梅毒实验室检测及分析课件

梅毒螺旋体梅毒螺旋体n n梅毒是一种性传播疾病，病原体为梅毒螺旋体，属于梅毒是一种性传播疾病，病原体为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种(Treponema(Treponema pallidum subspecies pallidum)pallidum subspecies pallidum)极细亚种 雅司病地方亚种 地方性梅毒苍白亚种 梅毒苍白螺旋体品他螺旋体品他病 密螺旋体属梅毒螺旋体梅毒是一种性传播疾病，病原体为梅毒螺旋体，属于密1青岛大学附属医院梅毒螺旋体的生物学特性梅毒螺旋体的生物学特性1 1、直径直径 0.100.15m0.100.15m，有，有814814个致密而规则的小螺旋个致密而规则的小螺旋 ，两，两端尖直。端尖直。2 2、原生质圆柱体上紧绕着、原生质圆柱体上紧绕着3434根周浆鞭毛，故运动活跃，运动根周浆鞭毛，故运动活跃，运动方式多样。方式多样。3 3、G-G-，但不易着色，镀银染色呈棕褐色。，但不易着色，镀银染色呈棕褐色。4 4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。5 5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉素、四环素、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉素、四环素、红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易生存。肥皂水和一般红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易生存。肥皂水和一般消毒剂以及加温消毒剂以及加温4242以上均极易将其杀灭。以上均极易将其杀灭。青岛大学附属医院梅毒螺旋体的生物学特性1、直径 0.1002 梅毒螺旋体梅毒螺旋体 梅毒螺旋体3传播途径传播途径n n性接触是主要的传染途径性接触是主要的传染途径 未经治疗的患者在感染后的未经治疗的患者在感染后的1 1年内最具有传染性年内最具有传染性 随着病期的延长，传染性越来越小随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后到感染后2 2年，通过性接触一般无传染性年，通过性接触一般无传染性n n母婴传播母婴传播 在妊娠在妊娠7 7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期虽已无性传播（病期22年），但妊娠时仍可传染给胎儿年），但妊娠时仍可传染给胎儿病期越长，传染性越小病期越长，传染性越小;n n输血传染输血传染n n间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接触间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接触部位附有梅毒螺旋体）部位附有梅毒螺旋体）。传播途径性接触是主要的传染途径4梅毒的分期梅毒的分期梅毒的分期5 梅毒的诊断梅毒的诊断n n梅毒的诊断梅毒的诊断 早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隐性梅毒）梅毒（三期和晚期隐性梅毒）必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析n n梅毒的实验室检查梅毒的实验室检查 结果对诊断有决定性意义结果对诊断有决定性意义 梅毒的诊断梅毒的诊断6 常用梅毒实验室检测方法常用梅毒实验室检测方法n n病原学检测病原学检测病原学检测病原学检测n n血清学检测血清学检测血清学检测血清学检测 常用梅毒实验室检测方法7病原学检查病原学检查n n取材方法取材方法一期、二期梅毒时，一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组结穿刺术得到的组织液织液病原学检查取材方法8暗视野显微镜暗视野显微镜暗视野显微镜9镀银染色镀银染色10病原学检查的临床意义病原学检查的临床意义n n病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。毒，且具有快速、方便、易操作的特点。n n螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。有十分重要的意义。n n如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。病原学检查的临床意义病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床11梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测方法1.1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）（非特异性梅毒抗体）2.2.梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）（特异性梅毒抗体）梅毒血清学检测方法12梅毒螺旋体非特异性抗体血清学试验梅毒螺旋体非特异性抗体血清学试验n n原理原理原理原理（抗心磷脂抗体）：（抗心磷脂抗体）：人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。体（反应素）。主要是主要是IgMIgM和和IgGIgG混合抗体。混合抗体。n n抗体产生时间抗体产生时间 感染感染3 3周周-4-4周，硬下疳出现周，硬下疳出现1 1周周-2-2周周 n n抗体作用抗体作用 无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。