肾功能不全试验的实验报告医学课件

家兔急性家兔急性肾功能不全肾功能不全1家兔急性肾功能不全1实验目的实验目的n n复复制制急急性性中中毒毒性性肾肾衰衰动动物物模模型型，通通过过对对肾肾功功能能指指标标的的检检测测及及肾肾脏脏形形态态学学改改变变的的观观察察，了了解解中中毒毒家家兔兔肾肾功功能能的的改改变变。判判断断、分分析析致致病病因因素素及及导导致致急急性性肾肾衰衰的的可可能能发发病病机机制制。2实验目的复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对肾功能指标的检测及实验原理实验原理n n肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功能受到影响，从而导致肾功能不全。能受到影响，从而导致肾功能不全。3实验原理肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一是泌尿功能。肾n nARF发病机制的中心环节是发病机制的中心环节是GFR的降低。的降低。肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回漏或肾细胞损伤等均可导致漏或肾细胞损伤等均可导致GFR的降低。的降低。n n 本实验通过皮下注射本实验通过皮下注射1HgCl2造成家兔造成家兔急性肾小管性坏死。急性肾小管性坏死。n n 通过本实验学习复制急性通过本实验学习复制急性中毒性中毒性肾衰动肾衰动物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红排物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红排泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰时泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰时肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分析肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分析急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对急急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对急性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化加性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化加深理解。深理解。4ARF发病机制的中心环节是GFR的降低。肾血流量减少，肾小管实验对象实验对象n n家兔家兔23kg。5实验对象家兔23kg。5实验药品与器材实验药品与器材n n1HgCl2、生理盐水、25氨基甲酸乙酯、06酚红、20葡萄糖、10NaOH、手术器械一套，注射器、试管、加样器、721分光光度计、水浴锅、离心机。6实验药品与器材1HgCl2、生理盐水、25氨基甲酸乙酯实验步骤实验步骤n n复复制制肾肾功功能能衰衰竭竭模模型型：于于实实验验前前一一天天，取取两两只只家家兔兔，称称重重，一一只只皮皮下下或或肌肌肉肉注注射射1HgCl2(o810mlkg)造造成成急急性性肾肾功功能能衰衰竭竭，为为实实验验组组兔兔；另另一一只只皮皮下下或或肌肌肉肉注注射射等等量量的的生生理理盐盐水水(10mlkg)作作为为对对照照组组兔兔。7实验步骤复制肾功能衰竭模型：于实验前一天，取两只家兔，称重实验步骤实验步骤n n观观察察：24h后后，比比较较两两组组动动物物的的一一般般状状态态、活活动动情情况况与与尿尿量量。n n家家兔兔称称重重，耳耳缘缘静静脉脉注注射射25氨氨基基甲甲酸酸乙乙酯酯40mlkg，待待动动物物麻麻醉醉后后，固固定定于于兔兔台台。8实验步骤观察：24h后，比较两组动物的一般状态、活动情况与尿角膜反射角膜反射夹肢反射夹肢反射9角膜反射夹肢反射9实验步骤实验步骤家家兔兔心心脏脏采采血血35ml置置于于一一干干燥燥管管中中（不不抗抗凝凝），放放置置10min后后，3000r/min离离心心15min，小小心心吸吸取取血血清清置置于于另另一一干干燥燥管管中中，备备测测血血肌肌酐酐10实验步骤家兔心脏采血35ml置于一干燥管中（不抗凝），放置实验步骤实验步骤n n如如果果心心脏脏采采血血失失败败，则则颈颈总总动动脉脉采采血血n n颈颈部部正正中中剪剪毛毛，切切开开皮皮肤肤，分分离离左左侧侧颈颈总总动动脉脉，在在动动脉脉下下穿穿两两根根丝丝线线，用用一一根根丝丝线线结结扎扎动动脉脉的的远远心心端端，近近心心端端用用动动脉脉夹夹夹夹闭闭，在在结结扎扎线线下下方方的的动动脉脉壁壁上上剪剪一一小小斜斜口口，然然后后向向心心脏脏方方向向插插入入动动脉脉导导管管放放血血3ml备备测测血血肌肌酐酐11实验步骤如果心脏采血失败，则颈总动脉采血11实验步骤实验步骤n n分分离离右右侧侧颈颈外外静静脉脉，插插管管用用于于输输液液。输输液液速速度度一一定定要要慢慢n n下下腹腹部部正正中中剪剪毛毛，在在耻耻骨骨联联合合上上约约15cm处处做做切切口口，长长约约4cm，暴暴露露膀膀胱胱，用用注注射射器器收收集集2ml尿尿液液于于试试管管中中，做做尿尿肌肌酐酐检检查查。12实验步骤分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输液速度一定要慢12实验步骤实验步骤n n在在膀膀胱胱底底部部，找找出出两两侧侧输输尿尿管管，并并分分离离之之。在在近近膀膀胱胱端端结结扎扎输输尿尿管管，稍稍等等片片 刻刻，待待其其略略充充盈盈后后，用用眼眼科科剪剪剪剪一一小小口口，向向肾肾脏脏方方向向插插入入一一细细塑塑料料管管(塑塑料料管管事事先先用用肝肝素素冲冲洗洗或或充充满满肝肝素素)，结结扎扎并并固固定定，用用于于收收集集尿尿液液。