艾滋病抗体实验室检测

省疾病预防控制中心2021年*月26日内容一、艾滋病检测技术标准-2021版二、艾滋病筛查实验室检测技术三、质量控制一、艾滋病检测技术标准-2021版第一章样品的采集和处理在样品的采集和处理中增加了滤纸干血斑样品、快速检测样品的采集和处理，用于CD4+/CD8淋巴细胞测定样品、尿液和唾液样品的采集和处理。样品的编码和记录4.1.2应制定样品编码的标准操作程序SOP，规定样品编码的原那么和方法，为样品制定唯一性编码编号，保证其唯一性。4.1.3采血前，先对装有样品的离心管或滤纸进行标记，核对后编码。要将标签贴在试管的侧面，最好使用预先印制好的、专门用于冷冻储存的耐低温标签。4.1.4应使用专门的样品记录本或登记表记录样品，同时录入电脑保存。样品的管理保证病人、工作人员平安保证样本平安保证周围环境平安按照规定要求运输样本溯源例1“P20030609A2P1001，“P代表样品类型“2003代表年份“0609代表日期“A表示轮换位置“2：表示类型“P1代表样品采集地点“001序列号。例2样品号：2021A02500011、2021-年代标示2、A样本状态标示3、025检测工程编号4、0001样品序列号-要有技术文件标准支持唯一性编号！唯一性编号！应用单位可能采取的编码原那么及编码顺序例如:有些单位还可以有样品编号规那么：1年月+科室编号+组别编号+流水号；2固定字符+科室编号+组别编号+流水号；3年+科室编号+组别编号+流水号；4样品类别+年+月+日+流水号；5年月日+样品条形码+流水号；等等。总结:一个编号可以由5个局部组成：固定字段、独立可变字段、受控固定字段、受控可变字段、顺序码字段五类。条码机、冻存盒样本的保存别离血清即时检测的样品1-2天内，可存放于2-8冰箱，最长时间一周。如需长期保存，应将别离的血清或血浆存放于-20冰箱内。选择适宜的冻存管。第一层容器第二层容器第三层容器样品包装样品包装HIV抗体检测2.在HIV抗体检测中，增加了免疫荧光法和化学发光法，进一步明确了不同情况下的检测策略。3.在HIV核酸检测中，增加了HIV感染产妇所生婴儿HIV感染早期诊断检测流程和适用于窗口期的集合核酸检测方法。复检试验对初筛呈阳性反响的样品，应使用原有试剂和另外一种不对初筛呈阳性反响的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理或厂家的试剂，或另外两种不同原理或不同厂同原理或厂家的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，那么复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂，那么复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反响，那么报告试剂复检均呈阴性反响，那么报告HIV抗体阴性抗体阴性-；如；如均呈阳性反响，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行均呈阳性反响，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验图确证试验图1。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反响，而抗体试剂检测为阴性反响，那么应考虑进行响，而抗体试剂检测为阴性反响，那么应考虑进行HIV-1p24抗原或核酸检测，必要时进行随访。抗原或核酸检测，必要时进行随访。艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反响的样品，确证艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反响的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。实验室可以直接进行确证试验。5筛查试验呈阳性反响样品的转送如需送上级实验室进行复检，需要核对身份，补充个人信息如姓名和身份证号码，必要时采集第二份血样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复检。HIV抗体复检试验用附表2进行报告，两次检测均阳性或一阴一阳报告为“HIV抗体待确证；两次检测均阴性报告为“HIV抗体阴性-。HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审核人员签字。5.1.1.1筛查试剂筛查试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。快速检测RT及其它检测试验：这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在1030分钟内得出结果。有效试验的质控带必须显色。明胶颗粒凝集试验PA：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。4.根据临床治疗需求，增加了HIV-1的耐药检测。5.进一步完善了艾滋病检测实验室平安防护和艾滋病检测实验室的质量管理，使其更加符合目前艾滋病防治工作的需求，更加具有可操作性。6.考虑到技术开展核心的需求，增加了HIV-1新近感染检测和HIV-1的别离培养技术。7.不确定反响结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反响，那么报告阴性；如随访期间出现阳性反响，那么报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反响那么报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准那么报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。5.2.3HIV-1新近感染检测HIV常规抗体检测方法可以判定感染和未感染状态，新近感染检测方法那么用于识别近期感染与既往感染。目前，检测HIV新近感染的血清学方法中，研究和应用最多的是BED-EIAHIV-1捕获EIA方法BED-CEIA，其原理是根据HIV特异性IgG占总IgG抗体的比例随着感染时间的延长而逐渐增高。应用BED-CEIA进行新近感染检测只适用于HIV阳性样品。由于个体间抗体生成的变异性，对个体而言，BED结果的预测值偏低，而且在个体水平上，BED检测可能产生一定的假阳性和假阴性，但在人群水平上，假阳性的数目与假阴性的数目相近，因此可以相互抵消彼此的作用。美国FDA将BED-CEIA归为“只应用于监测目的，不能用于个体诊断和临床的实验方法。该方法用于监测及发病率计算的条件参见“HIV新近感染监测方案。二、艾滋病筛查实验室检测技术HIV实验室检测方法分类：实验室检测方法分类：1.抗体检测抗体检测(IgG,IgM,IgA)初筛实验初筛实验ELISA(EIA)第四代第四代化学放光化学放光胶体金胶体金/硒硒层析、渗滤层析、渗滤明胶颗粒凝集明胶颗粒凝集凝集法凝集法确认实验确认实验蛋白印迹蛋白印迹(WesternBlot,WB)免疫荧光免疫荧光(IFA)2.抗原检测抗原检测(P24)3.核酸检测核酸检测(RNA,DNA)4.病毒别离病毒别离抗体检测抗体检测抗体检测抗体检测诊断的金标准：诊断的金标准：HIV特异性抗体检测特异性抗体检测EIA高敏感性高敏感性+WB高特异性诊断的高特异性诊断的准确率大于准确率大于99%，假阳性率约为，假阳性率约为0.0006%，造成错误诊断的时机几乎是造成错误诊断的时机几乎是0。抗体检测唯一的问题是窗口期可以出现假阴抗体检测唯一的问题是窗口期可以出现假阴性性试验前准备试验前准备1.观察外包装，内主份有无漏液，注意效期等。2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。3.操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟，保证酶等液体的初始反响温度及活性剂的溶解。4.核对样本编号5.检查孵育温度6.检查洗板机管道的畅通及程序7.一次性手套、隔离衣、口罩等8.消毒物品9.污物桶、缸10.做好试验原始记录艾滋病抗体实验室检测1.样本的采集采集、标识、运输、保存2.试验前准备试剂、仪器、记录3.试验sop4.质量控制5.结果报告6.生物平安废弃物处理ELISA试验的有关问题ELISA检测，按照试剂说明书要求，每次试验、每块板上都要设置以下3项对照和用途空白对照仅用稀释液代替检测样本、用以观测最终反响的显色“本底、并用于酶标仪消除、扣除“本底，即：以本底为“零读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值A；或者，在计算阴性对照均值NCx、阳性对照均值PCx、样本读数的S/C.O.