结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术课件

郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 结核病又称为结核病又称为结核病又称为结核病又称为痨病痨病痨病痨病和和和和白色瘟疫白色瘟疫白色瘟疫白色瘟疫。公公公公元元元元三三三三世世世世纪纪纪纪以以以以前前前前，我我我我国国国国古古古古代代代代医医医医学学学学还还还还只只只只是是是是认认认认识识识识到到到到该该该该病病病病可可可可能能能能是是是是一一一一种种种种极极极极为为为为严严严严重重重重的的的的慢慢慢慢性性性性传传传传染染染染病病病病，“累累累累年年年年积积积积月月月月，渐渐渐渐就就就就顿顿顿顿滞滞滞滞，以以以以至至至至于于于于死死死死，死死死死后后后后复复复复转转转转旁旁旁旁人人人人，乃乃乃乃至灭门至灭门至灭门至灭门”。以后逐渐认识到这是一种。以后逐渐认识到这是一种。以后逐渐认识到这是一种。以后逐渐认识到这是一种“肺痨肺痨肺痨肺痨”，其病因为，其病因为，其病因为，其病因为“痨虫痨虫痨虫痨虫”所致。所致。所致。所致。后后后后来来来来，西西西西方方方方的的的的一一一一些些些些科科科科学学学学家家家家发发发发现现现现这这这这类类类类病病病病人人人人的的的的肺肺肺肺内内内内有有有有一一一一个个个个个个个个坚坚坚坚实实实实的的的的团团团团块块块块，摸摸摸摸上上上上去去去去像像像像土土土土豆豆豆豆或或或或花花花花生生生生这这这这类类类类植植植植物物物物的的的的根根根根上上上上块块块块茎茎茎茎，就就就就将将将将该该该该病病病病称称称称之之之之为为为为TuberculosisTuberculosisTuberculosisTuberculosis，即结节的意思，这就是结核病命名的由来。，即结节的意思，这就是结核病命名的由来。，即结节的意思，这就是结核病命名的由来。，即结节的意思，这就是结核病命名的由来。结核病结核病 结核病又称为痨病和白色瘟疫。公元三世纪郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 红红红红楼楼楼楼梦梦梦梦：香香香香魂魂魂魂一一一一缕缕缕缕随随随随风风风风散散散散，愁愁愁愁绪绪绪绪三三三三更更更更入入入入梦梦梦梦遥遥遥遥。虽虽虽虽然然然然说说说说红红红红楼楼楼楼梦梦梦梦与医学无关，但其作者笔下的与医学无关，但其作者笔下的与医学无关，但其作者笔下的与医学无关，但其作者笔下的“痨病痨病痨病痨病”代表林黛玉却惊动全世界。代表林黛玉却惊动全世界。代表林黛玉却惊动全世界。代表林黛玉却惊动全世界。上上上上世世世世纪纪纪纪50505050年年年年代代代代，美美美美国国国国细细细细菌菌菌菌学学学学家家家家杜杜杜杜博博博博斯斯斯斯所所所所写写写写的的的的The The The The White White White White PlaguePlaguePlaguePlague(白白白白色色色色瘟瘟瘟瘟疫疫疫疫)，就就就就曾曾曾曾提提提提到到到到了了了了林林林林黛黛黛黛玉玉玉玉的的的的肺肺肺肺结结结结核核核核，可可可可见见见见在在在在当当当当时时时时红红红红楼楼楼楼梦梦梦梦中中中中林林林林黛黛黛黛玉的病症已是结核病的典型症状。玉的病症已是结核病的典型症状。玉的病症已是结核病的典型症状。玉的病症已是结核病的典型症状。黄黄黄黄帝帝帝帝内内内内经经经经素素素素问问问问：“大大大大骨骨骨骨枯枯枯枯稿稿稿稿，大大大大肉肉肉肉陷陷陷陷下下下下。胸胸胸胸中中中中气气气气满满满满，喘喘喘喘息息息息不不不不便便便便，内内内内痛痛痛痛引引引引肩肩肩肩项项项项，身热，脱肉破腘。身热，脱肉破腘。身热，脱肉破腘。身热，脱肉破腘。”结核病结核病 红楼梦：香魂一缕随风散，愁绪三更入梦遥。虽然郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 2011 2011年全球结核病发病率年全球结核病发病率年全球结核病发病率年全球结核病发病率 （世界卫生组织（世界卫生组织（世界卫生组织（世界卫生组织20122012年结核病报告）年结核病报告）年结核病报告）年结核病报告）世界世界新发结核病例新发结核病例2007年年 927万万 2009年年 940万万2010年年 880万万2011年年 870万万中国中国新发结核病例新发结核病例2007年年 130万万 2010年年 100万万2011年年 100万万结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。