梅毒血清学实验室诊断课件

梅毒血清学实验室诊断梅毒血清学实验室诊断梅毒血清学实验室诊断梅毒血清学实验室诊断1历史的回顾性病是一个历史悠久的疾病，多数认为梅毒是年由印度传入我国广东岭南。梅毒是一个曾经广泛流行的性病，解放初期，估计的性病（主要是梅毒）患者约为万。年之后，全国逐渐形成了一个“四级”皮肤性病防治体系。年，实现了全国梅毒基本消灭的目标。2历史的回顾性病是一个历史悠久的疾病，多数认为梅毒是年由印度传性病死灰复燃上世纪年代末，改革开放后，性观念的改变性产业的出现性生活方式的变化高危人群规模在不断的增加，如：暗娼、男男性接触者、流动人口等。性病在我国死灰复燃，再度流行。3性病死灰复燃上世纪年代末，改革开放后，3445566现况严重的公共卫生问题和社会问题；临床认知水平不够，实验室诊断水平参差不齐；实验室检测各流程存在不规范现象；新的实验室诊断技术不断出现而又缺乏了解；部分（如私人诊所）医疗工作存在过度诊疗或诊疗不规范，延误患者的最佳诊疗时机；无症状感染者成为维系性病流行的重要的传染源。7现况严重的公共卫生问题和社会问题；7如何就目前高发的性病，尤其是对梅毒进行有效监测和控制？如何对高危人群与潜在易感人群进行筛查，主动发现无症状的性病感染者？如何确定感染的病原体种类？需要完善的实验室检测工作，包括检测能力建设和质量控制8如何就目前高发的性病，尤其是对梅毒进行有效监测和控制？8性病防治工作的重点 两个系统 疫情监测系统 实验室检测系统实验室检测能力和质量控制 一个服务 规范化医疗服务9性病防治工作的重点91010常用梅毒实验室检测方法病原学检测血清学检测11常用梅毒实验室检测方法病原学检测11梅毒血清学检测分类梅毒血清学检测分类（）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）（非特异性梅毒抗体）（）梅毒螺旋体抗原血清学试验（）梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）（特异性梅毒抗体）12梅毒血清学检测分类12非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，在周产生抗类脂质抗原的和的梅毒螺旋体一旦感染人体，在周产生抗类脂质抗原的和的混合抗体（也叫反应素）。混合抗体（也叫反应素）。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转阴。治疗后，反应素可以逐渐减少至转阴。13非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，在周产非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理反应素与心磷脂形成抗原抗体反应，卵磷脂可加强心磷脂反应素与心磷脂形成抗原抗体反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂心磷脂、卵磷脂与与胆固醇都是醇溶性脂类、遇水形成胶体胆固醇都是醇溶性脂类、遇水形成胶体溶液，胆固醇遇水形成结晶。溶液，胆固醇遇水形成结晶。14非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理反应素与心磷脂形成抗原抗体反应非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图15非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图15非梅毒螺旋体抗原血清学试验方法包括：包括：（）快速血浆反应素环状卡片试验（）快速血浆反应素环状卡片试验（)（）甲苯胺红不加热血清试验（）甲苯胺红不加热血清试验（)（）性病研究实验室试验（）（）性病研究实验室试验（）所用抗原基本成分是：心磷脂、卵磷脂和胆固醇所用抗原基本成分是：心磷脂、卵磷脂和胆固醇16非梅毒螺旋体抗原血清学试验方法包括：16试验试验抗原组成抗原组成与与特点特点抗原组成：心磷脂、卵磷脂、胆固醇抗原组成：心磷脂、卵磷脂、胆固醇抗原需新鲜配制，不能保存抗原需新鲜配制，不能保存待检血清需灭活待检血清需灭活需要在显微镜下观察结果需要在显微镜下观察结果目前主要用于脑脊液检查，特异性较高目前主要用于脑脊液检查，特异性较高是诊断神经梅毒的重要依据，但检测阴性不能排除神是诊断神经梅毒的重要依据，但检测阴性不能排除神经梅毒经梅毒17试验抗原组成与特点17试验试验仪器材料仪器材料、水平旋转仪、显微镜、水平旋转仪、显微镜、试剂盒：抗原原液、缓冲液、抗原滴管、试剂盒：抗原原液、缓冲液、抗原滴管与与针头、带针头、带直径为漆圈的玻璃反应板、试验结果判读用参照涂直径为漆圈的玻璃反应板、试验结果判读用参照涂片片、平底玻璃小瓶、生理盐水、平底玻璃小瓶、生理盐水18试验仪器材料18试验试验标本采集标本采集、血清：新鲜血清或冻存血清；、血清：新鲜血清或冻存血清；、脑脊液：采用腰穿术获得、脑脊液：采用腰穿术获得 一般来说，送检试验的脑脊液应采集两份，一一般来说，送检试验的脑脊液应采集两份，一份作脑脊液常规（白细胞份作脑脊液常规（白细胞*、蛋白含量）测定，、蛋白含量）测定，检测结果与另一份用作试验的脑脊液样本同时送性检测结果与另一份用作试验的脑脊液样本同时送性病实验室病实验室19试验标本采集19试验试验操作步骤操作步骤、抗原配制；、抗原配制；、玻片定性试验、玻片定性试验（）灭活：血清标本（）灭活：血清标本灭活分钟；灭活分钟；（）吸样：吸取血清放入反应板圈中，并涂布于整个（）吸样：吸取血清放入反应板圈中，并涂布于整个圈内；圈内；（）加抗原：用标准针头加入滴抗原；（）加抗原：用标准针头加入滴抗原；（）反应：置水平旋转仪上旋转，（）反应：置水平旋转仪上旋转，次，立即置低倍次，立即置低倍显微镜下观察。