血型鉴定常见的疑难问题分析及处理剖析课件

2024/7/31 血型鉴定常见的疑难问题分析及处理2023/8/121 血型鉴定常见的疑难问题分析及处理2024/7/32疑难血型鉴定常用的辅助实验n n吸收试验n n放散试验n nDTT（二硫苏糖醇）处理自身凝集红细胞n n唾液血型物质测定（中和试验）n n分子生物学技术进行基因型检测2023/8/122疑难血型鉴定常用的辅助实验吸收试验2024/7/33疑难血型鉴定疑难血型鉴定n n共同特点共同特点:正反定型不一致。正反定型不一致。2023/8/123 疑难血型鉴定2024/7/34ABO血型正血型正反定型不符及其原因不符及其原因1.技术和管理错误技术和管理错误2.正定型正定型-红细胞自身相关问题红细胞自身相关问题3.反定型反定型-血清自身相关问题血清自身相关问题2023/8/124ABO血型正反定型不符及其原因1.技术和2024/7/35一、技术和管理错误一、技术和管理错误（1 1）标本或试剂搞错，造成假阳性或假阴性结果。）标本或试剂搞错，造成假阳性或假阴性结果。）标本或试剂搞错，造成假阳性或假阴性结果。）标本或试剂搞错，造成假阳性或假阴性结果。（2 2）器材不洁产生假阳性结果。）器材不洁产生假阳性结果。）器材不洁产生假阳性结果。）器材不洁产生假阳性结果。（3 3）试剂污染或失效产生假阳性或假阴性结果。）试剂污染或失效产生假阳性或假阴性结果。）试剂污染或失效产生假阳性或假阴性结果。）试剂污染或失效产生假阳性或假阴性结果。（4 4）离心过度或不足，产生假阳性或假阴性结果。）离心过度或不足，产生假阳性或假阴性结果。）离心过度或不足，产生假阳性或假阴性结果。）离心过度或不足，产生假阳性或假阴性结果。2023/8/125一、技术和管理错误（1）标本或试剂搞错，2024/7/37二二、正定型、正定型-红细胞自身相关问题红细胞自身相关问题1.1.红红细细胞胞致致敏敏 直直接接抗抗球球蛋蛋白白试试验验阳阳性性的的红红细细胞胞（如如自自身身免免疫疫性性溶溶血血性性贫贫血血患患者者的的红红细细胞胞）在在高高蛋蛋白白介介质质的的试试剂剂中可发生凝集，产生假阳性结果。中可发生凝集，产生假阳性结果。2.2.异异常常基基因因型型 ABOABO亚亚型型的的弱弱抗抗原原常常规规方方法法难难以以检检出出，产产生假阴性结果。生假阴性结果。3.Cis-AB3.Cis-AB型型（顺顺式式ABAB型型）指指从从父父母母的的一一方方同同时时得得到到A A和和B B基基因因在在一一条条染染色色体体上上，而而另另一一条条染染色色体体上上是是从从父父母母中中另另一方来的一方来的O O基因。顺式基因。顺式ABAB细胞的细胞的B B抗原较弱，类似抗原较弱，类似B3B3亚型。亚型。2023/8/127二、正定型-红细胞自身相关问题Cis-ABCis-AB型（顺式型（顺式ABAB型）型）n n传统观念认为AB型与O型夫妻无法生出AB型的孩子，但是如果其中一方的血型并非普通的AB型，而是AB型中稀有的CisAB型，那么就能生出AB型的孩子。CisAB最特殊的特征是A型和B型基因位于同一条染色体上，两个基因能同时从父亲或母亲中的一方继承，也能同时遗传给子女。2024/7/38Cis-AB型（顺式AB型）传统观念认为AB型与O型夫妻无法2024/7/39ABOOO大多数CisAB型的人血清中含有弱抗弱抗-B抗体抗体，能与所有普通B型或AB型人的血液凝结，但不与顺式AB细胞反应。因此输血时不能输B型或AB型的血液，而应该输O型或A型的洗涤红细胞，或者考虑自体输血。2023/8/129ABOOO大多数CisAB型的人血清中含2024/7/310二、二、正定型正定型-红细胞自身相关问题红细胞自身相关问题4.4.嵌嵌合合体体血血型型 体体内内有有两两群群红红细细胞胞，定定型型时时显显示示“混混合合外外观观凝凝集集”现现象象。