结核病结核病 2011年全球结核病发病率（世界卫生组织2012年结核病郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 流行过程流行过程流行过程流行过程传染源传染源传染源传染源 痰涂片阳性的肺结核病人痰涂片阳性的肺结核病人痰涂片阳性的肺结核病人痰涂片阳性的肺结核病人传播途径传播途径传播途径传播途径 空气传播空气传播空气传播空气传播易感人群易感人群易感人群易感人群 普遍易感普遍易感普遍易感普遍易感第二节第二节 流行病特征流行病特征影响流行的因素影响流行的因素影响流行的因素影响流行的因素自然因素自然因素自然因素自然因素 季节季节季节季节、环境、居室通风、环境、居室通风、环境、居室通风、环境、居室通风社会社会社会社会因素因素因素因素 社会社会社会社会、经济、医疗、经济、医疗、经济、医疗、经济、医疗服务服务服务服务其他因素其他因素其他因素其他因素 HIV-TBHIV-TB，MDR/XDR-TBMDR/XDR-TB结核病结核病流行过程第二节 流行病特征影响流行的因素结核病郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 疫苗预防疫苗预防BCGBCG早期诊断早期诊断细菌学细菌学影像学影像学分子生物学分子生物学免疫学免疫学 等等新药开发新药开发一线药物一线药物二线药物二线药物其他其他结核病防控的三大手段结核病防控的三大手段临床诊断常常结合临床诊断常常结合临床诊断常常结合临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征痰涂片，胸片，症状和体征痰涂片，胸片，症状和体征痰涂片，胸片，症状和体征结核病结核病世界防治结核病日世界防治结核病日世界防治结核病日世界防治结核病日3 3月月月月2424日日日日疫苗预防BCG早期诊断细菌学影像学分子生物学免疫学 等新药开郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 结核病是由结核分枝杆菌引起的。结核病是由结核分枝杆菌引起的。结核病是由结核分枝杆菌引起的。结核病是由结核分枝杆菌引起的。Robert KochRobert Koch（1843-1843-19101910）18821882年发现结核分枝杆菌，年发现结核分枝杆菌，19051905年获得年获得诺贝尔生理或诺贝尔生理或医学奖医学奖。Friedrich Neelsen(1854-1898)Franz Ziehl（1857-1926）Ziehl-Neelsen 染色法染色法（分枝杆菌抗酸染色的基础分枝杆菌抗酸染色的基础）结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核病是由结核分枝杆菌引起的。Robert Koch（18郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 结核分枝杆菌结核分枝杆菌（一）生物学性状（一）生物学性状（一）生物学性状（一）生物学性状1.1.1.1.形态与染色形态与染色形态与染色形态与染色 细长略带弯曲，细长略带弯曲，细长略带弯曲，细长略带弯曲，分枝状，分枝状，分枝状，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性有荚膜，抗酸染色阳性有荚膜，抗酸染色阳性有荚膜，抗酸染色阳性结核分枝杆菌（一）生物学性状郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起迟发型超敏反应（型变态反应）的一种试验1882年发现结核分枝杆菌，1905年获得诺贝尔生理或医学奖。经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。社会因素 社会、经济、医疗服务结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）其他因素 HIV-TB，MDR/XDR-TB上世纪50年代，美国细菌学家杜博斯所写的The White Plague(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺结核，可见在当时红楼梦中林黛玉的病症已是结核病的典型症状。题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征RNA作为临床分子诊断靶标的优点初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫无超敏反应乳白或米黄，不透明社会因素 社会、经济、医疗服务经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫无超敏反应Increased case finding of tuberculosis from sputum and sputum deposits after magnetic bead concentration of mycobacteria.硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）TB-SAT检测的敏感度和特异性2.2.培养与生长特性培养与生长特性培养与生长特性培养与生长特性 特点特点特点特点 专性需氧专性需氧专性需氧专性需氧 生长缓慢生长缓慢生长缓慢生长缓慢 营养要求高，常用罗氏培养基营养要求高，常用罗氏培养基营养要求高，常用罗氏培养基营养要求高，常用罗氏培养基 生长现象生长现象生长现象生长现象 液体：表面生长（菌膜）液体：表面生长（菌膜）液体：表面生长（菌膜）液体：表面生长（菌膜）固体：颗粒、结节、花菜状菌落固体：颗粒、结节、花菜状菌落固体：颗粒、结节、花菜状菌落固体：颗粒、结节、花菜状菌落 乳白或米黄，不透明乳白或米黄，不透明乳白或米黄，不透明乳白或米黄，不透明3.3.