显微镜下观察。20试验操作步骤20试验试验操作步骤操作步骤、定量试验、定量试验（）加稀释液：在圈内加入生理盐水；（）加稀释液：在圈内加入生理盐水；（）样本稀释：吸取样本与第一个圈内生理盐水混合，（）样本稀释：吸取样本与第一个圈内生理盐水混合，混匀后，吸取加至第二个圈，做系列稀释，并将稀混匀后，吸取加至第二个圈，做系列稀释，并将稀释样本涂布于整个圈内释样本涂布于整个圈内（）同定性试验的（）、（）。（）同定性试验的（）、（）。21试验操作步骤21试验试验结果判读结果判读凝集反应强度分级：凝集反应强度分级：镜下见中等大小或大的絮状物，液体清亮；：镜下见中等大小或大的絮状物，液体清亮；：絮状物较小，液体较清亮；：絮状物较小，液体较清亮；：絮状物较小，均匀分布，液体浑浊；：絮状物较小，均匀分布，液体浑浊；：抗原复合物颗粒稍粗；：抗原复合物颗粒稍粗；：抗原颗粒均匀、细小。：抗原颗粒均匀、细小。定性试验：镜下可见定性试验：镜下可见的絮状凝集物为阳性，不产的絮状凝集物为阳性，不产生凝集为阴性；生凝集为阴性；定量试验：镜下可见絮状凝集物的样本最高稀释倍数定量试验：镜下可见絮状凝集物的样本最高稀释倍数为其滴度。为其滴度。22试验结果判读22试验试验临床意义临床意义 脑脊液试验是神经梅毒的标准试验，阳性结果脑脊液试验是神经梅毒的标准试验，阳性结果可诊断为神经梅毒，但阴性结果不能排除诊断，存可诊断为神经梅毒，但阴性结果不能排除诊断，存在假阴性。在假阴性。23试验临床意义23试验试验在试剂成分的基础上，加入黑色活性碳颗粒，在试剂成分的基础上，加入黑色活性碳颗粒，作为凝集的指示物；与待检血清（浆）中的作为凝集的指示物；与待检血清（浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的黑色絮状物。反应素结合，形成肉眼可见的黑色絮状物。用白色硬纸片代替玻片；用白色硬纸片代替玻片；血清不需要灭活；血清不需要灭活；不需要显微镜观察结果不需要显微镜观察结果可作定性和定量试验可作定性和定量试验24试验24试验试验原理和成分以原理和成分以与与操作与试验相同操作与试验相同用红色的甲苯胺红替代了活性碳颗粒，在与待检血清用红色的甲苯胺红替代了活性碳颗粒，在与待检血清（血浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮（血浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物状物25试验25快速血浆反应素环状卡片试验（)样本类型：血清、血浆、脑脊液样本类型：血清、血浆、脑脊液样本保存：短期（周）内进行检测的可存放于样本保存：短期（周）内进行检测的可存放于；保存一周以上的应置于保存一周以上的应置于 以下冰箱保存；以下冰箱保存；长期保存应置于长期保存应置于 以下冰箱中保存。以下冰箱中保存。26快速血浆反应素环状卡片试验（)样本类型：血清、血浆、脑脊液2快速血浆反应素环状卡片试验（)样本运送：样本运送：应按照生物安全要求进行包装和运送。应按照生物安全要求进行包装和运送。（）第一层容器（如试管）（）第一层容器（如试管）（）第二层容器（）第二层容器 （）第三层容器（）第三层容器27快速血浆反应素环状卡片试验（)样本运送：27快速血浆反应素环状卡片试验（)样本接收：样本接收：（）检查标本管有无破损和溢漏；（）检查标本管有无破损和溢漏；（）核对标本与送检单；（）核对标本与送检单；（）检查标本的状况（）检查标本的状况;（）如标本不能接收，怎么处理？（）如标本不能接收，怎么处理？（）样本交接应在接收单上双方签字确认（）样本交接应在接收单上双方签字确认注意：应把每一份样本当作强阳性样本来处置和对待！注意：应把每一份样本当作强阳性样本来处置和对待！28快速血浆反应素环状卡片试验（)样本接收：注意：应把每一份样本快速血浆反应素环状卡片试验（)仪器：水平旋转仪（要求？）仪器：水平旋转仪（要求？）试剂盒：试剂盒：（）含有活性碳的抗原悬液；（）含有活性碳的抗原悬液；（）一个标定的号针头（）；（）一个标定的号针头（）；（）压印有个直径圆圈的封塑环状卡片；（）压印有个直径圆圈的封塑环状卡片；（）内部对照；（）内部对照；为了保证试验结果的可靠性，以为了保证试验结果的可靠性，以与与每批试剂间的可比性，应制备外部对每批试剂间的可比性，应制备外部对照血清照血清（）量程移液器和吸头（）量程移液器和吸头（）无菌生理盐水（）无菌生理盐水29快速血浆反应素环状卡片试验（)仪器：水平旋转仪（要求？）29快速血浆反应素环状卡片试验（)定性试验定性试验（）试剂准备：复室温分钟（）试剂准备：复室温分钟（）加标本：样本量；（）加标本：样本量；（）加抗原：抗原量（）加抗原：抗原量（滴，约滴）滴，约滴）（）反应：反应时间（）反应：反应时间（）读取结果（）读取结果30快速血浆反应素环状卡片试验（)定性试验30快速血浆反应素环状卡片试验（)定量试验定量试验抗原滴抗原滴 抗原滴抗原滴 抗原滴抗原滴 抗原滴抗原滴 抗抗原滴原滴标本标本（全血）（全血）标本标本吸取吸取吸取弃掉标本稀释顺序涂布顺序31快速血浆反应素环状卡片试验（)定量试验标本标本吸取吸取吸取弃快速血浆反应素环状卡片试验（)结果判读结果判读判读凝集反应强度分级：判读凝集反应强度分级：圆圈内出现中到大的黑色絮状物，液体清亮；：圆圈内出现中到大的黑色絮状物，液体清亮；：圆圈内出现小到中的黑色絮状物，液体较清亮；：圆圈内出现小到中的黑色絮状物，液体较清亮；：圆圈内出现小的黑色絮状物，液体浑浊；：圆圈内出现小的黑色絮状物，液体浑浊；：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散。：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散。