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药物分析药物分析(药物分析专论药物分析专论)药物分析教研室药物分析教研室孙立新孙立新副教授副教授药物结构药物结构性质性质分析方法分析方法第四章芳酸类药物的分析第四章芳酸类药物的分析TheAnalysisofAromaticAcidsl第一节概述第一节概述一、分类羧基直接与苯环相连接的药物。根据结构分为:水杨酸类苯甲酸类其它芳酸l1、水杨酸类水杨酸类l代表药物有阿斯匹林水杨酸钠对氨基水杨酸钠l2、苯甲酸类苯甲酸类l代表药物苯甲酸钠氨甲苯酸泛影酸l3、其它芳酸其它芳酸l代表药物止血敏布洛酚l二、性质二、性质l1、性状：、性状：l大多数是结晶性固体大多数是结晶性固体l少少数数为为液液体体水水杨杨酸酸甲甲酯酯、苯苯甲甲酸酸苄酯苄酯l2、溶解性：、溶解性：l游游离离芳芳酸酸类类药药物物，几几乎乎不不溶溶于于水水，易溶于有机溶剂易溶于有机溶剂l芳酸碱金属盐易溶于水芳酸碱金属盐易溶于水l3、酸性：芳酸类药物分子中具有COOH，所以显弱酸性药用芳酸pKa在36之间。具有酸性，可以与碱成盐。l4、紫外吸收：具有苯环，所以具有紫外吸收。一、呈色反响一、呈色反响1、FeCl3反响反响紫堇色第二节鉴别反响第二节鉴别反响+苯甲酸的碱性或中性溶液与三氯化铁试液生成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀。l2、茚三酮反响、茚三酮反响l具具有有类类似似-氨氨基基酸酸结结构构如如氨氨甲甲苯苯酸酸，可可与与茚茚三三酮酮反反响响，产产生生蓝蓝紫紫色色的的缩缩合合物物+二、阿斯匹林水解产物的反响二、阿斯匹林水解产物的反响l三、重氮化三、重氮化-偶合反响偶合反响ll对对氨氨基基水水杨杨酸酸钠钠具具有有芳芳伯伯氨氨基基结结构构，在在盐盐酸酸酸酸性性溶溶液液中中，与与亚亚硝硝酸酸钠钠试试液液发发生生重重氮氮化化反反响响，生生成成重重氮氮盐盐，与与碱碱性性萘萘酚酚偶偶合产生橙红色沉淀。合产生橙红色沉淀。l四、溴代反响四、溴代反响l酚酚羟羟基基邻邻位位、对对位位的的氢氢比比较较活活泼泼，很容易被溴取代。很容易被溴取代。l五、紫外光谱法五、紫外光谱法l六、红外光谱法六、红外光谱法第三节水杨酸类药物的分析第三节水杨酸类药物的分析一、特殊杂质检查一、特殊杂质检查(一一)、阿斯匹林中的杂质检查、阿斯匹林中的杂质检查1、炽灼残渣2、重金属3、易碳化物4、溶液的澄清度检查：、溶液的澄清度检查：检查碳酸钠试液中不溶物检查碳酸钠试液中不溶物酚类如苯酚酚类如苯酚醋酸苯酯醋酸苯酯水杨酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯杂杂质质碳碳酸酸钠钠试试液液中中不不溶溶，而而阿阿斯斯匹匹林林溶溶于于碳酸钠试液。碳酸钠试液。5、水杨酸、水杨酸来源：生产过程中乙酰化不完全或贮藏过程中水解产生。原理：阿斯匹林无酚羟基，不与高铁反响。水扬酸有酚羟基，与高铁反响生成紫堇色(二二)、对氨基水杨酸中的杂质检查、对氨基水杨酸中的杂质检查杂质来源:未反响完全的原料间氨基酚遇热受潮生成间氨基酚,再被氧化成二苯醌型化合物检查方法:双相滴定法(ChP2000)HPLC(USP23)二、含量测定二、含量测定(一一)、阿斯匹林含量测定阿斯匹林含量测定酸碱滴定法酸碱滴定法1直接滴定法原理：阿司匹林具有游离羧基，具有酸性，以标准碱滴定液直接滴定。方法:取本品0.4g,精密称定,加中性乙醇(对酚酞指示液显中性)20ml,溶解后,加酚酞指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定.每1ml的氢氧 化 钠 滴 定 液(0.1mol/L)相 当 于18.02的C9H8O4。中性乙醇：溶解供试品防止酯水解。目的：扣除乙醇中酸的影响。l2.水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法l原理原理:阿斯匹林酯结构在碱性溶液中易阿斯匹林酯结构在碱性溶液中易于水解于水解,参加定量过量的氢氧化钠滴定参加定量过量的氢氧化钠滴定液液,加热使酯水解加热使酯水解,剩余的碱用酸回滴剩余的碱用酸回滴.l需做空白试验校正.l目的：NaOH在加热时易吸收CO2,l用酸回滴定会消耗酸，影响结果l3.