真真正正的的嵌嵌合合体体非非常常少少见见，可可出出现现于于双双胞胞胎胎，在在胚胚胎胎期期由由于于血血管管的的吻吻合合使使得得2 2个个胎胎儿儿的的血血液液发发生生混混合合，2 2种种血血液液都都被被机机体体认认做做自自我我，不不产产生生抗抗体体。也也可可见见于于ABOABO不不同同型型的的骨骨髓髓移移植植术术后后。人人工工嵌嵌合合状状态态可可出出现现于于输输血血后后，如如O O型型红红细细胞胞输输给给A A或或B B型型的病人。的病人。2023/8/1210二、正定型-红细胞自身相关问题42024/7/311二、二、正定型正定型-红细胞自身相关问题红细胞自身相关问题5.5.疾疾病病因因素素导导致致抗抗原原减减弱弱 常常见见的的如如白白血血病病、霍霍奇奇金金淋淋巴巴瘤瘤、1010号号染染色色体体转转位位、地地中中海海贫贫血血等等病病人人ABOABO血血型型抗抗原原可可受受到到暂暂时时抑抑制制，抗抗原原减减弱弱检检出出困困难难。红红细细胞胞ABOABO抗抗原减弱与病程有关，病情缓解时抗原性会恢复。原减弱与病程有关，病情缓解时抗原性会恢复。6.6.红红细细胞胞多多凝凝集集现现象象 当当病病人人感感染染细细菌菌或或病病毒毒后后，病病毒毒或或细细菌菌产产生生的的酶酶使使红红细细胞胞上上掩掩蔽蔽的的T T抗抗原原暴暴露露激激活活，由由于于正正常常人人血血清清中中都都含含有有抗抗-T-T抗抗体体，因因此此可可与与正正常常人人血血清清产产生凝集反应，生凝集反应，正定型正定型正定型正定型试验假阳性。试验假阳性。2023/8/1211二、正定型-红细胞自身相关问题52024/7/312二、二、正定型正定型-红细胞自身相关问题红细胞自身相关问题7.7.获获得得性性类类B B 由由于于革革兰兰氏氏阴阴性性杆杆菌菌的的作作用用，红红细细胞胞可可获得获得“类类B”B”的活性。的活性。2023/8/1212二、正定型-红细胞自身相关问题72024/7/313ABO血型系统受血型系统受A、B、O三个等位基因控制，三个等位基因控制，A和和B基因并不直接产生基因并不直接产生A、B抗原，而是在产生抗原，而是在产生岩藻糖岩藻糖基转移酶（基转移酶（H转移酶转移酶）的基础上）的基础上A基因产生基因产生N-乙酰半乙酰半乳糖乳糖胺基胺基转移酶（转移酶（A酶酶），），B基因产生半乳糖基因产生半乳糖基基转移酶（转移酶（B酶酶）。这两种酶可）。这两种酶可使使H寡糖链（寡糖链（H抗原）上加入特异性糖而产生特异性物质抗原）上加入特异性糖而产生特异性物质A或或B抗原。在某些被抗原。在某些被肠道菌感染革兰氏阴性菌的患者或正常人（肠道菌感染革兰氏阴性菌的患者或正常人（O型或型或A型），其红细胞可获得一型），其红细胞可获得一种种“类类B”抗原（变成抗原（变成B型或型或AB型），这种血型的暂时改变属于罕见的类型），这种血型的暂时改变属于罕见的类B现象现象（或被称为获得性类（或被称为获得性类B抗原）抗原）。类类B抗原可能是由革兰氏阴性细菌派生的酶进抗原可能是由革兰氏阴性细菌派生的酶进入循环中而致，使部分入循环中而致，使部分A抗原的抗原的N-乙酰半乳糖，在脱乙酰基酶作用下转变为胺乙酰半乳糖，在脱乙酰基酶作用下转变为胺基半乳糖，出现新的基半乳糖，出现新的B抗原，称为抗原，称为“脱乙酰基酶型脱乙酰基酶型”。AB2023/8/1213ABO血型系统受A、B、O三个等位基因2024/7/314二、二、正定型正定型-红细胞自身相关问题红细胞自身相关问题8.8.可可溶溶性性血血型型物物质质增增多多 胃胃或或胰胰腺腺恶恶性性肿肿瘤瘤患患者者血血清清中中可可能能含含有有过过多多的的可可溶溶性性血血型型物物质质，这这些些物物质质中中和和抗抗A A（B B）血清从而影响正定型结果。）血清从而影响正定型结果。2023/8/1214二、正定型-红细胞自身相关问题82024/7/315二、二、正定型正定型-红细胞自身相关问题红细胞自身相关问题9.红细胞发生自凝现象 患者血清中的高效价自身冷凝集素使红细胞发生凝集。