32快速血浆反应素环状卡片试验（)结果判读323333快速血浆反应素环状卡片试验（)结果报告结果报告（）定性试验：（）定性试验：出现强度的凝集反应报告阳性（）出现强度的凝集反应报告阳性（）不产生凝集反应报告阴性（）不产生凝集反应报告阴性（）（）定量试验：（）定量试验：出现凝集反应的血清最高稀释倍数为抗体滴度，结出现凝集反应的血清最高稀释倍数为抗体滴度，结果报告滴度为：。果报告滴度为：。也可将每个稀释度的反应强度依次报告，如（全血）也可将每个稀释度的反应强度依次报告，如（全血）（）、（）、（）、（）、（）。有利于疗效观察（）、（）、（）、（）、（）。有利于疗效观察34快速血浆反应素环状卡片试验（)结果报告34快速血浆反应素环状卡片试验（)质量控制质量控制（）内部对照：（）内部对照：试剂盒含有的阳性质控血清，用于检查该盒试剂的试剂盒含有的阳性质控血清，用于检查该盒试剂的有效性。有效性。新开试剂，以新开试剂，以与与每天工作开始前或每批试验开始前，每天工作开始前或每批试验开始前，应常规进行内部对照质控。应常规进行内部对照质控。（）外部对照：（）外部对照：可采取自留阳性标本用作外部对照。可采取自留阳性标本用作外部对照。新开试剂或更换试剂批次，应同时进行外部对照试新开试剂或更换试剂批次，应同时进行外部对照试验，用于检查每批试验结果的重复性和可比性。验，用于检查每批试验结果的重复性和可比性。35快速血浆反应素环状卡片试验（)质量控制35快速血浆反应素环状卡片试验（)质量控制质量控制（）移液器质量控制：强检和定期校准；（）移液器质量控制：强检和定期校准；（）旋转仪质量控制：检查转速；（）旋转仪质量控制：检查转速；（）人员的质量控制：有经验人员的指导下（）人员的质量控制：有经验人员的指导下开展工作、双人核对结果；开展工作、双人核对结果；（）操作的质量控制：反复操作、正确操作。（）操作的质量控制：反复操作、正确操作。36快速血浆反应素环状卡片试验（)质量控制36快速血浆反应素环状卡片试验（)临床意义临床意义（）产生的抗类脂质抗体，未经治疗可长期存在；（）产生的抗类脂质抗体，未经治疗可长期存在；（）经适当治疗后，抗体可以逐渐减少至转为阴（）经适当治疗后，抗体可以逐渐减少至转为阴性；性；（）定性试验结果可用于现症梅毒诊断；（）定性试验结果可用于现症梅毒诊断；（）定量试验结果可用于疗效观察（）定量试验结果可用于疗效观察与与判愈。判愈。37快速血浆反应素环状卡片试验（)临床意义37快速血浆反应素环状卡片试验（)梅毒血清反应假阳性梅毒血清反应假阳性 即非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性的现象。即非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性的现象。（）技术性假阳性反应（）技术性假阳性反应 由于标本保存不当（如由于标本保存不当（如细菌污染或溶血）、试剂质量差或过期、或试验细菌污染或溶血）、试剂质量差或过期、或试验操作错误等所造成。操作错误等所造成。（）生物学假阳性反应（）生物学假阳性反应 非梅毒螺旋体抗原血清非梅毒螺旋体抗原血清学试验采用的抗原为脂类混合物，所检测的抗心学试验采用的抗原为脂类混合物，所检测的抗心磷脂抗体亦可见于其他多种疾病，如自身免疫性磷脂抗体亦可见于其他多种疾病，如自身免疫性疾病、怀孕的妇女，麻风病人。疾病、怀孕的妇女，麻风病人。38快速血浆反应素环状卡片试验（)梅毒血清反应假阳性38 王千秋教授等检测了份血清样本，假阳性率为（）。假阳性中：例为有高危性行为的常规检查者 例孕妇 皮肌炎、尖锐湿疣、龟头破溃各例39 王千秋教授等检测了份血清样本，假阳性率为（）。39快速血浆反应素环状卡片试验（)梅毒血清反应假阳性的处理梅毒血清反应假阳性的处理（）技术性假阳性反应：实验前检查试剂的有效（）技术性假阳性反应：实验前检查试剂的有效性、重复操作排除人为操作错误等；性、重复操作排除人为操作错误等；（）生物学假阳性反应：应做（）生物学假阳性反应：应做()()等试验进行排除等试验进行排除 单一（非特异性抗体血清试验）结果阳性，不能作为梅毒的确定型诊断试验结果，需用梅毒螺旋体抗原血清试验进行确证。40快速血浆反应素环状卡片试验（)梅毒血清反应假阳性的处理 快速血浆反应素环状卡片试验（)前带现象前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清学试验中，有时血指非梅毒螺旋体抗原血清学试验中，有时血清中存在高浓度的反应素导致抗原抗体浓度不匹清中存在高浓度的反应素导致抗原抗体浓度不匹配，出现弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而配，出现弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又像早期梅毒（一期和二期），此时将血临床上又像早期梅毒（一期和二期），此时将血清稀释后再进行试验，可出现阳性结果的现象。清稀释后再进行试验，可出现阳性结果的现象。41快速血浆反应素环状卡片试验（)前带现象41快速血浆反应素环状卡片试验（)血清固定血清固定 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。血清试验在一定时期内不阴转。早期的血清固定常与治疗不足或不规则治疗、早期的血清固定常与治疗不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。病期不明的潜伏梅毒患者血清固定发生率显病期不明的潜伏梅毒患者血清固定发生率显著增高，应加强对潜伏梅毒的筛查和著增高，应加强对潜伏梅毒的筛查和与与时治疗。时治疗。