药物的杂质检查课件

资料仅供参考,不当之处，请联系改正。第二节 一般杂质的检查方法第三节 特殊杂质的检查方法第一节 概述内容：内容：第二节 一般杂质的检查方法第三节 特殊杂质的检查方法第一1资料仅供参考,不当之处，请联系改正。一、药物的纯度要求一、药物的纯度要求1 1药物纯度的药物纯度的概念概念：药物的纯度是指药物的纯净程度药物的纯度是指药物的纯净程度 药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素2.2.药物纯度的药物纯度的要求要求是不断提高是不断提高 第一节第一节 概概 述述一、药物的纯度要求第一节 概 述2资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3 3药物纯度的药物纯度的评价评价：应把药物的性状、理化常数、杂质检查、应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。物的纯度。纯度检查也称为杂质检查纯度检查也称为杂质检查 3药物纯度的评价：3资料仅供参考,不当之处，请联系改正。评价标准评价标准 性状性状：1.结晶结晶粉末粉末 2.溶程溶程变长 3.颜色有异色有异 杂质检查杂质检查超标超标 含量测定含量测定含量低含量低评价标准 性状：1.结晶粉末 杂质检查超标 含量4资料仅供参考,不当之处，请联系改正。二、杂质的来源与种类二、杂质的来源与种类杂质杂质的的概念概念 药物中存在的无治疗用，影响药药物中存在的无治疗用，影响药物的疗效和稳定性，甚至对人体健康有物的疗效和稳定性，甚至对人体健康有害的物质，称为药物的杂质。害的物质，称为药物的杂质。二、杂质的来源与种类 杂质的概念 5资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（一）杂质的来源（一）杂质的来源 有两个方面：在生产过程中引入有两个方面：在生产过程中引入 在贮藏过程中引入在贮藏过程中引入 1.1.生产过程生产过程中引入的杂质中引入的杂质 主要指药物在合成过程中，未反应的主要指药物在合成过程中，未反应的 原料、中间体和副产物原料、中间体和副产物 （一）杂质的来源 1.生产过程中引入的杂质6资料仅供参考,不当之处，请联系改正。生产过程中残留有机溶剂、酸性或碱性生产过程中残留有机溶剂、酸性或碱性 杂质的检查。杂质的检查。药物中无效、低效异构体或晶型的检查药物中无效、低效异构体或晶型的检查 例如：例如：无味氯霉素存在无味氯霉素存在A A、B B晶型，其晶型，其 中中B B为有效，为有效，A A为低效。为低效。生产过程中残留有机溶剂、酸性或碱性7资料仅供参考,不当之处，请联系改正。主要指外界条件的变化或微生物的作用可主要指外界条件的变化或微生物的作用可能发生的水解、氧化、潮解、温度等变化，而能发生的水解、氧化、潮解、温度等变化，而产生的有关杂质。产生的有关杂质。如：如：阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸；阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸；麻醉乙醚氧化为醛和有毒的过氧化麻醉乙醚氧化为醛和有毒的过氧化物物 2.贮藏过程贮藏过程引入的杂质引入的杂质 主要指外界条件的变化或微生物的作用可能发生的水解、氧8资料仅供参考,不当之处，请联系改正。二、杂质的分类二、杂质的分类来源：一般杂质一般杂质:具有普遍性具有普遍性特殊杂质特殊杂质:具有特殊性具有特殊性毒性：有毒杂质有毒杂质:严格控制严格控制信号杂质信号杂质:监测生产监测生产二、杂质的分类来源：一般杂质:具有普遍性特殊杂质:具有9资料仅供参考,不当之处，请联系改正。三、杂质的限量检查三、杂质的限量检查 1 1杂质限量的杂质限量的概念概念 药物中所含杂质的药物中所含杂质的最大允许量最大允许量，叫做，叫做 杂质限量。杂质限量。通常用百分之几或百万分之几（通常用百分之几或百万分之几（ppmppm）来表示。来表示。三、杂质的限量检查 1杂质限量的概念10资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3、杂质限量检查、杂质限量检查 指所检查的杂质不得超过杂质的限量指所检查的杂质不得超过杂质的限量2、限量制定的考虑因素、限量制定的考虑因素 不得影响药物的质量不得影响药物的质量 根据药物的用途制定限量的大小根据药物的用途制定限量的大小 根据杂质本身毒性的大小制定限量根据杂质本身毒性的大小制定限量 利于生产利于生产 3、杂质限量检查2、限量制定的考虑因素11资料仅供参考,不当之处，请联系改正。4 4杂质限量的杂质限量的计算计算 杂质限量的杂质限量的计算公式计算公式：杂质限量杂质限量=杂质的最大允许量杂质的最大允许量供试品的量供试品的量100%100%标准液浓度标准液浓度体积体积供试品的量供试品的量100%100%L（%）=CV/S100%4杂质限量的计算 L（%）=CV/S10012资料仅供参考,不当之处，请联系改正。例例1 1葡萄糖中重金属的检查：葡萄糖中重金属的检查：已知：已知：S=4.0 gS=4.0 g；C=10g/mlC=10g/ml；L=510 L=510-6-6；求：求：V=V=？