值时减去空白对照的本底吸光值。阴性对照品所谓阴性对照品，应当是本项检测试验中采用与待检物样品、人用试剂就是人的血清等具有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反响之间的差异。因此，用动物血清或其制品如牛血清白蛋白等代替阴性人血清作为对照品，从理论和实践上都是不可取的。国产ELISA试剂中，有的试剂是用动物血清制品稀释配置、或与局部人血清混合配置的。阳性对照品同阴性对照品，只是采用“精选的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选，就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试、把含有“干扰性物质的血清剔除、不用，以防止出现“假阳性干扰试验结果。用途:一是阳性对照主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性。二是阳性对照的设置，不仅用于评价试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性，而且计入Cutoff的计算。厂家厂家方法方法包被抗原包被抗原CUTOFF值值阳性对照阳性对照阴性对照阴性对照条件条件北京万泰北京万泰酶免酶免未注明未注明阴性均值阴性均值NC+0.12，型型各各1孔孔0.83孔孔0.1北京金豪北京金豪酶免酶免gp41;gp36;ENV180.10+N(均值）均值）2孔孔2孔小于孔小于0.02按按0.02计算计算P小于小于0.5，N大于大于0.1实验无效实验无效安图绿科安图绿科酶免酶免未注明未注明0.10+N(均值）均值）2孔孔3孔孔P大于大于0.7，N小于小于0.1，P-N大于大于0.6实实验无效验无效英科新创英科新创酶免酶免未注明未注明0.10+N(均值小于均值小于0.05按按0.05算）算）2孔孔2孔孔P大于大于N0.6以上，以上，N小于小于0.1，实验有效，实验有效珠海丽珠珠海丽珠酶免酶免未注明未注明0.15+N(均值）均值）2孔孔0.83孔孔0.12，0.08按按0.08算算阳性对照孔间差大于阳性对照孔间差大于30%，实验无效，实验无效英科新创英科新创胶体金胶体金gp120;gp41;gp3630分钟内判定结果分钟内判定结果上海科华上海科华胶体金胶体金gp160;gp41;gp36无无30分钟内判定结果分钟内判定结果美国雅培美国雅培层析法层析法未注明未注明最少最少15分钟最多分钟最多60分钟判定结果分钟判定结果确定CUT-OFF值的方法当试剂盒研发完成后，需要进行大量的临床样品的考核。其中阴性血清的A值呈正态分布，大约95的阴性血清值与平均值相近，而有5的阴性血清那么明显低于或高于平均值，这是cutoff值可根据95的置信限来确定。假设试剂盒的特异性很好，可用98作为置信限来确定cutoff值。但不管是选择多少的置信限，总存在置信限以外的区域，该区域的局部样品A值会高于cutoff值，从统计上说是无法防止的。CUTOFF值确实定?药品生产质量管理标准?GMP?新生物制品审批方法?于1999年3月26日经国家药品监督管理局局务会审议通过，现予发布。本规定自1999年5月1日起施行。CUTOFF值确实定：正常人标本测定人数应在400人份以上，所得数据经统计学处理。通常是阴性对照均值+常数严格按照说明书要求判定结果假阳性本底产生的原因(人血清中的正常的IgG)人血清中IgG的浓度对试剂盒有较大的影响。酶标抗抗体能与人所有IgG结合，而IgG吸附于板孔的能力很强，因此我们采用100微升样稀加10微升血清来将其稀释以降低本底。据统计学调查，成人的IgG为12mg/ml，而有些人的IgG浓度会远远高于此，这局部人的血清经ELISA反响后往往会显色。假阳性本底产生的原因(人血清中的异常的IgG)结缔组织病系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤等等病症时，血清中的风湿小体和其它异常IgGIgG浓度到达50mg/ml会引起本底升高或假阳性。加样样品稀释液少加，或血清多加，都会引起本底增高。因为血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小局部。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的外表。