炭疽检验技术ppt课件

炭疽检验技术炭疽检验技术辽宁省辽宁省cdc炭疽检验技术课件炭疽炭疽检验检验技技术辽术辽宁省宁省cdc炭疽炭疽检验检验技技术课术课件件1 炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽共患急性、热性、败血性传染病。其病理变化的特点是脾脏显著肿大，皮下及浆膜下结缔组织出血浸润，血液凝固不良，呈煤焦油样。人感染后多表现为皮肤炭疽、肺炭疽及肠炭疽，偶有伴发败血症。炭疽炭疽（Anthrax）炭疽检验技术课件炭疽是由炭疽杆菌引起的人炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽兽共患急性、共患急性、热热性、性、败败血血2发病、死亡污染环境形成芽胞经口食入食草动物通过直接接触、消化道、呼吸道等途径感染人类食肉动物偶尔感染炭疽检验技术课件发发病、病、污污染染环环境境经经口口食草食草动动物通物通过过直接接触、食肉直接接触、食肉动动物物炭炭3革兰氏染色阳性；长而直的大杆菌，菌体两端平直；大小为1.01.5um35um，致病菌中最大的；无鞭毛，不能运动。一、病原一、病原炭疽杆菌（Bacillusanthracis）炭疽检验技术课件革革兰兰氏染色阳性；一、病原氏染色阳性；一、病原炭疽杆菌（炭疽杆菌（Bacillusan4荚膜染色在碳酸盐培养基中、厌氧环境下生成荚膜。一、病原一、病原炭疽杆菌（Bacillusanthracis）炭疽杆菌在病人、病畜体内多散在或呈23个短链排列，有荚膜（红色）炭疽检验技术课件荚荚膜染色一、病原膜染色一、病原炭疽杆菌（炭疽杆菌（Bacillusanthra5在活炭疽病畜体或死亡后未经解剖的尸体内，不形成芽胞。一旦体内炭疽杆菌暴露于空气中，接触了游离氧，在一定温度下(12-42)就会形成芽胞。芽胞呈卵圆形或圆形，位于菌体中央或稍偏向一端。一、病原一、病原炭疽杆菌（Bacillusanthracis）炭疽检验技术课件在活炭疽病畜体或死亡后未在活炭疽病畜体或死亡后未经经解剖的尸体内，不形成芽胞。一旦体内解剖的尸体内，不形成芽胞。一旦体内6A：炭疽芽孢薄片（透射电镜）有致密的胞膜B：炭疽芽孢（扫描电镜）收缩成椭圆形C：炭疽繁殖体薄片（透射电镜）炭疽检验技术课件A：炭疽芽：炭疽芽孢孢薄片（透射薄片（透射电镜电镜）有致密的胞膜）有致密的胞膜B：炭疽芽：炭疽芽孢孢（扫扫描描7 炭疽杆菌为兼性需氧菌，在1244都能生长，最适生长温度为37。最适pH为7.37.6。在普通琼脂平皿培养基上生长成不透明、灰白色、扁平、表面粗糙的菌落，边缘不整齐，能形成几个或数十个菌体相连的长链，低倍显微镜观察呈卷发状。在血液琼脂平皿培养基上，生长出湿润粘稠的菌落，菌落周围不溶血。二、培养特性二、培养特性炭疽检验技术课件炭疽杆菌炭疽杆菌为为兼性需氧菌，在兼性需氧菌，在1244都能生都能生长长，最适生，最适生8光镜下炭疽杆菌菌落边缘呈卷发状炭疽检验技术课件光光镜镜下炭疽杆菌菌落下炭疽杆菌菌落边缘边缘呈卷呈卷发发状炭疽状炭疽检验检验技技术课术课件件9在血液琼脂平皿培养基上不溶血或微溶血炭疽检验技术课件在血液在血液琼琼脂平皿培养基上不溶血或微溶血炭疽脂平皿培养基上不溶血或微溶血炭疽检验检验技技术课术课件件10三、致病性与免疫性三、致病性与免疫性致病物质:主要有二种荚膜:由质粒编码,具有抗吞噬作用炭疽毒素:由质粒编码（致死主要因素）保护性抗原（protective antigen，PA）水肿因子（edema factor，EF）致死因子(lethal factor，LF)炭疽检验技术课件三、致病性与免疫性致病物三、致病性与免疫性致病物质质:主要有二种炭疽主要有二种炭疽检验检验技技术课术课件件11四、抵抗力四、抵抗力芽胞抵抗力强煮沸40min或干热140C 