解：解：V=LS/C=V=LS/C=510 510-6-64.0/10104.0/1010-6-6=2.0(ml)=2.0(ml)例例2 2葡萄糖中砷盐的检查：葡萄糖中砷盐的检查：已知：已知：V=2.0 mlV=2.0 ml；C=1g/mlC=1g/ml；L=0.0004%L=0.0004%；求：求：S=S=？解：解：S=CV/L=S=CV/L=110 110-6-62.0/4102.0/410-6-6=0.5(g)=0.5(g)例1葡萄糖中重金属的检查：13资料仅供参考,不当之处，请联系改正。例例3 3磷酸可待因中吗啡的检查：磷酸可待因中吗啡的检查：已知：已知：V=5.0mlV=5.0ml；C=0.02 mg/mlC=0.02 mg/ml；S=0.1g S=0.1g；求：；求：L=L=？解：解：L=CV/S=L=CV/S=5.00.02/0.11000 100%5.00.02/0.11000 100%=0.1%=0.1%注意注意 单位一致单位一致 稀释倍数稀释倍数 表示方法（表示方法（%，mmpmmp）14资料仅供参考,不当之处，请联系改正。第二节第二节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法 一、氯化物的检查一、氯化物的检查 1 1原理原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液作用，：是利用氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶生成氯化银的白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶 液在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，以判断液在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，以判断 供试品中氯化物是否超过限量。供试品中氯化物是否超过限量。Cl Cl-+Ag+Ag+AgCl AgCl第二节 一般杂质的检查方法 一、氯化物的检查15资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2 2条件：条件：ClCl-0.05mg 0.05mg0.08mg/50ml,0.08mg/50ml,即相当于标准即相当于标准 氯化钠溶液氯化钠溶液5 5mlml8ml8ml。酸度酸度 稀硝酸稀硝酸1010ml/50mlml/50ml。温度温度 30 304040 2条件：16资料仅供参考,不当之处，请联系改正。Cl-1的浓度：的浓度：50-80ug/50 ml 在硝酸酸性条件下在硝酸酸性条件下 在暗处放置在暗处放置5 min注注 意意 Cl-1的浓度：50-80ug/50 ml注 意17资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3 3干扰的排除干扰的排除 （1 1）供试品液混浊：）供试品液混浊：可用含可用含硝酸硝酸的蒸馏水洗净氯纸中氯的蒸馏水洗净氯纸中氯 化物后过滤来消除混浊对氯化物检查的化物后过滤来消除混浊对氯化物检查的 干扰。干扰。3干扰的排除18资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（2 2）供试品有色：）供试品有色：采用内消色法，按药典附录规定的方法处理采用内消色法，按药典附录规定的方法处理供试品供试品+AgNO3放置放置1010minmin澄清溶液澄清溶液+标准标准NaClNaCl+水水对照溶液对照溶液供试品供试品+AgNO3+水水供试品溶液供试品溶液暗处放置暗处放置5 5minmin后比后比较较 （2）供试品有色：供试品+AgNO3放置10m19资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（3 3）药物与）药物与AgNOAgNO3 3反应反应 1、碘化物中氯离子的检查碘化物中氯离子的检查2、巴比妥类药物中氯离子的检查巴比妥类药物中氯离子的检查 （3）药物与AgNO3反应例：1、碘化物中氯离子20资料仅供参考,不当之处，请联系改正。二、硫酸盐检查法二、硫酸盐检查法 1 1原理原理 SO42-+Ba2+BaSO4稀HCl白色沉淀白色沉淀 二、硫酸盐检查法SO42-+Ba2+21资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2 2条件：条件：SOSO4 42-2-0.1mg 0.1mg0.5mg/50ml,0.5mg/50ml,即相当于标准硫酸钾溶液即相当于标准硫酸钾溶液1 15 5mlml 酸酸 度度 稀盐酸稀盐酸2 2ml/50mlml/50ml 3 3干扰的排除干扰的排除 供试品有色：可采用内消色法供试品有色：可采用内消色法 2条件：22资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（一）硫氰酸盐法（一）硫氰酸盐法 1 1原理原理 FeFe3+3+6SCN+6SCN-Fe(SCN)Fe(SCN)6-6-3-3-红色红色 2 2条件条件：FeFe3+3+0.01mg 0.01mg0.05mg/50ml,0.05mg/50ml,即相当于标准铁溶液即相当于标准铁溶液1 15 5mlml 酸酸 度度 稀盐酸稀盐酸4 4ml/50mlml/50mlHCl 三、铁盐检查法三、铁盐检查法 HCl 三、铁盐检查法23资料仅供参考,不当之处，请联系改正。