风湿病自身抗体荧光模式课件

风湿病自身抗体荧光模式风湿病自身抗体荧光模式 及临床意义及临床意义 风湿病自身抗体荧光模式风湿性疾病相关自身抗体1.抗核抗体谱:ANA、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗DNA抗体、抗DNA组蛋白复合物抗体、抗核仁抗体、抗其他细胞成分抗体2.抗磷脂抗体(ALP)：抗心磷脂抗体（ACL）、抗2糖蛋白1（2GP1）抗体3.抗中性粒细胞胞浆抗体谱(ANCA)：anti-PR3、anti-MPO4.早期诊断相关抗体：抗角质蛋白抗体（AKA）、抗Sa抗体、抗核周因子（APF）、抗RA33抗体、抗CCP抗体、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）风湿性疾病相关自身抗体抗核抗体(ANA)的概念传统定义:是以细胞核内成份为靶抗原的器官非 特异性自身抗体总称。现代定义：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解已不再局限于核成分,而是指抗核酸(nucleic acid)和核蛋白（nucleoprotein)抗体的总称。靶抗原分布：细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期抗核抗体(ANA)的概念ANAANA筛选实验基本原理筛选实验基本原理 患者血清中存在的ANA(第一抗体)能与相应细胞核（浆）抗原成分结合,再用荧光标记的抗人球蛋白抗体(第二抗体)复染，经过荧光显微镜观察即能反映ANA的存在,而且通过对患者血清做一定稀释后的检测还可以对抗体含量作半定量（滴度）测定。ANA阳性的定义:一般将超过95正常人群ANA水平数值定义为ANA阳性，对大多数实验室而言，通常认为IFANA滴度1:80为阳性。ANA筛选实验基本原理基本荧光核型基本荧光核型 荧光核型荧光染色特点相关抗体相关疾病（核）均质型Homogeneous细胞核均匀染色，分裂期细胞染色体区域着染。抗组蛋白抗体，抗dsDNA抗体SLE，药物性狼疮，其它（核）周边型Perinuclear细胞核均匀染色，核周染色更强；分裂期细胞染色体区域强着染。抗层粘素抗核膜-核孔复合物，抗DNA慢性活动性肝炎，SLE（核）斑块型Speckle细胞核颗粒状、块状着染；核仁通常不着染；分裂期细胞染色体区域不着染。抗盐水可抽提核抗原（ENA）抗体 SLE，MCTD，SS，SSc，其它核仁型Nucleolar核仁着染，表现为核内几个大的块状或颗粒状染色(通常不超过6个)。抗核仁抗体SSc着丝点型Centromere间期细胞核内均匀分布细颗粒染色；分裂中期细胞中细颗粒沿染色体中板呈线性分布。抗着丝粒/动粒抗体CREST综合征PCNA型同一视野阴性、阳性染色细胞共存；不同细胞周期的细胞染色类型不同。抗PCNA抗体SLE基本荧光核型 荧光核型荧光染色特点相关抗体相关疾病（核）均质原因原因 :在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖1:10001:1000ANA核均质型和着丝点型核均质型和着丝点型1:1001:100ANA 核均质型和核仁型核均质型和核仁型推荐一个标本平行作两个稀释度 1:100和1:1000原因:在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖1:10001整个细胞核呈 现一片模糊而均匀的荧光,有时核仁部位也可见到荧光，分裂期细胞的染色体区也出现荧光。