艾滋病梅毒乙肝实验室检测技术课件

艾滋病梅毒乙肝实验室检测技术艾滋病梅毒乙肝实验室检测技术艾滋病梅毒乙肝实验室检测技术艾滋艾滋病艾滋病抗体检测及抗体检测及样品处样品处理理实验室实验室质量管理质量管理生物安全生物安全质量控制质量控制梅毒梅毒乙肝乙肝检测要点检测要点2艾滋病实验室生物安全质量控制梅毒2艾滋病抗体检测及样品处理艾滋病抗体检测及样品处理一、抗体检测筛查方法一、抗体检测筛查方法酶联免疫吸附试验（）酶联免疫吸附试验（）化学发光或免疫荧光试验化学发光或免疫荧光试验快速检测（）快速检测（）（建议配备合格的快速检测试剂，灰区。）（建议配备合格的快速检测试剂，灰区。）3艾滋病抗体检测及样品处理一、抗体检测筛查方法3二、二、筛查程序筛查程序初筛和复检流程初筛和复检流程（图（图1）4二、筛查程序455三、筛查试验结果的报告三、筛查试验结果的报告（建议用修改后附表（建议用修改后附表3）（例）（例）抗体筛查试验用附表抗体筛查试验用附表1进行报告，阴性反应报告为进行报告，阴性反应报告为“抗体阴性（抗体阴性（-）”；阳性反应报告为；阳性反应报告为“抗体待复检抗体待复检”。6三、筛查试验结果的报告6四、四、感染产妇所生儿童抗体检测策略及流程感染产妇所生儿童抗体检测策略及流程 1、适用范围、适用范围感感染染产产妇妇所所生生婴婴幼幼儿儿；已已满满18个个月月的的婴婴幼幼儿儿，其其母母亲亲感感染染状状态态不不详详，儿儿童童出出现现相相关关临临床床表表现现，临临床床怀怀疑疑感感染的儿童。染的儿童。7四、感染产妇所生儿童抗体检测策略及流程 72 2、检测程序、检测程序82、检测程序8五、样品的处理五、样品的处理1样品的保存样品的保存用用于于抗抗体体和和抗抗原原检检测测的的血血清清或或血血浆浆样样品品，短短期期（1周周）内内进进行行检检测测的的可可存存放放于于28，一一周周以以上上应应存存放放于于-20以下。以下。2.样品的运送（例）样品的运送（例）（1）应符合生物安全要求；）应符合生物安全要求；(2)应采用三层容器对样品进行包装。应采用三层容器对样品进行包装。9五、样品的处理9第第一一层层容容器器：直直接接装装样样品品，应应防防渗渗漏漏。样样品品应应置置于于带带盖盖的的试试管管内内。在在试试管管的的周周围围应应垫垫有有缓缓冲冲吸吸水水材材料料，以以免免碰碎。碰碎。第第二二层层容容器器：容容纳纳并并保保护护第第一一层层容容器器，可可以以装装若若干干个个第第一一层层容容器器。要要求求不不易易破破碎碎、带带盖盖、防防渗渗漏漏、容容器器的的材材料要易于消毒处理。料要易于消毒处理。第第三三层层容容器器：容容纳纳并并保保护护第第二二层层容容器器的的运运输输用用外外层层包包装装箱箱。外外面面要要贴贴上上醒醒目目的的标标签签、联联系系方方式式，还还应应易易于于消消毒。毒。10第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内。在1111(3)用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。12(3)用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。1质量控制质量控制一、一、艾滋病抗体检测的统计学室内质量控制艾滋病抗体检测的统计学室内质量控制1、试剂盒内部对照、试剂盒内部对照即即试试剂剂盒盒提提供供的的阳阳性性和和阴阴性性对对照照血血清清。用用于于判判断断实实验验的的有有效效性性，不不能能作作为为室室内内质质控控品品使使用用，内内部部对对照照结结果果无效，必须重新试验。无效，必须重新试验。13质量控制一、艾滋病抗体检测的统计学室内质量控制132 2、室内质控品、室内质控品为为非非试试剂剂盒盒组组份份的的外外部部质质控控品品，是是为为了了监监控控检检测测的的重重复复性性而而设设置置的的，包包括括强强阳阳性性、弱弱阳阳性性和和阴阴性性质质控控血血清清。也也可可以以只只设设置置一一个个弱弱阳阳性性质质控控，以以该该试试剂剂盒盒临临界界值值（）的的2 23 3倍倍为为宜宜。作作用用：判判断断该该批批临临床床样样品品检检测测的的有有效性，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。