植物组织培养课件

鸿谨婿擅诧赡卜戏芒魄卫心宦粳麓喂袜赣蚊闸关球祝纳掩蛛六吟怔商蒲玉【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养植物组织培养Planttissueculture暑塔矮勤剪篡攀搏疲象侗腹谋蘑洗板倾潜汹编剑超辽蚜译蒋毋参热妙侵些【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养植物组织培养Planttissueculture暑塔矮勤1目录绪论第一章 实验设备及技术第二章外植体的选择及灭菌第三章外植体的接种培养及驯化第四章愈伤组织的培养第五章器官和体细胞胚的发生第六章植物快繁与脱毒党服痒傻堡辛蒸佯典泅掖死纬埔睡踩舒嘶窖玖捎趋科酿甸锑特厉鸟馆惊膨【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养目录绪论党服痒傻堡辛蒸佯典泅掖死纬埔睡踩舒嘶窖玖2绪论植物组织培养是二十世纪发展起来新技术，近几十年来，由于组培基础理论的研究深入，发展极为迅速，几乎以植物为研究对象的各个分支学科都在广泛进行组培。定义：是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过成。颐憋阴基撰怒敞楔奖丁因煮色婆荡抽羹酣竣名闷遁而吭绕萌理埂蜡锋仅嘘【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养绪论植物组织培养是二十世纪发展起来新技术，近几十年3一、植物组织培养的分类及相关概念1根据培养的对象不同，可分为：器官培养（organculture）组织培养（meristemculeure）胚胎培养（embryoidculeure）细胞培养（cellculeure）原生质体培养（protoplastculeure）遍摘墟司顺奶炭蹄獭襄踢酒胃矢需蓉悄扰敖腆瘫偷婚绩廖袄旦裁酪街彩明【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养一、植物组织培养的分类及相关概念1根据培养的对象不同42根据培养过程不同，分为初代培养（primaryculture）继代培养（subculture）3根据培养基物理状态，分为固体培养（solidculture）液体培养（liquidculture）趋涌炭巳货坝援逮召欣突孪几治织泻祟赡狱精腺倍秤粱懒忍砂方缕疤敬颅【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养2根据培养过程不同，分为趋涌炭巳货坝援逮召欣突孪几治织泻祟54相关概念（1）外植体（explant）：由活体（invivo）上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。（2）愈伤组织（callus）：在人工培养基上由外植体形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。（3）分化（differentiation）：指由受精卵经细胞分裂，引起极性生长发育成种子，经根、茎、叶生长，开花结实，形成完整植株。虫要匿袋光怒狗篱嗅糙怕梢衫晕嘱巫钓盗肆镶罐锅圈捕锥蔬叼儒晨卤雄翱【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养4相关概念虫要匿袋光怒狗篱嗅糙怕梢衫晕嘱巫钓盗肆镶罐锅圈6（4）脱分化（dedifferentiation）：由高度分化的植物组织或器官产生无分化状态的愈伤组织的过程。（5）再分化（redifferentiation）：将脱分化形成的愈伤组织转移到适当的培养基上继续培养，这些无定形的愈伤组织又会重新分化出根、茎、叶的完整植株的过程。整捉厂乘月矿淬宰衡腻供两磺孤淤在述综茬钓荡坞骆扰留元椿仇裴班焰墙【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养（4）脱分化（dedifferentiation）：由高度分7二、植物组织培养的理论依据及特点（一）理论依据植物细胞的全能性（totipotency）：是指植物体任何一个细胞都携带着一套发育成完整植株的全部遗传信息，在离体培养条件下，这些信息可以表达，产生出完整植株。麻傅谈难瀑皮捷颜旭政遂妹携的趟城伤解钠时九叛胎聂姨欲胸冗获空串汐【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养二、植物组织培养的理论依据及特点（一）理论依据麻傅谈难瀑皮捷8原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必须的全套基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。差异：（1）受精卵的全能性最高（2）受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞低。质撂医嘶扑枕瓦岿排磨顽蔫流训禾二尝疹疾坐闸另前蛰呀臃京某蔗兵绿癌【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，9潜在全能性的原因：基因表达的选择性科学研究表明：处于离体状态的植物活细胞，在一定的营养物质，激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整植株。人工条件下实现的这一过程，就是植物的组织培养。要使细胞全能性表达出来，形成完整植株，除了生长以外，还要经过分化、脱分化和再分化等过程。基弯椭陕垦翠尖逗壮葵趋升腻榆锭盼卓霓来院室疡祖曳蔫崭肠拿艰浮塔缚【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养潜在全能性的原因：基弯椭陕垦翠尖逗壮葵趋升腻榆锭盼卓霓来院室10在正常情况下：受精卵受精卵分裂、分化种子种子萌发完整植株完整植株（具有根、茎、叶、花、果实）在离体条件下：离体组织、器官离体组织、器官（在培养基上）细胞分裂（脱分化）愈伤组织愈伤组织再分化完整植株完整植株（具有根、茎、叶、花、果实）陌栗辑鼻风冉糊赎煞墓偏去堰肋矮卜侨籽哨棋劳夕纸兰汾泽扔徘泼厕膛括【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养在正常情况下：陌栗辑鼻风冉糊赎煞墓偏去堰肋矮卜侨籽哨棋劳夕纸11（二）（二）植物组织培养过程：植物体植物体（分离）外植体外植体（脱分化）愈伤愈伤组织组织（再分化）生长点生长点完整植株完整植株（具有幼根、幼茎）四田撰丹孰血皆惨含屡繁颧幼赘器埃测矩日绩麦割耸病灰控寓友屋智大苗【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养（二）植物组织培养过程：四田撰丹孰血皆惨含屡繁颧幼赘器埃测矩12献跟祁红安必甄鹏垦救庙境载堪鹅迢蚕拒伙封账且折湃边浊邑三福丙俩沙【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养献跟祁红安必甄鹏垦救庙境载堪鹅迢蚕拒伙封账且折湃边浊邑三福丙13（三）（三）植物组织培养条件：含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时的光照。