整个细胞核呈 现一片模糊而均匀的荧光,有时核仁部位也可见到荧以HEp-2细胞为基质检测ANA免疫荧光模式颗粒型颗粒型核仁型核仁型以HEp-2细胞为基质检测ANA免疫荧光模式颗粒型核仁型抗组蛋白抗体(AHA)靶抗原:组蛋白亚单位H1、H2A、H2B、H3、H4及其复合物抗体（主要抗原H1和H2B）功能：组蛋白+DNA ：核小体相关性：药物（普鲁卡因胺、肼屈嗪等）诱导性的红斑狼疮：100%（唯一的标志抗体）SLE：56.4%（EUROIMMUN研究）40%-80%其它风湿性疾病：少见抗组蛋白抗体(AHA)靶抗原:组蛋白亚单位H1、H2A、H抗非抗非组蛋白抗体蛋白抗体抗抗ENA抗体抗体:Sm、SSA、SSB抗染色体抗体：抗着丝点抗染色体抗体：抗着丝点抗非组蛋白抗体 核颗粒型 核内荧光呈斑点或颗粒状,核膜存在，分裂期细胞的染色体区无荧光，此型多与可溶性核抗原（ENA）有关 核颗粒型 抗Sm抗体靶抗原:与U1-、U2-、U4-、U5-或U6-nRNA连接的6 种不同蛋白分子（core proteins B,B,D,E,F,G）功能：切割pre-mRNA相关性：SLE:6.3%（EUROIMMUN研究）5%-30%抗Sm抗体核粗颗粒型（RNP/Sm类型）核粗颗粒型（RNP/Sm类型）抗核糖核蛋白抗体（抗U1-nRNP）靶抗原:与U1-nRNA 连接的3个颗粒特异性蛋白 （70K、A和C）功能：切割pre-mRNA相关性：MCTD:95%-100%SLE:17.5%（EUROIMMUN研究）15%-40%抗核糖核蛋白抗体（抗U1-nRNP）抗SS-A抗体/抗Ro抗体靶抗原:与 Y1,Y3,Y4 或Y5 型 RNA 连接的2个蛋白（52 kDa和60 kDa）功能：调节 mRNA 的转译活性 相关性：干燥综合征：40%-95%SLE:34.7%（EUROIMMUN研究）20%-60%抗SS-A抗体/抗Ro抗体抗SS-B抗体/抗La抗体靶抗原:与 小分子RNA（U6-RNA,pre-tRNA）结合的磷脂蛋白（48 kDa）功能：RNA多聚酶III的辅助蛋白相关性：干燥综合征：40%-95%SLE:13.3%（EUROIMMUN研究）10%-20%抗SS-B抗体/抗La抗体核细颗粒型（SS-A/SS-B类型）核细颗粒型（SS-A/SS-B类型）抗着丝点抗体靶抗原:连接动粒（着丝点）上的4个蛋 白分子：A-、B-、C-、D-蛋白,分 子量（17、80、140、50 kDa)主要的靶抗原：着丝点B蛋白 （与 IIFT相关性：100%）相关性：对系统性硬化诊症局限型（CREST综合征）有确诊意义（80%-95%）。抗着丝点抗体ANA:着丝点型ANA:着丝点型抗DNA抗体(ssDNA/dsDNA)靶抗原:单链、非天然（变形）DNA（嘌呤和嘧啶碱基对）双链、天然DNA（脱氧核糖核酸结构）相关性：ssDNA 类风湿80.8%（EUROIMMUN研究）SLE40.0%（EUROIMMUN研究）干燥综合征 44.0%（EUROIMMUN研究）皮肌炎12.3%（EUROIMMUN研究）类风湿性关节炎 51.7%（EUROIMMUN研究）献血员 6.8%（EUROIMMUN研究）dsDNA SLE30%-90%抗DNA抗体(ssDNA/dsDNA)抗ds-DNA（绿蝇短膜虫）抗ds-DNA（绿蝇短膜虫）抗DNA组蛋白复合物抗体狼疮细胞抗DNP抗体抗核小体抗体抗DNA组蛋白复合物抗体抗核仁抗体抗RNA多聚酶/原纤维蛋白NOR-90和Th/To等抗体抗核仁抗体RNA多聚酶I、II和III靶抗原:多个蛋白亚单位组成的核 仁酶复合物功能：多聚酶 I:转录rRNA基因 多聚酶 II:转录 mRNA 基因 多聚酶 III:转录 tRNA 基因 相关性：硬皮病：4%RNA多聚酶I、II和III核仁颗粒型（抗RNA多聚酶抗体）核仁颗粒型（抗RNA多聚酶抗体）核仁均质型（Scl-70类型）核仁均质型（Scl-70类型）抗Scl-70抗体靶抗原:DNA拓扑异构酶I 降解产物（100 kDa）功能：DNA复制和翻译过程的辅助蛋白相关性：系统性硬化症：79.7%（EUROIMMUN研究）25%-75%抗Scl-70抗体阳性患者肺间质纤维化的危险性明显增加,并且提示预后不良。