效性，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。142、室内质控品14二、二、统计室内质控的主要表示方法统计室内质控的主要表示方法建立质控图建立质控图最常用的质控图是质控图，下面以方法检测抗体为例，描述建立质控图步骤：最常用的质控图是质控图，下面以方法检测抗体为例，描述建立质控图步骤：15二、统计室内质控的主要表示方法建立质控图151616171718182 2、绘制质控图、绘制质控图（a a）在在常常规规条条件件下下，对对同同一一批批血血清清连连续续测测定定2020次次（天天）或或以以上上，获获得得一一组组值值，求求均均数数（）和和标标准准差差（s s）,超出超出2s2s或或3s3s的数据不应删除。的数据不应删除。（b b）将将均均值值（）和和标标准准差差（s s）分分别别在在质质控控框框架架图图中中标标示示出出来来。以以值值作作纵纵座座标标（Y Y轴轴），每每一一批批次次试试验验作作横座标（横座标（x x轴），绘制质控图。轴），绘制质控图。192、绘制质控图19（c）从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。20（c）从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框3 3、质控规则及其使用、质控规则及其使用质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，目前有许多质控规则，常用的是质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，目前有许多质控规则，常用的是12S12S和和13S13S规则。规则。（a a）告告警警（12S12S）：当当外外部部质质控控品品的的值值超超出出 +2s+2s范范围围时时，系系统统处处于于告告警警状状态态，应应予予注注意意，是是否否可可以以继继续续检检测需要进一步观察。若将测需要进一步观察。若将12S12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。213、质控规则及其使用21（b）失控（13S）：当外部质控品的值超出+3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品 稳定性下降所致。（c）漂移：连续几次（35次）外部质控品的值都落在均值的一侧则称为漂移，提示实验条件发生了较大的变化。（d）趋势：连续几次（57次）外部质控品的值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。22（b）失控（13S）：当外部质控品的值超出+3s范围时，系艾滋病实验室生物安全艾滋病实验室生物安全一、的生物危害一、的生物危害第第一一类类、第第二二类类病病原原微微生生物物统统称称为为高高致致病病性性病病原原微微生生物物。人人类类免免疫疫缺缺陷陷病病毒毒（）属属第第二二类类病病原原微微生生物物，是是高致病性病原微生物。高致病性病原微生物。23艾滋病实验室生物安全一、的生物危害23二、相关检测的生物安全级别二、相关检测的生物安全级别抗体检测应在符合抗体检测应在符合级生物安全实验室（级生物安全实验室（2）要求的艾滋病检测实验室中进行。）要求的艾滋病检测实验室中进行。24二、相关检测的生物安全级别24三、生物安全保证措施三、生物安全保证措施1、建立安全制度、建立安全制度艾滋病检测实验室应建立下列安全制度艾滋病检测实验室应建立下列安全制度(1)实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（）。实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（）。(2)意外事故处理预案，主要是生物安全意外事故。意外事故处理预案，主要是生物安全意外事故。(3)信息安全及保密制度：（例）信息安全及保密制度：（例）25三、生物安全保证措施252 2、培训和管理、培训和管理3 3、个人保健和防护、个人保健和防护4 4、安全操作、安全操作5 5、实验室的清洁和消毒、实验室的清洁和消毒工工作作完完毕毕应应对对工工作作台台面面消消毒毒，推推荐荐用用0.10.10.2%0.2%的的次次氯氯酸酸溶溶液液消消毒毒；用用消消毒毒液液清清洗洗后后要要干干燥燥2020以以上上；操操作作过过程中如有样品、检测试剂外溅，应及时消毒。