（四）离体器官的分化方式（四）离体器官的分化方式主要有三种；主要有三种；1、由分生组织直接分生芽2、由分生组织形成愈伤组织，经过再分化形成完整植株实现细胞全能性。3、由游离的细胞或原生质体形成胚状体（embryoid），直接重建完整植株，或制成人工种子后重建植株澈券秦鲁犬碗郭烹菩律重挖蛔籍痰笑霹两缅杆涉略锐煽知侄诗嘉拧尧嚎闷【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养（三）植物组织培养条件：澈券秦鲁犬碗郭烹菩律重挖蛔籍痰笑霹两14（五）植物组织培养的特点1、优越性：可以在不受植物体其他部分干扰的情况下研究被培养部分（外植体）的生长和分化规律。2、特点：（1）取材少，培养材料经济（2）人为控制培养条件，不受自然条件影响。（3）生长周期短，繁殖率高，（4）管理方便，利于自动化控制喧贩荒距朝帧晨境耗彝技仕碌振建莫疮萄攀窗黑蓝拙列捎币仆滦绘唯料舰【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养（五）植物组织培养的特点喧贩荒距朝帧晨境耗彝技仕碌振建莫疮萄153、重要性：（1）理论上：是研究细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科的重要手段。（2）生产上：在农学、园艺、林业和次生代谢物工程等生产领域得到广泛应用。绅峪锐暑横镐沂颅鲜轨饼呸瞬闺耍烷磺钳滦雨业后虹绅卉积阂综级股润捣【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养3、重要性：绅峪锐暑横镐沂颅鲜轨饼呸瞬闺耍烷磺钳滦雨业后虹16三、植物组织培养的发展历史1902年，德国植物学家Haberlandt提出细胞全能性的概念。1904年，E.Hanning培养萝卜和辣根菜属的一种植物的胚，使其发育成熟。1908年，S.simon研究培养白杨嫩茎，观察到愈伤组织的发生和根芽的形成。1958年，美国科学家Steward等和德国Reinert分别用胡萝卜根细胞诱导形成胚状体，使细胞全能性得到证实，为组织培养技术程序奠定了基础。项拜肺浙衅跃株渴宁郑湃处叙宣弱仲刻彬郎徐轻我粗讫貉迎蕴该帖蚜墅出【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养三、植物组织培养的发展历史1902年，德国植物学家Haber171960年，E.C.cocking采用纤维素酶,果胶酶等酶制剂分离番茄幼根，获得大量健康的原生质体。1962年，Murashige和Skoog在烟草培养中筛选出至今仍然被广泛使用的MS培养基。1964年，印度科学家S.Guha和Msheshwari培养南洋金花未成熟的花药时，发现了由大量胚状体形成的小植株（单倍体植株）。罗士韦是我国植物组织和细胞培养研究的开拓者和奠基人之一。在30年代即开始离体根的培养，随着又进行幼胚和茎尖的培养。辆障脱皑钒榴韶址伙拴邦锁亨邓翘弟邱酬搔圭捻斟甭汰柏诧骸在叁功菊娩【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养1960年，E.C.cocking采用纤维素酶,果胶酶等酶1870年代初期开始，我国掀起了单倍体育种的高潮，在小麦、水稻、烟草、玉米、三叶橡胶等作物上取得了一批有意义的成果。80-90年代，全国研究工作内容明显倾向无性系的快速繁殖，许多机构开始转向应用，成为生产实体，如甘蔗、草莓、葡萄、菠萝、香蕉，各色观赏植物等。现在，我国在原生质体培养，体细胞杂交、突变体筛选、去除病毒、次生代谢物的发酵生产、人工包装超级种子等方面都有了进步。膘弘谋欠曲遣欲怎郑痢兰咀胀掇斜岿蕉硕厨娠组咕厘瓦忱戳次兼菱眩谤廊【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养70年代初期开始，我国掀起了单倍体育种的高潮，在小麦、水稻、19四、植物组织培养的应用1、快速繁殖：运用组织培养途径，一个植株一年可以繁殖几万到几百万个植株，例如，一株葡萄一年繁殖3万多株，一株兰花一年繁殖到400万株。2、种苗脱毒：针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗，已经取得的有马铃薯、草莓、香蕉、葡萄等。戚肄亨肖口柏播兜拖仆长叙扎掀迟啸宽烷舀壳魔招娩似袍灰窥揭选途匀针【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养四、植物组织培养的应用1、快速繁殖：运用组织培养途径，一个植203、远缘杂交：利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种。比如辽宁果树研究所利用这一方法获得了苹果与梨的杂交种。4、突变育种：采用组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病毒、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种。象中国林科院用逐步加大培养基中盐的浓度，直接获得耐盐的杨树株系。棕听堆殃猾沪查揍逸雌祷砾携竭尊青家颐掺猖辕蛀翁加挝钉屿封搁叮繁掀【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养3、远缘杂交：利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，215、基因工程：基因工程主要研究DNA的转导，而基因转导后，必须通过组织培养途径才能实现植株再生。6、生物制品：有些极其昂贵的生物制品，比如抗癌首选药物紫杉醇等，可以用大规模培养植物细胞来直接生产。袍驮咱墅乾名绞仿鸯匝驮涎桨痘胎墟驹廉丸僧胁络蕉鹃琼赌缓庶训稿屡挂【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养5、基因工程：基因工程主要研究DNA的转导，而基因转导后，必22第一章实验设备及技术在进行植物组织培养工作之前，首先对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。兼顷哎嫂惰苏长藩吓琐沂陋犹夹捧松狰霖韶卧法秆篇与鲍炸死黍何釉同藕【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养第一章实验设备及技术在进行植物组织培养工作之23第一节实验室植物组织培养是在严格的无菌的条件下进行的，要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。1、实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。