当有当有FeFe2+2+存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化FeFe2+2+成成FeFe3+3+当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所 呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别 移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。分别取提取液比色。3干扰的排除干扰的排除 当有Fe2+存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化Fe2+3干24资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2Fe3+2HSCH2COOH2Fe2+SCH2COOH+2H+SCH2COOHFe2+2HSCH2COOHFe(SCH2COOH)2+H+Fe(SCH2COOH)2Fe(SCH2COOH)22-+2H2O 2OH-(二）巯基醋酸法二）巯基醋酸法 1.原理原理 巯基醋酸还原巯基醋酸还原Fe3+为为Fe2+，在氨在氨 碱性试液中与碱性试液中与Fe 2+作用生成红色作用生成红色 配位离子配位离子 2OH-(二）巯基醋酸法25资料仅供参考,不当之处，请联系改正。氨溶液提供碱性条件氨溶液提供碱性条件 巯基醋酸使高铁离子还原巯基醋酸使高铁离子还原 枸橼酸的作用是与铁离子形成配位离子，枸橼酸的作用是与铁离子形成配位离子，防止产生氢氧化铁沉淀防止产生氢氧化铁沉淀2.说明说明 氨溶液提供碱性条件2.说明26资料仅供参考,不当之处，请联系改正。四、重金属检查法四、重金属检查法 重金属重金属是指在实验条件下能有硫是指在实验条件下能有硫代乙酰胺或硫化钠作用而显色的金属代乙酰胺或硫化钠作用而显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等锑、铋等定义：定义：检查时以铅作为代表检查时以铅作为代表四、重金属检查法 重金属是指在实验条件下能有硫代乙酰胺27资料仅供参考,不当之处，请联系改正。药典收载了四种重金属的检查法药典收载了四种重金属的检查法第二法第二法 炽灼破坏后硫代乙酰胺法炽灼破坏后硫代乙酰胺法第三法第三法 硫化钠法；硫化钠法；第四法第四法 微孔滤膜法微孔滤膜法第一法第一法 硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法药典收载了四种重金属的检查法第二法 炽灼破坏后硫代乙酰胺28资料仅供参考,不当之处，请联系改正。1 1原理原理 CHCH3 3CSNHCSNH2 2+H+H2 2O CHO CH3 3CONHCONH2 2+H+H2 2S S 合格合格 H H2 2S +PbS +Pb2+2+PbS +2H PbS +2H+2 2条件：条件：PbPb2+2+1010g g2020g/27ml,g/27ml,相当于标准铅溶液相当于标准铅溶液1 12 2mlml。酸酸 度度 pH 3.0pH 3.03.5.3.5.合格合格 pH3.5 1原理 pH3.529资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3 3干扰的排除干扰的排除 (1)(1)供试品有色：可采用外消色法消除干扰。供试品有色：可采用外消色法消除干扰。(2)(2)供试品有微量供试品有微量FeFe3+3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氢析在弱酸性溶液中氧化硫化氢析 出硫，产生混浊影响比色，可出硫，产生混浊影响比色，可 加加VcVc或盐酸羟胺使或盐酸羟胺使FeFe3+3+氧化成氧化成 Fe Fe2+2+离子再检查。离子再检查。3干扰的排除 (1)供试品有色：可采用外消色法消除干扰30资料仅供参考,不当之处，请联系改正。五、砷盐检查法五、砷盐检查法 （一）古蔡法一）古蔡法Gutzeit)Gutzeit)(BP也采用此法）也采用此法）1.原理原理As3+3Zn+3H+3Zn+AsH3AsO33-+3Zn+9H+3Zn+3H2O+AsH3AsO43-+4Zn+11H+4Zn+4H2O+AsH3AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3(棕色棕色)2As(HgBr)3+AsH33AsH(HgBr)2(黄色黄色)As(HgBr)3+AsH33HBr+As2Hg3(棕黑色棕黑色)五、砷盐检查法 31资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.装置与试剂作用装置与试剂作用 (1)(1)验砷仪验砷仪 砷化氢发生瓶砷化氢发生瓶;中空磨口塞中空磨口塞;导气管导气管 (2)(2)试剂的作用试剂的作用 合格合格 KI-SnClKI-SnCl2 2的作用：的作用：交替还原作用；首先将交替还原作用；首先将AsO43-还原成还原成AsO33-，生成的碘再被还原成碘离子。生成的碘再被还原成碘离子。2.装置与试剂作用32资料仅供参考,不当之处，请联系改正。