程中如有样品、检测试剂外溅，应及时消毒。262、培训和管理26如有大量高浓度的传染性液体溅出，在清洁之前应先用1%的次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦净。离心样品时要使用密闭的罐和密封头，防止离心时液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。27如有大量高浓度的传染性液体溅出，在清洁之前应先用1%的次氯酸四、污染物处理四、污染物处理1、艾艾滋滋病病实实验验室室产产生生的的所所有有废废弃弃物物，包包括括不不再再需需要要的的样样品品、培培养养物物和和其其它它物物品品，均均应应视视为为感感染染性性废废弃弃物物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，经高压消毒后再进行处理或废弃。应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，经高压消毒后再进行处理或废弃。28四、污染物处理282 2、艾滋病检测实验室常用的消毒方法、艾滋病检测实验室常用的消毒方法（1 1）物理消毒方法物理消毒方法a a 高压蒸汽消毒，高压蒸汽消毒，121121，保持，保持151520;20;b b 干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），140140，保持，保持2 23h3h。（2 2）化学消毒方法化学消毒方法 含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000200050005000）、）、75%75%乙醇、乙醇、2%2%戊二醛戊二醛292、艾滋病检测实验室常用的消毒方法29（3）艾滋病检测实验室物品常用的消毒方法a、废弃物缸：5000 次氯酸钠。b、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。c、溢出物：5000次氯酸钠。d、污染的台面和器具：2000 次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。30（3）艾滋病检测实验室物品常用的消毒方法30艾滋病检测实验室质量管理艾滋病检测实验室质量管理一、范围一、范围艾滋病检测实验室质量管理包括质量保证、质量控制和质量评价艾滋病检测实验室质量管理包括质量保证、质量控制和质量评价31艾滋病检测实验室质量管理一、范围31二、质量保证二、质量保证1、人员培训、人员培训检测技术人员需经过上岗培训和在岗持续培训。筛查实验室技术人员至少每检测技术人员需经过上岗培训和在岗持续培训。筛查实验室技术人员至少每2年年1次。次。32二、质量保证322 2、环境条件、环境条件艾艾滋滋病病抗抗体体筛筛查查实实验验室室的的设设置置及及其其建建筑筑、设设施施、设设备备必必须须符符合合全全国国艾艾滋滋病病检检测测工工作作管管理理办办法法的的要要求求。，及及梅梅毒毒等等血血清清学学检检测测在在满满足足实实验验室室管管理理要要求求和和保保证证生生物物安安全全的的条条件件下下，可可以以及及检检测测共共享享空空间间和和设设备备，应应避避免交叉污染。免交叉污染。332、环境条件333 3、样品采集、运送和处理、样品采集、运送和处理4 4、检测方法和试剂的选择、检测方法和试剂的选择5 5、设备维护、设备维护及及校准校准6 6、实验耗材、实验耗材7 7、文件和文件管理、文件和文件管理343、样品采集、运送和处理348 8、标准操作程序、标准操作程序 （）（）筛筛查查实实验验室室文文件件包包括括：（1 1）样样品品的的接接收收、登登记记、处处理理、保保存存和和运运输输；（2 2）检检测测方方法法和和步步骤骤；（3 3）试试剂剂使使用用和和保保存存；（4 4）仪仪器器的的使使用用维维护护和和校校准准；（5 5）质质量量控控制制要要求求及及程程序序；（6 6）结结果果解解释释及及报报告告；（7 7）保保密密程程序序；（8 8）实实验验室室数数据据、相相关关文文件件记记录录与与保保存存；（9 9）不不确确定定样样品品追追踪踪和和处处理理；（1010）实实验验室室安安全全防防护护及及实验室的清理和消毒；实验室的清理和消毒；358、标准操作程序（）35（11）标题和编号；（12）编写和修订日期；（13）编写和修订人员姓名；（14）方法、目的和应用范围；（15）检测设备；（16）试剂及有效期；（17）安全防护相关步骤；（18）结果的解释和报告；（19）附录，包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。