生化反应生化反应生化反应生化反应 不发酵糖类不发酵糖类不发酵糖类不发酵糖类 ，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性结核分枝杆菌结核分枝杆菌应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起迟8郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 4.4.抵抗力抵抗力抵抗力抵抗力四不怕四不怕四不怕四不怕干燥干燥干燥干燥碱性染料碱性染料碱性染料碱性染料青霉素等抗生素青霉素等抗生素青霉素等抗生素青霉素等抗生素对酸或碱有抵抗力对酸或碱有抵抗力对酸或碱有抵抗力对酸或碱有抵抗力（3%HCl3%HCl或或或或6%H2SO46%H2SO4、4%NaOH4%NaOH）四怕四怕四怕四怕乙醇乙醇乙醇乙醇湿热湿热湿热湿热紫外线紫外线紫外线紫外线抗痨药物抗痨药物抗痨药物抗痨药物（异烟肼、利福平等）（异烟肼、利福平等）（异烟肼、利福平等）（异烟肼、利福平等）5.5.变异性变异性变异性变异性形态结构变异：形态结构变异：形态结构变异：形态结构变异：结核杆菌的结核杆菌的结核杆菌的结核杆菌的L L型：颗粒状、丝状型：颗粒状、丝状型：颗粒状、丝状型：颗粒状、丝状毒力变异：毒力变异：毒力变异：毒力变异：卡介苗卡介苗卡介苗卡介苗BCGBCG：CalmetteCalmette和和和和Gurin Gurin 牛分枝杆菌牛分枝杆菌牛分枝杆菌牛分枝杆菌 1313年年年年230230次次次次 耐药性变异：耐药性变异：耐药性变异：耐药性变异：耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多结核分枝杆菌结核分枝杆菌4.抵抗力四不怕四怕5.变异性结核分枝杆菌郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 致致致致病病病病物物物物质质质质（二）致病性（二）致病性（二）致病性（二）致病性荚膜荚膜荚膜荚膜与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）含多种酶（分解利用营养物质）含多种酶（分解利用营养物质）含多种酶（分解利用营养物质）含多种酶（分解利用营养物质）保护（阻止有害物质的进入菌体）保护（阻止有害物质的进入菌体）保护（阻止有害物质的进入菌体）保护（阻止有害物质的进入菌体）脂质脂质脂质脂质索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）磷脂（形成结核结节）磷脂（形成结核结节）磷脂（形成结核结节）磷脂（形成结核结节）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）蜡质蜡质蜡质蜡质D D（引起迟发性过敏反应）（引起迟发性过敏反应）（引起迟发性过敏反应）（引起迟发性过敏反应）蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质引起迟发性过敏反应引起迟发性过敏反应引起迟发性过敏反应引起迟发性过敏反应感染方式感染方式感染方式感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体所致疾病所致疾病所致疾病所致疾病 结核病，以肺结核常见结核病，以肺结核常见结核病，以肺结核常见结核病，以肺结核常见结核分枝杆菌结核分枝杆菌致（二）致病性荚膜与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）含多种郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 结核菌素试验（OT试验）：（三）核酸分子诊断技术-Xpert MTB/RIF和TB-SAT（二）TB-Beads技术结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）快速，24小时报告结果Liu J,Sun ZQ,Pei H,et al.临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征（二）TB-Beads技术由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）上世纪50年代，美国细菌学家杜博斯所写的The White Plague(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺结核，可见在当时红楼梦中林黛玉的病症已是结核病的典型症状。传染源 痰涂片阳性的肺结核病人标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）快速，24小时报告结果营养要求高，常用罗氏培养基感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体后来，西方的一些科学家发现这类病人的肺内有一个个坚实的团块，摸上去像土豆或花生这类植物的根上块茎，就将该病称之为Tuberculosis，即结节的意思，这就是结核病命名的由来。