抗Scl-70抗体抗PM-Scl抗体靶抗原:多个蛋白分子的复合物主要的靶抗原 100 kDa（与 DNA拓扑异构酶I不同）功能：未知相关性：硬皮病：2%-5%皮肌炎：8%重叠综合征：24%抗PM-Scl抗体核仁均质型（PM-Scl类型）核仁均质型（PM-Scl类型）抗原纤维蛋白（U3-nRNP）抗体（AFA)靶抗原:与基础蛋白（34 kDa）连 接的U3-nRNA和其它5个蛋白功能：分离pre-rRNA 相关性：硬皮病：5%-10%抗原纤维蛋白（U3-nRNP）核仁颗粒型（抗原纤维蛋白 抗体）核仁颗粒型（抗原纤维蛋白 抗体）抗增殖性细胞核抗原抗体靶抗原:PCNA功 能:DNA聚合酶 的辅助蛋白 相关性:SLE的特异性抗体 3%抗增殖性细胞核抗原抗体抗周期蛋白I抗体抗周期蛋白I抗体 抗周期蛋白II抗体 抗周期蛋白II抗体抗核点型抗体主要有两种荧光模型少核点型(p80卷曲蛋白抗体）:1-5个点；SLE、干燥综合症、原发性胆汁性肝硬化多核点型（Sp100)：5-20个点,常与线粒体抗体同时出现；原发性胆汁性肝硬化、进行性系统性硬化症、SLE、重叠综合症。抗核点型抗体ANA:核点型ANA:核点型抗Ku抗体靶抗原:66KD、88KD核蛋白相关性：PM/DM、SLE抗Ku抗体 核细颗粒/网状型（抗Ku抗体类型）核细颗粒/网状型（抗Ku抗体类型）HEp-2细胞/灵长类肝脏:抗核膜型HEp-2细胞/灵长类肝脏:抗核膜型抗中性粒细胞抗体（ANCA）一组与中性粒细胞或单核细胞胞浆中的一些特异性抗原发生反应的自身抗体靶抗原谱:丝氨酸蛋白酶3（PR3）髓过氧化物酶（MPO）杀菌/通透性增高蛋白（BPI）人白细胞弹性蛋白酶（HLE）乳铁蛋白（LF）组织蛋白酶G（CG）溶菌酶（LYS）天青杀素（AZU）抗中性粒细胞抗体（ANCA）ANCA荧光染色模型固定剂作用人为形成固定剂作用人为形成 胞浆型胞浆型:C-ANCA(cytoplasmic pattern)主要靶抗原成份是PR-3(在活动性韦氏肉芽肿(WG)中阳性率几乎100%,特异性在90%以上,也可见于显微镜下多血管炎等原发性血管炎,且与疾病活动度具有明显相关性)。核周型核周型:P-ANCA(perinuclear pattern)主要靶抗原成份是MPO(要与坏死性血管炎,特发性坏死性新月体性肾小球肾炎(NCGN)，Churg-Strauss综合征及炎症性肠病等有关,在SLE患者可有10%15%阳性,RA患者存在关节外损害及血管损害时也可呈阳性)。非典型型非典型型:X-ANCA(atypical pattern)A-ANCA 为上述两型的混合型ANCA荧光染色模型固定剂作用人为形成P-ANCA C-ANCAP-ANCA C-ANCA目前ANCA临床常规检测存在的问题仅用IIF法检测ANCA,而不检测ANCA特异性抗体降低了ANCA对疾病诊断的特异性 仅检测抗PR3和抗MPO两种特异性抗体，而不做 IIF-ANCA，降低了ANCA对疾病诊断的应用范 用IIF法检测ANCA时，未能严格排除ANA的干扰，出现假阳性结果 IIF和/或ELISA 的检测仅为定性结果，而无定量结果目前ANCA临床常规检测存在的问题类风湿关节炎的自身抗体名名 称称敏感性敏感性(%)特异性特异性(%)类风湿因子湿因子RA33/36抗体抗体Sa抗体抗体抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体抗核周因子抗核周因子抗抗CCP抗体抗体抗抗CB10抗体抗体抗抗BiP抗体抗体50-70 