10.近期输血 曾异型输血，使病人血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。2023/8/1215二、正定型-红细胞自身相关问题9.2024/7/316三、三、反定型反定型-血清自身相关问题血清自身相关问题1.1.血血浆浆置置换换治治疗疗后后 近近期期内内进进行行大大量量的的血血浆浆置置换换治治疗疗，影影响抗体效价，造成反定型困难。响抗体效价，造成反定型困难。2.2.异异常常的的血血浆浆蛋蛋白白 病病人人血血浆浆中中异异常常的的白白蛋蛋白白、球球蛋蛋白白比比例例和和高高浓浓度度的的纤纤维维蛋蛋白白原原等等能能导导致致缗缗钱钱状状形形成成，造造成成假假凝凝集集现现象象，多多见见于于如如多多发发性性骨骨髓髓瘤瘤、巨巨球球蛋蛋白白血血症症、霍霍奇金淋巴瘤、严重的肝病等患者奇金淋巴瘤、严重的肝病等患者 。3.3.高高分分子子聚聚合合物物的的影影响响 血血浆浆增增容容剂剂也也会会引引起起缗缗钱钱状状凝凝集集导导致假阳性结果。致假阳性结果。2023/8/1216三、反定型-血清自身相关问题1.血2024/7/317三、三、反定型反定型-血清自身相关问题血清自身相关问题4.4.不不规规则则抗抗体体或或自自身身冷冷凝凝集集素素的的存存在在 受受检检者者血血浆浆中中含含有有ABOABO血血型型抗抗体体以以外外的的IgGIgG类类不不规规则则抗抗体体与与试试剂剂A A、B B、O O细胞上的相应抗原起反应。细胞上的相应抗原起反应。5.5.低低丙丙种种球球蛋蛋白白血血症症 低低丙丙种种球球蛋蛋白白血血症症病病例例(如如白白血血病病、淋淋巴巴瘤瘤及及使使用用免免疫疫抑抑制制剂剂的的患患者者、先先天天丙丙种种球球蛋蛋白白缺缺乏乏的的患患者者、免免疫疫缺缺陷陷的的患患者者)可可能能会会因因免免疫疫球球蛋蛋白白水水平平全全面面下下降降使使血血清清定定型型时时不不见见凝凝集集或或仅仅见见弱弱凝凝集集反应。反应。2023/8/1217三、反定型-血清自身相关问题4.不2024/7/318三、三、反定型反定型-血清自身相关问题血清自身相关问题6.6.年龄因素年龄因素 在未产生自己抗体的婴儿、由母亲被在未产生自己抗体的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现不见凝集或仅见弱凝集反应等异常结验时可出现不见凝集或仅见弱凝集反应等异常结果。果。7.7.骨髓移植术后骨髓移植术后 ABOABO不同型骨髓移植患者术后。不同型骨髓移植患者术后。8.8.纤维蛋白原的影响纤维蛋白原的影响 使用血浆或凝固不完全的血使用血浆或凝固不完全的血清会形成很小的纤维蛋白凝集包裹的红细胞凝块。清会形成很小的纤维蛋白凝集包裹的红细胞凝块。2023/8/1218三、反定型-血清自身相关问题6.年2024/7/319小小结（一）结（一）一、红细胞抗原增多（额外的反应）的原因一、红细胞抗原增多（额外的反应）的原因一、红细胞抗原增多（额外的反应）的原因一、红细胞抗原增多（额外的反应）的原因n n红细胞致敏：直接抗人球蛋白试验阳性。红细胞致敏：直接抗人球蛋白试验阳性。红细胞致敏：直接抗人球蛋白试验阳性。红细胞致敏：直接抗人球蛋白试验阳性。n n红细胞多凝集现象红细胞多凝集现象红细胞多凝集现象红细胞多凝集现象n n红细胞发生自凝现象红细胞发生自凝现象红细胞发生自凝现象红细胞发生自凝现象n n获得性类获得性类获得性类获得性类B B B Bn n其它：近期异型输血、嵌合体血型其它：近期异型输血、嵌合体血型其它：近期异型输血、嵌合体血型其它：近期异型输血、嵌合体血型 二、红细胞抗原减弱的原因二、红细胞抗原减弱的原因二、红细胞抗原减弱的原因二、红细胞抗原减弱的原因n n异常基因型（异常基因型（异常基因型（异常基因型（ABOABOABOABO亚型等）亚型等）亚型等）亚型等）n