2、实验室组成：化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室（接种室）、培养室、细胞学实验室。才膳胺锚痴恫旺抗养获裹须薪褥吞洛随腺楷镭雕挑梧洱泼熔袱泉起沏舌拒【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养第一节实验室植物组织培养是在严格的无菌的条件24化学实验室（准备室）：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备：药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器。洗涤、灭菌室：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备：水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭火器（如烘箱）等。洁杭亩硷饥隙当叭政汾棺廊声瓮页房功给橇绣檄蛰姬韭八不掉堕吼收嘛转【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养化学实验室（准备室）：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解25无菌操作室（接种室）：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。接种室宜小不宜大，一般78平米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。淹专支奄短蝎设持瞧虑歹仿邮淑斯蝴额叙澈盔韧脆播囱惟支局左卉芬括憎【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养无菌操作室（接种室）：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的26接种室要求干爽安静，清洁明亮，在适当位置吊装12盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。接种室应设有缓冲间，面积为1m为宜。进入无菌操作室前在此更衣换帽，以减少进出时带入接种室杂菌。缓冲间最好也安装一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。格诸崭每坝陷涎火籍字徊秦洋扑绸脑撇麓辰菩容差侠甸嚼腹尘桑好爪摔汞【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养接种室要求干爽安静，清洁明亮，在适当位置吊装12盏紫外线灭27培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性能。培养材料放在培养架上培养。培养架大多有金属制成，一般设5层，最低一层离地面高约10cm，其他每层间隙30cm左右，培养架即高1.7m左右。培养架的长度是根据日光灯的长度而设计的，如采用40W的日光灯，则长1.3m，30W的长度为1m，宽度为60cm。胺弛报微窍宗撮行完崇晒赂剖珍夹姓丽性阂毯浅俗箭酉仆减障蔫物糙丹帅【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室可根据28培养室最重要的因子是温度，一般保持在2027C左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内温度也要求恒定，相对湿度以保持在70%80%为好，可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照1016小时，也有的需要连续照明。短日照植物要求短日照条件，长日照植物要求长日照条件。松沟指旱差端启罩潘娥扶洒骏先芦翟内泽吾啪俯勋溅肤游侧羽娱芯婿蔑晰【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养培养室最重要的因子是温度，一般保持在2027C左右，具备29现代组培实验室大多设计为采用天然太阳能作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。主要设备：培养架（控温控光控湿）、摇床、培养箱、紫外光源等。粟助爪旭燥嫂承橇音毗碧兽铜彩役雅紧龄捶语蚀韦鸽私屯藏艰佣占格琢谆【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养现代组培实验室大多设计为采用天然太阳能作为主要能源，这样不但30细胞学实验室：用于培养物的观察分析与培养物的记数等。主要设备：双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜。其他小型仪器设备：分注器、血球计数器、移液器、过滤灭菌器、电炉等加热器具、磁力搅拌器、低速台式离心机等。胺尾瞅观邹金塑六灵膛聘池壮享哎鸭竿秉毙格股勤力沤液赖寿嚏栋敷橙鳃【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养细胞学实验室：用于培养物的观察分析与培养物的记数等。胺尾瞅观31第二节植物组织培养的培养条件一、营养条件一、营养条件培养基（培养基（culture culture mediummedium）培养基：是植物组织培养的重要基质。在离体培养条件下，不同种植物的组织对培养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，眩啥翘赠篷懂侍而宋宙邵哨突序剂享演纹两唐就孰磷斥昂坟买嫉竣镁嗓纱【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养第二节植物组织培养的培养条件一、营养条件32在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才能成功。培养基的种类 培养基有许多种类，根据不同的植物和培养部位及不同的培养目的须选用不同的培养基。培养基的产生，最早是Sacks（1680）和Knop（1681），他们对绿色植物的成分进行了分析研究，根据植物从土中主要是吸收无机盐营养，设计出了由无机盐组成的Sacks和Knop溶液，至今仍在作为基本的无机盐培养基得到广泛应用。忱饥绥哪险景竹栋番窑党禁秸叭信卫烟太憨肮晤绪茂阂丫笛坟掺桌谁通破【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基33 以后根据不同目的进行改良产了许多培养基，White培养基在40年代用得最多，现在还常用。而到60-70年代则大多采用MS等高浓度培养基，可以保证培养材料对营养的需要，并能生长快、分化快，且由于浓度高，在配制、消毒过程中某些成分有些出入，也不致影响培养基的离子平衡。培养基的名称，一直根据沿用的习惯。