3h灭活；在干燥土壤或皮毛中能存活数年至20年；对化学消毒剂抵抗力强(5%石炭酸5d杀死）；对碘及氧化剂较敏感；繁殖体的抵抗力弱对青霉素、红霉素、氯霉素敏感炭疽检验技术课件四、抵抗力芽胞抵抗力四、抵抗力芽胞抵抗力强强炭疽炭疽检验检验技技术课术课件件12u炭疽病原学检查炭疽病原学检查u炭疽血清学检查炭疽血清学检查五、炭疽实验室检查五、炭疽实验室检查炭疽检验技术课件五、炭疽五、炭疽实验实验室室检查检查炭疽炭疽检验检验技技术课术课件件13u炭疽病原学检查炭疽病原学检查标本采集和样品处理细菌培养涂片、革兰染色、荚膜染色、光镜检查Ascoli试验动力检查噬菌体裂解和青霉素敏感性试验串珠试验生化试验炭疽PCR基因检测五、炭疽实验室检查五、炭疽实验室检查炭疽检验技术课件炭疽病原学炭疽病原学检查检查五、炭疽五、炭疽实验实验室室检查检查炭疽炭疽检验检验技技术课术课件件14u炭疽血清学检查炭疽血清学检查标本采集和样品处理血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平检测 （酶联免疫吸附实验ELISA）血清中抗炭疽荚膜抗体胶体金检测五、炭疽实验室检查五、炭疽实验室检查炭疽检验技术课件炭疽血清学炭疽血清学检查检查五、炭疽五、炭疽实验实验室室检查检查炭疽炭疽检验检验技技术课术课件件15人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录序号 病原菌名称 危害程度分类 实验活动所需生物安全实验室级别 学名 中文名 大量活菌操作 动物感染实验 样本检测 非感染性材料的实验 1Bacillus anthracis 炭疽芽孢杆菌 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 2Brucella spp 布鲁氏菌属 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 3Burkholderia mallei 鼻疽伯克菌 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 4Coxiella burnetii 伯氏考克斯体 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 大量活菌操作：实验操作涉及大量活菌操作：实验操作涉及“大量大量”病原菌的制备，或易产生气溶胶的实验操病原菌的制备，或易产生气溶胶的实验操作（如病原菌离心、冻干等）。作（如病原菌离心、冻干等）。动物感染实验：特指以活菌感染的动物实验。动物感染实验：特指以活菌感染的动物实验。样本检测：包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实样本检测：包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、验、PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活动。核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活动。非感染性材料的实验：如不含致病性活菌材料的分子生物学、免疫学等实验。非感染性材料的实验：如不含致病性活菌材料的分子生物学、免疫学等实验。炭疽检验技术课件人人间传间传染的病原微生物名染的病原微生物名录录序号序号病原菌名称病原菌名称危害程度分危害程度分类类16炭疽病原炭疽病原检验程序程序标本本处理（方法根据理（方法根据标本情况本情况选择）直接涂片、直接涂片、革兰染色、革兰染色、荚膜染色、荚膜染色、光镜检查光镜检查接种培养接种培养（可用选择性培养基、血培养基）（可用选择性培养基、血培养基）37，1648hAscoli试验基因检测可疑菌落（形可疑菌落（形态）初初检培养性培养性鉴定定试验深入深入鉴定定涂片、革兰涂片、革兰染色、荚膜染色、荚膜染色、染色、光镜检查光镜检查动力力检查液液体体培培养养噬菌体裂解噬菌体裂解和青霉素敏和青霉素敏感性试验感性试验产荚膜培膜培养及光养及光镜检查串串珠珠试验生化试验基因检测酶免疫法测外毒素动物毒性测定炭疽检验技术课件炭疽病原炭疽病原检验检验程序程序标标本本处处理（方法根据理（方法根据标标本情况本情况选择选择）直接涂片、接）直接涂片、接17采取标本时必须遵循的两条原则采取标本时必须遵循的两条原则1、尽可能的在抗生素治疗前采取标本；2、除必要时并在具备条件的实验室内，不得用解剖的方式获取标本，所需的血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。