13实验步骤在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离之。在近膀胱端结扎实验步骤实验步骤酚酚红红排排泄泄率率测测定定：n n 1)两两组组家家兔兔分分别别耳耳缘缘静静脉脉注注射射o6酚酚红红溶溶液液(1mlkg)，接接着着从从颈颈外外静静脉脉插插管管处处注注射射20葡葡萄萄糖糖溶溶液液(30mlkg)。收收集集从从开开始始注注射射酚酚红红起起15min或或30min的的尿尿液液。换换算算成成单单位位时时间间的的尿尿量量(mlmin)。14实验步骤酚红排泄率测定：14实验步骤实验步骤n n将将收收集集的的尿尿液液倒倒入入500ml量量筒筒内内，加加10NaOH lOml，用用自自来来水水补补充充至至500ml处处，混混匀匀后后，取取出出适适当当量量放放入入与与比比色色管管口口径径相相同同的的试试管管中中与与标标准准比比色色管管比比较较，得得出出15min或或30min内内肾肾脏脏酚酚红红排排泄泄率率。15实验步骤将收集的尿液倒入500ml量筒内，加10NaOH实验步骤实验步骤n n肾肾脏脏酚酚红红排排泄泄率率：是是反反映映肾肾血血流流量量与与肾肾小小管管排排泌泌功功能能的的指指标标。正正常常情情况况下下从从静静脉脉注注入入酚酚红红后后15min或或30min，肾肾脏脏酚酚红红排排泄泄率率分分别别30%与与45%。16实验步骤肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标实验步骤实验步骤n n血清和尿液肌酐含量测定血清和尿液肌酐含量测定苦味酸沉定苦味酸沉定蛋白法蛋白法n n原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，使溶液呈色后进行使溶液呈色后进行比色比色测定；然后加测定；然后加醋酸醋酸，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被清在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被清除，非肌酐物质（除，非肌酐物质（假肌酐）假肌酐）呈色，呈色，两者比两者比色之差为血及尿中肌酐。色之差为血及尿中肌酐。按表按表1、表、表2的操的操作步骤测定血清及尿液肌酐。作步骤测定血清及尿液肌酐。17实验步骤血清和尿液肌酐含量测定苦味酸沉定蛋白法17表表1 血清肌酐测定血清肌酐测定18表1血清肌酐测定18实验步骤实验步骤n n混匀，混匀，37OC水浴水浴30 min，以以510nm波长比波长比色，空白管调零，读色，空白管调零，读OD值，然后，各管加值，然后，各管加50%醋酸醋酸液两滴，放置液两滴，放置6min后，在测后，在测OD值。计算：值。计算：n n Crp(mg%)=OD测测OD测测/OD标标OD标标0.01/0.2100 n n正常值正常值:0.70.8mg%(1mg%=88.4 mol/L)。19实验步骤混匀，37OC水浴30min，以510nm波长比色表表2 尿肌酐测定尿肌酐测定20表2尿肌酐测定20实验步骤实验步骤n n混混匀匀，放放10min后后加加蒸蒸馏馏水水6。0ml，摇摇匀匀，以以530nm波波长长比比色色，空空白白管管调调零零，读读OD值值。计计算算：n n Cru(mg%)=OD测测/OD标标0.05mg100ml/0.1mln n21实验步骤混匀，放10min后加蒸馏水6。0ml，摇匀，以53实验步骤实验步骤n n尿尿肌肌酐酐/血血肌肌酐酐的的意意义义：器器质质性性肾肾衰衰时时比比值值20；功功能能性性肾肾衰衰时时比比值值40。22实验步骤尿肌酐/血肌酐的意义：器质性肾衰时比值20；功能性内生肌酐清除率内生肌酐清除率(Ccr)：能较准确的反映肾小球滤过率能较准确的反映肾小球滤过率(GFR)n n Ccr=Cr尿尿尿量（尿量（ml/min）/Cr血血n n为此，实验步骤为此，实验步骤收集尿液收集尿液必须采集有必须采集有“记录单记录单位时间的尿量位时间的尿量”的尿液样品做尿肌酐的尿液样品做尿肌酐Cr尿尿测定，测定，才能与血肌酐才能与血肌酐Cr血血比，计算出比，计算出GFR。肌酐能自。肌酐能自由从肾小球滤过，在肾小管中很少被重吸收，由从肾小球滤过，在肾小管中很少被重吸收，但有少量是由近曲小管分泌。内生肌酐在血浆但有少量是由近曲小管分泌。内生肌酐在血浆中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌酐量可忽中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌酐量可忽略不计，因此略不计，因此Ccr与菊粉清除率相近，可以代表与菊粉清除率相近，可以代表肾小球滤过率。肾小球滤过率。23内生肌酐清除率(Ccr)：能较准确的反映肾小球滤过率(GFR实验步骤实验步骤肾肾形形态态学学观观察察：处处死死家家兔兔，取取出出肾肾脏脏，称称肾肾重重量量，计计算算肾肾体体比比，比比较较两两组组家家兔兔肾肾脏脏外外形形，纵纵向向剖剖开开肾肾脏脏，观观察察皮皮髓髓质质条条纹纹、色色泽泽等等。24实验步骤肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏，称肾重量，计算肾体思考题思考题n n1试试分分析析氯氯化化高高汞汞（升升汞汞）中中毒毒性性急急性性肾肾功功能能不不全全的的主主要要发发病病机机制制是是什什么么？n n2哪哪些些实实验验结结果果可可说说明明肾肾血血流流量量减减少少也也参参与与升升汞汞中中毒毒性性肾肾衰衰的的发发生生机机制制？为为什什么么肾肾血血液液量量会会减减少少？n n3.急急性性肾肾功功衰衰时时，家家兔兔的的尿尿液液有有哪哪些些变变化化？为为什什么么？25思考题1试分析氯化高汞（升汞）中毒性急性肾功能不全的主要