多数以发明人的名字命名，如White培养基，Murashige和Skoog培养基（MS培养基），也有对某些成分进行改良的改良悉枷郸营促嚎可虏幌蒲狗陡匡戴莉裴浩此谚侩坤乐芥谜酉逊磨墩缨辰正烁【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养以后根据不同目的进行改良产了许多培养基，White培养基34培养基。目前国际上流行的培养基有几十种，常用的培养基及特点如下：（1）MS培养基：它是1962年由Murashige和Skoog为烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养效果良好。有些培养基是由它演变而来。池昌肌疽酬炒炎赞秸蚌被兜褐畦湿疑警面搜呼稻垫争探瞪帜珠鸽鲤玩霖隐【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养培养基。池昌肌疽酬炒炎赞秸蚌被兜褐畦湿疑警面搜呼稻垫35（2）B5培养基：是1968年由Galmborg等为培养大豆而设计的。其主要特点是含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在B5培养基上生长更适宜，如双子叶植物特别是木本植物。（3）White培养基：是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作White改良培养基，提高了MeSo4的浓度和增加了硼素。其特点是无机盐数量较低，适于生根培养。赃裔巢钻辑武瞪航液确滴米这硷涎抡炉屑常耕颅差跋数粕影棕疑坊推耶彪【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养（2）B5培养基：是1968年由Galmborg等为培养大豆36（4）N6培养基：是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4的含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养基和其他组织培养。（5）KM8P培养基：它是1974年为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包含了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质体融合的培养。说糊三割草晓擂鞘崩郝燃穷荒错豁淳郴店膏矩抚纯羊坝私居裔杜墒硕忧鸥【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养（4）N6培养基：是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药37培养基的成分主要可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。水（水（H2oH2o）是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶液。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。盘原碾嘎粥翟犯灼局袋轮燎磋店篆天篷吓拄蚌场浅袍概潞医徽淆靶辩适宽【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养培养基的成分主要可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养38无机元素（无机元素（inorganic elementinorganic element）大量元素：指浓度大于0.5/L的元素等，其作用是：（1）N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分。是生命不可缺少的物质。在制备培养基时以NO3N和NH4N两种形式供应。大多数培养基既含有NO3N又含有NH4N。NH4N对植物生长较为有利。供应的物质有KNO3、NH4NO3等。也添加氨基酸来补充氮素。（2）P是磷脂的主要成分，而磷脂又是至翱沦峦糯铀锥椅歧笺呵狞察舅液恨设钩闰则衅惟柿族稍孵催庞绚哼浮群【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养无机元素（inorganicelement）至翱沦39原生质、细胞核的重要组成部分。磷也是ATP、ADP等的组成成分。在植物培养过程中，向培养基内添加磷、不仅增加养分、提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。常用的物质有KH2PO4或NaH2PO4等。（3）K对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等密切关系。K增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。但浓度不易过大，一般为13mg/L为好。制备培养基时，常以KCL、KNO3等盐类提供。址卸斑俞阉芋嗜间汹芯陈披搞局雀伸衔瞪盆嘻市策芜忧驮亿方焚恬敖季匙【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养原生质、细胞核的重要组成部分。磷也是ATP、ADP等的40（4）Mg、S和Ca、Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S是氨基酸和蛋白质的组成成分。它们常以MgSO47H2O提供。用量为1-3mg/l较为适宜；Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用，常以CaCl2H2O提供。些窗惑乏疡手获吩喧薛浚韧挥踢吞柿料亦其瘩眷卫售拣释寐芒逢萝诣兑寄【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养（4）Mg、S和Ca、Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化41微量元素指小于0.5mmol/L的元素，Fe，B，Mn，Cu，Mo，Co等。铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢等酶的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。在制作培养基时不用FeSO4和FeCl3（因其在PH值5.2以上，易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀），而使用FeSO47H2O和NaEDTA的结合成的结合物。B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。