（一）炭疽病原学检查（一）炭疽病原学检查标本采集和样品处理标本采集和样品处理炭疽检验技术课件采取采取标标本本时时必必须须遵循的两条原遵循的两条原则则（一）炭疽病原学（一）炭疽病原学检查检查181、血液标本、血液标本 所有的疑似病例和病畜，都应采取血液标本5-10ml，标本量至少应满足下列检查的需要：涂片进行显微镜检查；接种培养基进行细菌分离培养；分离血清检查抗体；常规血液检查。荧光定量PCR检测2、皮肤溃疡标本、皮肤溃疡标本 在皮肤炭疽病人溃疡边缘用棉拭子擦拭，沾取分泌物。（一）炭疽病原学检查（一）炭疽病原学检查标本采集和样品处理标本采集和样品处理炭疽检验技术课件1、血液、血液标标本本所有的疑似病例和病畜，都所有的疑似病例和病畜，都应应采取血液采取血液标标本本5193、粪便与呕吐物标本、粪便与呕吐物标本 表现消化道症状的可疑病人收集粪便或呕吐物标本，特别注意选取其中混有血液的部分，置无菌的容器中。4、痰与咳碟标本、痰与咳碟标本 表现为呼吸道症状的可疑病人应收集其痰液标本，无痰液者，应取供细菌分离培养用的培养基，打开平皿盖置病人口鼻10cm处；令病人对平皿咳嗽，然后迅速盖上平皿。（一）炭疽病原学检查（一）炭疽病原学检查标本采集和样品处理标本采集和样品处理炭疽检验技术课件3、粪粪便与呕吐物便与呕吐物标标本本表表现现消化道症状的可疑病人收集消化道症状的可疑病人收集粪粪便或呕便或呕205、脑脊液标本、脑脊液标本 表现为脑膜刺激症状的病人，腰椎穿刺获取脑脊液。6、尸体标本、尸体标本 食草动物死于炭疽时，通常会从口、鼻、肛门等腔道开口流出血液，这种血液应是首先采取的标本。如果血液已渗入土壤，则应收集混有血液的土壤作为标本。没有血液流出，或已不可能获取血液标本时，可通过穿刺心脏获得血液或穿刺肝脏等实质性脏器获得组织标本。（一）炭疽病原学检查（一）炭疽病原学检查标本采集和样品处理标本采集和样品处理炭疽检验技术课件5、脑脑脊液脊液标标本本表表现为脑现为脑膜刺激症状的病人，腰椎穿刺膜刺激症状的病人，腰椎穿刺获获取取217、肉类标本、肉类标本 如果怀疑罹患炭疽的牲畜已被宰杀，或对商品肉类进行常规检查时，可剪取小块肉类标本。如有可能，特别应剪取肝脏、脾脏等富含血以及含有淋巴组织的标本。8、毛皮或其他可疑污染物品标本、毛皮或其他可疑污染物品标本 剪取小块毛皮或其他可疑物品，剪碎置无菌试管内，加适量的无菌生理盐水浸泡。（一）炭疽病原学检查（一）炭疽病原学检查标本采集和样品处理标本采集和样品处理炭疽检验技术课件7、肉、肉类标类标本本如果如果怀怀疑罹患炭疽的牲畜已被宰疑罹患炭疽的牲畜已被宰杀杀，或，或对对商品肉商品肉类类229、水标本、水标本 检查水体污染时，用广口瓶收集水样。10、土壤标本、土壤标本 在牲畜死亡或宰杀的地点，应取土壤标本以供检查。一般要采集表层土壤（10cm内），每份150g左右。（一）炭疽病原学检查（一）炭疽病原学检查标本采集和样品处理标本采集和样品处理炭疽检验技术课件9、水、水标标本本检查检查水体水体污污染染时时，用广口瓶收集水，用广口瓶收集水样样。（一）炭疽病。（一）炭疽病23 所有来自病人、病畜、尸体的标本都应首先进行直接涂片镜检。步骤：步骤：涂片、革兰染色及荚膜染色、显微镜检查涂片、革兰染色及荚膜染色、显微镜检查 镜检：取末稍血液或其他材料制成涂片后，染色镜检，发现有多量单在、成对或24个菌体相连的短链排列、竹节状有荚膜的粗大杆菌，即可确诊。（二）炭疽病原学检查（二）炭疽病原学检查显微镜检查显微镜检查炭疽检验技术课件所有来自病人、病畜、尸体的所有来自病人、病畜、尸体的标标本都本都应应首先首先进进行直接涂片行直接涂片镜检镜检24革兰染色（二）炭疽病原学检查（二）炭疽病原学检查显微镜检查显微镜检查炭疽检验技术课件革革兰兰染色（二）炭疽病原学染色（二）炭疽病原学检查检查显显微微镜检镜检25荚膜染色（二）炭疽病原学检查（二）炭疽病原学检查显微镜检查显微镜检查炭疽检验技术课件荚荚膜染色（二）炭疽病原学膜染色（二）炭疽病原学检查检查显显微微镜镜26 采集到的标本均应进行细菌分离培养。