AsO43-+2I-+2H+AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2OI2+Sn2+2I-+Sn4+4I-+Zn2+ZnI42-AsO43-+2I-+2H33资料仅供参考,不当之处，请联系改正。ZnZn粒与氯化亚锡作用，在其面上形成粒与氯化亚锡作用，在其面上形成Zn-SnZn-Sn齐，起齐，起 去极化作用。去极化作用。Pb(AC)Pb(AC)2 2棉的作用是消除供试品可能含有的少量的硫棉的作用是消除供试品可能含有的少量的硫 化物。化物。S S2-2-+2H+2H+H H2 2S S H H2 2S+HgBrS+HgBr2 2 2HBr +HgS 2HBr +HgS（汞斑）汞斑）H H2 2S +Pb(AC)S +Pb(AC)2 2 PbS +2HAC PbS +2HAC Zn粒与氯化亚锡作用，在其面上形成Zn-Sn齐，起34资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3.干扰的排除干扰的排除（1）供试品为）供试品为S2-,SO32-,S2O32-等等:因在酸中生成因在酸中生成H2S,SO2,与与 HgBr HgBr作用生成作用生成HgSHgS或或HgHg，干扰砷斑检查。用硝酸氧化成硫干扰砷斑检查。用硝酸氧化成硫 酸盐可消除。酸盐可消除。（2）供试品为）供试品为Fe3+能消耗能消耗KI，SnCl2应测定条件，先可加足应测定条件，先可加足量量KI。3.干扰的排除35资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（3）含锑药物）含锑药物锑盐被还原为锑盐被还原为SbH3与与HgBr2试纸作试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检查，可用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检查，可改用改用Betterdorff法（白田道夫法）法（白田道夫法）（3）含锑药物 36资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（二）（二）Ag-DDCAg-DDC法法(二乙基二硫代氨基甲酸银，二乙基二硫代氨基甲酸银，USPUSP采用此法采用此法)1.1.原理原理：是利用砷化氢与：是利用砷化氢与Ag-DDCAg-DDC吡啶溶液吡啶溶液作用，使作用，使Ag-DDCAg-DDC中的中的 银还原为红色胶态银，以银还原为红色胶态银，以Ag-DDCAg-DDC溶液为空白，于溶液为空白，于510510nmnm 的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得大的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得大 于标准砷溶液的吸收度。于标准砷溶液的吸收度。2.2.试剂的作用试剂的作用：同古蔡法。：同古蔡法。（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸银，USP采用此法37资料仅供参考,不当之处，请联系改正。六、溶液颜色检查法六、溶液颜色检查法 溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量的方法。中国药典溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量的方法。中国药典 （20002000年版）收载有三种方法：年版）收载有三种方法：K K2 2CrCr2 2O O7 7 黄、绿黄、绿 1.1.标准比色液进行比较的方法标准比色液进行比较的方法 标准比色液标准比色液 CoClCoCl2 2 橙黄橙黄,橙红橙红 2.2.分光光度法分光光度法 CuSOCuSO4 4 棕红棕红 3.3.色差计法色差计法 通过测定供试品与标准比色液或水之间的色差值通过测定供试品与标准比色液或水之间的色差值六、溶液颜色检查法 溶液颜色检查法是控制药物中有色杂38资料仅供参考,不当之处，请联系改正。七、易炭化物检查法七、易炭化物检查法是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量呈色的微量有机杂质有机杂质。这类杂质多数结构未。这类杂质多数结构未知，常采用与标准比色液比色的方法进行检知，常采用与标准比色液比色的方法进行检查。查。(标准比色液为标准比色液为CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4)七、易炭化物检查法 是检查药物中遇硫酸易炭化或39资料仅供参考,不当之处，请联系改正。是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与浊是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与浊度标度标准液比浊的方法进行检查。浊准液比浊的方法进行检查。浊度标准液制备原理：度标准液制备原理：(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O 甲醛腙白色混浊甲醛腙白色混浊 不同级号浊度标准液不同级号浊度标准液 级 号 0.5 1 2 3 4浊度标准原液（ml）2.5 5.0 10.0 30.0 50.0水 （ml）97.5 95.0 90.0 70.0 50.0八、溶液澄清度检查法八、溶液澄清度检查法 是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与浊40资料仅供参考,不当之处，请联系改正。