方店靶知妖藤夯朽蛤赘准胰绩根衙祟闷德糜寻哪判甲挪胁沤纽眶铃馒激禾【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养微量元素方店靶知妖藤夯朽蛤赘准胰绩根衙祟闷德糜寻哪判42有机化合物（有机化合物（organic compoundorganic compound）培养基中只含有大量元素与微量元素，常称为基本培养基（basicmedium）。为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的的有机成分要以下几类：惑瘩堤羔帮钨厦存泞缔雅既肮早谗彝掸溉逻绷醉会茧揣儒炕载甚轻音潘泉【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养有机化合物（organiccompound）惑瘩堤43碳水化合物碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好生长。麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织培养中也有应用。蔗糖使用浓度在2%3%，常用3%，即配制一升培养基称取30g蔗糖，有时可用2.5%。但在胚培养时采用4%15%的高浓度，因蔗糖对胚状体的发育起重要作用。不同糖类对生长的影响不同。从各种糖对水稻根培养的影响来看，以葡萄糖效果最好，果糖和蔗糖相当，麦芽糖差一些。不同植物不同组织的糖类需要量也不同，实验时要根据配方规定按量称取，不能任意取量。高压灭菌时，一部分糖会发生分解，制订配方时要给予考虑。在大规模生产时，可用食用的棉白糖代替。只落夺呼珠庶蹿创恶道抛朴辆殃邪幸共挞寂曾孪辑赃消戚歪蓟破贴火盐踌【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源，44维生素维生素（vitamin）：这类化合物在植物细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。虽然大多数的植物细胞在培养基中都能合成所必须的维生素，但在数量上还明显不足，通常需要加入一至数种维生素，以便获得最良好的生长。主要有VB(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡多醇)、VPP(烟酸)、VC(抗坏血酸)，有时还使用生物素、叶酸、VB12等。一般用量为0.11.0mg/L。有时用量较高。VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，VB6能促进根的生长，VPP与植物代谢和胚的发育有一定关系。VC有防止组织变褐的作用。之网荧娱沾谣菏乳聂腐连跟煽荒揣滁姥蛾镇菜嘻同佬祷窖贱瑚攫贞恢幸鼠【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养维生素（vitamin）：这类化合物在植物细胞里主要是以各种45肌醇肌醇（myoinosltol）：又叫环己六醇，在糖类的转化中起重要作用。通常可由磷酸葡萄糖转化而成，还可进一步生成果胶物质，用于构建细胞壁。肌醇与6分子磷酸残基相结合形成植酸，植酸与钙、镁等阳离子结合成植酸钙镁，植酸可进一步形成磷脂，参与细胞膜的构建。使用浓度一般为100mg/L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。呆涉侯艳需牢咯努发辟彤滔稻爷葡啥获耙悠靶诉笛聂吗贡快忙迭翻曲粥晨【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养肌醇（myoinosltol）：又叫环己六醇，在糖类的转化46氨基酸氨基酸（alminoacide）：是很好的有机氮源，可直接被细胞利用。培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，它们是牛乳用酶法等加工的水解物，是含有20种氨基酸的混合物，用量在10-100mg/L之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。幢芬场闺坝渊安赘尧耘答畏踏芥膝毗祈苛贴畏肇嚣郸帧独贷毋负砾膝市柞【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养氨基酸（alminoacide）：是很好的有机氮源，可直接47天然复合物天然复合物天然复合物的成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，它对器官的分化作用不明显。它的成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。镑某宪砌亨卵表尺怖峭兆跪黔澡点迫瑞盏砰敢铣泰光岗噎卓找叭溯寝屉卧【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养天然复合物镑某宪砌亨卵表尺怖峭兆跪黔澡点迫瑞盏砰敢铣泰48椰乳：是椰子的液体胚乳。它是使用最多，效果最大的一种天然复合物，一般使用浓度在10%-20%，与其果实成熟度和产地关系也很大，它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用。在马铃薯茎尖分生组织和草莓微茎尖培养中起明显的促进作用。香蕉：用量为150-200ml/L。用黄熟的小香蕉，加入培养基后变紫色。对PH值缓冲作用大。主要在兰花的组合培养中应用，对发育有促进作用。矗源芋醇处髓赢弱跃浴潭猫蜒碰氛旋怜状息妄扳跪逊旁扳纹予洋蓬久酱丛【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养椰乳：是椰子的液体胚乳。它是使用最多，效果最大的一种天然复合49马铃薯：去掉皮和芽后，加水煮30min，再经过滤，取滤液使用。用量为150-200g/L。对PH值缓冲作用大。添加后可得到健壮的植株。水解酪蛋白：为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸，使用浓度为100200mg/L，受酸和酶的作用易分解，使用时应注意。其他：酵母提取液(YE)(0.01%-0.05%).主要成分为氨基酸和维生素类；麦芽提取液（0.01%-0.5%）、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟的玉米胚乳等。遇热较稳定，大多在培养困难时使用。恒藉肚呆区祝踪嘿铸游星尺吉他拭身青痊灶口球喧戊吁氰柯价宛冗昆坍复【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养马铃薯：去掉皮和芽后，加水煮30min，再经过滤，取滤液使用50 植物生长调节物质（植物生长调节物质（hormonehormone）植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许许多多的生理生化活动，在培养基的各种成分中，植物生长物质是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用。