骨髓细胞微核实验ppt课件

骨髓细胞微核实验骨髓细胞微核实验骨髓细胞微核实验骨髓细胞微核实验1微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。微核(Micronucleus,MCN)是指细胞中主核之外的颗粒，染色与细胞核一致，相当于细胞直径的1/20-1/5，呈圆形或杏仁状。是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。实验原理实验原理骨髓细胞微核实验2微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检机理：1有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中2断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中结论：微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点实验原理实验原理骨髓细胞微核实验3机理：实验原理骨髓细胞微核实验3无核细胞无核细胞红细胞红细胞有核细胞中有核细胞中微核难与正常核分叶微核难与正常核分叶及核突出物区别及核突出物区别微微核核实实验验骨髓细胞微核实验4无核细胞红细胞有核细胞中微骨髓细胞微核实验4红细胞的分化成熟过程骨髓细胞微核实验5红细胞的分化成熟过程骨髓细胞微核实验5骨髓细胞微核实验6骨髓细胞微核实验6小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成骨髓细胞微核实验7小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成骨髓细胞微核实验78环磷酰胺（CTX）v最常用的最常用的烷化化剂类抗抗肿瘤瘤药。v在体外无抗在体外无抗肿瘤活性，瘤活性，进入体内入体内经转化、分解，生成化、分解，生成酰胺氮芥胺氮芥对肿瘤瘤细胞有胞有细胞毒作用。胞毒作用。v副作用明副作用明显，有，有恶心、食欲减退、脱心、食欲减退、脱发、白、白细胞减少、胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。等。v具有具有显著的著的遗传、生殖毒性：停、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠初或精子缺乏，妊娠初期期时给予可致畸胎。予可致畸胎。v用用药后后24-30小小时，骨髓中微核形成达峰。，骨髓中微核形成达峰。骨髓细胞微核实验88环磷酰胺（CTX）骨髓细胞微核实验89结果示小鼠骨髓嗜多染示小鼠骨髓嗜多染红细胞中一个微核红细胞中一个微核示小鼠骨髓正常示小鼠骨髓正常嗜多染红细胞嗜多染红细胞骨髓细胞微核实验99结果示小鼠骨髓嗜多染红细胞中一个微核示小鼠骨髓正常嗜多染10示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核骨髓细胞微核实验1010示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核骨髓细胞微核实验1011示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核骨髓细胞微核实验1111示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核骨髓细胞微核实验11Giemsa染色PCE胞质内含有核糖体，染色呈灰蓝色；MCN多数为圆形，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。NCE PCE&MCN骨髓细胞微核实验12Giemsa染色PCE胞质内含有核糖体，染色呈灰蓝色；MCN实验目的1.用化疗药（环磷酰胺）制备突变模型2.观察小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核骨髓细胞微核实验13实验目的用化疗药（环磷酰胺）制备突变模型骨髓细胞微核实验13【Animal】小鼠是微核试验的常规动物，通常用712周龄，体重1820g的小鼠。【Reagents】小牛血清 Giemsa染液环磷酰胺实验动物及试剂骨髓细胞微核实验14【Animal】实验动物及试剂骨髓细胞微核实验14实验分组和染毒方法环磷酰胺环磷酰胺40mg/kg 模型组模型组等体积溶剂等体积溶剂对照组对照组染毒方法（染毒方法（30h两次给药法）：两次给受两次给药法）：两次给受试物间隔试物间隔24h，第二次给药后，第二次给药后6h取材取材骨髓细胞微核实验15实验分组和染毒方法环磷酰胺40mg/kg模型组等体积溶剂对处死死：小鼠：小鼠颈椎脱臼椎脱臼处死；死；取股骨取股骨：防止出血；：防止出血；取骨髓取骨髓：小牛血清：小牛血清1滴滴推片推片：30度角；度角；晾干晾干：一定要干；：一定要干；固定固定：甲醇固定：甲醇固定10min,需要晾干；需要晾干；染色染色：Gimesa染液染色（染液染色（1015min）冲洗：冲洗：蒸蒸馏水冲洗，晾干水冲洗，晾干阅片片:观察微核。察微核。染毒后操染毒后操染毒后操染毒后操 作步作步作步作步骤骤骨髓细胞微核实验16处死：小鼠颈椎脱臼处死；取股骨：防止出血；取骨髓：小牛血清1推片方法骨髓细胞微核实验17推片方法骨髓细胞微核实验17观察与计数：低倍镜下选择分布均匀，染色较好的区域油镜下观察计数F多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞（NCE）呈橘黄色。典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。F计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。微核率（微核率（）=含微核含微核PCE细胞胞数数PCE细胞胞总数数1000实验方法和步骤骨髓细胞微核实验18观察与计数：低倍镜下选择分布均匀，染色较好的区域微核率（）实验结果组别动物数物数受受检PCE总数数含微核含微核PCE数数微核率微核率阴性阴性对照照组模型模型组骨髓细胞微核实验19实验结果组别动物数受检PCE总数含微核PCE数微核率阴性对照结果分析与评价本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示.PCE/NCE为评价细胞毒性的指标：F正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.61.2)；F如PCE/NCE0.1，则表示PCE形成受到严重抑制；F如PCE/NCE0.05，则表示受试化学毒物的剂量过大，试验结果不可靠。骨髓细胞微核实验20结果分析与评价本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示骨髓细胞微核实验ThankYou!骨髓细胞微核实验21此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！骨髓细胞微核实验22此课件下载可自行编辑修改，供参考！骨髓细胞微核实验22