这些非特异的IgG均可以和酶标二抗发生反响而造成较高阴性本底或假阳性。如果参加的血清过多，高于规定的稀释倍数，必将带来阴性高值。酶结合物的不正确参加酶结合物的不正确参加。一般来讲，酶也有一定的非特异吸附，将包被好的酶联板再封闭，一方面也可防止酶的非特异性吸附。通常每孔参加的封闭液为120l。如果参加的酶多于120l或加在较高的孔壁上或孔口，也会引起本底升高或假阳性。温育由于试剂盒通常设定的反响温度为37度，在这个温度下放置30分钟，蒸发的水分会很多，对于整个反响体系来讲，各种反响物的浓度会不断增加，这样必会导致反响最后的值升高。因此温育时应盖上胶贴。增加时间会延长反响，也会引起阴性高值或假阳性。试剂盒在设计时，反响是在静置条件下完成的，如果反响改变为振动条件，会加快分子的热运动，增加反响的时机。试剂盒的温育过程是在培养箱中进行，这和水浴的条件不一样。水浴可是酶联板迅速升温，但较难将温度控制在较稳定的温度，往往高于37度，同样会引起高值阴性。水浴箱-温度计仪器器设备洗板1各个厂家使用的洗液配方是不同的，是根据各自试剂的条件配制的，采用不配套的洗液常会得到不正常的反响结果，包括本底过高。本公司的洗液采用独特的洗涤系统不能和其它公司的试剂盒混用。试剂盒中提供的洗液是浓缩的，应该稀释到规定的倍数使用，过多稀释洗液，会影响洗液的效果，而使反响的本底过高。稀释洗液的水应该是新鲜的蒸馏水，电导率小于1.2s/cm。如果水中含有过多的Ca2+、Mg2+，这些离子会占用外表活性剂，影响洗涤效果。洗板2洗板时，应每孔加满洗液，如果参加的洗液液量不够，对洗涤的效果影响也是很大的。因此及时调整液量，以防止加液量不满。洗板的次数不够孔内多余的抗原抗体或酶结合物不能彻底去除，也会因此本底升高。洗板的强度和洗板的浸泡时间是密切相关的。洗板机不同，使用的泵不同，液体参加时的冲力不同。如果参加洗液的冲力不大，也没有设定浸泡时间，同样会使结果的A值偏高。洗板完毕后，要进行拍板，尽量采用质量好的毛巾和吸水纸，使用易掉渣的纸，纸屑会留在板孔中，由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性。样本状态原因溶血红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，会增加非特异性显色细菌污染菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应保存时间过长血清标本放置4时间过长，导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深反复冻融冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡，反复冻融会使抗体效价跌落，抗凝不完全抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是肝素抗凝剂三、质量控制医疗机构临床实验室管理方法医疗机构临床实验室管理方法第三章第三章医疗机构临床实验室质量管理医疗机构临床实验室质量管理第二十五条第二十五条医疗机构临床实验室应当对开医疗机构临床实验室应当对开展的临床检验工程进行室内质量控制，绘展的临床检验工程进行室内质量控制，绘制质量控制图。出现质量失控现象时，应制质量控制图。出现质量失控现象时，应当及时查找原因，采取纠正措施，并详细当及时查找原因，采取纠正措施，并详细记录。记录。第二十六条第二十六条医疗机构临床实验室室内质量医疗机构临床实验室室内质量控制主要包括质控品的选择，质控品的数控制主要包括质控品的选择，质控品的数量，质控频度，质控方法，失控的判断规量，质控频度，质控方法，失控的判断规那么，失控时原因分析及处理措施，质控那么，失控时原因分析及处理措施，质控数据管理要求等。数据管理要求等。第二十七条第二十七条医疗机构临床实验室定量测定医疗机构临床实验室定量测定工程的室内质量控制标准按照工程的室内质量控制标准按照?临床实验室临床实验室定量测定室内质量控制指南定量测定室内质量控制指南?GB/20032302-T-361执行。执行。第六章第六章实验室质量管理实验室质量管理第二十六条第二十六条艾滋病检测实验室应建立健全实验室质量保艾滋病检测实验室应建立健全实验室质量保证和质量控制体系，并有专人负责质量体系的正常运转。证和质量控制体系，并有专人负责质量体系的正常运转。