42快速血浆反应素环状卡片试验（)血清固定42快速血浆反应素环状卡片试验（)用于脑脊液的检测，近年来也有不少研究。用于脑脊液的检测，近年来也有不少研究。有作者在对例各期梅毒患者有作者在对例各期梅毒患者与与例非梅毒神经系统疾例非梅毒神经系统疾病患者的脑脊液进行试验并作统计分析：病患者的脑脊液进行试验并作统计分析：脑脊液敏感性为、特异性为脑脊液敏感性为、特异性为 脑脊液敏感性为、特异性为脑脊液敏感性为、特异性为 结论：可以代替用于神经梅毒的诊断。结论：可以代替用于神经梅毒的诊断。但是？但是？43快速血浆反应素环状卡片试验（)用于脑脊液的检测，近年来也有不快速血浆反应素环状卡片试验（)注意事项注意事项、使用无菌生理盐水；标本无严重脂血、溶血和、使用无菌生理盐水；标本无严重脂血、溶血和细菌污染细菌污染、正确操作，移液器吸头保证在血清血浆液面以、正确操作，移液器吸头保证在血清血浆液面以下但不能接触反应纸板；防止产生气泡；下但不能接触反应纸板；防止产生气泡；、每批次标本数量不宜过多，防止干燥或血清水、每批次标本数量不宜过多，防止干燥或血清水分挥发，分挥发，、实验前应检查水平旋转仪转速，常规进行质量、实验前应检查水平旋转仪转速，常规进行质量控制；控制；、稀释后摊开液面是顺序应从低浓度向高浓度进、稀释后摊开液面是顺序应从低浓度向高浓度进行；行；、反应完毕应、反应完毕应与与时观察结果。时观察结果。44快速血浆反应素环状卡片试验（)注意事项44梅毒螺旋体抗原血清学试验试验原理：试验原理：以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者几乎终生阳性。试验呈阳性，则患者几乎终生阳性。45梅毒螺旋体抗原血清学试验试验原理：45梅毒螺旋体抗原血清学试验试验方法：试验方法：（）梅毒螺旋体颗粒凝集试验（）（）梅毒螺旋体颗粒凝集试验（）（）梅毒螺旋体血球凝集试验（）（）梅毒螺旋体血球凝集试验（）（）梅毒酶联免疫吸附试验（）（）梅毒酶联免疫吸附试验（）（）梅毒免疫层析法（）梅毒免疫层析法梅毒快速检测（）梅毒快速检测（）（）荧光螺旋体抗体吸收试验（）（）荧光螺旋体抗体吸收试验（）（）化学发光免疫分析法（）（）化学发光免疫分析法（）（）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（）（）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（）46梅毒螺旋体抗原血清学试验试验方法：46 感染梅毒螺旋体后周内，机体会产生特异感染梅毒螺旋体后周内，机体会产生特异的梅毒螺旋体抗体。具有较高的敏感性和特异性。的梅毒螺旋体抗体。具有较高的敏感性和特异性。是目前公认的梅毒抗原血清学试验的金标是目前公认的梅毒抗原血清学试验的金标准。准。4747试验原理图48试验原理图48试验仪器耗材试验仪器耗材（）试剂盒（）试剂盒 “”溶解液：用于溶解致敏颗粒溶解液：用于溶解致敏颗粒“”和非致敏和非致敏颗粒颗粒“”“”血清稀释液：用于血清标本的稀释血清稀释液：用于血清标本的稀释 “”冻干的致敏颗粒冻干的致敏颗粒 “”冻干的非致敏颗粒冻干的非致敏颗粒 “”阳性质控血清：为含梅毒抗体的兔血清制阳性质控血清：为含梅毒抗体的兔血清制品，最终滴度，品，最终滴度，（）微量振荡器（）微量振荡器（）移液器（）移液器与与吸头吸头（）保湿盒（）保湿盒 49试验仪器耗材49试验检验流程试验检验流程（）试剂准备：试验前复温分钟（）试剂准备：试验前复温分钟（）加稀释液（液）（）加稀释液（液）（）标本稀释（）标本稀释（）加致敏、未致敏颗粒（）加致敏、未致敏颗粒（）混合：微量振荡器震荡秒（）混合：微量振荡器震荡秒（）反应：置湿盒，（）反应：置湿盒，至少小时至少小时（）观察凝集反应强度（）观察凝集反应强度50试验检验流程50试验检验流程试验检验流程稀释液标本稀释液稀释液稀释液吸取吸取吸取弃掉未致敏粒子未致敏粒子致敏粒子致敏粒子51试验检验流程稀释液稀释液稀释液稀释液吸取吸取吸取弃掉未致敏粒试验结果判读试验结果判读 首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第孔）首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第孔）如出现凝集，则为无效试验。如出现凝集，则为无效试验。如无凝集，则根据致敏粒子反应孔标本与致如无凝集，则根据致敏粒子反应孔标本与致敏粒子是否产生凝集反应，判断结果。敏粒子是否产生凝集反应，判断结果。52试验结果判读52凝集反应分级凝集反应分级：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠；：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠；：粒子光滑覆盖大部分孔底；：粒子光滑覆盖大部分孔底；：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环；：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环；：粒子光滑聚集覆盖孔子，周围有一明显细胞环；：粒子光滑聚集覆盖孔子，周围有一明显细胞环；：粒子沉集孔底，中央形成一小点；：粒子沉集孔底，中央形成一小点；：粒子紧密沉积孔底中央。：粒子紧密沉积孔底中央。