梅毒螺旋体非特异性抗体血清学试验原理（抗心磷脂抗体）：13原理和方法原理和方法n n反应原理反应原理反应原理反应原理抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见n n抗原基本成分抗原基本成分抗原基本成分抗原基本成分心磷脂、卵磷脂和胆固醇心磷脂、卵磷脂和胆固醇n n方法包括：方法包括：方法包括：方法包括：快速血浆反应素环状卡片试验快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)(RPR)不加热血清反应素不加热血清反应素(USR)(USR)甲苯胺红不加热血清试验（甲苯胺红不加热血清试验（TRUSTTRUST）性病研究实验室试验性病研究实验室试验(VDRL)(VDRL)等。等。原理和方法反应原理14RPRRPR定量试验定量试验n n中等至大的凝块为阳性（圈中等至大的凝块为阳性（圈4 4和和7 7）有明确凝块）有明确凝块但很但很小的小的为弱阳性（圈为弱阳性（圈2 2和和3 3）颗粒均匀分布（圈）颗粒均匀分布（圈1,5,8-1,5,8-1010）或稍粗糙（圈）或稍粗糙（圈6 6）为阴性）为阴性RPR定量试验中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明确凝块但15TRUST试验结果试验结果TRUST试验结果16临床意义临床意义n n早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3 3个月，梅个月，梅毒抗体滴度下降毒抗体滴度下降2 2个稀释度，个稀释度，6 6个月下降个月下降4 4个稀释度。个稀释度。一期梅毒一期梅毒1 1年后转为阴性年后转为阴性 二期梅毒二期梅毒2 2年后转为阴性。年后转为阴性。晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2 2年后约年后约50%50%病人血病人血清反应仍为阳性清反应仍为阳性n n早期梅毒硬下疳出现早期梅毒硬下疳出现1 1周周-2-2周后，血清可呈阳性。周后，血清可呈阳性。n n经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判断经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判断痊愈、复发或再感染的指征。痊愈、复发或再感染的指征。临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，17假阳性问题假阳性问题n n假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性技术性假阳性技术性假阳性技术性假阳性技术性假阳性由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。生物学假阳性生物学假阳性生物学假阳性生物学假阳性是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性梅毒血清试验出现阳性假阳性问题假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性18急性生物学假阳性反应的疾病急性生物学假阳性反应的疾病风疹风疹风疹风疹水痘水痘水痘水痘传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症传染性肝炎传染性肝炎传染性肝炎传染性肝炎上呼吸道感染上呼吸道感染上呼吸道感染上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎肺炎球菌性肺炎肺炎球菌性肺炎肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎病毒性肺炎病毒性肺炎病毒性肺炎牛痘疹牛痘疹牛痘疹牛痘疹急性生物学假阳性反应的疾病风疹19慢性生物学假阳性反应的疾病慢性生物学假阳性反应的疾病n n系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮 n n自身免疫性溶血性贫血自身免疫性溶血性贫血n n盘状红斑狼疮盘状红斑狼疮 n n结节性多动脉炎结节性多动脉炎 n n类风湿性关节炎类风湿性关节炎 n n桥本氏甲状腺炎桥本氏甲状腺炎n n风湿性心脏病风湿性心脏病n n干燥综合征干燥综合征n n毒品瘾者毒品瘾者 n n慢性肾炎慢性肾炎n n肝硬化肝硬化n n老年老年 n n麻风麻风 (是唯一产生慢性生是唯一产生慢性生物学假阳性的感染性疾病物学假阳性的感染性疾病)慢性生物学假阳性反应的疾病系统性红斑狼疮 风湿性心脏病20特异性梅毒螺旋体抗体特异性梅毒螺旋体抗体试验原理试验原理n n检测血中以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（检测血中以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（IgG IgG 和和IgM IgM）。）。n n特异性特异性IgMIgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染型抗梅毒螺旋体抗体，感染2 2周后即可测周后即可测出。出。