结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术课件

结核病又称为痨病和白色瘟疫。结核病又称为痨病和白色瘟疫。结核病又称为痨病和白色瘟疫。结核病又称为痨病和白色瘟疫。公公公公元元元元三三三三世世世世纪纪纪纪以以以以前前前前，我我我我国国国国古古古古代代代代医医医医学学学学还还还还只只只只是是是是认认认认识识识识到到到到该该该该病病病病可可可可能能能能是是是是一一一一种种种种极极极极为为为为严严严严重重重重的的的的慢慢慢慢性性性性传传传传染染染染病病病病，“累累累累年年年年积积积积月月月月，渐渐渐渐就就就就顿顿顿顿滞滞滞滞，以以以以至至至至于于于于死死死死，死死死死后后后后复复复复转转转转旁旁旁旁人人人人，乃乃乃乃至灭门至灭门至灭门至灭门”。以后逐渐认识到这是一种。以后逐渐认识到这是一种。以后逐渐认识到这是一种。以后逐渐认识到这是一种“肺痨肺痨肺痨肺痨”，其病因为，其病因为，其病因为，其病因为“痨虫痨虫痨虫痨虫”所致。所致。所致。所致。后后后后来来来来，西西西西方方方方的的的的一一一一些些些些科科科科学学学学家家家家发发发发现现现现这这这这类类类类病病病病人人人人的的的的肺肺肺肺内内内内有有有有一一一一个个个个个个个个坚坚坚坚实实实实的的的的团团团团块块块块，摸摸摸摸上上上上去去去去像像像像土土土土豆豆豆豆或或或或花花花花生生生生这这这这类类类类植植植植物物物物的的的的根根根根上上上上块块块块茎茎茎茎，就就就就将将将将该该该该病病病病称称称称之之之之为为为为，即即即即结结结结节节节节的的的的意意意意思，这就是结核病命名的由来。思，这就是结核病命名的由来。思，这就是结核病命名的由来。思，这就是结核病命名的由来。结核病结核病 结核病又称为痨病和白色瘟疫。公元三世纪 红红红红楼楼楼楼梦梦梦梦：香香香香魂魂魂魂一一一一缕缕缕缕随随随随风风风风散散散散，愁愁愁愁绪绪绪绪三三三三更更更更入入入入梦梦梦梦遥遥遥遥。虽虽虽虽然然然然说说说说红红红红楼楼楼楼梦梦梦梦与医学无关，但其作者笔下的与医学无关，但其作者笔下的与医学无关，但其作者笔下的与医学无关，但其作者笔下的“痨病痨病痨病痨病”代表林黛玉却惊动全世界。代表林黛玉却惊动全世界。代表林黛玉却惊动全世界。代表林黛玉却惊动全世界。上上上上世世世世纪纪纪纪50505050年年年年代代代代，美美美美国国国国细细细细菌菌菌菌学学学学家家家家杜杜杜杜博博博博斯斯斯斯所所所所写写写写的的的的 (白白白白色色色色瘟瘟瘟瘟疫疫疫疫)，就就就就曾曾曾曾提提提提到到到到了了了了林林林林黛黛黛黛玉玉玉玉的的的的肺肺肺肺结结结结核核核核，可可可可见见见见在在在在当当当当时时时时红红红红楼楼楼楼梦梦梦梦中中中中林林林林黛黛黛黛玉玉玉玉的的的的病病病病症症症症已已已已是是是是结结结结核核核核病的典型症状。病的典型症状。病的典型症状。病的典型症状。黄黄黄黄帝帝帝帝内内内内经经经经素素素素问问问问：“大大大大骨骨骨骨枯枯枯枯稿稿稿稿，大大大大肉肉肉肉陷陷陷陷下下下下。胸胸胸胸中中中中气气气气满满满满，喘喘喘喘息息息息不不不不便便便便，内内内内痛痛痛痛引引引引肩肩肩肩项项项项，身热，脱肉破腘。身热，脱肉破腘。身热，脱肉破腘。身热，脱肉破腘。”结核病结核病 红楼梦：香魂一缕随风散，愁绪三更入梦遥。虽然 2011 2011年全球结核病发病率年全球结核病发病率年全球结核病发病率年全球结核病发病率 （世界卫生组织（世界卫生组织（世界卫生组织（世界卫生组织20122012年结核病报告）年结核病报告）年结核病报告）年结核病报告）结结核病目前仍然是一个全球性的核病目前仍然是一个全球性的核病目前仍然是一个全球性的核病目前仍然是一个全球性的严严重的公共重的公共重的公共重的公共卫卫生生生生问题问题。