小成小试管管进行收集。一般只行收集。一般只进行初步的快捷行初步的快捷检测，因此通常是取，因此通常是取一小薄一小薄层板，用板，用铅笔和直尺将硅胶板分划成多个小方笔和直尺将硅胶板分划成多个小方块，并按一定的，并按一定的次序次序编号。取一根内径号。取一根内径为0.3mm左右的玻璃毛左右的玻璃毛细管蘸取少量流出液，管蘸取少量流出液，点于薄点于薄层板的一个小格内，待半点干后，然后用物理的或化学的方法板的一个小格内，待半点干后，然后用物理的或化学的方法检测。7精选课件2.5.2 正式正式检测点点样:取分部收集的冲洗溶液取分部收集的冲洗溶液进行分行分别直接点直接点样,如果冲洗溶液太稀如果冲洗溶液太稀,浓度太小度太小,可先可先浓缩.点点样的容器一般用玻璃毛的容器一般用玻璃毛细管管,点点样斑点的直径一般斑点的直径一般为3-5mm.展开展开:在普通的展开槽中在普通的展开槽中进行行,展开方式常展开方式常选用上行展开用上行展开.展开展开剂:使用冲洗溶液使用冲洗溶液.显色色:一般常用物理一般常用物理检测法和化学法和化学检测法法.物理物理检测法中首先有紫外光法中首先有紫外光法法,紫外光常用两种波紫外光常用两种波长(254nm与与365nm).其次是碘蒸气其次是碘蒸气显色法色法.化学化学检出法通常惊醒出法通常惊醒显色色剂直接直接喷雾.显色色剂有通用有通用显色色剂和和专用用显色色剂.通用通用显色色剂最常最常见的是硫酸的是硫酸-乙醇或甲醇乙醇或甲醇(1:1)溶液溶液,喷雾后后,有的化合物有的化合物立即反立即反应,但多数化合物需加但多数化合物需加热后后经历数分数分钟才才显色色,不同化合物的反不同化合物的反应不同不同,所以所以颜色也往往不同色也往往不同.专用用显色色剂是指是指对某个或某一某个或某一类化合物化合物显色的色的试剂,利用化合物本身的特有性利用化合物本身的特有性质,或利用其所含的某些官能或利用其所含的某些官能团的特殊反的特殊反应.展开后根据斑点的展开后根据斑点的,可以粗略的估可以粗略的估计待分离物的含量的大待分离物的含量的大小小.8精选课件2.6 合并合并 根据上面薄根据上面薄层检测的的结果果,我我们可以将具有相同可以将具有相同Rf值的部分的部分进行合并行合并,然后利用旋然后利用旋转蒸蒸发器器对合并部分合并部分进行旋行旋转蒸蒸发,最后得到我最后得到我们需要的目需要的目标产物物.2.7色色谱柱的洗柱的洗涤 在在绝大多数情况下大多数情况下,硅胶分离柱中的硅胶是一次性使用硅胶分离柱中的硅胶是一次性使用,但在使用后的但在使用后的色色谱柱中由于柱中由于还含有冲洗溶含有冲洗溶剂,所以要将里面的硅胶到出是比所以要将里面的硅胶到出是比较困困难的的.取出硅胶的一种方法是将取出硅胶的一种方法是将该柱放置一段柱放置一段时间,让溶溶剂自然自然挥发完后完后,倒倒出硅胶出硅胶.但但这种方法既种方法既费时又又污染染环境境.第二种方法可以用一根比色第二种方法可以用一根比色谱柱稍柱稍长的木杆或塑料杆将含有溶的木杆或塑料杆将含有溶剂的硅胶一段一段地掏出的硅胶一段一段地掏出,但但这种种办法法也比也比较麻麻烦.第三种方法第三种方法时利用一个一般地真空利用一个一般地真空泵,将柱中剩余的溶将柱中剩余的溶剂进行减行减压抽出抽出,在色在色谱柱和真空柱和真空泵之之间加一个冷阱加一个冷阱,这样抽出地溶抽出地溶剂既既进行了有效地收集而不行了有效地收集而不污染染环境境,而色而色谱柱中地硅胶又能柱中地硅胶又能较快得到干燥快得到干燥,使硅胶能使硅胶能够方便地倒出方便地倒出.9精选课件3、色、色谱柱的柱的选择 柱子可以分柱子可以分为：加：加压，常，常压，减，减压。压力可以增加淋洗力可以增加淋洗剂的流的流动速度，减少速度，减少产品收集的品收集的时间，但是会减低，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常候，常压柱是效率最高的，但柱是效率最高的，但是是时间也最也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。减减压柱能柱能够减少硅胶的使用量，感减少硅胶的使用量，感觉能能够节省一半甚至更多，但是由省一半甚至更多，但是由于大量的空气通于大量的空气通过硅胶会使溶硅胶会使溶剂挥发（有（有时在柱子外面有水汽凝在柱子外面有水汽凝结），），以及有些比以及有些比较易分解的易分解的东西可能得不到，而且西可能得不到，而且还必必须同同时使用水使用水泵抽抽气（很大的噪音，而且气（很大的噪音，而且时间长）。）。加加压柱是一种比柱是一种比较好的方法，与常好的方法，与常压柱柱类似，只不似，只不过外加外加压力使淋洗力使淋洗剂走的快些。走的快些。压力的提供可以是力的提供可以是压缩空气，双空气，双连球或者小气球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特缸供气的就行）。特别是在容易分解的是在容易分解的样品的分离中适用。