九、炽灼残渣检查法九、炽灼残渣检查法(residueonignition)BP称硫酸灰分（称硫酸灰分（sulphatedash)是检查有机药物中混入的各种无机杂质。常采用是检查有机药物中混入的各种无机杂质。常采用重量方法进行检查。重量方法进行检查。残渣及坩埚重残渣及坩埚重 坩埚重坩埚重 残渣残渣%=100%=100%供试品重供试品重九、炽灼残渣检查法(residue on ignition)41资料仅供参考,不当之处，请联系改正。十、干燥失重检查法十、干燥失重检查法 主要检查药物中的主要检查药物中的水分水分及其他及其他挥发性的物质挥发性的物质。常采用重量方法进行检查。常用的方法有四种：常采用重量方法进行检查。常用的方法有四种：（一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法（二）干燥剂干燥法（二）干燥剂干燥法（三）（三）减压干燥法减压干燥法十、干燥失重检查法 主要检查药物中的水分及其他挥发性的42资料仅供参考,不当之处，请联系改正。热重分析法热重分析法（四）（四）热分析法（热分析法（thermoanalysis)差示热分析差示热分析 差示扫描量热法差示扫描量热法 1.1.热重分析法（热重分析法（thermogravimetricanalysis,TGA)在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在加热同时失重的情况下，所发生的质的变化，常用于药物稳定加热同时失重的情况下，所发生的质的变化，常用于药物稳定性的研究；贵重和易氧化药物的干燥失重测定。性的研究；贵重和易氧化药物的干燥失重测定。(长春碱长春碱)43资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.2.差示热分析（差示热分析（differentialthermlanalysis,DTA)是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间的温差与温是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间的温差与温 度关系的一种技术。参比物是一种惰性物质，在加热过程中度关系的一种技术。参比物是一种惰性物质，在加热过程中 不发生相变和化学变化。因此温差不发生相变和化学变化。因此温差(T)T)只与被测物质的量质只与被测物质的量质 变化有关。变化有关。T=0 T=0 被测物未发生吸热或放热反应被测物未发生吸热或放热反应;T=-T=-为为 吸热峰吸热峰;T=+T=+为放热峰为放热峰.2.差示热分析（differentialtherml44资料仅供参考,不当之处，请联系改正。测药的溶点测药的溶点 DTADTA在药物分析中应用在药物分析中应用 尖峰为物理变化尖峰为物理变化 药物定性分析药物定性分析 宽峰为化学变化宽峰为化学变化 估测药物的纯度估测药物的纯度 测药的溶点45资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3 3.差示扫描量热法差示扫描量热法(differentialscanningcalorimetry,DSC)是在程序升温下，测量维持样品和参比物的温度相同，系统是在程序升温下，测量维持样品和参比物的温度相同，系统 所需供给样品随温差变化的能量的一种技术。所需供给样品随温差变化的能量的一种技术。DSCDSC与与DTADTA的的不同之不同之 处处是记录方式不同，是记录系统供给的能量，吸热供给能量；放是记录方式不同，是记录系统供给的能量，吸热供给能量；放 热减少供给的能量。在药物分析中应用与热减少供给的能量。在药物分析中应用与DTADTA相同。相同。DSC-TGDSC-TG常联合常联合 用。用。3.差示扫描量热法(differential sc46资料仅供参考,不当之处，请联系改正。十一、有机溶剂残留量测定法十一、有机溶剂残留量测定法主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂(如苯、氯如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、二氧六环等）仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、二氧六环等）。常采用常采用气相色谱法方法进行检查。常用的方法有二种：气相色谱法方法进行检查。常用的方法有二种：直接进样法和直接进样法和 顶空进样法（试用于挥发性大的样品测定）。顶空进样法（试用于挥发性大的样品测定）。色谱色谱系统性系统性试验的试验的要求要求：(1)(1)N N1000;(2)1000;(2)用内标法测定时，要求用内标法测定时，要求R R1.5;(3)1.5;(3)外标法测外标法测 定时，待测物的峰面积的定时，待测物的峰面积的RSDRSD10%10%。十一、有机溶剂残留量测定法 主要检查药物47资料仅供参考,不当之处，请联系改正。