培养基选用血琼脂平板、营养琼脂平板和选择性平板。（三）炭疽病原学检查（三）炭疽病原学检查细菌分离培养细菌分离培养炭疽检验技术课件采集到的采集到的标标本均本均应进应进行行细细菌分离培养。（三）炭疽病原学菌分离培养。（三）炭疽病原学检查检查27标本处理：标本处理：无菌的标本，如血液或脑脊液，直接涂布上述两种平板，每平板0.1ml，组织标本应先以无菌剪刀剪开一断面，在培养基表面压印，然后以白金耳涂开。污染或陈旧的标本，均应首先制成悬液。根据标本中含菌量的多少，可将悬液适当稀释，或经自然沉淀除去粗大沉淀物后，再10000rpm离心1分钟，取富集的沉淀物。将所得的悬液沸水浴15min，冷却后涂布上述两种平板，每平板0.1ml。（三）炭疽病原学检查（三）炭疽病原学检查细菌分离培养细菌分离培养炭疽检验技术课件标标本本处处理：（三）炭疽病原学理：（三）炭疽病原学检查检查细细菌分离培养菌分离培养28 以上的平皿在37孵育过夜或24小时后，观察培养情况。粗糙不发光，比较扁平，有点儿象蜡样杆菌的菌落但较小，卷发状。有的菌体形态不规则，有彗星状拖尾，白或灰白色。（三）炭疽病原学检查（三）炭疽病原学检查细菌分离培养细菌分离培养炭疽检验技术课件以上的平皿在以上的平皿在37孵育孵育过过夜或夜或24小小时时后，后，观观察培养情况察培养情况29在血平皿上为白色菌落，较粘，不溶血或微溶血。（三）炭疽病原学检查（三）炭疽病原学检查细菌分离培养细菌分离培养炭疽检验技术课件在血平皿上在血平皿上为为白色菌落，白色菌落，较较粘，不溶血或微溶血粘，不溶血或微溶血。（三）炭疽病原。（三）炭疽病原30 在静止液体培养基中生长在上层和底部，培养基透明，拿起则呈丝絮状下垂，摇之均匀混浊，无菌膜和壁环。1、肉汤生长（四）炭疽病原学检查（四）炭疽病原学检查鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件在静止液体培养基中生在静止液体培养基中生长长在上在上层层和底部，培养基透和底部，培养基透31 诊断炭疽简便而快速的方法，其优点是培养失效时，仍可用于诊断，因而适宜于腐败病料及动物皮张或风干、淹浸过肉品的检验。但此法缺乏高度特异性，因为炭疽杆菌耐热抗原在其他腐生芽胞杆菌也共有。新鲜、陈旧和外环境标本都可采样20-50g，加水5-10倍，煮沸10分钟，用双层滤纸过滤后制成可溶性热沉淀抗原可溶性热沉淀抗原，用于热沉淀反应（Ascoli试验。2、Ascoli试验（四）炭疽病原学检查（四）炭疽病原学检查鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件诊诊断炭疽断炭疽简简便而快速的方法，其便而快速的方法，其优优点是培养失效点是培养失效时时，仍可用，仍可用32取一玻璃沉淀管（直径2-4 mm，高20-40 mm），将0.3 ml炭疽菌沉淀血清加于小玻璃管底部，再缓缓加入采集处理的可溶性热沉淀抗原约0.3ml于血清上层，注意勿使液面混合。置37 5 min，于两液面间出现白色沉淀环为阳性。本实验应有炭疽菌诊断抗原作阳性对照。炭疽菌沉淀血清处理的可溶性热沉淀抗原白色沉淀环（四）炭疽病原学检查（四）炭疽病原学检查鉴定试验鉴定试验2、Ascoli试验炭疽检验技术课件取一玻璃沉淀管（直径取一玻璃沉淀管（直径2-4mm，高，高233 在盖玻片周围涂凡士林，将待检菌的液体培养物或固体培养物用生理盐水制成的均匀悬液滴于中央，再将凹玻片盖于其上。迅速翻过来使盖玻片在上，菌悬液悬成滴。置高倍镜下观察，细菌不应有运动。3、动力试验（四）炭疽病原学检查（四）炭疽病原学检查鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件在盖玻片周在盖玻片周围围涂凡士林，将待涂凡士林，将待检检菌的液体培养物或固体培养菌的液体培养物或固体培养344、噬菌体裂解和青霉素敏感性将挑取的可疑菌落密集划线接种于平板上，在划线区内一处滴一诊断用炭疽噬菌体，另一处贴一片青霉素纸片。