53凝集反应分级535454结果报告结果报告 未致敏粒子反应孔不出现凝集，致敏粒子反未致敏粒子反应孔不出现凝集，致敏粒子反应孔出现凝集反应报告阳性（）；应孔出现凝集反应报告阳性（）；未致敏粒子与致敏粒子反应孔均未出现凝集未致敏粒子与致敏粒子反应孔均未出现凝集反应报告阴性（）反应报告阴性（）55结果报告55重吸收试验重吸收试验 如标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集者，如标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集者，标本需作重吸收试验：标本需作重吸收试验：（）加非致敏颗粒溶液于小试管内；（）加非致敏颗粒溶液于小试管内；（）加入血清充分混匀，置室温吸收分钟以上；（）加入血清充分混匀，置室温吸收分钟以上；（）离心分钟，吸取上清液加入第孔；（）离心分钟，吸取上清液加入第孔；（）第孔加血清稀释液；（）第孔加血清稀释液；（）孔吸取至孔，混匀后弃去；（）孔吸取至孔，混匀后弃去；（）分别加致敏与未致敏颗粒（试验方法同上）（）分别加致敏与未致敏颗粒（试验方法同上）56重吸收试验56临床意义临床意义、特异性高（），阳性可确证为现症或既往感染。、特异性高（），阳性可确证为现症或既往感染。、终生阳性，不能作为疗效观察的指标。、终生阳性，不能作为疗效观察的指标。、不能区分现症或既往感染。、不能区分现症或既往感染。57临床意义57梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（）梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（）是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和酶标记的单克隆羊抗人免疫球蛋加上梅毒血清和酶标记的单克隆羊抗人免疫球蛋白抗体或酶标记的梅毒螺旋体基因重组抗原，形白抗体或酶标记的梅毒螺旋体基因重组抗原，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判定阳性反应。定阳性反应。可用于大样本的血清检测。可用于大样本的血清检测。58梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（）58（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）试验原理：是用重组梅毒螺旋体抗原包被试验原理：是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上待检血清或血浆和酶标记的梅毒固相板条，加上待检血清或血浆和酶标记的梅毒螺旋体基因重组抗原，形成抗原抗体复合物与酶螺旋体基因重组抗原，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判定阳性反应。标记物结合，用酶标仪判定阳性反应。59（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）59（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）检测流程：与其他检测方法相同，按试剂检测流程：与其他检测方法相同，按试剂盒说明书进行对照的设置盒说明书进行对照的设置与与检测。检测。结果判读及报告：结果判读及报告：、根据阳性、阴性对照的值是否在规定的数、根据阳性、阴性对照的值是否在规定的数值范围内以判断试验的有效性，并根据阳性、阴值范围内以判断试验的有效性，并根据阳性、阴性值设定阈值（性值设定阈值（););、标本值大于或等于值报告阳性，否则报告、标本值大于或等于值报告阳性，否则报告阴性。阴性。60（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）60（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）临床意义：临床意义：、同，可用于非梅毒螺旋体血清试验阳性标、同，可用于非梅毒螺旋体血清试验阳性标本的确证试验；本的确证试验；、可用于大样本筛查检测，但阳性标本需进、可用于大样本筛查检测，但阳性标本需进一步进行非梅毒螺旋体血清试验复检，确证是否一步进行非梅毒螺旋体血清试验复检，确证是否为梅毒现症感染者；为梅毒现症感染者；、如对结果存在疑问，可用或其他方法进行、如对结果存在疑问，可用或其他方法进行重复检测。重复检测。61（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）61关于重组抗原 目前已重组的抗原多种，包括：、等。的反应性比较高，趋向于将种或种以上重组抗原联合使用，综合其特性，从而获得更高的特异性和敏感性。62关于重组抗原 62梅毒螺旋体抗体快速免疫层析检测法（）梅毒螺旋体抗体快速免疫层析检测法（）检测原理：检测原理：以硝酸纤维素膜为载体，将重组的梅毒螺以硝酸纤维素膜为载体，将重组的梅毒螺旋体抗原固定在膜上，待检标本与标记的梅毒螺旋体抗原固定在膜上，待检标本与标记的梅毒螺旋体特异性抗原结合并沿着固相载体迁移，阳性旋体特异性抗原结合并沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位形成重组抗原特异性抗体标结果在膜上抗原部位形成重组抗原特异性抗体标记的特异性抗原复合物，显示出有色条带，可直记的特异性抗原复合物，显示出有色条带，可直接判读结果。接判读结果。63梅毒螺旋体抗体快速免疫层析检测法（）63检测流程：检测流程：全血和血清血浆标本检测步骤不一样，但全血和血清血浆标本检测步骤不一样，但基本流程为：基本流程为：、加样、加样 、加缓冲液、加缓冲液 、反应、反应 、判读结果、判读结果64检测流程：64临床意义：临床意义：、同、。可采用全血检测，适合于单样本快速筛、同、。可采用全血检测，适合于单样本快速筛查；查；、简单、快速，如结果存在疑问，可用或其他方、简单、快速，如结果存在疑问，可用或其他方法进行重复试验。