nCis-ABCis-ABCis-ABCis-AB型（顺式型（顺式型（顺式型（顺式ABABABAB型）型）型）型）n n疾病因素导致抗原减弱（常见于白血型等血液病患者）疾病因素导致抗原减弱（常见于白血型等血液病患者）疾病因素导致抗原减弱（常见于白血型等血液病患者）疾病因素导致抗原减弱（常见于白血型等血液病患者）n n可溶性血型物质增多（常见于胃或胰腺恶性肿瘤患者）可溶性血型物质增多（常见于胃或胰腺恶性肿瘤患者）可溶性血型物质增多（常见于胃或胰腺恶性肿瘤患者）可溶性血型物质增多（常见于胃或胰腺恶性肿瘤患者）2023/8/1219 小 结（一）一、红细胞抗原增多2024/7/320小小结（二）结（二）三、血型抗体增多（额外的反应）的原因三、血型抗体增多（额外的反应）的原因三、血型抗体增多（额外的反应）的原因三、血型抗体增多（额外的反应）的原因n n异常的血浆蛋白（缗钱状假凝集）：多见于如多异常的血浆蛋白（缗钱状假凝集）：多见于如多异常的血浆蛋白（缗钱状假凝集）：多见于如多异常的血浆蛋白（缗钱状假凝集）：多见于如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金淋巴瘤、严发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金淋巴瘤、严发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金淋巴瘤、严发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金淋巴瘤、严重的肝病等患者重的肝病等患者重的肝病等患者重的肝病等患者 。n n高分子聚合物的影响：血如浆增容剂也会引起缗高分子聚合物的影响：血如浆增容剂也会引起缗高分子聚合物的影响：血如浆增容剂也会引起缗高分子聚合物的影响：血如浆增容剂也会引起缗钱状凝集导致假阳性结果。钱状凝集导致假阳性结果。钱状凝集导致假阳性结果。钱状凝集导致假阳性结果。n n不规则抗体或自身冷凝集素的存在不规则抗体或自身冷凝集素的存在不规则抗体或自身冷凝集素的存在不规则抗体或自身冷凝集素的存在n n纤维蛋白原的影响纤维蛋白原的影响纤维蛋白原的影响纤维蛋白原的影响2023/8/1220 小 结（二）三、血型抗体增多（2024/7/321小小结（三）结（三）四、血型抗体减弱的原因n n血浆置换治疗后血浆置换治疗后n n低丙种球蛋白血症低丙种球蛋白血症n n年龄因素：婴儿、老年人抗体水平低。年龄因素：婴儿、老年人抗体水平低。n n骨髓移植术后骨髓移植术后2023/8/1221 小2024/7/322正正反定型不符一般处理程序不符一般处理程序一、询问、查阅病史n n患者的年齡患者的年齡n n患者的病史患者的病史n n患者的近期输血史患者的近期输血史n n患者的近期用药史患者的近期用药史n n患者是否进行了骨髓移植患者是否进行了骨髓移植n n患者以前的血型患者以前的血型n n患者是否进行过血浆置换术患者是否进行过血浆置换术2023/8/1222正反定型不符一般处理程序一、询问2024/7/323正正反定型不符一般处理程序不符一般处理程序二、二、使用试管法重做试验并判断可能的原因使用试管法重做试验并判断可能的原因试管法定型的优点试管法定型的优点1.1.1.1.可以反复离心看结果。可以反复离心看结果。可以反复离心看结果。可以反复离心看结果。2.2.2.2.可以随意延长抗原抗体反应时间，可以改可以随意延长抗原抗体反应时间，可以改可以随意延长抗原抗体反应时间，可以改可以随意延长抗原抗体反应时间，可以改 变反应温度（变反应温度（变反应温度（变反应温度（4444、37373737孵育），有利于弱抗原、抗孵育），有利于弱抗原、抗孵育），有利于弱抗原、抗孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集素的干扰。