两步滴定法两步滴定法适用于阿斯匹林片剂片剂稳定剂:酒石酸或枸橼酸分解产物:水杨酸和醋酸第一步:中和第二步:水解和测定(二)、对氨基水杨酸钠含量测定对氨基水杨酸钠含量测定亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法对氨基水杨酸钠具有芳伯氨基,能在盐酸存在下与亚硝酸钠定量地发生重氮化,生成重氮盐.第四节第四节苯甲酸类药物的分析苯甲酸类药物的分析一、苯甲酸钠的含量测定双相滴定法原理：苯钾酸钠溶于H2O苯甲酸不溶于H2O，溶于乙醚滴定前：苯甲酸钠甲基橙指示剂，呈黄色pH3.14.4红黄滴定中：苯甲酸钠+盐酸苯甲酸滴定终点：过量HCl，使指示剂变橙红色水相乙醚相第一章第一章糖类和苷类药物的分析糖类和苷类药物的分析一、糖类1、医学上的糖类葡萄糖,乳糖半乳糖-葡萄糖,蔗糖葡萄糖-果糖2、分类：糖类就其化学结构来看，属于多羟基醚或羟基酮以及它们的多缩聚体.依其是否能水解及水解产生简单糖分子多少，可分为：1单糖类：a、戊糖：5个C原子b、己糖：6个C原子c、醛糖d、酮糖2双糖类：乳糖，蔗糖3多糖类：淀粉，纤维素3、性质1单糖、双糖为无色固体无色结晶或结晶性粉末或糖浆状液体，易溶于水、不溶于乙醚及其它有机溶剂，微溶于乙醇。2多糖：一般不溶于水。4、鉴别1灼烧试验：糖类直火燃烧并产生焦糖臭味一般用于蔗糖的鉴别2Molish试验糖类浓H2SO4脱水糠醛或糠醛衍生物+a-萘酚呈色3游离醛基或酮基的复原反响：单糖或含半缩醛基的双糖均具有复原性。(4).比旋度蔗糖：不得少于+6610%水溶液乳糖：+52.052.610%水溶液，并100ml中加氨试液0.2ml无水葡萄糖：+52.653.2葡萄糖：+52.55310%水溶液，并100ml中加氨试液0.2ml5、含量测定(1)旋光法Polarimetry旋光度：直线偏振光通过光学活性化合物液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光平面向左或右旋转，旋转的度数称旋光度。比旋度：偏振光透过1dm且1ml中含旋光物质1g的溶液，在一定波长一定温度下测得的旋光度称比旋度。=CL：旋光度；：比旋度ChP2000采用钠光谱的线589.3n测定旋光度，除另有规定外，测定温度20，测定管长度2dm，物质浓度以Cg/ml表示，那么：假设物质浓度用%浓度g/100ml表示，C以C/100代入，那么：即如果被测物质的比旋度a,根据测量得到的比旋度a,由上式即可计算出被测物质的百分浓度。(2)折光率法Refractometry折光率与溶液浓度W/V的关系用下式表示：n：折光率n0：同温度时水的折光率20为1.3330F：经反复试验测得的折光因数P：溶液的百分浓度%，W/Vn=n0+FPsini：光线入射角的正弦sinr：光线折射角的正弦只要求得折射因数F，从溶液的折光率和水溶液的折光率即可计算出溶液的浓度.本法可用于葡萄糖的快速测定，但测定结果较旋光法偏高。折光仪:阿培氏折光计测定前用棱镜或水进行校正。20时水的折光率为1.333025时水的折光率为1.332540时水的折光率为1.3305药物名称VE1.4941.499VK11.5251.528苯甲醇1.5171.522二甲硅油1.4001.410月桂氮卓酮1.4701.473Chp2000未见用于含量测定，但用于纯度检查。二、苷类1、含义：糖类和有羟基的非糖有机化合物缩合成环状缩醛结构的化合物，其水解产生糖+非糖类化合物苷元或称配基2、分类：按苷元的结构分为：1氰苷类如苦杏仁苷2恩苷类如大黄酚3黄酮苷类如芦丁4甾体强心苷类如洋地黄毒苷5皂苷类如甘草皂苷3、构成天然苷类的糖(1)葡萄糖；(2)其他的五碳糖、六碳糖；(3)特殊的去氧糖类洋地黄毒糖4、性质1味苦，中性有的呈酸性，也有呈碱性，称生物碱苷2多为白色结晶，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇，难溶于非极性溶剂中。强心苷类难溶于水，可溶于乙醇及氯仿。5、鉴别1天然产的苷类:均呈左旋性,无复原性.但当苷在碱性或酸性下水解后,生成苷元和糖类,后者多为右旋且具有复原性。鉴别方法：天然苷：左旋性，无复原性已水解苷：右旋，有复原性2Keller-kiliani反响(3)Kedde反响6、含量测定ChP2000对洋地黄毒苷采用比色法、荧光法或色谱法测定。1比色法：地高辛原料、地高辛注射液采用碱性三硝基苯酚显色后，于485nm处比色测定。