综合性血液病分子诊断体系课件

综合性血液病分子诊断体系综合性血液病分子诊断体系1我们一直在进步n更强的团队力量n更好的硬件支持n更多的新项目n优化的项目设置我们一直在进步更强的团队力量血液病诊断和治疗差不多进入分子生物学时代分类标准：1985 FAB WHO 2001 20081960年 1973年 1985年 1995年 1997年 2001年 2008年 2011年 鉴定Ph染色体鉴定t(9;22)易位鉴定BCR-ABL1STI571临床试验FDA批准ImatinibBCR-ABL1定量标准化会议19851988 年Mullis等发明PCR技术HGP，1985年提出，1990年启动2000年，人类基因组草图完成2003年，HGP完成，后基因组时代开始第二代测序技术荧光定量PCR技术第一台毛细管基因测序仪生物信息：检测技术：第二代测序临床应用定量PCR临床应用定性PCR临床应用血液病诊断和治疗差不多进入分子生物学时代分类标准：基因组学的研究推动疾病分子标记的发现和临床应用n97、3%的AML患者携带其中一种或以上的基因突变n预后差:FLT3-ITD、MLL-PTD、ASXL1、PHF6n预后好:CEBPA、IDH2、NPM1伴IDH1/IDH2突变n伴DNMT3A、NPM1突变、MLL易位患者,采纳大剂量的柔红霉素治疗可提高生存率Prognostic Relevance of Integrated Genetic Profiling in Acute Myeloid LeukemiaJay P、Patel,et al、,N Engl J Med 2012;366:1079-89基因组学的研究推动疾病分子标记的发现和临床应用97、3%的肿瘤的突变组n每一个肿瘤的发生都是一个基因团伙在犯罪每一个肿瘤基因组都是不同的基因突变的组合n白血病分子诊断只依照一种融合基因分类的患者仍有异质性AML1-ETO VS、AML1-ETO+KIT突变只检测一种突变也是不够的NPM1 VS、FLT3 VS、NPM1+FLT3新的突变出现提早估计预示临床进展急变、耐药等n对肿瘤突变组的全面了解有助于指导个性化治疗肿瘤的突变组每一个肿瘤的发生都是一个基因团伙在犯罪分子诊断的发展趋势及挑战Lucy A、Godley,DOI:0、1056/NEJMe1200409分子诊断的发展趋势及挑战Lucy A、Godley,D分子诊断临床应用遇到的问题n临床医师如何认识新的项目？n实验室假如向临床医师推荐新的项目？n如何提高突变的检测灵敏度？n如何降低检测费用？提高发现分子标记的速度？分子诊断临床应用遇到的问题临床医师如何认识新的项目？综合性血液病分子诊断体系融合基因筛查定量监测MRDMRD耐药、疾病进展监测基因突变筛查定量监测MRDMRD原癌基因表达谱定量监测个体差异相关的药物代谢、药物不良反应等其它项目:移植后嵌合状态;IGIG、TCRTCR克隆性;BCR-ABL1BCR-ABL1变异分析等孟德尔遗传病:先天性免疫缺陷、范可尼贫血等综合性血液病分子诊断体系融合基因筛查定量监测MRD耐药、疾病n“活在当下”与“追本溯源”用初治时的石蜡、形态涂片标本进行基因突变筛查n从实验方案和流程设计上加快报告速度新技术的应用和技术创新n融合基因和基因突变筛查 针对性监测降低总体检测费用,争取宝贵时间内容将不断增加,价格一般不再调整综合性血液病分子诊断体系“活在当下”与“追本溯源”综合性血液病分子诊断体系高通量基因测序的应用n降低单位检测成本肿瘤“突变组”分析变为估计n深度测序 突变MRD监测nIG、TCR免疫组库分析高通量基因测序的应用降低单位检测成本白血病融合基因和基因突变检测白血病融合基因和基因突变检测V2、3版31种融合基因筛查V2、3版31种融合基因筛查新的融合基因筛查项目nAML融合基因筛查(13种)AML1-EAP(1);AML1-ETO(1);AML1-MDS1(2);CBFB-MYH11(8);DEK-CAN(1);NPM-ALK(1);NPM-MLF1(1);NPM-RARA(2);PLZF-RARA(2);PML-RARA(5);SET-CAN(1);TEL-ABL1(2);TLS-ERG(5)nALL融合基因筛查(10种)BCR-ABL1(6);E2A-HLF(3);E2A-PBX1(2);NPM-ALK(1);NPM-MLF1(1);SET-CAN(1);SIL-TAL1(1);TEL-ABL1(2);TEL-AML1(2);TLS-ERG(5)nMPN融合基因筛查(23种)AML1-MDS1(2);BCR-ABL1(6);FIP1L1-PDGFRA(5);TEL-ABL1(2);18种PDGFRB fusion