法进行重复试验。65临床意义：65注意事项：注意事项：、如出现无效结果，应再次仔细阅读说明书，并、如出现无效结果，应再次仔细阅读说明书，并用新的试条重新测试，如问题仍然存在，应停止用新的试条重新测试，如问题仍然存在，应停止使用该批号产品；使用该批号产品；、注意试剂盒的储存条件，以、注意试剂盒的储存条件，以与与反应的温度条件；反应的温度条件；、按试剂盒说明书，反应时间应足够、加样量也、按试剂盒说明书，反应时间应足够、加样量也要准确。要准确。66注意事项：66梅毒螺旋体抗原血清学试验67梅毒螺旋体抗原血清学试验67梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验（）梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验（）检测原理：检测原理：以梅毒螺旋体作为抗原，与经吸收剂吸收以梅毒螺旋体作为抗原，与经吸收剂吸收的梅毒血清抗体反应形成抗原抗体复合物，再加的梅毒血清抗体反应形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（）标记的抗人免疫球蛋白，形成带有入荧光素（）标记的抗人免疫球蛋白，形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下螺旋体荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下螺旋体显出绿色荧光。显出绿色荧光。68梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验（）68 仪器耗材：仪器耗材：、荧光显微镜、荧光显微镜 、试剂盒（梅毒螺旋体抗原片、吸收剂、荧光、试剂盒（梅毒螺旋体抗原片、吸收剂、荧光素标记抗体、阳性对照血清、缓冲液、固定剂）素标记抗体、阳性对照血清、缓冲液、固定剂）、血清稀释板、血清稀释板 、移液器、移液器69 仪器耗材：69 检测流程：检测流程：、血清灭活：将血清标本于、血清灭活：将血清标本于灭活分钟，备用；灭活分钟，备用；、血清稀释：待检血清用吸收剂稀释，阳性血清、血清稀释：待检血清用吸收剂稀释，阳性血清与与阴性血清分别用缓冲液和吸收剂稀释。置阴性血清分别用缓冲液和吸收剂稀释。置 湿湿盒内，分钟；盒内，分钟；、加样：每个涂片分别加入、加样：每个涂片分别加入稀释后的血清或对稀释后的血清或对照，置照，置 湿盒内，分钟；湿盒内，分钟；、洗涤：用液洗玻片次，每次、洗涤：用液洗玻片次，每次,最后用蒸馏水洗最后用蒸馏水洗一次，冷风干燥；一次，冷风干燥；、加荧光抗体：每个涂片加、加荧光抗体：每个涂片加按要求稀释的荧光按要求稀释的荧光抗体，置抗体，置 湿盒内，分钟；湿盒内，分钟；、洗涤：同步骤；、洗涤：同步骤；、封片镜检：用固定剂封片，读片。、封片镜检：用固定剂封片，读片。70 检测流程：70 对照设置：对照设置：每次试验必须设个对照涂片，包括：每次试验必须设个对照涂片，包括：、缓冲液、缓冲液 、吸收剂、吸收剂 、液稀释阳性血清、液稀释阳性血清 、液稀释阴性血清、液稀释阴性血清 、吸收剂稀释阳性血清、吸收剂稀释阳性血清 、吸收剂稀释阴性血清、吸收剂稀释阴性血清71 对照设置：71 结果判读：结果判读：对照对照与与涂片荧光强度应符合如下结果方可判读涂片荧光强度应符合如下结果方可判读试验有效：试验有效：、阳性对照（）：、阳性对照（）：、强阳性对照（吸收剂）：、强阳性对照（吸收剂）：、阴性对照（）：、阴性对照（）：、阴性对照（吸收剂）：、阴性对照（吸收剂）：、空白对照（）：、空白对照（）：、空白对照（吸收剂）：、空白对照（吸收剂）：标本涂片在荧光显微镜下见到不同程度发绿标本涂片在荧光显微镜下见到不同程度发绿色荧光的螺旋体报告阳性（），无荧光或微显淡色荧光的螺旋体报告阳性（），无荧光或微显淡绿色荧光报告阴性（）绿色荧光报告阴性（）72 结果判读：72 临床意义：临床意义：是梅毒螺旋体抗原血清试验的是梅毒螺旋体抗原血清试验的“金标准金标准”，其临床意义同试验。，其临床意义同试验。脑脊液的试验阴性可排除神经梅毒，但特脑脊液的试验阴性可排除神经梅毒，但特异性不高，存在假阳性。异性不高，存在假阳性。操作繁琐、费时，需要高质量荧光显微镜操作繁琐、费时，需要高质量荧光显微镜和技术熟练的操作人员，一般不作为常规临床实和技术熟练的操作人员，一般不作为常规临床实验室检测方法。验室检测方法。73 临床意义：73梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析法（梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析法（)检测原理：检测原理：利用双抗原夹心法化学发光免疫分析原理，采利用双抗原夹心法化学发光免疫分析原理，采用多种梅毒螺旋体特异抗原包被固相发光微孔板，用多种梅毒螺旋体特异抗原包被固相发光微孔板，用辣根过氧化物酶标记相同蛋白抗原作为标记抗用辣根过氧化物酶标记相同蛋白抗原作为标记抗原，与样本中梅毒螺旋体原，与样本中梅毒螺旋体 抗体形成双抗原夹心复抗体形成双抗原夹心复合物后，加入化学发光底物，测定其发光值（），合物后，加入化学发光底物，测定其发光值（），根据值判断结果根据值判断结果74梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析法（)74仪器耗材仪器耗材 、化学发光免疫分析仪；、化学发光免疫分析仪；、微孔洗板机（全自动系统无需单独配置）；、微孔洗板机（全自动系统无需单独配置）；、微量振荡器（全自动系统无需单独配置）；、微量振荡器（全自动系统无需单独配置）；、恒温箱：、恒温箱：（全自动系统无需单独配置）；（全自动系统无需单独配置）；、移液器、计时器；、移液器、计时器；、新鲜制备的蒸馏水或去离子水；、新鲜制备的蒸馏水或去离子水；75仪器耗材75手工操作检测方法手工操作检测方法 