金黄色葡萄球菌检验-课件

金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）金黄色葡萄球菌定性检验金黄色葡萄球菌定性检验1 1金黄色葡萄球菌定性检验金黄色葡萄球菌定性检验1 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）1.了解金黄色葡萄球菌生物学特性。2.掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和检验方法。学习目的与要求2 2 1.了解金黄色葡萄球菌生物学特性。了解金黄色葡萄球菌生物学特性。学习目的学习目的 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）一、生物学特性一、生物学特性菌体形菌体形态及培养特征及培养特征革革兰氏阳性球菌，直径氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，微米，镜检时呈呈单个、成个、成对、四、四联或不或不规则的簇群，如葡萄状，故称的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。葡萄球菌。3 3一、生物学特性一、生物学特性菌体形态及培养特征革兰氏阳性球菌，直径为菌体形态及培养特征革兰氏阳性球菌，直径为0 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）大多数菌株大多数菌株产生生类胡胡萝卜素卜素，使，使细胞胞团呈呈现出出深橙色深橙色到浅黄色到浅黄色，色素的，色素的产生取决于生生取决于生长的条件，故称的条件，故称金黄金黄色葡萄球菌色葡萄球菌(高高盐甘露醇平板甘露醇平板：金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌为淡黄淡黄色菌落色菌落；其他葡萄球菌；其他葡萄球菌为白色菌落白色菌落)。4 4大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）n n n n最适生长温度最适生长温度37，最适，最适pH为为7.4；n n兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；n n可在高盐环境下生长，可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下氯化钠环境下还能生长；还能生长；n n一般用含一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。氯化钠肉汤增菌。5 5 最适生长温度最适生长温度37，最适，最适pH为为7.4；5 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）n n n n所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。浆。n n金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放脂肪酸。在的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生平板产生磷脂环。磷脂环。6 6 所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）生物学特性生物学特性 致致 病病 性性金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取弱主要取决于其决于其产生的毒素和侵生的毒素和侵袭性性酶：a.溶血素：溶血素：外毒素，能外毒素，能损伤血小板，破坏溶血小板，破坏溶酶体，引起肌体，引起肌体局部缺血和坏死；在体局部缺血和坏死；在血平板培养出血平板培养出现溶血溶血环。b.杀白白细胞素：胞素：可破坏人的白可破坏人的白细胞和巨噬胞和巨噬细胞；胞；c.血血浆凝固凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血使血液或血液或血浆中的中的纤维蛋白沉蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。胞的吞噬作用。d.耐耐热核酸核酸酶e.肠毒素：毒素：引起急性胃引起急性胃肠炎。炎。7 7生物学特性生物学特性 致致 病病 性金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致性金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）葡萄球菌性葡萄球菌性食物中毒食物中毒是葡萄球菌是葡萄球菌肠毒素毒素所引起的疾病，所引起的疾病，可引可引发不同程度的急性胃不同程度的急性胃肠炎症状，炎症状，恶心、呕吐最心、呕吐最为突突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。出而且普遍，腹痛、腹泻次之。当金黄色葡萄球菌当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分染了含淀粉及水分较多的食品，如多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小小时即可相当数量的即可相当数量的肠毒素。毒素。