第二十七条第二十七条艾滋病检测筛查实验室必须参加省级以上实艾滋病检测筛查实验室必须参加省级以上实验室能力验证；艾滋病检测确证实验室必须参加中国疾病验室能力验证；艾滋病检测确证实验室必须参加中国疾病预防控制中心组织的实验室能力验证。艾滋病检测实验室预防控制中心组织的实验室能力验证。艾滋病检测实验室能力验证结果由组织者定期公开发布。能力验证结果由组织者定期公开发布。?全国艾滋病检测工作管理方法全国艾滋病检测工作管理方法?质量管理的开展1、系统的和独立的质量管理系统的和独立的质量管理开始形成于18世纪的欧洲工业革命，其开展过程大致可分为3个阶段1-1检验质量管理阶段20年代初期到40年代1-2统计质量控制阶段40年代初到50年代末1-3全面质量管理阶段60年代初开始至今认证与认可关系认证与认可均属合格评定的范畴。认证的对象是供方的产品、工艺或效劳；认可的对象是实施认证、检验和检查的机构或人员。取得认证资格，证明机构具有一个有效的质量或环境管理体系。但并缺乏以说明机构出具的测试结果具有技术可靠性。获得认可资格，证明机构的质量体系运行有效和技术能力满足要求。而且机构出具的测试结果是可靠的。认证和认可医疗单位通过了ISO9000质量体系认证，这仅是证明医疗过程得到了保证，而并不证明最终检验结果的合格。经过ISO/IEC15189认可的医学实验室通过其完善的管理，能够向患者以及医护人员提供准确的检验结果。ISO9000认证不能替代认可认证不能替代认可ISO9000质量管理体系文件结构1.质量手册QM:主要功能是将管理层的质量方针及目标以文件形式告诉全体员工或顾客。是为了确保质量而说明“作了哪些工作以保证质量。2.程序文件QP:是指导员工如何进行及完成质量手册内容所表达的方针及目标的文件。3.作业指导书WI:详细说明特定作业是如何运作的文件。4.记录表格F:是用于证实产品或效劳是如何依照所定要求运作的文件。质量管理体系文件的结构编写规那么质量管理体系文件的结构编写规那么共8章56条款操作程序文件(SOP)SOP 是书面质量体系中的一个很重要的局部。SOP是指导完成检测工作的一整套书面操作指南，因而每个实验室应就本实验室所有重要工作制定相应的SOP。每一个检测工程都应该制定一份SOP，其中包含有详细的操作程序，例如实验室实验条件(温度等)、仪器的使用和维护、试剂、质控品、校准品的使用等(设备和试剂盒说明书作为附录)，以防止或减少因不同的操作者所引起的误差。SOP由各岗位工作人员起草，实验室负责人审定。实验人员在操作时应该严格按照SOP进行，实验室主管人员应该督查实验人员执行SOP。必要时，SOP中的内容，如说明书或相关内容，应该在实验室主管人员的领导下进行修订，每年至少修订一次。修订后的SOP按审批程序批准后使用。操作程序文件(SOP)内容1 1清楚、简洁的标题和统一的清楚、简洁的标题和统一的SOP SOP 编号编号2 2SOPSOP编写和修改日期编写和修改日期3 3编写和修订编写和修订SOPSOP的人员姓名的人员姓名4 4方法、目的和原理方法、目的和原理5 5相应的职业标准相应的职业标准6 6检测设备和试剂检测设备和试剂7 7参考其他包含相关步骤的参考其他包含相关步骤的SOPSOP8 8健康和平安操作指南健康和平安操作指南(参考参考?标准标准?附件一，实验室平安实施附件一，实验室平安实施 SOP)SOP)9 9每一操作步骤和质控步骤用编号描述每一操作步骤和质控步骤用编号描述1010结果的讨论和报告以及出现问题时所采取的措施结果的讨论和报告以及出现问题时所采取的措施1111附录，包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。附录，包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。档案管理 原始记录包括实验原始记录表、打印数据、膜反响条带或其照片、检测记录表、标本登记记录、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等重要记录都应该妥善存档保存15年以上。推荐同时使用计算机保存各种文件和记录。内含病人姓名的所有工作记录一定要保密。文件和文件管理原那么文件和文件管理原那么操作规程和操作手册每个实验都应有操作规程或操作手册，要准确、标准，妥善保管，每个检验人员都能随时查阅。记录是所取得的结果或提供完成活动的证据性文件。分质量记录和技术记录两大类。