、试剂准备：试剂自冰箱中取出，室温平衡分、试剂准备：试剂自冰箱中取出，室温平衡分钟；钟；、微孔板条准备：根据试剂盒要求设置的对照、微孔板条准备：根据试剂盒要求设置的对照、以以与与样本数量准备微孔板条；样本数量准备微孔板条；、加样：空白对照孔不加任何对照和样本，其余、加样：空白对照孔不加任何对照和样本，其余分别按要求加入阴性对照、阳性对照及待检样本分别按要求加入阴性对照、阳性对照及待检样本各各；、加酶标记物：除空白对照孔外，其余每孔加入、加酶标记物：除空白对照孔外，其余每孔加入酶标记物酶标记物；、温育：用微量振荡器震荡混匀、温育：用微量振荡器震荡混匀，封闭微孔板，封闭微孔板，置温育箱；置温育箱；76手工操作检测方法76手工操作检测方法手工操作检测方法 、洗板：用稀释后的洗涤液洗板次，每次洗涤、洗板：用稀释后的洗涤液洗板次，每次洗涤液不少于液不少于，每次浸泡，每次浸泡，最后在干净的吸水纸，最后在干净的吸水纸上拍干；上拍干；、加底物液：每孔加入现配的化学发光底物工作、加底物液：每孔加入现配的化学发光底物工作液液，用微量振荡器震荡混匀，用微量振荡器震荡混匀；、检测：室温静置（、检测：室温静置（）、避光反应，立刻测）、避光反应，立刻测量各孔发光值。量各孔发光值。77手工操作检测方法77 结果判读结果判读与与报告报告 根据化学发光免疫分析仪测量的发光值（）根据化学发光免疫分析仪测量的发光值（）自动判读结果。自动判读结果。标本值大于或等于值，报告阳性；标本值大于或等于值，报告阳性；标本值小于值，报告阴性。标本值小于值，报告阴性。的临床意义同的临床意义同 年有文献报道，以作为金标准，其年有文献报道，以作为金标准，其 敏感性：敏感性：特异性：特异性：78 结果判读与报告78 注意事项注意事项、检测结果需要、检测结果需要与与时进行测量；时进行测量；、血清标本若含少许红、白细胞，会导致假阳性、血清标本若含少许红、白细胞，会导致假阳性结果；结果；、黄疸或严重污染的样本将导致错误的结果；、黄疸或严重污染的样本将导致错误的结果；、不能用叠氮钠做样本的防腐剂；、不能用叠氮钠做样本的防腐剂；、确保血清样本离心处理前已充分凝集；、确保血清样本离心处理前已充分凝集；、消毒液等强氧化剂能引起发光底物液发生反应；、消毒液等强氧化剂能引起发光底物液发生反应；、严格控制每步反应的时间和温度，各试剂必须、严格控制每步反应的时间和温度，各试剂必须摇匀后使用，且应平衡至少分钟，尽量缩短加样、摇匀后使用，且应平衡至少分钟，尽量缩短加样、加试剂的时间；加试剂的时间；、加发光底物的移液器建议专用。吸头应确保无、加发光底物的移液器建议专用。吸头应确保无污染。污染。79 注意事项79梅毒抗体检测 细菌、病毒感染后的早期体液免疫应答反应，结果是抗体的产生，在梅毒螺旋体的感染中也不例外。抗体出现在感染的潜伏期、早期梅毒患者与晚期病人。抗体不能通过胎盘屏障及完整无损的血脑屏障，因此：若在新生儿血中检测到抗体是产前感染的诊断依据；若在完整无损的血脑屏障的脑脊液中出现，则提示患有活动性神经梅毒。80梅毒抗体检测 细菌、病毒感染后的早期体液免疫应答反应梅毒抗体检测 可采用抗单克隆抗体的酶标法、蛋白印迹法等进行检测。目前测定抗体的方法的敏感性不高，但检查到抗体则有助于以下病例的临床诊断：先天梅毒、早期一期梅毒、晚期梅毒、非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗体阳转前的早期感染病人的判愈试验以与有梅毒史或其他螺旋体感染史病人的再感染。81梅毒抗体检测 可采用抗单克隆抗体的酶标法、蛋白印迹法等 龚匡隆教授等就现用梅毒血清试验临床应用价值进行了评估治疗前的敏感度 一期梅毒（硬下疳）二期梅毒 早期潜伏梅毒 正规治疗月后的敏感度 一期梅毒（硬下疳）二期梅毒 早期潜伏梅毒 82 龚匡隆教授等就现用梅毒血清试验临床应用价值进先天梅毒的实验室诊断方法依据实验指标诊断依据实验指标诊断查到螺旋体；查到螺旋体；非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度持续上升；非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度持续上升；滴度高于母亲倍（高于个稀释滴度）；滴度高于母亲倍（高于个稀释滴度）；检测到抗梅毒的特异性抗体阳性；检测到抗梅毒的特异性抗体阳性；随访个月观察抗体的变化（主要是指特异性抗体）。随访个月观察抗体的变化（主要是指特异性抗体）。83先天梅毒的实验室诊断方法依据实验指标诊断83神经梅毒的实验室诊断实验室诊断标准实验室诊断标准梅毒螺旋体血清学检测阳性；梅毒螺旋体血清学检测阳性；脑脊液白细胞计数或蛋白质测定结果异常；脑脊液白细胞计数或蛋白质测定结果异常；脑脊液试验阳性；脑脊液试验阳性；脑脊液检测到抗体。脑脊液检测到抗体。84神经梅毒的实验室诊断实验室诊断标准84检测方法评价 各种检测方法在临床应用中都存在一定的局限性。、梅毒的临床诊断：（）特征性皮损中检测到梅毒螺旋体；（）血清中检测到抗体。、梅毒的表现非常复杂，感染后可不出现皮损或皮损不明显，检测不到抗原；、感染极早期或窗口期的存在，检测不到抗体。85检测方法评价 各种检测方法在临床应用中都存在检测方法评价血清学检测是目前提供诊断依据的主要的梅毒实验室检测方法。、但检测脑脊液中的抗体时，更具有临床诊断价值。、对病人进行治疗效果的随访观察，需根据或定量试验与抗体滴度的变化进行判断。、抗原血清试验都是检测特异性梅毒螺旋体抗体。无论采用哪一种梅毒螺旋体抗原抗体检测方法，都不能代替非梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义。