品的分离中适用。压力不可力不可过大，不然溶大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。走的太快就会减低分离效果。常常压柱色柱色谱，又称柱，又称柱层析，是色析，是色谱法中最常法中最常见的一种。它的突出的一种。它的突出优点点是，分离效率比是，分离效率比经典的化学分离方法高的多，与其他色典的化学分离方法高的多，与其他色谱法相比，不法相比，不需要昂需要昂贵的的仪器器设备，更，更换流流动相和吸附相和吸附剂方便，消耗材料少，成本方便，消耗材料少，成本低，适合分离取低，适合分离取样量从克到微克量从克到微克级范范围很很宽的各种的各种样品，因此在化学品，因此在化学实验室中至今仍被广泛室中至今仍被广泛应用。用。10精选课件4 溶溶剂的的选择 溶溶剂的的选择也也许是整个柱色是整个柱色谱分离操作中最困分离操作中最困难之之处,也是也是实验成功的成功的最关最关键之之处.溶溶剂通常先利用通常先利用简便的硅胶薄便的硅胶薄层色色谱进行行筛选.4.1 薄薄层色色谱点点样 把把样品溶解在一种低沸点的有机溶品溶解在一种低沸点的有机溶剂中中(如如氯仿仿,丙丙酮.甲醇甲醇.乙醇等乙醇等)然然后用毛后用毛细管或微量点管或微量点样管将管将试液点到薄液点到薄层板上板上.点点样量要适当量要适当,一般点一般点样量少些量少些,则分离叫清晰分离叫清晰.但要注意到但要注意到检测灵敏度灵敏度.4.2 展开展开4.2.1展开展开剂选择 选择展开展开剂时,可采用微量可采用微量圆环法和小型色法和小型色谱法法进行行选择.11精选课件微量微量圆环法法:将欲分离的物将欲分离的物质,按常按常规方法点在薄板方法点在薄板,两点相距两点相距2-3cm,再再用毛用毛细管吸取所管吸取所实验的溶的溶剂系系统,垂直放于垂直放于样点中心点中心,让溶溶剂自毛自毛细管管中依中立流出中依中立流出进行展开行展开,干燥后干燥后显色色.观察斑点的分离情况察斑点的分离情况.背背试物物质为未知化和物未知化和物时,常先用低极性溶常先用低极性溶剂展开展开,如式如式样留在留在圆点不点不动,则需增加需增加溶溶剂的极性或增大洗脱液的量的极性或增大洗脱液的量,如移如移动过快快,则必必须用用较低极性的溶低极性的溶剂来来调整整.小型色小型色谱法法.用普通的用普通的载薄片制成薄板薄片制成薄板,把欲分离的物把欲分离的物质点点载薄板上薄板上,放放于小型玻璃缸或广口瓶中展开于小型玻璃缸或广口瓶中展开,干燥后干燥后显色色,观察斑点分离情况察斑点分离情况.12精选课件4.2.2 展开展开薄薄层色色谱的展开方法有上行法的展开方法有上行法,下行法下行法,双向展开法双向展开法,径向展开法等。径向展开法等。上行法上行法:使展开使展开剂由下向上爬由下向上爬.下行法下行法:使展开使展开剂由上向下由上向下.该法可使用极性法可使用极性较弱的展开弱的展开剂.双向展开法双向展开法:取方形薄板像取方形薄板像纸色色谱一一样进行双向展开行双向展开.径向展开法径向展开法:可将吸附可将吸附剂涂成涂成圆形或扇形形或扇形,在在圆心部分加如展开心部分加如展开剂,使薄使薄层径向展开径向展开.多次展开多次展开:用展开用展开剂对薄薄层展开一次展开一次.称称为单次展开次展开.一次展开后一次展开后,取出薄板取出薄板,挥发出去展开出去展开剂后再行展开后再行展开.梯度展开梯度展开:该法所用的展开法所用的展开剂在在连续不断的改不断的改变组成成.一般可把一般可把一个装有一个装有强极性展开极性展开剂的滴定管深入密的滴定管深入密闭的含弱极性的展开的含弱极性的展开剂的的层析析槽中槽中,槽中用槽中用电磁磁搅拌器把滴下的拌器把滴下的强极性展开极性展开剂混匀混匀,此此时,展开展开剂的极的极性逐性逐渐由弱由弱变强,使极性差使极性差别较大的多种大的多种组分混合物得以很好的分离分混合物得以很好的分离.13精选课件4.3 显色色 展开后展开后,如物如物质有色有色,可明可明显的在薄的在薄层上上观察到它察到它们的位置的位置.如无色如无色,则要要通通过一定的方法一定的方法显色色,定位定位,一一边确定斑点的位置及大小确定斑点的位置及大小.4.4 常用溶常用溶剂的极性的极性 常用溶常用溶剂的极性的极性顺序：石油序：石油醚环己己烷/己己烷苯苯乙乙醚氯仿仿乙酸乙酸乙乙酯正丁醇正丁醇丙丙酮乙醇乙醇甲醇甲醇水。水。在薄在薄层色色谱中中,当溶当溶剂的极性太大的极性太大时.会使待分离物全部接近溶会使待分离物全部接近溶剂前沿前沿,当溶当溶剂的极性太小的极性太小时,又会使待分离物几乎全部保留在又会使待分离物几乎全部保留在圆点点,这两两种情况都是待分离物得不到分离种情况都是待分离物得不到分离.