结核病结核病 2011年全球结核病发病率（世界卫生组织2012年结核病流行过程流行过程流行过程流行过程传染源传染源传染源传染源 痰涂片阳性的肺结核病人痰涂片阳性的肺结核病人痰涂片阳性的肺结核病人痰涂片阳性的肺结核病人传播途径传播途径传播途径传播途径 空气传播空气传播空气传播空气传播易感人群易感人群易感人群易感人群 普遍易感普遍易感普遍易感普遍易感第二节第二节 流行病特征流行病特征影响流行的因素影响流行的因素影响流行的因素影响流行的因素自然因素自然因素自然因素自然因素 季节、环境、居室通风季节、环境、居室通风季节、环境、居室通风季节、环境、居室通风社会因素社会因素社会因素社会因素 社会、经济、医疗服务社会、经济、医疗服务社会、经济、医疗服务社会、经济、医疗服务其他因素其他因素其他因素其他因素 ，结核病结核病流行过程第二节 流行病特征影响流行的因素结核病结核病防控的三大手段结核病防控的三大手段临床诊断常常结合临床诊断常常结合临床诊断常常结合临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征痰涂片，胸片，症状和体征痰涂片，胸片，症状和体征痰涂片，胸片，症状和体征结核病结核病世界防治结核病日世界防治结核病日世界防治结核病日世界防治结核病日3 3月月月月2424日日日日结核病防控的三大手段临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体结结核病是由核病是由核病是由核病是由结结核分枝杆菌引起的。核分枝杆菌引起的。核分枝杆菌引起的。核分枝杆菌引起的。（1843-19101843-1910）18821882年年发现结核分枝杆菌，核分枝杆菌，19051905年年获得得诺贝尔尔生理或生理或医学医学奖。(1854-1898)（1857-1926）染色法染色法（分枝杆菌抗酸染色的基（分枝杆菌抗酸染色的基础）结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核病是由结核分枝杆菌引起的。（1843-1910）结核分枝杆菌结核分枝杆菌（一）生物学性状（一）生物学性状（一）生物学性状（一）生物学性状1.1.1.1.形态与染色形态与染色形态与染色形态与染色 细细细细长长长长略略略略带带带带弯弯弯弯曲曲曲曲，分分分分枝枝枝枝状状状状，有有有有荚荚荚荚膜膜膜膜，抗抗抗抗酸酸酸酸染染染染色阳性色阳性色阳性色阳性结核分枝杆菌（一）生物学性状2.2.培养与生长特性培养与生长特性培养与生长特性培养与生长特性 特点特点特点特点 专性需氧专性需氧专性需氧专性需氧 生长缓慢生长缓慢生长缓慢生长缓慢 营养要求高，常用罗氏培养基营养要求高，常用罗氏培养基营养要求高，常用罗氏培养基营养要求高，常用罗氏培养基 生长现象生长现象生长现象生长现象 液体：表面生长（菌膜）液体：表面生长（菌膜）液体：表面生长（菌膜）液体：表面生长（菌膜）固固固固体体体体：颗颗颗颗粒粒粒粒、结结结结节节节节、花花花花菜菜菜菜状状状状菌菌菌菌落落落落 乳白或米黄，不透明乳白或米黄，不透明乳白或米黄，不透明乳白或米黄，不透明3.3.生化反应生化反应生化反应生化反应 不发酵糖类不发酵糖类不发酵糖类不发酵糖类 ，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性结核分枝杆菌结核分枝杆菌2.培养与生长特性3.生化反应结核分枝杆菌84.4.抵抗力抵抗力抵抗力抵抗力四不怕四不怕四不怕四不怕干燥干燥干燥干燥碱性染料碱性染料碱性染料碱性染料青霉素等抗生素青霉素等抗生素青霉素等抗生素青霉素等抗生素对酸或碱有抵抗力对酸或碱有抵抗力对酸或碱有抵抗力对酸或碱有抵抗力（3%3%或或或或6%H246%H24、4%4%）四怕四怕四怕四怕乙醇乙醇乙醇乙醇湿热湿热湿热湿热紫外线紫外线紫外线紫外线抗痨药物抗痨药物抗痨药物抗痨药物（异烟肼、利福平等）（异烟肼、利福平等）（异烟肼、利福平等）（异烟肼、利福平等）5.5.变异性变异性变异性变异性形态结构变异：形态结构变异：形态结构变异：形态结构变异：结核杆菌的结核杆菌的结核杆菌的结核杆菌的L L型：颗粒状、丝状型：颗粒状、丝状型：颗粒状、丝状型：颗粒状、丝状毒力变异：毒力变异：毒力变异：毒力变异：卡介苗：和卡介苗：和卡介苗：和卡介苗：和 牛分枝杆菌牛分枝杆菌牛分枝杆菌牛分枝杆菌 13 13年年年年230230次次次次 耐药性变异：耐药性变异：耐药性变异：耐药性变异：耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多结核分枝杆菌结核分枝杆菌4.