gene;TLS-ERG(5)nMLL融合基因筛查(11种)MLL-PTD;MLL-AF1p(4);MLL-AF1q(4);MLL-AF4(12);MLL-AF6(4);MLL-AF9(8);MLL-AF10(18);MLL-AF17(1);MLL-AFX(4);MLL-ELL(8);MLL-ENL(4)新的融合基因筛查项目AML融合基因筛查(13种)融合基因筛查的特点和意义n从分子水平快速鉴定患者基因异常节约时间和总体费用n大多数情况下,某一患者只有一种融合基因阳性n提供按WHO2008标准分类的依据n预后判断和指导用药n提供灵敏的MRD监测指标融合基因筛查的特点和意义从分子水平快速鉴定患者基因异常病例:格列卫治疗FIP1L1-PDGFRA白血病n男,43岁,贫血,血小板低,嗜酸粒细胞增多n31种融合基因筛查:FIP1L1-PDGFRA阳性n格列卫每周200mg每周100mg治疗血象特别快转为正常FIP1L1-PDGFRA定量逐渐降低20090728 32、56%20091021 5、83%20100426 0、0089%病例:格列卫治疗FIP1L1-PDGFRA白血病男,43岁,基因突变筛查项目nAML基因突变筛查(11种)CEBPA;DNMT3A;FLT3-ITD/TKD;IDH1;IDH2;KIT;KRAS;NPM1;NRAS;TET2;WT1nALL基因突变筛查(11种)FBXW7;FLT3;KRAS;IKZF1;JAK1;JAK2;NOTCH1;NRAS;PAX5;PHF6;MLL-PTDnMPN基因突变筛查(7种)IDH1;IDH2;JAK2;KIT;MPL;SH2B3(LNK);TET2nMDS基因突变筛查(8种)DNMT3A;IDH1;IDH2;JAK2;MPL;SF3B1;SRSF2;TET2基因突变筛查项目AML基因突变筛查(11种)基因突变筛查的特点和意义n同一患者估计同时存在多种基因突变可与融合基因或其它基因突变同时存在同一患者的同一基因估计存在不同的突变克隆性判断;诊断分型;预后判断;个体化用药n基因突变在疾病发展过程中估计会变化FLT3、IKZF1等,与疾病进展有关n目前大多数基因突变作为MRD监测指标有困难用高通量测序进行深度测序分析可帮助实现n能够用初诊时的石蜡、涂片标本回顾性分析基因突变筛查的特点和意义同一患者估计同时存在多种基因突变KIT基因突变n主要见于伴inv(16)/CBFB-MYH11融合基因的M4和伴t(8;21)/AML1-ETO的M2n伴KIT突变的患者预后相对较差n伴KIT突变的患者用格列卫治疗有一定效果KIT基因突变主要见于伴inv(16)/CBFB-MYH1IKZF1基因突变n主要见于ALL约20%儿童B-ALL;30%成人B-ALL;5%T-ALL约63、083、7%的BCR-ABL1阳性B-ALL约20%染色体核型正常的B-ALL患者MLL融合基因阳性的ALL患者常伴IKZF1突变B-ALL患者独立的预后不良因素nCML患者急淋变时约86%发生IKZF1突变建议CML患者复诊时检测,可提早预警急变IKZF1基因突变主要见于ALL病例n男,30岁,形态学为M1型,柔红霉素+阿糖胞苷化疗一疗程后nNPM1突变阳性 42、15%nFLT3突变阳性n31种融合基因阴性,HOX11表达阳性病例男,30岁,形态学为M1型,柔红霉素+阿糖胞苷化疗一疗程血液系统遗传病分子诊断血液系统遗传病分子诊断血液系统遗传病检测项目n噬血细胞综合征相关基因突变PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11SH2D1A、XIAPn范可尼贫血基因突变FANCA 60%、FANCC 15%、FANCG 10%nWAS综合征n遗传性铁粒幼细胞性贫血血液系统遗传病检测项目噬血细胞综合征相关基因突变噬血细胞综合征相关基因突变和疱疹病毒检查结果基因突变谱型疱疹病毒感染谱型噬血细胞综合征相关基因突变和疱疹病毒检查结果基因突变谱型疱先天遗传因素和疾病表型关系先天遗传因素由弱到强的一组病因相关的症候群？FHL，XLPCAEBVEBV相关淋巴瘤IM先天遗传因素和疾病表型关系先天遗传因素由弱到强的一组病因相关范可尼贫血突变检测n部分患者可无显著的先天畸形n部分患者可染色体断裂实验阴性而基因突变阳性,不能相互替代n可提供范可尼贫血与继发再障鉴别诊断的依据范可尼贫血突变检测部分患者可无显著的先天畸形范可尼贫血基因突变患者示例n女,6岁,患者骨髓造血衰竭、发育迟缓、身材矮小、皮肤黑、两眼间距宽、多指。n染色体断裂实验及彗星电泳实验结果阳性。c.989_995delACAGCCC/p.H330LfsX2c.3971CT/p.P1324L范可尼贫血基因突变患者示例女,6岁,患者骨髓造血衰竭、发育迟感谢您的聆听！感谢您的聆听！27