使用使用单一溶一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低极性溶通常使用一个高极性和低极性溶剂组成的混合溶成的混合溶剂，高极性的溶，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：合有：Petroleum ether/Ethyl acetate,Petroleum ether/Acetone,Petroleum ether/Ether,Petroleum ether/CH2Cl2,CH2Cl2/ethyl acetate,ethyl acetate/MeOH,CHCl3/ethyl acetate14精选课件柱层析极性小的用乙酸乙极性小的用乙酸乙酯：石油：石油醚系系统极性极性较大的用甲醇：大的用甲醇：氯仿系仿系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸15精选课件1、称量 200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。2、搅成匀浆 加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。匀浆法16精选课件3、装柱 将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。4、压实 沉降完成后，加入更多的石油醚（氯仿），用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。17精选课件5、上样 干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。6、过柱和收集 柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。18精选课件7、检测 要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。8、送谱 收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。19精选课件TIPS:1.先根据先根据TLC方法方法筛选好洗脱好洗脱剂，使两相，使两相邻物物质Rf值之差最大化之差最大化2.将柱子必将柱子必须装平整、均匀装平整、均匀3.考考虑有限柱填料的吸附量有限柱填料的吸附量4.可考可考虑用梯度法分开并洗脱用梯度法分开并洗脱20精选课件柱子可以分为：加压，常压，减压。压力可以增加淋洗力可以增加淋洗剂的流的流动速度，减少速度，减少产品收集的品收集的时间，但是会减低，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常候，常压柱是效率最高的，但柱是效率最高的，但是是时间也最也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。减减压柱能柱能够减少硅胶的使用量，感减少硅胶的使用量，感觉能能够节省一半甚至更多，但是由省一半甚至更多，但是由于大量的空气通于大量的空气通过硅胶会使溶硅胶会使溶剂挥发（有（有时在柱子外面有水汽凝在柱子外面有水汽凝结），），以及有些比以及有些比较易分解的易分解的东西可能得不到，而且西可能得不到，而且还必必须同同时使用水使用水泵抽抽气（很大的噪音，而且气（很大的噪音，而且时间长）。）。加加压柱是一种比柱是一种比较好的方法，与常好的方法，与常压柱柱类似，只不似，只不过外加外加压力使淋洗力使淋洗剂走的快些。走的快些。压力的提供可以是力的提供可以是压缩空气，双空气，双连球或者小气球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特缸供气的就行）。特别是在容易分解的是在容易分解的样品的分离中适用。品的分离中适用。压力不可力不可过大，不然溶大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。走的太快就会减低分离效果。关于无水无氧柱，适用于关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的氧，水敏感，易分解的产品。品。21精选课件关于柱子的尺寸柱子柱子长了，相了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上的塔板数就高。柱子粗了，上样后后样品的原点就小品的原点就小（反映在柱子上就是（反映在柱子上就是样品品层比比较薄），薄），这样相相对的减小了分离的的减小了分离的难度。度。试想如果柱子十厘米，而想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，度可想而知，恐怕要用很低极性的溶恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果慢慢冲了。