记录的作用：1是质量要求满足程度或质量体系运行有效性的客观证据2是检测能力的客观证据3是质量体系文件执行结果的客观证据4是可追溯性的依据5是采取纠正措施和预防措施的依据要求：及时、完整、标准检验记录的要求(1)检验记录是出具检验报告书的原始记录，检验原始记录必检验记录是出具检验报告书的原始记录，检验原始记录必须用蓝黑墨水或碳素笔书写，做到记录原始、数据真实、须用蓝黑墨水或碳素笔书写，做到记录原始、数据真实、书写清晰、资料完整。书写清晰、资料完整。检验人员检验前要仔细查对检品标签内容与检验卡工程是检验人员检验前要仔细查对检品标签内容与检验卡工程是否相符，并逐一记录。检验记录如发现有误，可在原处加否相符，并逐一记录。检验记录如发现有误，可在原处加一斜线划去，并签名或盖章，必要时注明情况，但不得涂一斜线划去，并签名或盖章，必要时注明情况，但不得涂改，原处字迹必须清晰可辨。检验记录是出具检验报告书改，原处字迹必须清晰可辨。检验记录是出具检验报告书的原始记录，检验原始记录必须用蓝黑墨水或碳素笔书写，的原始记录，检验原始记录必须用蓝黑墨水或碳素笔书写，做到记录原始、数据真实、书写清晰、资料完整。做到记录原始、数据真实、书写清晰、资料完整。检验人员检验前要仔细查对检品标签内容与检验卡工程是检验人员检验前要仔细查对检品标签内容与检验卡工程是否相符，并逐一记录。检验记录如发现有误，可在原处加否相符，并逐一记录。检验记录如发现有误，可在原处加一斜线划去，并签名或盖章，必要时注明情况，但不得涂一斜线划去，并签名或盖章，必要时注明情况，但不得涂改，原处字迹必须清晰可辨。改，原处字迹必须清晰可辨。检验记录的要求(2)检验过程中的全部工程、实验现象、原始数据、实验温度、仪器名称、型号等，均应及时完整记录。严禁事先记录、事后补记、转抄。检验原始记录由室主任指定人员核对、签名。检验或试验结果无论成败，均应详细记录，失败的应及时总结分析，并在原始记录上注明。对于某些类型仪器测定或检验的记录，宜采用标准化的记录格式。检验记录的要求(3)原始检验记录不得携出所外，不得私自泄露有关内容。实验记录应编号，按规定归档保存。总结:检验记录是出具检验报告书的依据，是进行科学研究和技术总结的原始资料；为保证药品检验工作的科学性和标准化，检验记录必须做到：记录原始、真实，内容完整、齐全，书写清晰、整洁。1、判定试验是否成立2、计算cutoff值3、判定结果1、判定试验是否成立2、判定结果报告检测报告是实验室最终成果的表达，相当于企业的产品。能否出具高质量的报告，是实验室能否适应检测市场需求的核心问题。报告的质量不仅仅与原始记录、数据整理、报告编制、复核与批准有关，更应扩展到检测的全过程。报告1.对HIV抗体筛查试验，呈阴性反响者可出具“HIV抗体阴性报告。2.对初筛试验呈阳性反响者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查报告。见见?全国艾滋病检测技术标准全国艾滋病检测技术标准?报告1.艾滋病抗体阴性2.HIV-1+2抗体阴性3.HIV-Ab-4.HIV-抗体-5.抗-HIV-6.HIV抗体阴性报告内容更改1.单位出证明理由盖章2.原报告单与证明一起上报临床由于临床由于HIV检测导致的医疗纠纷检测导致的医疗纠纷1，阳性结果未确认就报告给被检验者。但确，阳性结果未确认就报告给被检验者。但确认为阴性。认为阴性。2，使用不标准试剂的检测结果被告知。，使用不标准试剂的检测结果被告知。3，使用低质量试剂，造成阳性漏检，但病人，使用低质量试剂，造成阳性漏检，但病人手术输血后发现手术输血后发现HIV。4，检测，检测HIV的记录未有详细标准记录。在的记录未有详细标准记录。在“举证倒置中陷于不利地位。举证倒置中陷于不利地位。控制图的定义和功能控制图的定义和功能控制图的定义控制图controlchart是对过程质量加以测定、记录从而进评估和监察过程是否处于控制状态的一种统计方法设计的图。图上有中心线central line,CL、上控制界限upper control limit,UCL和下控制界限lower controllimit,LCL，并有按时间顺序抽取的样本统计量值的描点序列。UCL、CL与LCL统称为控制线controllines。假设控制图中的描点落在UCL与LCL之外或描点在UCL与LCL之间的排列不随机，那么说明过程异常。世界上第一张控制图是美国休哈特在1924年5月16日提出的不合格品率p控制图。