电泳技术的基本原理课件

带电物质在电场中向其所带电荷带电物质在电场中向其所带电荷相反相反的电极的电极移动的现象称电泳。移动的现象称电泳。电泳分离生物大分子的原理：电泳分离生物大分子的原理：由于由于混合物中各组分所带电荷性质、混合物中各组分所带电荷性质、电荷数量以及分子量的不同，在同一电荷数量以及分子量的不同，在同一电场的作用下，它们泳动的方向和速电场的作用下，它们泳动的方向和速度也不同。因此，在一定时间内各组度也不同。因此，在一定时间内各组分移动的距离不同，从而达到分离和分移动的距离不同，从而达到分离和鉴定的鉴定的目的。目的。带电物质在电场中向其所带电荷相反的电极移动的现象称电泳。1在电场中，推动带电质点运动的力（在电场中，推动带电质点运动的力（F F）等于质点）等于质点所带净电荷量（所带净电荷量（Q Q）与电场强度（）与电场强度（E E）的乘积）的乘积。F FEQEQ质点的前移同样要受到阻力（质点的前移同样要受到阻力（f f）的影响，对于）的影响，对于一个球形质点，服从一个球形质点，服从StokeStoke定律，即：定律，即：f f6 r 6 r （r r为质点半径，为质点半径，为缓冲液的粘滞系数，为缓冲液的粘滞系数，为质点移动速度）为质点移动速度）其他因素其他因素：缓冲缓冲液液pHpH、离子强度、离子强度I I、支持介质、支持介质的筛孔等。的筛孔等。影响迁移率的因素影响迁移率的因素在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q2SDS-PAGE凝胶电泳凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳SDS-PAGE凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳3SDS-PAGE凝胶电泳凝胶电泳基本原理基本原理基本原理基本原理分类分类分类分类连续系统；连续系统；连续系统；连续系统；不连续系统：不连续系统：不连续系统：不连续系统：浓缩效应浓缩效应浓缩效应浓缩效应，电荷效应电荷效应电荷效应电荷效应。分离分离分离分离范围范围范围范围上样缓冲上样缓冲上样缓冲上样缓冲液液液液常见常见常见常见问题及处理方法问题及处理方法问题及处理方法问题及处理方法优缺点优缺点优缺点优缺点SDS-PAGE凝胶电泳基本原理4电泳技术的基本原理课件5基本原理基本原理阴离子去污剂阴离子去污剂SDS破坏蛋白质分子之间及与其它物质分子之破坏蛋白质分子之间及与其它物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变其原有的构象，并同蛋间的非共价键，使蛋白质变性而改变其原有的构象，并同蛋白质分子充分结合形成带负电荷的蛋白质白质分子充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物复合物强强还原剂巯基乙醇还原剂巯基乙醇打开蛋白质分子内的二硫键使这种结合更打开蛋白质分子内的二硫键使这种结合更加加充分充分结合结合了了SDS的蛋白质在水溶液中的形状类似于长椭圆棒，不的蛋白质在水溶液中的形状类似于长椭圆棒，不同的蛋白质同的蛋白质-SDS复合物其椭圆棒的短轴长度恒定，而长轴的复合物其椭圆棒的短轴长度恒定，而长轴的长度则与长度则与蛋白质分子量蛋白质分子量的大小成正比。的大小成正比。这样的蛋白质这样的蛋白质-SDS复合物在电场作用下，其迁移率便不再受复合物在电场作用下，其迁移率便不再受蛋白质原有的净电荷及形状等因素的影响，而主要取决于其蛋白质原有的净电荷及形状等因素的影响，而主要取决于其分子量大小这一因素。根据这一特点，就可以将各蛋白组分分子量大小这一因素。根据这一特点，就可以将各蛋白组分按分子量大小分开。按分子量大小分开。基本原理阴离子去污剂SDS破坏蛋白质分子之间及与其它物质分子6分类分类 PAGE根据其有无浓缩效应根据其有无浓缩效应，分为连连续系统续系统和不连续系统不连续系统两大类.连续系统连续系统电泳体系中电泳体系中,缓冲液缓冲液pH值及值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应要靠电荷和分子筛效应。分类PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不7不连续系统不连续系统不连续系统中由于缓冲液离子成分，不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。清晰度及分辨率均较前者佳。不连续系统不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电8浓缩胶浓缩胶浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。窄的区带。分离胶分离胶孔径较小孔径较小,通过选择合适的凝胶浓度通过选择合适的凝胶浓度,可以使可以使样品很好的分离样品很好的分离.浓缩胶浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较9凝胶由两种不同的凝胶层组成。上层为浓缩胶，下层凝胶由两种不同的凝胶层组成。上层为浓缩胶，下层为分离胶为分离胶。在。在上下电泳槽内充以上下电泳槽内充以Tris-甘氨酸缓冲液甘氨酸缓冲液(pH8.3)，上层胶的缓冲液中加入，上层胶的缓冲液中加入PH=6.8的的Tris-HCI,下下层中的缓冲液中层中的缓冲液中Tris-HCI的的PH=8.8。