而如果样品品层只有只有0.5厘米，那厘米，那么各么各组分就比分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比牲比较多的硅胶和溶多的硅胶和溶剂了，不了，不过这些成本相些成本相对于于产品来品来说也也许就不算什么就不算什么了（有些不了（有些不环保的保的说，不不过溶溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪回收重蒸后也就减小了部分浪费）。）。22精选课件现在在见到的柱子径高比一般在到的柱子径高比一般在1：510，书中写硅胶量是中写硅胶量是样品量的品量的3040倍，具体的倍，具体的选择要具体分析。如果所需要具体分析。如果所需组分和分和杂质分的比分的比较开开（是指在所需（是指在所需组分分rf在在0.20.4，杂质相差相差0.1以上），就可以少用硅以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如胶，用小柱子（例如200毫克的毫克的样品，用品，用2cm20cm的柱子）；如果的柱子）；如果相差不到相差不到0.1，就要加大柱子，我，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗的，也可以减小淋洗剂的极性等等。的极性等等。23精选课件关于湿法、干法上样湿法上湿法上样，一般用淋洗，一般用淋洗剂溶解溶解样品，也可以用二品，也可以用二氯甲甲烷、乙酸乙、乙酸乙酯等，等，但溶但溶剂越少越好，不然溶越少越好，不然溶剂就成了淋洗就成了淋洗剂了。很多了。很多样品在上柱前是粘品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。可是有的上乎乎的，一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出，后在硅胶上又会析出，这一般都一般都是比是比较大量的大量的样品才会出品才会出现，是因，是因为硅胶硅胶对样品的吸附品的吸附饱和，而和，而样品品本身又是比本身又是比较好的固体才会好的固体才会发生，生，这就就应该先重先重结晶，得到大部分的晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重品后再柱分，如果不能重结晶那就不管它了，直接晶那就不管它了，直接过就是了，就是了，样品品随着淋洗随着淋洗剂流流动会溶解的。会溶解的。干法上干法上样，一般用于固体或粘度大的液体，一般用于固体或粘度大的液体样品。品。样品用低沸点易溶溶品用低沸点易溶溶剂溶解，加入溶解，加入1-3倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。装好的柱子上留一段溶粉而不粘在瓶壁上。装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了，把吸附了样品的硅胶品的硅胶慢慢到慢慢到进去，震去，震动柱子或再加一些溶柱子或再加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下。，把粘在柱壁上的硅胶洗下。24精选课件溶剂的选择当然是最便宜，最安全，最当然是最便宜，最安全，最环保的了。所以大多保的了。所以大多选用石油用石油醚，乙酸乙，乙酸乙酯。文献中有写用正己。文献中有写用正己烷的，太的，太贵了，除非特了，除非特别需要不要用不然需要不要用不然银子子哗哗的，流的比淋洗的，流的比淋洗剂还快，不快，不过因因为极性很小，有极性很小，有时还是非它不可。是非它不可。乙乙醚也可以用，但是就是容易睡也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒，注意保持清醒别让溶溶剂流干了，流干了，那那样柱子也就不爽了。二柱子也就不爽了。二氯甲甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放吸附是一个放热过程，所以夏天的程，所以夏天的时候候经常会在柱子里常会在柱子里产生气泡，天生气泡，天气冷的气冷的时候会好一些。甲醇，据候会好一些。甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以能溶解部分的硅胶，所以产品如果品如果想想过元素分析的元素分析的话要留神，要留神，应该经过后后继处理，比如理，比如说重重结晶等。其晶等。其他的溶他的溶剂用的相用的相对较少，要依个人的不同需要少，要依个人的不同需要选择了。了。25精选课件由于某些原因，用到的淋洗由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我多是大包装的（便宜嘛），我们这里是里是用用10升或升或25升的塑料桶装的，就要注意升的塑料桶装的，就要注意这些工些工业品的品的纯度是度是较低的。低的。经常能常能够从送来的大桶底部看从送来的大桶底部看见有色的有色的杂质，其他的，其他的杂质就可想而知就可想而知了，所以在比了，所以在比较严格的柱分格的柱分时就要就要对溶溶剂重蒸。