37 孵育824h后，在滴噬菌体处有透明噬菌体斑，青霉素纸片周围有明显的抑菌环，便宜可断定接种物为炭疽芽胞杆菌。（四）炭疽病原学检查（四）炭疽病原学检查鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件4、噬菌体裂解和青霉素敏感性（四）炭疽病原学、噬菌体裂解和青霉素敏感性（四）炭疽病原学检查检查鉴鉴定定试试354、噬菌体裂解和青霉素敏感性（四）炭疽病原学检查（四）炭疽病原学检查鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件4、噬菌体裂解和青霉素敏感性（四）炭疽病原学、噬菌体裂解和青霉素敏感性（四）炭疽病原学检查检查鉴鉴定定试试36 制备有牛肉消化液琼脂培养基的载玻片，涂种待检菌，在一端加青霉素纸片或纸条。置平皿中于37培养4 6小时后，在低倍镜下观察。在有菌生长和抑菌区的临界线处，应有明显典型串珠形态。5、串珠试验串珠试验时炭疽杆菌的形态：串珠状或长链状（四）炭疽病原学检查（四）炭疽病原学检查鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件制制备备有牛肉消化液有牛肉消化液琼琼脂培养基的脂培养基的载载玻片，玻片，37葡萄糖麦芽糖蔗糖乳糖甘露醇水杨素MRVP石蕊牛乳+产酸，液化迟缓产酸不产气不产生靛基质和H2S6、生化试验 API 50CH/E鉴定条可以进行炭疽生化鉴定（四）炭疽病原学检查（四）炭疽病原学检查鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件葡萄糖麦芽糖蔗糖乳糖甘露醇水葡萄糖麦芽糖蔗糖乳糖甘露醇水杨杨素素MRVP石蕊牛乳石蕊牛乳+38待测模板的制备：待测模板的制备：模板制备可直接从标本样品，也可从培养物制。标本将炭疽杆菌接种于固体培养基平板上，37培养18h，取培养物悬浮于1ml生理盐水，离心，弃上清，沉淀用ph7.8TE溶液洗起悬浮，于沸水浴中煮15min。离心，上清用0.22um的滤器除菌过滤。滤液即为模板，可置4备用于PCR扩增。（五）炭疽病原学检查（五）炭疽病原学检查PCR鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件待待测测模板的制模板的制备备：（五）炭疽病原学：（五）炭疽病原学检查检查PCR鉴鉴定定试验试验39cap外F：CCTGGTTGTTCTTTTCGTTGCcap外R：CGGATTGTATATGGAGTGGG 产物大：1242bp rpoB普1F：GTACGCCAATCGATATCATGrpoB普1R：GATCATCGTCATCTTCCGTA 产物大小：618bp pagA普F:ATTTGCGGTAACACTTCACTpagA普R:AGACCGTGACAATGATGGAA 产物大小：923bp引物序列：引物序列：（五）炭疽病原学检查（五）炭疽病原学检查PCR鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件引物序列：（五）炭疽病原学引物序列：（五）炭疽病原学检查检查PCR鉴鉴定定试验试验40 反应体系反应体系 (50l)10反应缓冲液 5l4dNTP混合物（每种2.5mM）4l引物（上游）1l引物（下游）1l待测模板 1l无菌去离子水 37lTaq DNA 聚合酶 1l 反应条件：反应条件：预变性95 5min；然后95 1 min，55 1 min，72 1 min，30个循环；最后72 5 min。（五）炭疽病原学检查（五）炭疽病原学检查PCR鉴定试验鉴定试验炭疽检验技术课件反反应应体系体系41标本采集和样品处理血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平检测 （酶联免疫吸附实验ELISA）血清中抗炭疽荚膜抗体胶体金检测 炭疽血清学检查炭疽血清学检查炭疽检验技术课件标标本采集和本采集和样样品品处处理炭疽血清学理炭疽血清学检查检查炭疽炭疽检验检验技技术课术课件件42根据血清学检验的结果可以对病人做出追溯诊断，由于诊断必须由双份血清做出，需要特别强调急性期血清的采取。