25-45373338-6260-7072708693.678-9787-9270-909670-8892类风湿关节炎的自身抗体名 称敏感性(%)特异性(%)类风湿不同抗体在RA诊断中的意义阳性抗体阳性抗体RA%(n=114)对照照%(n=93)敏感度敏感度%特异度特异度%阳性阳性预测值%RF711762.381.780.6CCP84574.394.694.3RF or CCP962084.398.482.7RF+CCP59251.797.896.7不同抗体在RA诊断中的意义阳性抗体RA%对照%敏感度%特异度系统性红斑狼疮的自身抗体抗抗 体体 敏感性敏感性(%)特异性特异性(%)抗核抗体抗核抗体(ANA)dsDNA抗体抗体抗抗Sm抗体抗体膜膜DNA抗体抗体核小体抗体核小体抗体U1RNP抗体抗体SS-A 抗体抗体SS-B 抗体抗体抗心磷脂抗体抗心磷脂抗体类风湿因子湿因子PCNA抗体抗体组蛋白抗体蛋白抗体核蛋白抗体核蛋白抗体809599949287-947040753095505099702578855025-351520-4025530-8058系统性红斑狼疮的自身抗体抗 体 干燥综合征的自身抗体自身抗体自身抗体 阳性率阳性率(%)ANA抗抗SSA抗体抗体抗抗SSB抗体抗体 抗抗a a-胞胞衬蛋白抗体蛋白抗体抗抗M3受体抗体受体抗体 类风湿因子湿因子ANCA抗抗M2抗体抗体 ACA抗抗RNP抗体抗体60-8050-7030-60 65-8792 60-8010-251327 干燥综合征的自身抗体自身抗体 其他风湿病的自身抗体硬皮病硬皮病(PSS)皮肌炎皮肌炎/多肌炎多肌炎(DM/PM)血管炎血管炎 抗磷脂抗体抗磷脂抗体综合征合征 混合性混合性结缔组织病病(MCTD)Scl-70抗体抗体抗着抗着丝点抗体点抗体(ACA)抗核抗体抗核抗体(ANA)PM-1抗体抗体Jo-1抗体抗体抗核抗体抗核抗体(ANA)抗中性粒抗中性粒细胞胞胞胞浆抗体抗体(ANCA)抗内皮抗内皮细胞抗体胞抗体(AECA)抗磷脂抗体抗磷脂抗体(Acl)狼狼疮抗凝物抗凝物质 U1RNP抗体抗体(70kd)抗核抗体抗核抗体(ANA)其他风湿病的自身抗体硬皮病(PSS)Scl-70抗体常见的自身免疫性疾病及其自身免疫性抗体慢性甲状腺炎甲状腺球蛋白、微粒体、细胞膜表面抗原、第2胶质抗原（CA2）毒性弥漫性甲状腺肿（Gravas病）甲状腺细胞表面TSH受体原发性肾上腺皮质萎缩（Addison病肾上腺细胞恶性贫血胃壁细胞、内因子慢性溃疡性结肠炎结肠上皮细胞男性自发性不育症精子青少年型胰岛素依赖性糖尿病胰岛细胞伴共济失调-毛细血管扩张的胰岛素抵抗型糖尿病胰岛素受体重症肌无力乙酰胆碱受体自身免疫性溶血性贫血红细胞特发性血小板减少性紫癜血小板干燥综合征（Sjogrens syndrome）唾液腺管、细胞核、甲状腺球蛋白类风湿性关节炎变性IgG系统性红斑狼疮核成分（DNA、DNA-核蛋白、RNA、Sm抗原）、红细胞、血小板、细胞浆成分（线粒体、微粒体）常见的自身免疫性疾病及其自身免疫性抗体慢性甲状腺炎甲状腺球蛋各免疫性疾病相关抗体疾病疾病特异性急性相关性SLE抗双链DNA、抗Sm、抗核抗体蛋白P*、RNA解旋酶、抗PCNA抗体抗RNP、抗KU*、抗RNA聚合酶RA抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体RA-33抗体*、RFSScScl-70抗RNA聚合酶抗体*、抗Nor-90抗体*PM/DM抗tRNA合成酶（如组氨酸、苏氨酸、丙酰基）、抗识别颗粒（SRP）抗体*抗Ku抗体SS无抗 SSA（Ro）抗 体*、抗SSB（La）抗体PBC抗线粒体抗体注：*用免疫沉淀法检测。