86检测方法评价血清学检测是目前提供诊断依据的主要的梅毒实验室检8787非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图治疗前治疗后阳性：阴性：一期：二期：早期潜伏：晚期潜伏：三期：早期晚期88非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图治疗前治疗后阳性：阴梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图治疗前治疗后阳性：阴性：一期：二期：早期潜伏：晚期潜伏：三期：早期晚期89梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图治疗前治疗后阳性：阴性梅毒血清学试验结果的临床意义汇总梅毒血清学试验结果的临床意义汇总试验结果主要临床意义等等现症梅毒或接受过治疗的晚期梅毒排除梅毒感染或极早期梅毒（窗口期）或极晚期非梅毒螺旋体抗原血清试验假阳性临床治愈的早期梅毒（既往感染）或极早期梅毒90梅毒血清学试验结果的临床意义汇总试验结果等等现症梅毒排除梅毒应用策略梅毒血清学检测的目的：临床诊疗、血液筛查、梅毒血清学检测的目的：临床诊疗、血液筛查、流行病学监测、高危人群筛查和干预等。流行病学监测、高危人群筛查和干预等。无论什么目的，都需要根据非梅毒螺旋体抗原血无论什么目的，都需要根据非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原血清试验这两类血清学清试验和梅毒螺旋体抗原血清试验这两类血清学检测方法的特性进行结果判断。检测方法的特性进行结果判断。91应用策略梅毒血清学检测的目的：临床诊疗、血液筛查、流行病学监应用策略在实际应用中，可根据实际目的选择任何一类梅在实际应用中，可根据实际目的选择任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查；毒血清学检测方法作为筛查；但初筛阳性结果需经另一类梅毒血清学检测方法但初筛阳性结果需经另一类梅毒血清学检测方法复检确证，才能够为临床诊断或疫情报告等提供复检确证，才能够为临床诊断或疫情报告等提供依据。依据。应用策略有三种方法。应用策略有三种方法。92应用策略在实际应用中，可根据实际目的选择任何一类梅毒血清学检应用策略 采用非梅毒螺旋体抗原血清试验进行筛查非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验（以（以RPR为例）为例）阳性阳性阴性阴性报告报告RPR阴性阴性RPR定量定量试验试验梅毒螺旋体抗原梅毒螺旋体抗原血清试验复检血清试验复检（以（以TPPA为例）为例）阳性阳性阴性阴性报告报告RPR阳性、阳性、TPPA阴性阴性报告报告RPR阳性及滴度、阳性及滴度、TPPA阳性阳性93应用策略 采用非梅毒螺旋体抗原血清试验进行筛查非梅毒螺应用策略 如果梅毒螺旋体抗原血清试验，采用的是、等方法，在遇到阳性（）而等试验为阴性（）时，可采用方法进行进一步验证其阴性结果。94应用策略 94应用策略 采用梅毒螺旋体抗原血清试验进行筛查梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验（以（以ELISA为例）为例）阳性阳性阴性阴性报告报告ELISA阴性阴性结果结果非梅毒螺旋体抗原非梅毒螺旋体抗原血清定性血清定性/定量试验（以定量试验（以RPR为例）为例）（以（以TPPA为例）为例）阳性阳性阴性阴性报告报告ELISA阳性阳性、RPR阴性阴性报告报告ELISA阳性、阳性、RPR阳性及滴度阳性及滴度95应用策略 采用梅毒螺旋体抗原血清试验进行筛查梅毒螺旋体应用策略 如果梅毒螺旋体抗原血清试验，采用的是、等方法，在遇到阳性（）而试验为阴性（）时，推荐采用方法进行进一步验证其阳性结果。（试剂比对中发现：敏感性较高、相对于方法来说，存在一定的假阳性）96应用策略 96应用策略 第三种方法：将梅毒螺旋体抗原血清试验与非梅毒螺旋体抗原血清试验同时开展。在临床上对于等阳性标本，由于同时开展了等试验，有利于生物学假阳性的排除，不会造成治疗上的浪费和虚假疫情的报告；对于等试验阳性的标本，由于同时开展了等试验，有利于确证现症患者，使疫情报告更加真实，同时可对疗效进行观察和随访。97应用策略 第三种方法：97应用策略 无论使用哪一种策略，出具结果报告时，均需要注明采用的具体方法。作为临床医生，在取得检验报告时，应根据病人的具体情况，进行分析和下诊断结论。比如：、患者虽没有明显的皮肤表现、但近期有高危性行为、在接到阳性、阴性结果时该怎么解释？（既往感染已治愈？近期感染早期梅毒？）、患者否认高危性行为，在接到阴性、阳性结果时，怎么解释？（生物学假阳性、其他免疫性疾病）98应用策略 无论使用哪一种策略，出具结果报告时，梅毒血清学检测实验室质量控制梅毒血清学检测实验室质量控制、等属三类病原微生物。、人员、环境条件：、检测方法和试剂的选择、设备的维护和校准、标准操作程序和文件的管理99梅毒血清学检测实验室质量控制、等属三类病原微生物。99梅毒血清学检测方法分几类？梅毒血清学检测方法分几类？各试验原理以各试验原理以与与为什么梅毒实验室诊断需要依据非梅毒螺为什么梅毒实验室诊断需要依据非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原血清试验这两类方法旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原血清试验这两类方法的结果？的结果？哪些方法可用于梅毒的初筛试验？哪些方法可用于梅毒的初筛试验？100梅毒血清学检测方法分几类？100谢谢！谢谢！101