试验质量控制的要求1在试验质量要求的根底上进行质量控制的方案2选择适当的质控规那么和质控物个数3选择适当的质控物4应用统计质量控制5失控情况的处理内部对照质控血清内部对照质控血清内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供的一套阴性和阳性对照弱阳性对照外部对照质控血清外部对照质控血清目的：是为了监控实验的重复性和试剂盒的目的：是为了监控实验的重复性和试剂盒的稳定性而由实验室自己制备的对照。稳定性而由实验室自己制备的对照。来源：来源：1通过向有关机构购置获得通过向有关机构购置获得2通过实验室制备获得通过实验室制备获得(比较经济的方法比较经济的方法外部对照质控血清的组成 理理想想的的外外部部对对照照应应该该包包括括阳阳性性对对照照、弱弱阳阳性性对对照照、临临界界值值对对照照和和阴阴性性对对照照。在在每每次次实实验验时时应应设设置置一一个个单单一一浓浓度度水水平平的的质质控控品品即即弱弱阳阳性性对对照照。这这个个弱弱阳阳性性对对照照的的值值以以设设定定在在该该试试剂剂盒盒Cut-offCut-off值值的的2 23 3倍为宜。倍为宜。制备外部对照的方法制备外部对照的方法1.阳性血清阳性血清2.阴性血清稀释血清阴性血清稀释血清3.临界值对照的临界值对照的OD/CO+23倍倍4.重复重复20次结果绘制质控图次结果绘制质控图5.外外部部对对照照3000rpm15min去去除除沉沉淀淀，用用0.2m生生物物滤滤膜膜过过滤滤除除菌菌后后，56加加热热30min灭活处理，分装，灭活处理，分装，-20保存备用。保存备用。ELISA和快速试验对强阳性样品的滴度测定稀释度稀释度252627282929210211212ELISA(O.D.)OverOverOverOver2.8962.5612.4972.3852.372PA+稀释度稀释度213214215216217218219220221ELISA(O.D.)1.9941.5481.2781.1650.9320.9430.7900.6880.474PA+稀释度稀释度222223224225226227228229230ELISA(O.D.)0.3680.3450.2680.2420.2470.2350.1520.1170.105PA+所用所用ELISA试剂为生物梅里埃试剂为生物梅里埃HIV 试剂盒试剂盒,其其Cut off值为值为0.150外部对照质控血清的保存1 1外外部部对对照照血血清清或或血血浆浆的的一一次次制制备备量量应应该该足足够够本本实实验验室室一一年使用年使用2 2外部对照血清应该均一、无菌外部对照血清应该均一、无菌3 3外外部部对对照照血血清清标标定定后后应应该该等等量量分分装装，每每个个分分装装的的量量应应足足够一周使用够一周使用4 4外部对照应该分类作好标记外部对照应该分类作好标记5 5外外部部对对照照血血清清应应该该存存放放在在70 70，如如无无条条件件那那么么存存放放在在非自动除霜的非自动除霜的20 20 冰箱冰箱6 6外外部部对对照照血血清清一一旦旦融融解解以以后后应应该该存存放放在在 2 28 8，一一周周后必须弃去，不能重新冻存。后必须弃去，不能重新冻存。质控图质控图即刻法?标准?2021版“即刻法只能在前20次内使用，超出即可采用L-J质控图方法。20次数据算术平均值()：代表一组S/CO值的平均值。为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20次(天)所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。标准差(s)：是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与对照质控血清S/CO值均值有关的预期范围。一组S/CO值的标准差以s表示。变异系数(cv)：是反映各次S/CO值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度,理想状态应该小于5。质控图的绘制步骤质控图的绘制步骤在常规条件下，对同一批血清连续测定20次天或以上，获得一组S/CO值，求均数()和标准差(s),超出2s或3s的数据不应删除。将均值()和标准差(s)分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵座标(Y轴)，每一次(天)试验作横座标(x轴)，绘制质控图。从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。