蜡质D（引起迟发性过敏反应）由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）TB-SAT检测的敏感度和特异性（3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH）（三）免疫性（三）免疫性（三）免疫性（三）免疫性 1.1.机体抗结核免疫特点机体抗结核免疫特点机体抗结核免疫特点机体抗结核免疫特点：传染、免疫、超敏反应共存：传染、免疫、超敏反应共存：传染、免疫、超敏反应共存：传染、免疫、超敏反应共存 2.2.属于属于属于属于感染免疫感染免疫感染免疫感染免疫(infection immunity)(infection immunity)，又称有菌免疫，又称有菌免疫，又称有菌免疫，又称有菌免疫 3.3.细胞免疫为主细胞免疫为主细胞免疫为主细胞免疫为主，迟发型超敏反应同时存在，迟发型超敏反应同时存在，迟发型超敏反应同时存在，迟发型超敏反应同时存在 4.4.郭霍现象郭霍现象郭霍现象郭霍现象:注射结核杆菌于豚鼠皮下注射结核杆菌于豚鼠皮下注射结核杆菌于豚鼠皮下注射结核杆菌于豚鼠皮下 初次注射初次注射初次注射初次注射 局部反应小局部反应小局部反应小局部反应小 全身扩散全身扩散全身扩散全身扩散 无免疫无超敏反应无免疫无超敏反应无免疫无超敏反应无免疫无超敏反应 再次注射再次注射再次注射再次注射 局部反应大局部反应大局部反应大局部反应大 不扩散不扩散不扩散不扩散 有免疫有超敏反应有免疫有超敏反应有免疫有超敏反应有免疫有超敏反应 5.5.结核菌素试验（结核菌素试验（结核菌素试验（结核菌素试验（OTOT试验）：试验）：试验）：试验）：应应应应用用用用结结结结核核核核菌菌菌菌素素素素进进进进行行行行皮皮皮皮肤肤肤肤试试试试验验验验来来来来测测测测定定定定机机机机体体体体对对对对结结结结核核核核分分分分枝枝枝枝杆杆杆杆菌菌菌菌是是是是否否否否能引起迟发型超敏反应（能引起迟发型超敏反应（能引起迟发型超敏反应（能引起迟发型超敏反应（型变态反应）的一种试验型变态反应）的一种试验型变态反应）的一种试验型变态反应）的一种试验结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核菌素试验（OT试验）：（三）免疫性结核分枝杆菌郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）直接镜检：抗酸染色直接镜检：抗酸染色 分离培养：培养基、时间（分离培养：培养基、时间（24周后见结果）周后见结果）痰液等痰液等实验室诊断新技术实验室诊断新技术分离培养分离培养（一）传统微生物学检查（一）传统微生物学检查（一）传统微生物学检查（一）传统微生物学检查直接涂片直接涂片 标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）痰液等实郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 实验室诊断新技术实验室诊断新技术（二）（二）（二）（二）TB-BeadsTB-Beads技术技术技术技术Liu J,Sun ZQ,Pei H,et al.Increased case finding of tuberculosis from Liu J,Sun ZQ,Pei H,et al.Increased case finding of tuberculosis from sputum and sputum deposits after magnetic bead concentration of sputum and sputum deposits after magnetic bead concentration of mycobacteria.mycobacteria.J Microbiol MethodsJ Microbiol Methods,2013,93(2):144-147.2013,93(2):144-147.实验室诊断新技术（二）TB-Beads技术Liu J,Su郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 （三）核酸分子诊断技术（三）核酸分子诊断技术（三）核酸分子诊断技术（三）核酸分子诊断技术-Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF和和和和TB-SATTB-SAT靶基因菌种鉴定16SrRNA IS611016SrRNA IS6110异烟肼katGkatG、inhAinhA、ahpCahpC、oxyRoxyR、KasAKasA、ndh ndh 利福平rpoBrpoB乙胺丁醇embBembB吡嗪酰胺 pncApncA链霉素 rpsLrpsL、rrsrrs喹诺酮类药物 gyrAgyrA、gyrBgyrB Zhang YZhang Y,et al.,et al.NatureNature,1992,358(6387):591-593.,1992,358(6387):591-593.Scorpio A,Scorpio A,Zhang YZhang Y.Nat MedNat Med,1996,2(6):662-667.,1996,2(6):662-667.