残留有机溶剂测定的方法和限量残留有机溶剂测定的方法和限量有机溶剂 柱温（）内标 物 测定方法 限量（%）二氧六环 170 吡啶 1 法 0.038吡啶 170 二氧六环 1 法 0.02苯 170 甲苯 1 法或2 法 0.0002甲苯 170 苯 1法或2 法 0.089氯方 140 二氯甲烷 1 法或2 法 0.006二氯甲烷 140 1法或2 法 0.06环氧乙烷 80 2 法 0.001返 回残留有机溶剂测定的方法和限量有机溶剂 48资料仅供参考,不当之处，请联系改正。第三节第三节 特殊杂质的检查方法特殊杂质的检查方法 一、利用药物和杂质在物理性质上的差异一、利用药物和杂质在物理性质上的差异 （一）臭味及挥发性质的差异（一）臭味及挥发性质的差异 例如：黄凡士林中异性有机物检查：本品例如：黄凡士林中异性有机物检查：本品2.02.0g,g,直火加热无直火加热无 辛味。浓过氧化氢中不挥发性杂质检查：辛味。浓过氧化氢中不挥发性杂质检查：1010mlml水浴蒸水浴蒸 干残渣干残渣1515mgmg （二）颜色差异二）颜色差异 例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品2.02.0g g，加加NaOHNaOH试液试液1010mlml，加水加水2525mlml，与黄色与黄色3 3号比色液比，号比色液比，不得更深。不得更深。第三节 特殊杂质的检查方法 一、利用药物和杂质在物理性49资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（三）溶解行为的差异（三）溶解行为的差异 例如：吡哌酸中碱中不溶物吡哌酸甲酯（例如：吡哌酸中碱中不溶物吡哌酸甲酯（I I）和（和（IIII）检查检查 （四）旋光性质的差异（四）旋光性质的差异 例如：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：本品溶液例如：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：本品溶液(50(50mg/ml)mg/ml)-0.4 0.4 （三）溶解行为的差异 50资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异 1.1.紫外分光光度法：紫外分光光度法：例如例如:地蒽酚中二羟基蒽醌的检查地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 再如：苯丙醇中苯丙酮的检查：可利用供试液的吸收度再如：苯丙醇中苯丙酮的检查：可利用供试液的吸收度 比来控制杂质比来控制杂质;纯品苯丙醇纯品苯丙醇A A247nm247nm/A/A258nm258nm=0.59;=0.59;99.5%99.5%时时A A247nm247nm/A/A258nm258nm=0.79;=0.79;因此规定供试品因此规定供试品A A247nm247nm/A/A258nm258nm 0.79;0.79;即所含苯丙酮即所含苯丙酮 0.5%.0.5%.（五）对光吸收性质的差异 再如：苯丙醇中苯丙酮的检51资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.2.原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发自是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的 含量。含量。限量检查时：对照品液限量检查时：对照品液=供试品供试品+限量限量-a a 供试品液供试品液=-=-b b 符合规定时符合规定时 b b(a-b);b(a-b);b(a-b)(a-b)不合格。不合格。2.原子吸收分光光度法：52资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3 3。红外分光光度法：。红外分光光度法：主要用于药物中无效或低效主要用于药物中无效或低效晶型检查晶型检查 如：甲苯咪唑中如：甲苯咪唑中 A A晶型检查晶型检查 3。红外分光光度法：53资料仅供参考,不当之处，请联系改正。A A 晶型晶型 C C 晶型晶型 在在640640cmcm-1 -1 有强吸收有强吸收 吸收很弱吸收很弱 在在662662cmcm-1 -1 吸收很弱吸收很弱 有强吸收有强吸收 662 662cmcm-1-1 640 640cmcm-1 -1 662662cmcm-1-1 640 640cmcm-1-1 供试品供试品+10%+10%A A晶型晶型 D D2 2 D D1 1 供试品供试品 D D2 2 D D1 1 10%10%R=DR=D1 1/D/D2 2 R R=D=D1 1/D/D2 2 54资料仅供参考,不当之处，请联系改正。4.4.荧光分析法荧光分析法 3,4-3,4-二去氢利血平二去氢利血平 利血平中氧化产物检查：利血平利血平中氧化产物检查：利血平(无荧光无荧光)()(I)(I)(黄绿色荧光黄绿色荧光)3,4,5,6-3,4,5,6-四去氢利血平四去氢利血平 (II)(II)(蓝色荧光蓝色荧光)4.荧光分析法 55资料仅供参考,不当之处，请联系改正。(六六)吸附或分配性的差异吸附或分配性的差异 1.1.薄层色谱法薄层色谱法(TLC)TLC)(1)(1)杂质对照品法杂质对照品法 例如例如:盐酸左旋咪唑中检查盐酸左旋咪唑中检查 硅胶硅胶G G 2,3-2,3-二氢二氢-6-6-苯基咪唑苯基咪唑2,1-2,1-bb噻唑盐噻唑盐 苯苯:甲醇甲醇:冰冰HACHAC 样品样品 对招品对招品。