荧光原位杂交技术在临床病埋中的应用课件

荧荧光原位光原位杂杂交技交技术术(FISH)(FISH)在在临临床病理中的床病理中的应应用与用与质质控控广西至科大学一附院病理科 王华.荧光原位杂交技术(FISH)在临床病理中的应用与质控广西至1荧荧光原位光原位杂杂交技交技术术(FISH):(FISH):用用带带有有荧荧光素光素标记标记的的核酸探核酸探针针与与组织细组织细胞中待胞中待测测的核酸的核酸(DNA、RNA)按碱基配按碱基配对对的原的原则进则进行特异性行特异性结结合，在合，在荧荧光光显显微微镜镜下下显显示示细细胞基因状胞基因状态态的方法。的方法。FISHFISH在在临临床病理中的床病理中的应应用用辅辅助病理助病理诊诊断、判断断、判断预预后、指后、指导临导临床治床治疗疗.荧光原位杂交技术(FISH):.2一、常用荧光素及滤光片类型荧荧光素光素颜颜色色激激发发波波长长 发发射波射波长长常用常用滤滤光片光片Red(Red(红红色色)592592612612RedRed单单通道通道Orange(Orange(橙色橙色)559559588588OrangeOrange单单通道通道G/OG/O双通道双通道Green(Green(绿绿色色)497497524524GreenGreen单单通道通道G/OG/O双通道双通道Aqua(Aqua(青青蓝蓝色色)433433480480AquaAqua单单通道通道DAPI(DAPI(蓝蓝色色)367367452452BlueBlue单单通道通道.一、常用荧光素及滤光片类型荧光素颜色激发波长发射波长常用滤光3二、常用探针种类单单色探色探针针(single color probe,SC)(single color probe,SC)双色探双色探针针(dual color probe,DC)(dual color probe,DC)三色探三色探针针(triple color probe,TC)(triple color probe,TC)双色分离探双色分离探针针(dual color,break apart probe.DC,BCR)(dual color,break apart probe.DC,BCR)双色双色单单融合探融合探针针(dual color,single fusion.DC,SF(dual color,single fusion.DC,SF Trans)Trans)额额外信号探外信号探针针(extra signal.ES)(extra signal.ES)双色双融合探双色双融合探针针 (dual color,dual fusion probe.DC,DF Trans)(dual color,dual fusion probe.DC,DF Trans).二、常用探针种类单色探针(single color prob4单色探针(SC)正常正常异常异常CEP8.单色探针(SC)正常异常CEP8.5双色探针(DC)正常正常异常异常HER2CEP17.双色探针(DC)正常异常HER2CEP17.6三色探针(TC)正常正常异常异常XYCEP18.三色探针(TC)正常异常XYCEP18.7双色分离探针(DC,BCR)正常正常异常异常MYCMYC14181418.双色分离探针(DC,BCR)正常异常MYCMYC1418148双色单融合探针(DC,SF Trans)正常正常异常异常ABLABL922922BCRBCR.双色单融合探针(DC,SF Trans)正常异常ABLAB9额外信号探针(ES)正常正常异常异常ABLABL922922BCRBCR.额外信号探针(ES)正常异常ABLABL922922BCRB10双色双融合探针(DC,DF Trans)正常正常异常异常IGHIGH14181418BCL2BCL2.双色双融合探针(DC,DF Trans)正常异常IGHIG11三、三、FISHFISH检测检测在常在常见肿见肿瘤中的瘤中的应应用与意用与意义义.三、FISH检测在常见肿瘤中的应用与意义.12乳腺癌探探针针:HER2/CSP17:HER2/CSP17（双色探（双色探针针）HER2HER2基因基因检测检测意意义义：HER2HER2基目基目扩扩增的患者增的患者预预后差后差:无病生存和无病生存和总总生存期生存期缩缩短，淋巴短，淋巴结转结转移几率高，复移几率高，复发凤险发凤险高。