这样。这样便形成了凝便形成了凝胶孔径和缓冲液胶孔径和缓冲液pH值的不连续性。在浓缩胶中值的不连续性。在浓缩胶中HCl几几乎全部解离为乎全部解离为Cl-，但只有极少部分甘氨酸解离为，但只有极少部分甘氨酸解离为H2NCH2COO-。蛋白质的等电点一般在。蛋白质的等电点一般在pH5左右，在左右，在此条件下其解离度在此条件下其解离度在HCl和甘氨酸之间。当电泳系统通和甘氨酸之间。当电泳系统通电后，这电后，这3种离子同向阳极移动。其有效泳动率依次为种离子同向阳极移动。其有效泳动率依次为Cl-蛋白质蛋白质H2NCH2COO-，故，故C1-称为快离子，而称为快离子，而H2NCH2COO-称为慢离子。称为慢离子。浓缩效应之一浓缩效应之一凝胶由两种不同的凝胶层组成。上层为浓缩胶，下层为分离胶。在上10浓缩效应之二浓缩效应之二电泳开始后，快离子在前，在它后面形成离子浓度电泳开始后，快离子在前，在它后面形成离子浓度低的区域即低电导区。电导与电压梯度成反比，所低的区域即低电导区。电导与电压梯度成反比，所以低电导区有较高的电压梯度。这种高电压梯度使以低电导区有较高的电压梯度。这种高电压梯度使蛋白质和慢离子在快离子后面加速移动。在快离子蛋白质和慢离子在快离子后面加速移动。在快离子和慢离子之间形成一个稳定而不断向阳极移动的界和慢离子之间形成一个稳定而不断向阳极移动的界面。由于蛋白质的有效移动率恰好介于快慢离子之面。由于蛋白质的有效移动率恰好介于快慢离子之间，因此蛋白质离子就集聚在快慢离子之间被浓缩间，因此蛋白质离子就集聚在快慢离子之间被浓缩成一条狭窄带。这种浓缩效应可使蛋白质浓缩数百成一条狭窄带。这种浓缩效应可使蛋白质浓缩数百倍。倍。浓缩效应之二电泳开始后，快离子在前，在它后面形成离子浓度低11样品进入分离胶后，慢离子甘氨酸全样品进入分离胶后，慢离子甘氨酸全部解离为负离子，泳动速率加快，很快超部解离为负离子，泳动速率加快，很快超过蛋白质，高电压梯度随即消失。此时蛋过蛋白质，高电压梯度随即消失。此时蛋白质在均一的外加电场下泳动，但由于蛋白质在均一的外加电场下泳动，但由于蛋白质分子所带的有效电荷不同，使得各种白质分子所带的有效电荷不同，使得各种蛋白质的泳动速率不同而形成一条条区带。蛋白质的泳动速率不同而形成一条条区带。电荷效应之一电荷效应之一样品进入分离胶后，慢离子甘氨酸全部解离为负离12电荷效应之二电荷效应之二 与与SDS结合的蛋白质的构型也发生变化，结合的蛋白质的构型也发生变化，在水溶液中在水溶液中SDS-蛋白质复合物都具有相似的蛋白质复合物都具有相似的形状，使得形状，使得SDS-PAGE电泳的泳动率不再受蛋电泳的泳动率不再受蛋白质原有电荷与形状的影响。因此，各种白质原有电荷与形状的影响。因此，各种SDS-蛋白质复合物在电泳中不同的泳动率只蛋白质复合物在电泳中不同的泳动率只反映了蛋白质分子量的不同。反映了蛋白质分子量的不同。电荷效应之二与SDS结合的蛋白质的构型也发生变化，在13电荷效应之三电荷效应之三 在在SDS-PAGE电泳中，由于电泳中，由于SDS这种阴这种阴离子表面活性剂以一定比例和蛋白质结合成离子表面活性剂以一定比例和蛋白质结合成复合物，使蛋白质分子带负电荷，这种负电复合物，使蛋白质分子带负电荷，这种负电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷差别，荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷差别，从而降低或消除了蛋白质天然电荷的差别；从而降低或消除了蛋白质天然电荷的差别；此外，由多亚基组成的蛋白质和此外，由多亚基组成的蛋白质和SDS结合后结合后都解离成亚单位，这是因为都解离成亚单位，这是因为SDS破坏了蛋白破坏了蛋白质氢键、疏水键等非共价键。质氢键、疏水键等非共价键。电荷效应之三在SDS-PAGE电泳中，由于SDS14SDS聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶的的有有效效分分离离范范围围取取决决于于用用于于灌灌胶胶的的聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺的的浓浓度度和和交交联联度度。在在没没有有交交联联剂剂的的情情况况下下聚聚合合的的丙丙烯烯酰酰胺胺形形成成毫毫无无价价值值的的粘粘稠稠溶溶液液，而而经经双双丙丙烯烯酰酰胺胺交交联联后后凝凝胶胶的的刚刚性性和和抗抗张张强强度度都都有有所所增增加加，并并形形成成SDS-蛋蛋白白质质复复合合物物必必须须通通过过的的小小孔孔。这这些些小小孔孔的的孔孔径径随随“双双丙丙烯烯酰酰胺胺丙丙烯烯酰酰胺胺”比比率率的的增增加加而而变变小小，比比率率接接近近1：20时时孔孔径径达达到到最最小小值值。SDS聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶大大多多按按“双双丙丙烯烯酰酰胺胺丙丙烯烯酰酰胺胺”为为1：29配配制制，试试验验表表明明它它能能分分离离大大小小相相差差只只有有3%的蛋白质。的蛋白质。