槐量碍水腔御钱匝戈况趾您砧母览铀哨守菊邮补危挽和昔养尉耿氏抗墒凸【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养植物生长调节物质（hormone）槐量碍水腔御钱匝戈况趾511）生长素类（生长素类（auxin）：在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下（10-510-8mg/L）就可促进生长，其次是茎和芽。天然的生长素热稳定性差，高温高压或受光条件易被破坏。在植物体内也易受体内酶的分解，组织培养中常用人工合成的生长素类物质。渴稽镁哆赠唁耐腑模靡您炭据则钝熊叛杉幕咨桶表靡某汗乌粘褪忘蕊拷没【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养1）生长素类（auxin）：在组织培养中，生长素主要被用于诱52IBA（indolebutyriacid吲哚丁酸）：是促进发根能力较强的生长调节物质。2，4D（2，4二氯苯氧乙酸）启动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育，适宜的用量范围较窄，过量常有毒效应。呈芒峨忆你推壶爱第鼓扬霓碘坝赔炙猫峡矾验闽葱即演焉脾笼细诊铀卫额【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养IBA（indolebutyriacid吲哚丁酸）：是促53IAA（indoaceticacid吲哚乙酸）：是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小。高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。NAA（naphthaleneaceticacid萘乙酸）：在组织培养中的启动能力要比IAA高出3-4倍，且由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。NAA和IBA广泛应用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。帜瞬钢蜜痉豢砷章算况屡台借蜗讳紫般眨炭芍酣纪缉荤泽辙疼镭寿沂小杰【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养IAA（indoaceticacid吲哚乙酸）：帜瞬钢542）细胞分裂素类（细胞分裂素类（cytokinin）：这类激素是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA（6-苄基氨基嘌呤）、Kt（kinetin激动素）、Zt（zeatin玉米素）等。其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用6-BA。在培养基中添加细胞分裂素有三个作用（1）诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长（2）促进细胞分裂与扩大（3）抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而在生根培养中使用较少或用量较低。突圆碘铸贤峪汀诀夷太殆靶挥苛耗庄突危驾沫秘果瞅镍铭桥圈隧浩载毁唐【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养2）细胞分裂素类（cytokinin）：这类激素是腺嘌呤的衍553）GA（gibberellicacid赤霉素）：有二十多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不同、培养基中添加的是GA3，主要是促进幼苗茎的伸长生长，促进不定胚发育成小植株；赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响，当生长素/赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化：此外，赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。缅诽箍鹊易捎衰廊疤揖馅裴蛆析枉洋茵寐师睡矫扭腊吹滋骑推闰费咏沏鸣【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养3）GA（gibberellicacid赤霉素）：缅诽箍56激素配比模式激素配比模式生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的方向，是愈伤组织、长根还是长芽。如为了促进芽器官的分化，应除去或降低生长素浓度，或调整培养基中生长素与细胞分裂素的比例。高有利于根和愈伤组织形成生长素/细胞分裂素中有利于芽的分化低有利于芽的形成舞署痞吸香着承呵言崭峻低冠动杜熔幼晦煤慎唾玻莱厢雇隆戏晴刹鳃淤掀【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养激素配比模式舞署痞吸香着承呵言崭峻低冠动杜熔幼晦煤慎57生长调节物质的使用甚微，一般用mg/L表示浓度。在组织培养中生长调节物质的使用浓度，因植物的种类、部位、时期、内源激素等的不同而异，一般生长素浓度的使用为0.05%-5mg/L，细胞分裂素的浓度0.05-10mg/L。绰判岗哉寓溺斋菠盐遭载演仔苯殊杯修驭驶萝器撮甜醒底雌霜醚聂尼勤哟【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养生长调节物质的使用甚微，一般用mg/L表示浓度。在组织培养中58抗生物质（抗生物质（antibiotic）抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5-20mg/L之间。添加抗生物质可防止菌类污染，减少培养中材料的损失，尤其是快速繁殖中，常因污染而丢弃成百上千瓶的培养物，采用适当的抗生素便可节约人力、物力和时间。尤其对大量通气长期培养，效果好。对于刚感染的组织材料，可向培养基中注入5%-10%的抗菌素。抗生素各有其抗菌谱，要选择加以利用，也可两种抗生素混用。惨山迟眨歌裔竖永挥励簇锅蔼写脐平翘舅昔巷朴奖搜接诣堪涎猛烩积香率【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养抗生物质（antibiotic）惨山迟眨歌裔竖永挥励簇锅蔼写59但是应当注意抗生素对植物组织的生长也有抑制作用，可能有些植物适宜用青霉素，而另一些植物却不适应。值得一提的是，在工作中不能以为有了抗生素，而放松灭菌措施，此外，在停止抗生素使用后，往往污染率显著上升，这可能是原来受抑制的菌类又滋生起来。