SLE：系统性红斑狼疮；RA：类风湿关节炎；SSc：系统性硬化症；PM：多发性肌炎；DM：皮肌病；SS：干燥综合征；PBC：原发性胆汁性肝硬化；PCNA：增殖细胞核抗原；RF类风湿因子。各免疫性疾病相关抗体疾病疾病特异性急性相关性SLE抗双链DN抗核抗体谱在风湿病中的阳性率（%）SLEMCTDRASScPM/DMSSANAs959920503020302060抗双链DNA抗体5080少见35少见少见029抗DNP抗体708530抗组蛋白抗体256620027010030抗Sm抗体2540少见少见少见少见抗RNP抗体2645100101020020014抗SSA（Ro）抗体3040少见520010少见6075抗SSB（La）抗体0150200505少见5060抗Scl-70抗体3060抗着丝点抗体4090抗Jo-1抗体抗核仁抗体615399SLE：系统性红斑狼疮；MCTD：混合性结缔组织病；RA：类风湿关节炎；SSc：系统性硬化症；PM：多发性肌炎；DM：皮肌病；SS：干燥综合征。抗核抗体谱在风湿病中的阳性率（%）SLEMCTDRASScP抗核抗体疾病及抗核抗体疾病及相关情况相关情况情况情况ANAANA检验检验有助于疾病有助于疾病诊诊断断系系统性性红斑狼斑狼疮99100系系统性硬化病性硬化病97多多发性肌炎性肌炎/皮肌病皮肌病4080干燥干燥综合征合征4896ANA检验检验室疾病室疾病诊诊断所必断所必须须药物性狼物性狼疮100混合性混合性结缔组织病病100自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎100ANA检验检验有助于疾病有助于疾病预预后的估后的估计计幼年型幼年型类风湿关湿关节炎炎2050抗磷脂抗体抗磷脂抗体综合征合征4050雷雷诺现象象2060ANA抗体抗体检验检验通常无作用的疾病通常无作用的疾病风湿性疾病湿性疾病盘状状红斑狼斑狼疮525纤维肌痛症肌痛症1525类风湿关湿关节炎炎3050自身免疫疾病患者自身免疫疾病患者亲属属525多多发性硬化性硬化25特特发性血小板减少性紫癜性血小板减少性紫癜1030甲状腺疾病甲状腺疾病3050硅胶乳房移植患者硅胶乳房移植患者1525感染性疾病感染性疾病差别很大恶性性肿瘤瘤差别很大正常人抗核抗体滴度正常人抗核抗体滴度 1:402030 1:801012 1:1605 1:3203抗核抗体疾病及相关情况情况ANAANA检验有助于疾病诊断系统间接免疫荧光抗核抗体（IFANA）检测的核型与临床意义镜下核型分裂象核色相关抗体常见疾病周边型均染抗ds-DNA抗体或抗脱氧核糖核蛋白（ds-DNA+组蛋白，DNP）高滴度仅见于SLE均质型均染抗组蛋白抗体、抗DNA抗体引起狼疮细胞见于所有的结缔组织病（CTD）、SLE、RA及药物性SLE颗粒型粗颗粒型细颗粒型抗U1RNP抗体、抗Sm抗体、抗SS-A/Ro抗体、抗SS-B/La抗体、抗nRNA抗体、抗Scl-70抗体、抗PCNA抗体等抗盐水可提取的核抗原(ENA)抗体见于SLE、RA、PSS、和SS、MCTD。颗粒型荧光阴性则无需免疫印迹法进行抗EMA抗体的特异性检测核仁型细颗粒抗RNA聚合酶-1抗体、抗核仁小分子RNA(TH抗原)抗体、抗PM-Scl抗体、抗核糖体抗体、抗U3-RNP抗体硬皮病，也见于DM、RA、SS、SLE、等着丝点型趋向于线性染色抗RNA抗体、抗PM-Scl抗体硬皮病、尤其是硬皮病的CREST综合征80%阳性核糖体型SLE核膜型阴性抗Lamins(核层素)抗体，多于ds-DNA有关SLE、狼疮肾炎间接免疫荧光抗核抗体（IFANA）检测的核型与临床意义镜下核谢 谢