8 8葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）二、二、检验程序与操作方法程序与操作方法食品安全国家食品安全国家标准准GB 4789.10-2016食品微生物学食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌检验第一法第一法 金黄色葡萄球菌定性金黄色葡萄球菌定性检验 9 9二、检验程序与操作方法食品安全国家标准二、检验程序与操作方法食品安全国家标准GB 4789.10-金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质Baird-parker平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告36 1 36 1 36 136 1 18h-24hBPBP平板平板 24h-48h血平板血平板 18h-24h36 136 1 18h-24h检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质Baird-parker平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告36 1 36 1 36 136 1 18h-24hBPBP平板平板 24h-48h血平板血平板 18h-24h36 136 1 18h-24h检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质Baird-parker平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告36 1 36 1 36 136 1 18h-24hBPBP平板平板 24h-48h血平板血平板 18h-24h36 136 1 18h-24h检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质Baird-parker平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告36 1 36 1 36 136 1 18h-24hBPBP平板平板 24h-48h血平板血平板 18h-24h36 136 1 18h-24h检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质1010检样检样Baird-parker平板，血平板平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂肉汤和营养琼脂 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）检验程序程序 样品品处理理 称取称取25g（mL）样品至盛有品至盛有225mL7.5%氯化化钠肉肉汤的无菌均的无菌均质杯内杯内,8000r/min10000r/min均均质1min2min,或放入盛有或放入盛有225mL7.5%氯化化钠肉肉汤无菌均无菌均质袋中袋中,用拍用拍击式均式均质器拍打器拍打1 min2min。1111检验程序检验程序 样品处理样品处理 称取称取25g（mL）样品至）样品至 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）检验程序程序 增菌增菌 利用金黄色葡萄球菌利用金黄色葡萄球菌耐耐盐的特性（最高可耐受的特性（最高可耐受15%的的氯化化钠），用），用7.5%氯化化钠肉肉汤增菌。增菌。361培养培养18h24h。1212检验程序检验程序 增菌增菌 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特利用金黄色葡萄球菌耐盐的特 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）检验程序程序 分离培养（血平板和分离培养（血平板和BP平板）平板）血平板：金黄色葡萄球菌可以血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平生溶血素，因此在血平板上板上产生明生明显的的溶血溶血环。典型菌落：呈金黄色，有典型菌落：呈金黄色，有时也也为白色，大而突起，白色，大而突起，圆形，形，不透明，表面光滑，菌落周不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血有完全透明溶血环。1313检验程序检验程序 分离培养（血平板和分离培养（血平板和BP平板）血平板：金黄色葡萄平板）血平板：金黄色葡萄 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）大而突起，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血形，不透明，表面光滑，有溶血环阳性阳性阴性阴性1414大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环阳性阴性大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环阳性阴性14 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）BPBP（贝尔贝尔德德德德-帕克）平板：帕克）平板：帕克）平板：帕克）平板：n n胰蛋白胰蛋白胰蛋白胰蛋白胨胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维维生素生素生素生素和和和和矿矿物元素物元素物元素物元素n n丙丙丙丙酮酮酸酸酸酸钠钠是一种生是一种生是一种生是一种生长长促促促促进剂进剂n n亚亚碲酸碲酸碲酸碲酸盐对盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落有毒性，并使菌落有毒性，并使菌落有毒性，并使菌落产产生黑色生黑色生黑色生黑色n n卵黄提供卵黄提供卵黄提供卵黄提供营营养和有利于养和有利于养和有利于养和有利于观观察卵磷脂察卵磷脂察卵磷脂察卵磷脂环环n n甘氨酸和甘氨酸和甘氨酸和甘氨酸和氯氯化化化化锂对锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。作用。作用。作用。检验程序程序分离培养分离培养1515BP（贝尔德（贝尔德-帕克）平板：检验程序帕克）平板：检验程序分离培养分离培养15 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）在在BP平板上典型菌落平板上典型菌落为：圆形形,表面光滑、凸起、湿表面光滑、凸起、湿润、菌落直径、菌落直径为2mm3mm,颜色呈色呈灰黑色至黑色灰黑色至黑色,有光有光泽,常有浅色常有浅色(非白色非白色)的的边缘,周周围绕以以不透明圈不透明圈(沉淀沉淀),其外常其外常有一有一清晰清晰带。当用接种。当用接种针触及菌落触及菌落时具有具有黄油黄油样黏稠感。黏稠感。