分离范围分离范围SDS聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围取决于用于灌胶的聚丙烯酰胺15上样缓冲液之一上样缓冲液之一上样缓冲液上样缓冲液(SDS-PAGEloadingbuffer)是一种以是一种以溴酚蓝溴酚蓝为染料，为染料，5倍浓缩的倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样凝胶电泳上样缓冲液，用于常规的缓冲液，用于常规的SDS-PAGE蛋白电泳样品上样。蛋白电泳样品上样。本产品分为本产品分为还原型和非还原型还原型和非还原型两种，还原型上样两种，还原型上样缓冲液中的巯基可使蛋白分子的链内二硫键和链间二缓冲液中的巯基可使蛋白分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，使通过二硫键连接的各亚单位彼此分离，硫键断裂，使通过二硫键连接的各亚单位彼此分离，在电泳凝胶上显现多个蛋白条带，选购和使用时请务在电泳凝胶上显现多个蛋白条带，选购和使用时请务必注明，仔细区分。必注明，仔细区分。上样缓冲液之一上样缓冲液(SDS-PA16 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质质染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。的快速、灵敏的方法。考马斯亮蓝考马斯亮蓝考马斯亮蓝17SDS-PAGE凝胶电泳实验装置18垂直板垂直板电泳装置电泳装置加样加样样品迁样品迁移方向移方向垂直板电泳装置加样样品迁移方向19电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。个带孔胶粒。混合样品混合样品带孔胶带孔胶按分子按分子大小分离大小分离电泳方向电泳方向电泳电泳小分子小分子大分子大分子电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝20夹在两块玻璃夹在两块玻璃板之间的凝胶板之间的凝胶电泳电泳缓冲液缓冲液电泳电泳缓冲液缓冲液加在槽中的经加在槽中的经SDS处理的样品处理的样品分子量小分子量小分子量大分子量大电源电源夹在两块玻璃板之间的凝胶电泳缓冲液电泳缓冲液加在槽21电泳后的凝胶经考马斯亮蓝染色、电泳后的凝胶经考马斯亮蓝染色、脱色后的凝胶照片脱色后的凝胶照片图1 标准蛋白质与待测样品电泳图谱 94 00062 00043 00031 00020 10014 400注：胶槽1 标准蛋白；胶槽2、3 样品蛋白电泳后的凝胶经考马斯亮蓝染色、脱色后的凝胶照片图1标准蛋22标准蛋白分子量标准蛋白分子量未未知知蛋蛋白白在一定的凝胶浓度下，在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数与多肽链分子量的对数与多肽链的相对迁移率成多肽链的相对迁移率成线性关系，所以可以通线性关系，所以可以通过标准曲线求未知多肽过标准曲线求未知多肽链分子量链分子量。相对迁移率相对迁移率结果处理标准蛋白分子量未知蛋白在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数23常见问题及处理办法常见问题及处理办法纹理和拖尾现象纹理和拖尾现象由于样品溶解不佳引起的，克服的方法可由于样品溶解不佳引起的，克服的方法可以在加样前离心，增加一些增溶辅助试剂以在加样前离心，增加一些增溶辅助试剂如尿素。如尿素。蛋白带过宽蛋白带过宽与邻近泳道的蛋白带相连是由于加样量太与邻近泳道的蛋白带相连是由于加样量太多，可以减少上样量。多，可以减少上样量。常见问题及处理办法纹理和拖尾现象24琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳25实验原理实验原理1琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是是D-半乳糖和半乳糖和3,6-脱水脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。其本身不带有电荷。因此束，构成大网孔型凝胶。其本身不带有电荷。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。鉴定及纯化。实验原理1琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是D26实验原理实验原理2DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。不同的区带。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的分子质量的DNA，也可以分离相对分子质量，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的相同，但构型不同的DNA分子。分子。实验原理2DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下27琼脂糖凝胶电泳技术琼脂糖凝胶电泳技术28DNA的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系（1）DNA分子的大小在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。