36（11）标题和编号；（12）编写和修订日期；（13）编写和修9 9、实验原始记录表（附表、实验原始记录表（附表4 4）1010、结果报告结果报告1111、样品登记和保存样品登记和保存379、实验原始记录表（附表4）37三、质量控制三、质量控制四、质量评价四、质量评价包括内部质量评价和外部质量评价。包括内部质量评价和外部质量评价。1、内部质量评价、内部质量评价2、外部质量评价、外部质量评价筛查实验室应参加省级职能工作考核和。筛查实验室应参加省级职能工作考核和。38三、质量控制383 3、职能工作考核、职能工作考核现场评价内容，筛查实验室现场评价应包括：现场评价内容，筛查实验室现场评价应包括：实实验验室室人人员员组组成成及及其其职职责责分分工工；实实验验室室分分区区、布布局局、恒恒温温设设施施；仪仪器器设设备备及及其其使使用用、校校准准记记录录；质质量量保保证证文件、实验室文件及原始记录；实验室的安全防护措施，安全用品及安全规程；文件、实验室文件及原始记录；实验室的安全防护措施，安全用品及安全规程；393、职能工作考核39消毒及污物处理方法及设施；检测资料数据库的建设、存档、备份、安全和保密；样品保存和安全；开展的检测项目和检测试剂等。40消毒及污物处理方法及设施；检测资料数据库的建设、存档、备份、梅毒、乙肝检测要点梅毒、乙肝检测要点一、梅毒螺旋体感染人体后出现两种抗体，特异体抗体和非特异性抗体。一、梅毒螺旋体感染人体后出现两种抗体，特异体抗体和非特异性抗体。特异性抗体特异性抗体()：为，这种抗体一旦产生，终身是阳性。灵敏度高、特异性强：为，这种抗体一旦产生，终身是阳性。灵敏度高、特异性强非非特特异异性性抗抗体体（反反应应素素）：为为及及的的混混合合物物，随随病病情情发发展展而而变变化化。可可与与正正常常生生物物组组织织中中的的类类脂脂抗抗原原发发生生非非特特异性结合。异性结合。41梅毒、乙肝检测要点一、梅毒螺旋体感染人体后出现两种抗体，特二二、梅梅毒毒特特异异性性抗抗体体检检测测：用用于于证证实实试试验验，即即使使患患者者已已经经经经过过充充分分的的治治疗疗，抗抗体体仍仍保保持持阳阳性性 所所以以不不能能用用以以观察疗效、复发及再感染。观察疗效、复发及再感染。方法有：酶联免疫法、。方法有：酶联免疫法、。42二、梅毒特异性抗体检测：用于证实试验，即使患者已经经过充分的梅毒非特异性抗体检测：用于梅毒诊断疗效观察和对复发或再感染的监测。梅毒非特异性抗体检测：用于梅毒诊断疗效观察和对复发或再感染的监测。方法有：性病实验室试验（又称试验）、快速血浆反应素方法有：性病实验室试验（又称试验）、快速血浆反应素()试验、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（）、试验、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（）、世界卫生组织推荐用等方法进行过筛试验，出现阳性者再用等方法进行确认试验。世界卫生组织推荐用等方法进行过筛试验，出现阳性者再用等方法进行确认试验。43梅毒非特异性抗体检测：用于梅毒诊断疗效观察和对复发或再感染的三、梅毒滴度测定使用仪器：水平旋转仪三、梅毒滴度测定使用仪器：水平旋转仪 转速：转速：100转转 室温室温四、乙肝定性：检测方法同艾滋病筛查。四、乙肝定性：检测方法同艾滋病筛查。五、乙肝定量：乙肝病毒检测五、乙肝定量：乙肝病毒检测特点：灵敏度高、易出现假阳性、数据波动大特点：灵敏度高、易出现假阳性、数据波动大 要点：合理分区、防止污染。要点：合理分区、防止污染。44三、梅毒滴度测定使用仪器：水平旋转仪 转速：100转 谢谢大家！4545谢谢谢谢