当然重蒸。当然过原料原料时就可以就可以免去免去这一步了，反正下面一步了，反正下面还有提有提纯的方法。另外溶的方法。另外溶剂在在过柱子后最好柱子后最好也回收使用，一方面也回收使用，一方面环保，另一方面也能保，另一方面也能节省部分省部分经费，缺点是要消，缺点是要消耗一定的人工。耗一定的人工。这里要注意的是，一般在里要注意的是，一般在过柱同柱同时进行的是减行的是减压旋蒸，旋蒸，石油石油醚和乙酸乙和乙酸乙酯的比例由于的比例由于挥发度的不同会度的不同会导致极性的致极性的变化，一般化，一般会使得极性会使得极性变大，在梯度淋洗大，在梯度淋洗时比比较合适，正好极性越来越大了。在合适，正好极性越来越大了。在过完柱子后，溶完柱子后，溶剂最后回收要采用常最后回收要采用常压，因，因为在减在减压旋蒸旋蒸时会有部分会有部分低沸点的低沸点的杂质一起出来，常一起出来，常压时就会减少就会减少这种种现象，如果象，如果杂质和你下和你下面要面要过的的样品有反品有反应那就惨了。那就惨了。26精选课件关于操作问题1 装柱装柱 柱子下面的活塞一定不要涂柱子下面的活塞一定不要涂润滑滑剂，会被淋洗，会被淋洗剂带到到产品中的，可以品中的，可以采用四氟采用四氟节门（T型四氟型四氟节门三通接三通接头）的。干法和湿法装柱）的。干法和湿法装柱觉得没得没什么区什么区别，只要能把柱子装，只要能把柱子装实就行。装完的柱子就行。装完的柱子应该要适度的要适度的紧密密（太密了淋洗（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一品就会从一侧斜着斜着下来）。下来）。书中写的都是不能中写的都是不能见到气泡，我到气泡，我觉得在大多数情况下有些小得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。当然如果你装的柱子气泡就全下来了。当然如果你装的柱子总是有气泡就是有气泡就说明需要多明需要多练习了。但是柱子更忌了。但是柱子更忌讳的是开裂，的是开裂，甭管管竖的的还是横的，都会影响分离效果，甚至作是横的，都会影响分离效果，甚至作废！27精选课件2 加加样 用少量的溶用少量的溶剂溶溶样品加品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降下降至石英砂面至石英砂面时，再加少量的低极性溶，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂，一开始不要加，一开始不要加压，等溶等溶样品的溶品的溶剂和和样品品层有一段距离（有一段距离（24cm就就够了），再加了），再加压，这样避免了溶避免了溶剂（如二（如二氯甲甲烷等）等）夹带样品快速下行。品快速下行。28精选课件3 淋洗淋洗剂的的选择 感感觉上要使所需点在上要使所需点在rf0.20.3左右的比左右的比较好。不要好。不要认为在板上爬高在板上爬高了分的比了分的比较开，开，过柱子就用那种极性，如果柱子就用那种极性，如果rf在在0.6，即使相差，即使相差0.2也也不容易在柱子上分开，因不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状柱子是一个多次爬板的状态，可以通，可以通过公公式的比式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四）的三次方或四次方大。次方大。29精选课件4 样品的收集品的收集 用硅胶作固定相用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比品与硅胶的吸附比较强的的话，就不容易流出。，就不容易流出。这样就会就会发生，后面的生，后面的点先出，而前面的点后出。点先出，而前面的点后出。这时可以采用氧化可以采用氧化铝作固定相。另外，收作固定相。另外，收集的集的试管大小要以管大小要以样品量而定，特品量而定，特别是小量是小量样品，如果用大品，如果用大试管，可管，可能一根就收到了三个能一根就收到了三个样品。如果都用小品。如果都用小试管那工作量又太大。管那工作量又太大。30精选课件5 最后的最后的处理理 柱分后的柱分后的产品，由于使用了大量的溶品，由于使用了大量的溶剂，其中的，其中的杂质也会累也会累积到到产品品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗洗涤一下，因一下，因为大部分的大部分的杂质是溶在溶是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要里的，一洗基本就没了，必要时进行重行重结晶。晶。31精选课件32精选课件感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！