（2）不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。DNA的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依29核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）直线DNA开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状DNA（一般为球形）不能进入胶中，相对迁移率为0（Rm=0），而同等大小的直线双链DNA（刚性棒状）则可以长轴方向前进（Rm0），由此可见，这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液离子强度等的影响。核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系不同构型DNA的移动速度30凝胶的浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.52%之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。凝胶的浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.52%之间，低31缓冲液 常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更32电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30，对于巨大的DNA电泳，温度应该低于15。注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象。电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于33marker的选择DNA电泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正对照DNA来估计DNA片段大小。Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的，这样对目标片段大小的估计才比较准确。需要注意的是Marker的电泳同样也要符合DNA电泳的操作标准。如果选择DNA/HindIII或者DNA/EcoRI的酶切Marker，需要预先65加热5min，冰上冷却后使用。从而避免HindIII或EcoRI酶切造成的粘性接头导致的片段连接不规则或条带信号弱等现象。marker的选择DNA电泳一定要使用DNAMarker或34操作操作 操作35影响电泳迁移率的因素影响电泳迁移率的因素DNA分子的大小1凝胶的浓度2DNA的构象3使用的电压4琼脂糖的种类5电泳缓冲液6嵌入染料的存在7影响电泳迁移率的因素DNA分子的大小1凝胶的浓度2DNA的构36应用应用目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug0.1ug蛋白质蛋白质就可检出。就可检出。琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如也常用于分离、鉴定核酸，如DNADNA鉴定，鉴定，DNADNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。一。应用目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼37两种电泳技术两种电泳技术 优缺点优缺点两种电泳技术优缺点38SDS-PAGE的优点的优点设备简单设备简单快速快速分辨率和灵敏度高分辨率和灵敏度高 特别适用于寡聚蛋白及其亚基的分析鉴定特别适用于寡聚蛋白及其亚基的分析鉴定和分子量的测定和分子量的测定 SDS-PAGE的优点设备简单39SDS-PAGE的缺点的缺点1.有许多蛋白质是由亚基或两条以上肽有许多蛋白质是由亚基或两条以上肽链组成的（如血红蛋白、胰凝乳蛋白酶等），链组成的（如血红蛋白、胰凝乳蛋白酶等），他们在变性剂和强还原剂的作用下，解离成他们在变性剂和强还原剂的作用下，解离成亚基或单条肽链。因此，对于这一类的蛋白亚基或单条肽链。因此，对于这一类的蛋白质，质，SDS-PAGE测定的只是它们的亚基或单测定的只是它们的亚基或单条肽链的分子量，而不是完整蛋白质的分子条肽链的分子量，而不是完整蛋白质的分子量。量。SDS-PAGE的缺点1.有许多蛋白40SDS-PAGE的缺点的缺点2.还有一些电荷异常和构象特殊的蛋白质还有一些电荷异常和构象特殊的蛋白质（如组蛋白（如组蛋白F1），含有较大辅基的糖蛋白），含有较大辅基的糖蛋白和含有二硫键较多的蛋白质，以及一些结和含有二硫键较多的蛋白质，以及一些结构蛋白（如胶原蛋白）等，它们在构蛋白（如胶原蛋白）等，它们在SDS-凝凝胶系统中，电泳的迁移率与分子量的对数胶系统中，电泳的迁移率与分子量的对数不呈线性关系。因此，为了测得真实和完不呈线性关系。因此，为了测得真实和完整的蛋白质分子量，通常可采用多种方法整的蛋白质分子量，通常可采用多种方法进行测定和相互验证。进行测定和相互验证。SDS-PAGE的缺点2.还有一些电荷异常和构象特殊的41琼脂糖凝胶电泳特点琼脂糖凝胶电泳特点琼脂糖凝胶电泳特点42