实验室诊断新技术实验室诊断新技术（三）核酸分子诊断技术-Xpert MTB/RIF和TB-S郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 基因水平基因水平基因水平基因水平-PCR-PCR技术技术技术技术1.Xpert MTB/RIF1.Xpert MTB/RIFIndorsed by WHO in 2010.Indorsed by WHO in 2010.实验室诊断新技术实验室诊断新技术基因水平-PCR技术1.Xpert MTB/RIFIndo郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 2.TB-SAT2.TB-SAT技术技术技术技术S Simultaneous imultaneous A Amplification and mplification and T Testingesting（RNARNA仁度）仁度）仁度）仁度）RNARNA作为临床分子诊断靶标的优点作为临床分子诊断靶标的优点作为临床分子诊断靶标的优点作为临床分子诊断靶标的优点 RNA RNA 拷贝数拷贝数拷贝数拷贝数 DNADNA拷贝数拷贝数拷贝数拷贝数 更具临床意义更具临床意义更具临床意义更具临床意义 生命力旺盛的病原体生命力旺盛的病原体生命力旺盛的病原体生命力旺盛的病原体RNARNA转录活跃转录活跃转录活跃转录活跃 RNA RNA远不如远不如远不如远不如DNADNA稳定稳定稳定稳定 病原体死亡，病原体死亡，病原体死亡，病原体死亡，RNARNA很快降解很快降解很快降解很快降解 1.1.交叉污染少交叉污染少交叉污染少交叉污染少 2.2.较好的愈后指标较好的愈后指标较好的愈后指标较好的愈后指标实验室诊断新技术实验室诊断新技术2.TB-SAT技术RNA作为临床分子诊断靶标的优点实验室郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 恒温扩增恒温扩增恒温扩增恒温扩增-SAT-SAT技术技术技术技术TB-SATTB-SAT技术原理技术原理技术原理技术原理实验室诊断新技术实验室诊断新技术恒温扩增-SAT技术TB-SAT技术原理实验室诊断新技术郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 TB-RNATB-RNA提取提取提取提取恒温扩增恒温扩增恒温扩增恒温扩增实时检测实时检测实时检测实时检测60C 10 min60C 10 min4242 C 5 minC 5 min超声仪超声仪超声仪超声仪（300W300W）15 min15 min痰液预处理痰液预处理痰液预处理痰液预处理4242 C C 40 min40 min50 ul 稀释液TB-SATTB-SAT操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤实验室诊断新技术实验室诊断新技术TB-RNA提取恒温扩增60C 10 min超声仪（300郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 培养鉴定结果培养鉴定结果+PCR结果结果合计合计TB-SAT检检测结果测结果阳性阳性阴性阴性阳性阳性2317238阴性阴性12318330合计合计243325568敏感度敏感度敏感度敏感度=231/243100%=95.06%=231/243100%=95.06%特异性特异性特异性特异性=318/325100%=97.85%=318/325100%=97.85%准确度准确度准确度准确度=(231+318)/568 100%=96.65%=(231+318)/568 100%=96.65%恒温扩增恒温扩增恒温扩增恒温扩增-SAT-SAT技术技术技术技术TB-SATTB-SAT检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性实验室诊断新技术实验室诊断新技术培养鉴定结果+PCR结果合计TB-SAT检测结果阳性阴性阳性郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 （四）蛋白分子诊断技术（四）蛋白分子诊断技术（四）蛋白分子诊断技术（四）蛋白分子诊断技术-干扰素释放实验干扰素释放实验干扰素释放实验干扰素释放实验结结结结核核核核感感感感染染染染者者者者体体体体内内内内存存存存在在在在特特特特异异异异的的的的效效效效应应应应T T淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞，效效效效应应应应T T淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞再再再再次次次次受受受受到到到到结结结结核核核核抗抗抗抗原原原原刺刺刺刺激激激激时时时时会会会会分分分分泌泌泌泌多多多多种种种种细细细细胞胞胞胞因因因因子子子子（IFN-IFN-）由由由由于于于于效效效效应应应应T T细细细细胞胞胞胞存存存存活活活活时时时时间间间间很很很很短短短短，而而而而且且且且具具具具有有有有特特特特异异异异性性性性，因因因因此此此此可可可可以以以以作作作作为为为为机机机机体体体体是是是是否否否否正正正正处处处处于于于于被被被被感感感感染染染染的的的的指指指指标标标标，无无无无论论论论是是是是否否否否有有有有临床症状。临床症状。临床症状。临床症状。