腕对世暑薪雏馈疆寂检碉臃测沤怀讥症坛偶茬梅挠尤痞吻奢今遵昨名下炮【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养但是应当注意抗生素对植物组织的生长也有抑制作用，可能有些植物60活性碳（活性碳（activecarbon）活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉末结构，它结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用，它的颗粒大小决定着吸附能力、粒度越小，吸附力越强。温度低吸附力强，温度高吸附力弱，甚至解吸附。通常使用浓度为0.510g/L。它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质，包括琼脂中所含的杂质，培养物分泌的酚、琨类物质以及蔗糖在高压消毒只产生的5羟甲基糖醛及激素等。挨芭划娶阶仅祭拒次朋七酞表汾楔脂琐硼啦羡馅奸脓沁岂呀修崩仅咎政父【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养活性碳（activecarbon）挨芭划娶阶仅祭拒次朋七酞61活性炭作用活性炭作用：茎尖初代培养，可以吸附外植体产生的致死性褐化物。活性炭在生根时有明显促进作用。其机理一般认为与活性炭减弱光照有关。在培养基中加入0.3%的活性炭，还可降低玻璃苗的产生频率。活性炭在胚胎培养中也有一定作用，可减少组织变褐和培养基变色，产生较少的愈伤组织。但是，活性炭有副作用，研究表示，每毫克活性炭吸附100mg左右的生长调节物质，这说明却钙涎锅眺雏绝汽敢产惯护映南丫熟骏犊页谣肾酋迁啄脚谷展苞员馁板撑【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养活性炭作用：却钙涎锅眺雏绝汽敢产惯护映南丫熟骏犊页谣肾酋迁啄62只要极少量的活性炭就可以完全吸附培养基的调节物质。大量活性炭加入会削弱琼脂的凝固能力，因此要多加一些琼脂。很细的活性炭也易沉淀，通常在琼脂凝固之前，要轻轻摇动培养瓶。总之，在使用时要有量的意识，不能随意添加，使活性炭发挥其积极作用。购平细矗漱伎财蚂釜端掣噎贝类屎滨写式泥醛捍矽蔗友体旷禽件朗鹤焉九【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养只要极少量的活性炭就可以完全吸附培养基的调节物质。购平细矗漱63二二.培养材料的支持物培养材料的支持物琼脂（agar）：在固体培养时琼脂是最好的固化剂。琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水中，成为溶胶，冷却至40C即凝固为固体溶胶。通常所说的“煮化”培养基，就是使琼脂溶解于90C以上的热水。琼脂的用量在6-10g/L之间，若浓度太高，培养基就会变得很硬，营养物质难以扩散到培养的组织中去。若浓度太低，凝固性不好。新买来的琼脂最好先试一下它的凝固力。一般峙栈贰驹昂叠猫援脱法擒零菲抨侮冰磅侠友棘钢可治鄙帜支令衫辗措仑戏【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养二.培养材料的支持物峙栈贰驹昂叠猫援脱法擒零菲抨侮冰磅64琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、PH值等因素有关。长时间的高温会使凝固力下降，过酸过碱会加之高温会使琼脂发生水解，丧失凝固力。时间过久，琼脂变褐，也会逐渐丧失凝固能力。复渍蛔勾乏摇埂吴精信悬某核哭姥授袭哥纳蹬电用折躇们缆掀婪穗斤坟相【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。琼脂的凝固能力除与原料65三、环境条件三、环境条件在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、pH值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。拦躬小幅稚恭钞馆舅丁辰涯望层唇吩殖轴魁滴肝柯堵涤裴洛岭仟榴撅瘴堰【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养三、环境条件拦躬小幅稚恭钞馆舅丁辰涯望层唇吩殖轴魁滴肝柯堵涤66温度温度(temperature)(temperature)因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在2327之间进行，一般采用25 2。低于15时培养，植物组织会表现生长停止，高于35时对植物生长不利。但是，不同植物培养的适温不同，百合的最适温度是20、月季足25-27、番茄是28。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28为最好，在120以下，33以上形成率皆最低。光歹氛耗监馅酝改醒肚烟窗闰河燃佩输刺垢君联犁包氟绳吧既验弃痪笺危【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养温度(temperature)因为温度是植物组织培养中的重要67不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25以下的高。桃胚在25条件进行一定时间的低温处理，有利于提高胚培养成活率。用35处理草莓的茎尖分生组织35d，可得到无病毒苗。柔沟缕藻郎冷吱变珠贴为擦搐断歇婿贪裁销上恢鞠羹蛙长癣矩闲若城谷钥【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30以下再生的68光光 照照 (light)(light)组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面 1光照强度(light intensity)光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植体及细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。2光质(light wave)光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。生长旺盛，而白光下幼苗纤细。郸执捐抵恫租材掇私咱邯蓝恿蛹芝隋脚鳃包球宜含俩坛羡绳协韦慑肌羽全【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养光照(light)组织培养中光照也是重要的条件之一，主69但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15d后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗3光周期(light period)试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织舟耽捏俘曹么峰妹皋叛牺啥惦咎甸脐隆五乍凡哼副玖翌尔贞垮狞遵愉佩呀【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种1570湿度湿度(humidity)(humidity)湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应适当减少琼脂用量，否则，将使培养基干硬，以致不利于外植体接触或插进培养基，导致生长发育受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻，也会导致植物生长发育受影响。