(六)吸附或分配性的差异 (1)杂质对照品法。56资料仅供参考,不当之处，请联系改正。(2)(2)高低浓度对比品法高低浓度对比品法 例如例如:盐酸异丙嗪中有关物质的检查盐酸异丙嗪中有关物质的检查 硅胶硅胶G G 有有多个杂质多个杂质而且而且结构不清结构不清 样品样品1010mg/ml;mg/ml;对照品对照品(1)0.15mg/ml (1)0.15mg/ml 己烷己烷:丙酮丙酮:乙胺乙胺 (2)0.05 (2)0.05mg/mlmg/ml 样品液样品液 对对(1)(2)(1)(2)供试液杂质斑点供试液杂质斑点不多于不多于3 3个个;杂质斑点与对照杂质斑点与对照(2)(2)的主斑点比的主斑点比 较较,不得更深不得更深;如有一点超过如有一点超过,应不深于对照液应不深于对照液(2)(2)的主斑点的主斑点.(2)高低浓度对比品法.57资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.2.纸层析法纸层析法(PC)PC)常用于常用于极性大极性大的药物的分离、分析，如地高辛中的的药物的分离、分析，如地高辛中的有关杂质的检查。有关杂质的检查。2.纸层析法(PC)58资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3.3.高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)HPLC)（1 1）峰面积归一化法峰面积归一化法：L%=AL%=Ai i/(A/(Ai i+A+A主主）100%100%例如：利巴韦林中有关杂质的检查：例如：利巴韦林中有关杂质的检查：对照品液对照品液(5(5g/ml)g/ml)进样进样1010l,l,调灵敏度，使主峰达满调灵敏度，使主峰达满 量程的量程的20%20%25%25%样品液样品液(0.4(0.4mg/ml)mg/ml)进样进样1010l,l,杂质杂质AAi i(A(Ai i+A+A主主）的的1.0%1.0%3.高效液相色谱法(HPLC)59资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（2 2）不加校正因子主成分对照法不加校正因子主成分对照法 对照品液为供试品的稀释液进样测得对照品液为供试品的稀释液进样测得A A主主 供试品液进样测得供试品液进样测得AAi i 其其A Ai i A A主主即为合格即为合格.例如例如:甲硝唑中甲硝唑中2-2-甲基甲基-5-5-硝基咪唑硝基咪唑:对照品液对照品液(0.01(0.01mg/ml)mg/ml)进样进样2020l,l,调灵敏度，使主峰达调灵敏度，使主峰达10%10%30%30%样品液样品液(0.14(0.14mg/ml)mg/ml)进样进样2020l,l,杂质杂质AAi iA A主主的的1.0%.1.0%.药物的杂质检查课件60资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（3 3）内标法加校正因子内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量测定供试品中杂质的含量 对照品对照品+内标内标 进样求校正因子（进样求校正因子（f)=(Af)=(As s/C/Cs s)/(A)/(AR R/C/CR R)供试品供试品+内标内标 进样求进样求A AX X.A.AS S,则杂质浓度则杂质浓度C CX X=f =f A AX X/(A/(AS S/C/CS S)（3）内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量61资料仅供参考,不当之处，请联系改正。4.4.气相色谱法气相色谱法(GC)GC)主要用于药物中主要用于药物中挥发性的杂质挥发性的杂质检查，其检查方检查，其检查方 法与法与HPLCHPLC法相同。法相同。4.气相色谱法(GC)62资料仅供参考,不当之处，请联系改正。二、利用药物和杂质在化学性上的差异二、利用药物和杂质在化学性上的差异（一）酸碱性的差异（一）酸碱性的差异1.1.规定消耗滴定液体积规定消耗滴定液体积 例如己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸检查：例如己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸检查：(NaOH 0.02mol/L)NaOH 0.02mol/L)取本品取本品0.200.20g+g+中性乙醇中性乙醇+溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝 微蓝色微蓝色0.50ml0.50ml 2.2.pHpH法法 例如乙琥胺中例如乙琥胺中2-2-甲基甲基-2-2-乙基丁二酸检查：乙基丁二酸检查：0.010.01g/ml pH3.0g/ml pH3.04.5.4.5.3.3.指示剂法指示剂法 例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查：其水溶液不得使甲基橙显红例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查：其水溶液不得使甲基橙显红 色。色。