基基基基于于于于IGRAIGRA原原原原理理理理的的的的产产产产品品品品目目目目前前前前已已已已被被被被美美美美国国国国、加加加加拿拿拿拿大大大大、英英英英国国国国、德德德德国国国国、法法法法国国国国、日日日日本本本本等等等等二二二二十十十十余余余余个个个个国国国国家家家家写写写写入入入入本本本本国国国国的的的的结结结结核核核核诊诊诊诊疗指南中疗指南中疗指南中疗指南中（IGRAIGRA，i interferon-nterferon-g gamma amma r release elease a assayssay）实验室诊断新技术实验室诊断新技术（四）蛋白分子诊断技术-干扰素释放实验结核感染者体内存在郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 检测过程与结果判断检测过程与结果判断检测过程与结果判断检测过程与结果判断阴性阴性阴性阴性结结果果果果阳性阳性阳性阳性结结果果果果空白空白空白空白对对照照照照抗原抗原抗原抗原 A A抗原抗原抗原抗原 B B阳性阳性阳性阳性对对照照照照（PHAPHA）实验室诊断新技术实验室诊断新技术检测过程与结果判断阴性结果阳性结果实验室诊断新技术郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。郭霍现象:注射结核杆菌于豚鼠皮下蜡质D（引起迟发性过敏反应）（二）TB-Beads技术基于IGRA原理的产品目前已被美国、加拿大、英国、德国、法国、日本等二十余个国家写入本国的结核诊疗指南中经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.（3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH）经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）2007年 130万306例入伍新兵 特异性 97.临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫无超敏反应营养要求高，常用罗氏培养基细长略带弯曲，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性（分枝杆菌抗酸染色的基础）临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征虽然说红楼梦与医学无关，但其作者笔下的“痨病”代表林黛玉却惊动全世界。Xpert MTB/RIF结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。美国美国美国美国FDAFDA认证临床实验数据认证临床实验数据认证临床实验数据认证临床实验数据 经培养确诊的结核病患者样本经培养确诊的结核病患者样本经培养确诊的结核病患者样本经培养确诊的结核病患者样本183183例例例例 敏感度敏感度敏感度敏感度 95.6%(175/183)95.6%(175/183)306 306例入伍新兵例入伍新兵例入伍新兵例入伍新兵 特异性特异性特异性特异性 97.1%(297/306)97.1%(297/306)检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性检测的敏感度和特异性国内临床实验数据国内临床实验数据国内临床实验数据国内临床实验数据T-SPOT.T-SPOT.TBTB确诊病例确诊病例确诊病例确诊病例合合合合 计计计计试验组试验组试验组试验组对照组对照组对照组对照组阳阳阳阳 性性性性6246243030654654阴阴阴阴 性性性性3131478478509509合合合合 计计计计65565550850811631163灵敏度灵敏度灵敏度灵敏度=95.3%=95.3%；特异性；特异性；特异性；特异性=94.1%=94.1%；准确性；准确性；准确性；准确性=94.8%=94.8%特点：特点：特点：特点：特异性好特异性好特异性好特异性好，不受卡介苗（，不受卡介苗（，不受卡介苗（，不受卡介苗（BCGBCG）接种和环境分枝杆菌影响）接种和环境分枝杆菌影响）接种和环境分枝杆菌影响）接种和环境分枝杆菌影响 敏感度高敏感度高敏感度高敏感度高，在免疫力低下，在免疫力低下，在免疫力低下，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的检出率受抑制人群中有很高的检出率受抑制人群中有很高的检出率受抑制人群中有很高的检出率 快速快速快速快速，2424小时报告结果小时报告结果小时报告结果小时报告结果实验室诊断新技术实验室诊断新技术感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体美国FDA认证郑州大学第一附属医院郑州大学第一附属医院 题目题目结核分枝杆菌结核分枝杆菌及其实验室及其实验室诊断新技术诊断新技术敬请各位专家批评指正！敬请各位专家批评指正！郑州大学第一附属医院检验科郑州大学第一附属医院检验科/河南省检验医学重点实验室河南省检验医学重点实验室 赵俊伟赵俊伟2015年年12月月题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术敬请各位专家批评指正