抵抗力四不怕四怕5.变异性结核分枝杆菌致致致致病病病病物物物物质质质质（二）致病性（二）致病性（二）致病性（二）致病性荚膜荚膜荚膜荚膜与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）含多种酶（分解利用营养物质）含多种酶（分解利用营养物质）含多种酶（分解利用营养物质）含多种酶（分解利用营养物质）保护（阻止有害物质的进入菌体）保护（阻止有害物质的进入菌体）保护（阻止有害物质的进入菌体）保护（阻止有害物质的进入菌体）脂质脂质脂质脂质索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）磷脂（形成结核结节）磷脂（形成结核结节）磷脂（形成结核结节）磷脂（形成结核结节）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）蜡质蜡质蜡质蜡质D D（引起迟发性过敏反应）（引起迟发性过敏反应）（引起迟发性过敏反应）（引起迟发性过敏反应）蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质引起迟发性过敏反应引起迟发性过敏反应引起迟发性过敏反应引起迟发性过敏反应感染方式感染方式感染方式感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体所致疾病所致疾病所致疾病所致疾病 结核病，以肺结核常见结核病，以肺结核常见结核病，以肺结核常见结核病，以肺结核常见结核分枝杆菌结核分枝杆菌致（二）致病性荚膜与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）含多种（三）免疫性（三）免疫性（三）免疫性（三）免疫性 1.1.机机机机体体体体抗抗抗抗结结结结核核核核免免免免疫疫疫疫特特特特点点点点：传传传传染染染染、免免免免疫疫疫疫、超超超超敏敏敏敏反应共存反应共存反应共存反应共存 2.2.属于感染免疫属于感染免疫属于感染免疫属于感染免疫()()，又称有菌免疫，又称有菌免疫，又称有菌免疫，又称有菌免疫 3.3.细胞免疫为主，迟发型超敏反应同时存在细胞免疫为主，迟发型超敏反应同时存在细胞免疫为主，迟发型超敏反应同时存在细胞免疫为主，迟发型超敏反应同时存在 4.4.郭霍现象郭霍现象郭霍现象郭霍现象:注射结核杆菌于豚鼠皮下注射结核杆菌于豚鼠皮下注射结核杆菌于豚鼠皮下注射结核杆菌于豚鼠皮下 初初初初次次次次注注注注射射射射 局局局局部部部部反反反反应应应应小小小小 全全全全身身身身扩扩扩扩散散散散 无无无无免免免免疫疫疫疫无超敏反应无超敏反应无超敏反应无超敏反应 再再再再次次次次注注注注射射射射 局局局局部部部部反反反反应应应应大大大大 不不不不扩扩扩扩散散散散 有有有有免免免免疫疫疫疫有超敏反应有超敏反应有超敏反应有超敏反应 5.5.结核菌素试验（试验）：结核菌素试验（试验）：结核菌素试验（试验）：结核菌素试验（试验）：应应应应用用用用结结结结核核核核菌菌菌菌素素素素进进进进行行行行皮皮皮皮肤肤肤肤试试试试验验验验来来来来测测测测定定定定机机机机体体体体对对对对结结结结核核核核分分分分枝枝枝枝杆杆杆杆菌菌菌菌是是是是否否否否能能能能引引引引起起起起迟迟迟迟发发发发型型型型超超超超敏敏敏敏反反反反应应应应（型变态反应）的一种试验型变态反应）的一种试验型变态反应）的一种试验型变态反应）的一种试验结核分枝杆菌结核分枝杆菌（三）免疫性结核分枝杆菌 标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）直接镜检：抗酸染色直接镜检：抗酸染色 分离培养：培养基、时间（分离培养：培养基、时间（24周后见结果）周后见结果）痰液等痰液等实验室诊断新技术实验室诊断新技术分离培养分离培养（一）传统微生物学检查（一）传统微生物学检查（一）传统微生物学检查（一）传统微生物学检查直接涂片直接涂片 标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）痰液等实实验室诊断新技术实验室诊断新技术（二）技术（二）技术（二）技术（二）技术 J,H,.J ,2013,93(2):144-147.J,H,.J ,2013,93(2):144-147.