质控图质控图要求1、配制记录购置记录2、即刻法数据3、20次试验数据和图4、受控试验数据和图5、全部原始记录溯源6、分析记录告警12S：当外部对照的S/CO值超出+2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。假设将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。失控13S：当外部对照的S/CO值超出+3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。位移：连续几次35次外部对照S/CO值都落在均值的一侧那么称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。引起位移的原因有使用新批号的试剂盒、使用新试剂、实验员的更换、孵育温度的改变、仪器(移液器)故障等。趋势：连续几次57次外部对照S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。发生趋势的最常见的原因是试剂(如酶标记物)或对照的失效。为何要收集20天或累积更长时间的质控数据计算的均值和标准差来绘制质控图1收集每水平控制物至少20个数据，数据点必须来自于20个独立分析批，以及累积更多的质控数据。这样才能反映出校准频率次数、试剂或试剂批号变换、操作人员技术水平、实验场所温度/湿度、每日/每周维护等等的影响。2收集的数据点计算平均数和标准差。在排除任何可疑数据点之前使用异常值Outliers统计检验。计算统计控制限X2s和X3s3厂家提供的范围只用作指导?标准?2021版外部质控品的均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对外部质控品重复测定的根底上。一般采用在不同批次检测取得至少20个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5个批次的检测，每个批次中不少于4个质控血清测定结果，以建立一个临时性的均值和标准差，当到达20批次数据后，替代临时性的均值和标准差。定期分析和总结1、每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。2、要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO比值绘制质控图。3、采用自制的质控物，是一种经济的方法，关键是要确保质控物的性质稳定;4、使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。5、建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也应重新制作质控图。6、发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。出现以下情况时，应暂停检测查找原因1出现一次超出3s范围的变化；2连续两次出现同一方向超出2s范围的变化；3连续四次出现同一方向的超出1s范围的变化；4连续10次结果都在1s范围内，但落在均值线的同一侧。?标准?2021版9.2快速检测质控9.2.1试剂内对照在质控窗口内出现质控带，该质控带是试剂自带的内部过程质控，说明实验操作全部完成并且实验所用材料处于工作状态。清洁的检测区背景是内部阴性过程质控。如实验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品须重检。9.2.2外部质控品对照9.2.2.1外部对照质控品，可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性样品和阴性样品。自制质控品可使用本室保存的阳性样品。不能使用酶联试验的外部质控品。?标准?2021版9.2.2.4建议：每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于50份样品，至少应作2次质控。9.2.2.5开展快速检测确实证实验室须参加中国CDC组织的检测能力验证，开展快速检测的筛查实验室及检测点须参加省级或地市级CDC组织的实验室能力验证。总结一层：无意识无能力二层：有意识无能力三层：有意识有能力四层：无意识有能力祝培训班圆满成功！祝培训班圆满成功！