高。指指导导内分泌冶内分泌冶疗疗：HER2HER2基因基因扩扩增患者增患者对对内分泌治内分泌治疗产疗产生耐生耐药药。指指导导合理合理选择辅选择辅助化助化疗疗方案：方案：HER2HER2基因基因扩扩增患者宜采增患者宜采用紫杉醇化用紫杉醇化疗疗和高和高强强度的蒽度的蒽环类药环类药物方案。物方案。筛选筛选分子靶向分子靶向药药物的适用者：物的适用者：HER2HER2基因基因扩扩增患者适合增患者适合使用曲妥珠使用曲妥珠单单抗抗药药物。物。.乳腺癌探针:HER2/CSP17（双色探针）.13Her2(-)2G+2R Ratio:1/12.2/1,Her2 FISH(+).Her2(-)2G+2R Ratio:1/1Her14探探针针：TOP2A/CSP17TOP2A/CSP17（双色探（双色探针针）TOP2A基因两种异常：基因两种异常：扩扩增和缺失。增和缺失。TOP2ATOP2A基因基因检测检测的意的意义义：存在存在TOP2A基因异常的患者基因异常的患者预预后差，尤其是基因缺失后差，尤其是基因缺失的患者的患者预预后更差。后更差。TOP2A基因异常患者基因异常患者对对于含蒽于含蒽环类药环类药物的治物的治疗疗方案更方案更敏感。敏感。.探针：TOP2A/CSP17（双色探针）.15非小细胞肺癌探探针针：EGFR/CSP7EGFR/CSP7（双色探（双色探针针）EGFR基因异常：基因异常：扩扩增和拷增和拷贝贝数增加。数增加。EGFREGFR基因基因检测检测的意的意义义：30%40%非小非小细细胞肺癌存在胞肺癌存在EGFR基因异常基因异常.筛选筛选酪氨酸激酪氨酸激酶酶抑制抑制剂剂适用者：适用者：EGFR基因基因增多的患者，增多的患者，应应用用Iressa/Tarceva治治疗疗的有效率的有效率为为35%，疾病控制率高达，疾病控制率高达70%。.非小细胞肺癌探针：EGFR/CSP7（双色探针）.16EGFR(-)2G+2R Ratio:2.0,EGFR FISH(+).EGFR(-)2G+2R Ratio:4个个.非小细胞肺癌EGFR基因检测:.39六、六、FISHFISH检测规检测规范与范与质质控控影响影响FISHFISH制片制片质质量的因素量的因素 组织处组织处理的理的规规范化范化:及及时时固定固定:冷缺血冷缺血时间时间1h1h 4%4%中性中性缓缓冲甲冲甲醛醛6-48h6-48h 不推荐微波固定不推荐微波固定 乙醇脱水乙醇脱水 浸蜡温度浸蜡温度686周的周的组织组织切片不切片不应应再用于再用于FISH检测检测.脱蜡、脱二甲苯.41影响影响FISHFISH判判读读的因素的因素 采用正确的采用正确的滤滤光片光片观观察察 Orange/red Orange/red 正确判定正确判定肿肿瘤瘤细细胞胞(HEIHCFISH)(HEIHCFISH)肿肿瘤异瘤异质质性表达性表达 导导管内癌管内癌/浸浸润润性癌性癌 浸浸润润性癌不同部位性癌不同部位 至少两位至少两位阅阅片者片者 .影响FISH判读的因素.42.43导导管内癌管内癌浸浸润润性性导导管癌管癌.导管内癌浸润性导管癌.44免疫免疫组组化技化技术术、蛋白、蛋白组组学技学技术术的的发发展展2121世世纪纪初蛋白初蛋白质质指指纹图谱纹图谱技技术术建立建立新蛋白新蛋白质质种种类类的的发现发现免疫免疫组组化抗体种化抗体种类类对临对临床病理的影响床病理的影响10年年时间时间.免疫组化技术、蛋白组学技术的发展！10年时间.45DNADNA测测序技序技术术的的进进步步人人类类基因基因组计组计划初步完成划初步完成 于于20002000年完成年完成测测定人体定人体2323对对染色体全部染色体全部DNADNA序列，完成人序列，完成人类类基因基因组组“工作框架工作框架图图”。20012001年年公布了人公布了人类类基因基因组图谱组图谱及初步分析及初步分析结结果。果。人人类类基因基因组组研究研究进进入入规规模化模化荧荧光原位光原位杂杂交技交技术术的的发发展展FISHFISH探探针针的种的种类类对临对临床病理的影响床病理的影响.DNA测序技术的进步？.46.谢谢！.47