实验室诊断新技术（二）技术 J,H,.（三）核酸分子诊断技术（三）核酸分子诊断技术（三）核酸分子诊断技术（三）核酸分子诊断技术 和和和和靶基因菌种鉴定16 611016 6110异烟肼、利福平乙胺丁醇吡嗪酰胺 链霉素、喹诺酮类药物、Y,.,1992,358(6387):591-593.Y,.,1992,358(6387):591-593.A,Y.,1996,2(6):662-667.A,Y.,1996,2(6):662-667.实验室诊断新技术实验室诊断新技术（三）核酸分子诊断技术 和靶基因菌种鉴定16 6110异烟肼基因水平技术基因水平技术基因水平技术基因水平技术1.1.2010.2010.实验室诊断新技术实验室诊断新技术基因水平技术1.2010.实验室诊断新技术2.2.技术技术技术技术 （仁度）（仁度）（仁度）（仁度）作为临床分子诊断靶标的优点作为临床分子诊断靶标的优点作为临床分子诊断靶标的优点作为临床分子诊断靶标的优点 拷贝数拷贝数拷贝数拷贝数 拷贝数拷贝数拷贝数拷贝数 更具临床意义更具临床意义更具临床意义更具临床意义 生命力旺盛的病原体转录活跃生命力旺盛的病原体转录活跃生命力旺盛的病原体转录活跃生命力旺盛的病原体转录活跃 远不如稳定远不如稳定远不如稳定远不如稳定 病原体死亡，很快降解病原体死亡，很快降解病原体死亡，很快降解病原体死亡，很快降解 1.1.交叉污染少交叉污染少交叉污染少交叉污染少 2.2.较好的愈后指标较好的愈后指标较好的愈后指标较好的愈后指标实验室诊断新技术实验室诊断新技术2.技术作为临床分子诊断靶标的优点实验室诊断新技术恒温扩增技术恒温扩增技术恒温扩增技术恒温扩增技术技术原理技术原理技术原理技术原理实验室诊断新技术实验室诊断新技术恒温扩增技术技术原理实验室诊断新技术提取提取提取提取恒温扩增恒温扩增恒温扩增恒温扩增实时检测实时检测实时检测实时检测60C 10 60C 10 42C 5 42C 5 超声仪超声仪超声仪超声仪（300W300W）15 15 痰液预处理痰液预处理痰液预处理痰液预处理42C 42C 40 40 50 稀释液操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤实验室诊断新技术实验室诊断新技术提取恒温扩增60C 10 超声仪（300W）痰液预处理42培养鉴定结果结果培养鉴定结果结果合计合计检测结果检测结果阳性阳性阴性阴性阳性阳性2317238阴性阴性12318330合计合计243325568敏感度敏感度敏感度敏感度=231/24310095.06%=231/24310095.06%特异性特异性特异性特异性=318/32510097.85%=318/32510097.85%准确度准确度准确度准确度=(231+318)/568 10096.65%=(231+318)/568 10096.65%恒温扩增技术恒温扩增技术恒温扩增技术恒温扩增技术检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性实验室诊断新技术实验室诊断新技术培养鉴定结果结果合计检测结果阳性阴性阳性2317238阴性1（四）蛋白分子诊断技术（四）蛋白分子诊断技术（四）蛋白分子诊断技术（四）蛋白分子诊断技术-干扰素释放实验干扰素释放实验干扰素释放实验干扰素释放实验结结核核核核感感感感染染染染者者者者体体体体内内内内存存存存在在在在特特特特异异异异的的的的效效效效应应T