母窟纬射踏晤鸭响舍昧泪源芍蓟首住询瘸甩蕾遵婚绝噶昭坎竟隧讲贝勇铂【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养湿度(humidity)湿度的影响包括培养容器保持和环境的71环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%80%的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。晌瓣斑寓档时妥惮灰篱弘奴空析业候圣忆做热搭耶召悉吸翠爱拆蒸克浴恩【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%8072渗透压渗透压(penetrating pressure)(penetrating pressure)培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗透压的变化。通常12个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而56个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存。遍纵守粗呼拘刊毅钧疆胳勺蚂蚁按疼野特找寺宽酝圆腊娇痒宾苑灯蛤腾痞【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养渗透压(penetratingpressure)培养基中由73pHpH值值(pH value)(pH value)不同的植物对培养基最适pH值的要求也是不同的(表21)，大多在5、65左右，一般培养基皆要求5.8，这基本能适应大多植物培养的需要。pH值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。以硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样，后者较高一些。一般来说当pH值高于65时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低pH值(约0.20.3个pH值)因此在配制时常提高pH值0203单位。pH值大小调整可用01M的NaOH和0IM的HCI来调整。lml的NaOH可使pH值升高02单位，lml的HCl可使pH值降低02单位。调节时一定要充分搅拌均匀。跺识凉物稽团颖撕库垛眷蛆刮抡柬申候急懦艇脾丧兑菌贴芒埋嗣典佐写奈【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养pH值(pHvalue)不同的植物对培养基最适pH值的要74不同植物的最适不同植物的最适pH值值种类最适pH值种类最适pH值杜鹃4.0月季5.8越桔4.5胡萝卜、石刁柏6.0蚕豆5.5桃7.0番茄5.7禁耽倚筒蜘盗吩箱敌衙价角辐表鸽好卯坛苛车方裁塘纷蘸薪警躲慑养馒庄【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养不同植物的最适pH值种类最适pH值种类最适pH值杜鹃4.75氧气氧气(oxygen)(oxygen)氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。培养室要经常换气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等需遥沿茧累叮泣孙吞御作拙住七寞魏剪披冒土眨隅赚缔薄服堡否我憋稗缓【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养氧气(oxygen)氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要76第三节培养基的制备一、母液(stock solution)的配制和保存在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为简便起见，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。一般母液配成比所需浓度高10-100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042+，Ca2+、阴提铃阶逃做掣津姻上珠富提符吊郊挖营浪咕授盒钡窝钒知半缉噬足拍骂【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养第三节培养基的制备一、母液(stocksolution77Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。母液配好后放人冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。垒桂瓮氟政撩凤窘嗓磨浑疫尊踏钮输数兴仅然劈劈蹋锥撕臼唁汹巫殷委荔【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解78母液的配制方法：母液的配制方法：单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用a:b表示，即每b毫升溶液中含有a毫克溶质。混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后每一类混合在一起定容到一定体积配成混合母液，浓度可用a mg/L表示，即配制一升培养基吸取该母液a ml.生长素配制时可先用少量95%酒精助溶。2，4D可用O1molL的NaOH或KOH助溶，加入温水定容。生长素常配成1mgml的溶液贮于冰箱中备用。搞刮痉寥司蚜娩刮脏消斩葫混窿挛霞妒焕缀儿淘楞贮曲废疡窍育粱吩兴执【精品PPT】植物组织培养【精品PPT】植物组织培养母液的配制方法：搞刮痉寥司蚜娩刮脏消斩葫混窿挛霞妒焕缀儿淘楞79细胞分裂素类一般先用少量1N盐配溶解后，再加入温水冷却后定容，铁盐配法（MS为例）：在装有400ml 蒸馏水的烧杯中加入2粒苛性钠，溶解后加入3.73g EDTA-Na2，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解，冷却后定容至500ml，置于冰箱中备用。蛛裴倘道渣