特异性梅毒螺旋体抗体试验原理检测血中以梅毒螺旋体特异蛋白为抗21实验方法实验方法n n 梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)(TPPA)n n 梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)(TPHA)n n 梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISATP-ELISA）n n 梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法-梅毒快速检测梅毒快速检测(RT)(RT)n n 荧光螺旋体抗体吸收试验（荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）n n 化学发光免疫分析法（化学发光免疫分析法（CLIACLIA）n n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WBWB）实验方法 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)22TPPA/TPHA原理原理n nTPPATPPA试验原理与试验原理与TPHATPHA试验基本相同试验基本相同 TPPATPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 TPHATPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞n n特点特点 梅毒螺旋体梅毒螺旋体(Nichols(Nichols株株)全抗原全抗原TPPA/TPHA原理TPPA试验原理与TPHA试验基本相23梅毒实验室检测及分析课件24TP-ELISAn n原理原理原理原理 用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判定试验阳性反应。物与酶标记物结合，用酶标仪判定试验阳性反应。n n特点特点 本法可用于大规模血清检测。本法可用于大规模血清检测。TP-ELISA原理25免疫层析免疫层析免疫层析26梅毒实验室检测及分析课件27临床应用临床应用n n梅毒螺旋体特异性抗体试验的作用是作为证实试验，梅毒螺旋体特异性抗体试验的作用是作为证实试验，以以TPPA/TPHATPPA/TPHA的特异性和敏感性最高。的特异性和敏感性最高。n n它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。性还是假阳性。n n 一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。临床应用梅毒螺旋体特异性抗体试验的作用是作为证实试验，以TP28方法特点方法特点n n特异性强，敏感性高特异性强，敏感性高 很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有有有有1%1%的的生物学假阳性发生。生物学假阳性发生。如系统性红斑狼疮患者血清可使试验呈假阳性反应，如系统性红斑狼疮患者血清可使试验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使可使TPHATPHA呈假阳性。呈假阳性。麻风患者也可使特异试验呈阳性。麻风患者也可使特异试验呈阳性。方法特点特异性强，敏感性高29梅毒特异性抗体检测的应用梅毒特异性抗体检测的应用n n作为作为RPRRPR初筛阳性标本的确证试验。初筛阳性标本的确证试验。n n不能作为疗效观察的指标。不能作为疗效观察的指标。n n阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合RPRRPR结果进行结果进行诊断。诊断。n n老年人抗体阳性的问题：这些老年患者所患的基础疾病可老年人抗体阳性的问题：这些老年患者所患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或抗梅毒抗体的交或抗梅毒抗体的交叉抗原；叉抗原；n nTPPATPPA敏感性高，特异性好，作为确证实验。敏感性高，特异性好，作为确证实验。梅毒特异性抗体检测的应用作为RPR初筛阳性标本的确证试验。30临床病例分析临床病例分析1n n病例：某患者，男，病例：某患者，男，6565岁，梅毒抗体检测结果为：岁，梅毒抗体检测结果为：TPTP抗体（时间分辨）：抗体（时间分辨）：1.25 S/CO(1.0)1.25 S/CO(1.0)阳性阳性 TPPATPPA检测结果：阴性检测结果：阴性 时间分辨敏感性太高，假阳性。时间分辨敏感性太高，假阳性。临床病例分析1病例：某患者，男，65岁，梅毒抗体检测结果31临床病例分析临床病例分析2n n病例：某患者，男，病例：某患者，男，4040岁，梅毒检测结果为：岁，梅毒检测结果为：TPTP抗体（时间分辨）抗体（时间分辨）:24.65 :24.65 S/CO(1.0)S/CO(1.0)阳性阳性 TPPA:TPPA:阳性阳性 TRUST:TRUST:阴性阴性梅毒既往感染，已治愈。梅毒既往感染，已治愈。临床病例分析2病例：某患者，男，40岁，梅毒检测结果为：32临床病例分析临床病例分析3n n病例：某患者，男，病例：某患者，男，3030岁，梅毒检测结果为：岁，梅毒检测结果为：TPTP抗体（时间分辨）：阳性抗体（时间分辨）：阳性 TPPA:TPPA:阳性阳性 TRUST:TRUST:阳性，滴度阳性，滴度1:32.1:32.梅毒螺旋体现症感染，活动期。梅毒螺旋体现症感染，活动期。临床病例分析3病例：某患者，男，30岁，梅毒检测结果为33临床病例分析临床病例分析4n n病例：某患者，男，病例：某患者，男，6161岁，梅毒检测结果为：岁，梅毒检测结果为：TPTP抗体（时间分辨）抗体（时间分辨）0.14 S/CO(1.0)0.14 S/CO(1.0)TPPA:TPPA:阴性阴性 TRUST:TRUST:阳性，滴度阳性，滴度1:11:1阳性，阳性，1:21:2阴性阴性.TRUST结果假阳性。临床病例分析4病例：某患者，男，61岁，梅毒检测结果为34临床病例分析临床病例分析5n n病例：某患者，男，病例：某患者，男，3535岁，梅毒检测结果为：岁，梅毒检测结果为：TPTP抗体（时间分辨）抗体（时间分辨）2.14 S/CO(1.0)2.14 S/CO(1.0)TPPA:TPPA:阳性阳性 TPTP抗体（胶体金）：阴性抗体（胶体金）：阴性胶体金敏感性太低，假阴性。胶体金敏感性太低，假阴性。临床病例分析5病例：某患者，男，35岁，梅毒检测结果为35n n n Thank YOU36