二、利用药物和杂质在化学性上的差异（一）酸碱性的差异63资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（二）氧化还原性的差异（二）氧化还原性的差异例如：例如：NaCl中中I-和和Br-检查检查EOCl/2Cl-=+1.3595VEOBr/2Br-=+1.065VEOI/2I-=+0.5345V,因此因此+NaNO2+H2SO4+淀粉显蓝色淀粉显蓝色再例如：盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查：后者可被碘氧化生成水溶性再例如：盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查：后者可被碘氧化生成水溶性绿色化绿色化合物。因此合物。因此ChP规定：本品规定：本品50mg+4mlH2O+1dI2+5ml乙醚乙醚乙醚层不得显红色；水层不得显绿色。乙醚层不得显红色；水层不得显绿色。再例如：盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查：后者可被碘氧化生成水溶性64资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀例一、间苯二酚中邻苯二酚检查：后者例一、间苯二酚中邻苯二酚检查：后者+Pb(Ac)2白色白色ChP规定：本品规定：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸稀醋酸+0.5mlPb(Ac)2不得发生混浊，即为合格。不得发生混浊，即为合格。例二、硝酸毛果芸香碱中其他生物的检查：后者例二、硝酸毛果芸香碱中其他生物的检查：后者+氨水氨水+K2Cr2O7ChP规定：本品规定：本品0.2g+20mlH2O两份；两份；I份份+数滴氨试液；另数滴氨试液；另1份份+数滴数滴K2Cr2O7试液试液，均不得发生混浊。，均不得发生混浊。（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀65资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（四（四）杂质与一定试剂反应产生颜色杂质与一定试剂反应产生颜色 例一、盐酸普萘洛尔中游离例一、盐酸普萘洛尔中游离-萘酚检查：利用后者可与重氮盐萘酚检查：利用后者可与重氮盐 发生重氮化发生重氮化-偶合反应，生成偶氮染料。偶合反应，生成偶氮染料。ChP规定：供试品规定：供试品20mg+乙醇与乙醇与10%NaOH液各液各2ml+重氮苯重氮苯磺酸磺酸试液试液1 1ml,ml,放置放置3 3minmin；如显色，与如显色，与0.30.3ml-ml-萘萘 酚对照液（酚对照液（2020g/ml)g/ml)比较不得更深。比较不得更深。例二、碘他拉酸中氨基化合物的检查：利用重氮化例二、碘他拉酸中氨基化合物的检查：利用重氮化-偶合反应偶合反应ChP规定：供试品规定：供试品2.5mg/ml经经重氮化重氮化-偶合反应后，在波长偶合反应后，在波长 485 485nmnm测得测得A A 0.250.25（四）杂质与一定试剂反应产生颜色66资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（五）杂质与一定试剂反应产生气体（五）杂质与一定试剂反应产生气体ChP附录中收载氰化物的两种检查方法：附录中收载氰化物的两种检查方法：第一法：改进普鲁士蓝法第一法：改进普鲁士蓝法原理：原理：CN-+酒石酸酒石酸HCNFe(CN)64-Fe4Fe(CN)6第二法：气体扩散第二法：气体扩散-三硝基苯酚锂法三硝基苯酚锂法原理：原理：HCN扩散进入三硝基苯酚锂试液，生成异红紫酸盐，在扩散进入三硝基苯酚锂试液，生成异红紫酸盐，在500nm波长处测定吸收度。波长处测定吸收度。Fe2+Fe3+（五）杂质与一定试剂反应产生气体 ChP附录中67资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（六）药物经有（六）药物经有机机破坏后检查杂质破坏后检查杂质某些环状有机药物在生产中可能引入磷、硫、卤素及硒等杂某些环状有机药物在生产中可能引入磷、硫、卤素及硒等杂质，质，这些杂质与有机分子中的碳原子以共价键结合，需进行有机这些杂质与有机分子中的碳原子以共价键结合，需进行有机破坏后检查，各国药典所采用的方法为氧瓶燃烧法。破坏后检查，各国药典所采用的方法为氧瓶燃烧法。(下章讨论下章讨论)1。硒检查法：有机破坏转化为。硒检查法：有机破坏转化为SeO3+H2OH2SeO4H2SeO4+2NH2OHH2SeO3+3H2OH2SeO3+二氨基萘二氨基萘4，5-苯并本硒二唑（苯并本硒二唑（378nm有吸收）有吸收）（六）药物经有机破坏后检查杂质68资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2 2 氟检查法氟检查法 有机氟药物有机氟药物 F F-+茜素氟蓝茜素氟蓝+硝酸亚铈硝酸亚铈 紫色配位化合物（紫色配位化合物（610610nmnm）OpH4.3 2 氟检查法OpH4.369资料仅供参考,不当之处，请联系改正。Tianjin Medical University天津医科大学药学院天津医科大学药学院药物分析药物分析第三章第三章谢谢！Tianjin Medical University天津医70