有有时可可见到不分解脂肪的菌株到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清除没有不透明圈和清晰晰带外外,其他外其他外观基本相同。基本相同。从从长期期贮存的冷存的冷冻或脱水食品中分离的菌落或脱水食品中分离的菌落,其黑色其黑色常常较典型菌落浅些典型菌落浅些,且外且外观可能可能较粗糙粗糙,质地地较干燥干燥。1616 在在BP平板上典型菌落为：圆形平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起表面光滑、凸起 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）B-P平板平板圆形、光滑、黑色有光形、光滑、黑色有光泽,周周围绕以不透明圈以不透明圈,其外有清晰其外有清晰带1717B-P平板圆形、光滑、黑色有光泽平板圆形、光滑、黑色有光泽,周围绕以不透明圈周围绕以不透明圈,其外有其外有 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）革革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无，无荚膜膜检验程序程序 确确证鉴定定1.革革兰氏染色氏染色镜检1818革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜检验程序革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜检验程序 确证鉴确证鉴 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）检验程序程序 确确证鉴定定2.血血浆凝固凝固酶试验 金黄色葡萄球菌可以金黄色葡萄球菌可以产生血生血浆凝固凝固酶，因此，因此对其其鉴别的主要的主要试验是是测定其凝固定其凝固酶。试管法管法 挑取挑取BP平板或血平板上平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于（少于5个个全全选，分，分别接种于接种于BHI肉肉汤和和营养养琼脂小斜面，脂小斜面，361 培养培养18h-24h。取取0.5mL无菌生理无菌生理盐水加入瓶装水加入瓶装冻干兔血干兔血浆中至完全中至完全溶解，加入培养后的溶解，加入培养后的BHI肉肉汤培养物培养物0.2-0.3mL，振，振荡摇匀，放匀，放361恒温箱或水浴内，恒温箱或水浴内，每半小每半小时观察一次，察一次，观察察6h，如凝固体，如凝固体积大于原体大于原体积一半一半时，判定，判定为阳性。阳性。如如结果可疑，从果可疑，从营养养琼脂小斜面挑去菌落到脂小斜面挑去菌落到BHI肉肉汤，重复凝固重复凝固酶试验。1919检验程序检验程序 确证鉴定确证鉴定2.血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 金金 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固巨大块凝固完全凝固，倒置不流动阴性阴性阳性阳性2020不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固巨大块凝固完全凝固，倒置不不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固巨大块凝固完全凝固，倒置不 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）试管法管法2121试管法试管法21 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）结果报告结果报告n n在在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。萄球菌。n n即：检出即：检出/25g(mL)或或 未检出未检出/25g(mL)2222结果报告在结果报告在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。2 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）小结n n了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐，能产毒素、凝固酶等）n n掌握检验流程n n知识点：增菌液，BP平板和血平板的典型菌落特征，凝固酶试验。2323小结了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐，能产毒素、凝固酶等小结了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐，能产毒素、凝固酶等 金色葡萄球菌金色葡萄球菌检验食品安全食品安全检验技技术（微生物部分）（微生物部分）新旧标准主要差异n n增菌液统一改成了增菌液统一改成了增菌液统一改成了增菌液统一改成了7.5%7.5%氯化钠肉汤氯化钠肉汤氯化钠肉汤氯化钠肉汤 这个标准主要是因为这个标准主要是因为这个标准主要是因为这个标准主要是因为20082008版本参照美国版本参照美国版本参照美国版本参照美国FDAFDA的方法增加了的方法增加了的方法增加了的方法增加了10%10%胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。n n修改修改修改修改Baird-ParkerBaird-Parker平板的培养时间为平板的培养时间为平板的培养时间为平板的培养时间为24 h24 h48 h48 h，原来是，原来是，原来是，原来是18 h18 h24 h 24 h 或或或或45 h45 h48 h48 h。n n挑取挑取挑取挑取Baird-Parker Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落至少平板或血平板上可疑菌落至少平板或血平板上可疑菌落至少平板或血平板上可疑菌落至少5 5个，个，个，个，20102010版版版版1 1个以上。个以上。个以上。个以上。2424新旧标准主要差异增菌液统一改成了新旧标准主要差异增菌液统一改成了7.5%氯化钠肉汤氯化钠肉汤 24