体的检出或排除冷凝集素的干扰。体的检出或排除冷凝集素的干扰。体的检出或排除冷凝集素的干扰。3.3.3.3.可以观察红细胞混合外观现象。可以观察红细胞混合外观现象。可以观察红细胞混合外观现象。可以观察红细胞混合外观现象。4.4.4.4.可以观察红细胞溶血现象。可以观察红细胞溶血现象。可以观察红细胞溶血现象。可以观察红细胞溶血现象。2023/8/1223正反定型不符一般处理程序 二、使2024/7/324ABO定型常见问题的解决方法 ABOABO亚型亚型 *正定：抗正定：抗-A-A、抗、抗-B-B、抗、抗-AB-AB、抗、抗-A1-A1、抗、抗-H-H*反定：反定：A1cA1c、A2cA2c、BcBc、OcOc、自身对照、自身对照 *正反定型在不同温度下反应并比较凝集强度的变化正反定型在不同温度下反应并比较凝集强度的变化 *吸收放散试验吸收放散试验*唾液血型物质检测唾液血型物质检测*有条件者可作家系调查或有条件者可作家系调查或PCRPCR检测血型基因检测血型基因2023/8/1224ABO定型常见问题的解决方法 AB2024/7/3252023/8/12252024/7/326ABOABO定型常见问题的解决方法定型常见问题的解决方法A、B抗原减弱*延长孵育时间、4孵育*酶处理红细胞*吸收放散试验*唾液血型物质检测*既往血型调查 2023/8/1226ABO定型常见问题的解决方法 A、B2024/7/327ABOABO定型常见问题的解决方法定型常见问题的解决方法抗体减弱*延长孵育时间、4孵育*酶处理试剂红细胞*既往血型调查 *免疫球蛋白水平测定2023/8/1227ABO定型常见问题的解决方法 抗2024/7/328ABOABO定型常见问题的解决方法定型常见问题的解决方法冷自身抗体*将血清和红细胞分别在将血清和红细胞分别在3737孵育后再混合孵育后再混合*用用3737温盐水洗涤红细胞、温盐水洗涤红细胞、4545热放散热放散3 3分钟分钟*巯基试剂巯基试剂(DTT)(DTT)处理红细胞处理红细胞*自身吸收去除血清中的自身冷抗体自身吸收去除血清中的自身冷抗体 2023/8/1228ABO定型常见问题的解决方法 冷自2024/7/329ABOABO定型常见问题的解决方法定型常见问题的解决方法室温反应的同种抗体*用谱细胞做抗体鉴定*选择没有相应抗原的A、B细胞做反定型反定型 2023/8/1229ABO定型常见问题的解决方法 室温反2024/7/330ABOABO定型常见问题的解决方法定型常见问题的解决方法获得性B红细胞*询问病史*酸化抗-B血清（pH6.0)*唾液型物质检测 *家系调查证明没有遗传基础2023/8/1230ABO定型常见问题的解决方法 获得2024/7/332ABOABO定型常见问题的解决方法定型常见问题的解决方法致敏红细胞造成的假阳性洗涤后的压积受检红细胞于56水浴放散10分钟，直至直抗试验阳性结果明显减弱或消失，再次洗涤放散后的细胞用于正定型试验。2023/8/1232ABO定型常见问题的解决方法 致敏红细2024/7/333ABOABO定型常见问题的解决方法定型常见问题的解决方法*缗钱状凝集：洗涤红细胞、盐水替代试验 *前带现象：稀释血清后再做试验2023/8/1233ABO定型常见问题的解决方法 2024/7/334疑难血型举例疑难血型举例2023/8/1234 疑难血型举例2024/7/3352023/8/12352024/7/3362023/8/12362024/7/3372023/8/12372024/7/3382023/8/12382024/7/3392023/8/12392024/7/3402023/8/12402024/7/3412023/8/12412024/7/3422023/8/12422024/7/3432023/8/12432024/7/3442023/8/12442024/7/3452023/8/1245