首份血清应在检视病人时采取，通常应一次采取血液标本供涂片镜检，细菌分离培养，血清学检查及常规的血液检查使用。血清分离后置4保存，待获得恢复期血清后，一同进行抗体检查。恢复期血清应在发病后15日左右采取。（一）炭疽血清学检查（一）炭疽血清学检查标本采集和样品处理标本采集和样品处理炭疽检验技术课件根据血清学根据血清学检验检验的的结结果可以果可以对对病人做出追溯病人做出追溯诊诊断，由于断，由于诊诊断必断必须须由双由双43（二）炭疽血清学检查（二）炭疽血清学检查抗炭疽芽胞和毒素抗炭疽芽胞和毒素IgG水平水平ELISA测定定炭疽检验技术课件（二）炭疽血清学（二）炭疽血清学检查检查炭疽炭疽检检44抗炭疽芽胞和毒素抗炭疽芽胞和毒素IgG水平水平ELISA测定程序定程序包被抗原包被抗原：所用各孔加入检测用炭疽标准芽胞抗原液或检测用炭疽毒素抗原液100l，酶标板贴上封口膜，置4过夜。次日，甩干孔内溶液，每孔加洗涤缓冲液100l，甩干，反复洗涤3次，每次3min。待待检血清反血清反应：每种待测血清使用两行，以增加测定结果的可分析性。两行的112孔各加生理氯化钠溶液100l。在第1孔加待测血清100l，从第1孔以倍比稀释法向后至第12孔进行稀释混匀。酶标板贴上封口膜，置3760min。甩干孔内溶液，每孔加洗涤缓冲液100l，甩干，反复洗涤3次，每次3min。(同时做空白、正常血清孔对照)酶酶标抗体反抗体反应：于各反应孔中加入新鲜稀释的工作浓度的辣根过氧化物酶标记的羊（兔）抗人IgG或辣根过氧化物酶标记SPA100l，酶标板贴上封口膜，置3760min。甩干孔内溶液，每孔加洗涤缓冲液100l，甩干，反复洗涤3次，每次3min。显色反色反应：于各反应孔中加入显色底物A、B溶液50l，酶标板贴上封口膜，置暗处20min。终止止显色色：于各反应孔中加入显色终止液100l。OD值读取和取和结果果判定判定：在酶标仪上，于450nm波长处，被检测孔OD值达阴性血清对照孔OD值2.1倍时，可判断为阳性。也可用目测判读，被检测孔显示与阴性对照孔具有明显区别的黄褐色时，可判为阳性。炭疽检验技术课件抗炭疽芽胞和毒素抗炭疽芽胞和毒素IgG水平水平ELISA测测定程序包被抗原：所用各定程序包被抗原：所用各45（二）炭疽血清学检查（二）炭疽血清学检查抗炭疽芽胞和毒素抗炭疽芽胞和毒素IgG水平水平ELISA测定测定注意事项：u标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质,以HRP为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色；菌体中可能含有内源性HRP,长菌的标本同样的道理易产生假阳性。u抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。u标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合，一般血清置4冰箱5天内完成测试。如需保存一周以上则要-20冷冻保存，融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免气泡。炭疽检验技术课件（二）炭疽血清学（二）炭疽血清学检查检查注意事注意事46（三）炭疽血清学检查（三）炭疽血清学检查血清中抗炭疽荚膜抗体胶体金检测血清中抗炭疽荚膜抗体胶体金检测检测对象为抗荚膜抗体，疫苗株不带有荚膜，因此可以鉴别免疫接种与感染。可以检测循环总抗体，即IgG、IgM均可检出。检测方法：将人活动物血清标本1：40稀释后，取150ul加入加样孔，2分钟后开始观察，15分钟终止观察。阴性阴性阳性阳性炭疽检验技术课件（三）炭疽血清学（三）炭疽血清学检查检查47ThankYou！炭疽检验技术课件ThankYou！炭疽！炭疽检验检验技技术课术课件件48