T淋淋淋淋巴巴巴巴细细胞胞胞胞，效效效效应应T T淋淋淋淋巴巴巴巴细细胞胞胞胞再再再再次次次次受受受受到到到到结结核核核核抗抗抗抗原原原原刺刺刺刺激激激激时时会会会会分分分分泌泌泌泌多多多多种种种种细细胞胞胞胞因因因因子子子子（）由由由由于于于于效效效效应应T T细细胞胞胞胞存存存存活活活活时时间间很很很很短短短短，而而而而且且且且具具具具有有有有特特特特异异异异性性性性，因因因因此此此此可可可可以以以以作作作作为为机机机机体体体体是是是是否否否否正正正正处处于于于于被被被被感感感感染染染染的的的的指指指指标标，无无无无论论是是是是否否否否有有有有临临床症状。床症状。床症状。床症状。基基基基于于于于原原原原理理理理的的的的产产品品品品目目目目前前前前已已已已被被被被美美美美国国国国、加加加加拿拿拿拿大大大大、英英英英国国国国、德德德德国国国国、法法法法国国国国、日日日日本本本本等等等等二二二二十十十十余余余余个国家写入本国的个国家写入本国的个国家写入本国的个国家写入本国的结结核核核核诊疗诊疗指南中指南中指南中指南中（，（，（，（，）实验室诊断新技术实验室诊断新技术（四）蛋白分子诊断技术-干扰素释放实验结核感染者体内存在检测过程与结果判断检测过程与结果判断检测过程与结果判断检测过程与结果判断阴性阴性阴性阴性结结果果果果阳性阳性阳性阳性结结果果果果空白空白空白空白对对照照照照抗原抗原抗原抗原 A A抗原抗原抗原抗原 B B阳性阳性阳性阳性对对照照照照（PHAPHA）实验室诊断新技术实验室诊断新技术检测过程与结果判断阴性结果阳性结果实验室诊断新技术美国认证临床实验数据美国认证临床实验数据美国认证临床实验数据美国认证临床实验数据 经培养确诊的结核病患者样本经培养确诊的结核病患者样本经培养确诊的结核病患者样本经培养确诊的结核病患者样本183183例例例例 敏感度敏感度敏感度敏感度 95.6%(175/183)95.6%(175/183)306 306例入伍新兵例入伍新兵例入伍新兵例入伍新兵 特异性特异性特异性特异性 97.1%(297/306)97.1%(297/306)检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性国内临床实验数据国内临床实验数据国内临床实验数据国内临床实验数据确确确确诊诊病例病例病例病例合合合合 计计试验组试验组对对照照照照组组阳阳阳阳 性性性性6246243030654654阴阴阴阴 性性性性3131478478509509合合合合 计计65565550850811631163灵敏度灵敏度灵敏度灵敏度=95.3%=95.3%；特异性；特异性；特异性；特异性=94.1%=94.1%；准确性；准确性；准确性；准确性=94.8%=94.8%特点：特点：特点：特点：特异性好，不受卡介苗（）接种和环境分枝杆菌影响特异性好，不受卡介苗（）接种和环境分枝杆菌影响特异性好，不受卡介苗（）接种和环境分枝杆菌影响特异性好，不受卡介苗（）接种和环境分枝杆菌影响 敏感度高，在免疫力低下敏感度高，在免疫力低下敏感度高，在免疫力低下敏感度高，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的检出率受抑制人群中有很高的检出率受抑制人群中有很高的检出率受抑制人群中有很高的检出率 快速，快速，快速，快速，2424小时报告结果小时报告结果小时报告结果小时报告结果实验室诊断新技术实验室诊断新技术美国认证临床实验数据 检测的敏感度和特异性国内临床实验数据确题目题目结核分枝杆菌结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术及其实验室诊断新技术敬请各位专家批评指正！敬请各位专家批评指正！郑州大学第一附属医院检验科郑州大学第一附属医院检验科/河南省检验医学重点实验室河南省检验医学重点实验室 赵俊伟赵俊伟2015年年12月月题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术敬请各位专家批评指正