2荧光法：地高辛片剂含量测定、含量均匀度检查、溶出度采用荧光法测定。是利用洋地黄毒苷+VC+H2O2+HCl产生荧光激发波长360nm，发射波长485nm。第二章第二章醇、醚、醛和酮类药物的分析醇、醚、醛和酮类药物的分析一、醇1、代表药物及特点：CH3CH2OH乙醇甘油二巯丙醇三氯叔丁醇三梨醇结构分析：含-OH醇羟基，可与酸成酯。a-活泼H乙醇、三氯叔丁醇反响在碱性下与碘反响生成碘仿；丙烯醛反响甘油、二巯丙醇，碱性下加热生成丙烯醛；l三氯叔丁醇碱性下加热回流生成氯化钠，可参加定过量硝酸银，过量硝酸银用硫氢酸铵滴定，以硫酸铁铵为指示剂，可以定量测定；l本类药物具有复原性，可采用碘量法或高碘酸法测定。2、鉴别反响(1)碘仿反响a-活泼H：乙醇在OH-下可被碘氧化生成甲酸盐，并生成碘仿臭气或黄色CH3CH2OH+4I2+6NaOHCHI3+5NaI+HCOONa+5H2O三氯叔丁醇同上，碘仿a-活泼H(2)丙烯醛反响：甘油、二巯丙醇在碱性下加热，即产生丙烯醛的刺激性臭气。+2H2O(3)沉淀反响：+PbAC2+2HAC3、含量测定(1)碘量法：基于巯基的强复原性原理：+I2+2HI(2)方法：同时做空白实验。(2)高碘酸法：凡含有邻位二元或多元羟基的化合物均能被高碘酸氧化生成相应的小分子酸和醛，反响时n个相邻羟基，消耗n-1个高碘酸。生成的HCOOH用NaOH标准液滴定;或生成的HIO3+KII2用Na2S2O3滴定。C6H14O6+5HIO42HCHO+4HCOOH+5HIO3+H2O(3)GC法乙醇的测定，可采用GC法顶空GC法二、醚1、代表药物：C2H5-O-C2H5麻醉乙醚2、杂质检查：1酸度2醛类3过氧化物，4异臭5不挥发物三、醛1、代表药物：HCHOCCl3CH(OH)2甲醛乌洛托品水合氯醛2、鉴别：(1)醛基的复原反响：碱性酒石酸酮FehlingCu2O红色氨制AgNO3液Tollen)Ag银镜(2)甲醛的反响：甲醛+H2SO4+变色酸紫色专属反响l(3)水合氯醛的反响：l水合氯醛+NaOHlCHCl3+HCOONa+H2Ol形成二液层(4)乌洛托品反响：乌洛托品加稀酸，加热即分解生成甲醛和铵盐。生成的甲醛具有特臭味，并和氨制硝酸银反响生成银镜。铵盐加碱放出氨气。NH4HSO4+2NaOHNH3+Na2SO4+2H2OHCHO+2Ag(NH3)OHHCOONH4+2Ag+3NH3+H2O6HCHO+4NH4HSO4C6H12N4+4H2SO4+6H2O3、含量测定：(1)碘量法：醛+I2定、过量醛基在OH-下被I2氧化成相应的酸，剩余碘在酸性下以Na2S2O3滴定。(2)中和法氧化后剩余滴定法HCHO+NaOH+H2OHCOONa+H2O2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O(3)剩余碱水解法水合氯醛+NaOHCHCl3+HCOONa2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O水解生成CHCl3在碱性下会有少量分解消耗碱CHCl3+4NaOHHCOONa+3NaCl+2H2O生成的NaCl可采用银量法测定后折算成NaOH的体积,自酸碱滴定中扣除。(4)酸水解后剩余滴定法乌洛托品+H2SO4NH42SO4+6HCHOH2SO4过量用碱测定。三、酮1、代表药物富马酸酮替酚吡喹酮扑米酮扑米酮酸性下分解，生成甲醛，可利用甲醛的专属反响鉴别。扑米酮碱性下加热灼烧分解生成氨气，可利用红色石蕊试纸鉴别。富马酸酮替酚环上氮显碱性，可采用非水滴定法测定含量，富马酸不干扰；富马酸酮替酚环上酮可与二硝基苯肼反响，生成红色絮状沉淀。第五章芳胺及芳烃胺类药物的分析第五章芳胺及芳烃胺类药物的分析TheAnalysisofAromaticaminesandAromaticalkylamines芳胺类药物指氨基直接与苯环相连。芳胺类*:酰胺类、对氨基苯甲酸酯类苯乙胺类氨基醚衍生物芳烃胺类药物指氨基在烃基侧链上。1.结构特点：苯胺酰基衍生物，酰胺基邻位或对位有取代基。第一节第一节芳胺类药物的分析芳胺类药物的分析一、酰胺类一、酰胺类l代表药物有：对乙酰氨基酚盐酸利多卡因l2性质性质：利多卡因，酰胺基邻位上有两个甲基，有很大空间位阻，水解较为困难。利多卡因在80%的硫酸溶液中加热才能水解l水解后可发生重氮化反响l具有酰胺结构共性。l水解成芳伯氨基，发生重氮化偶合反响。l碱性l利多卡因侧链中具有叔氨N原子，显弱碱性，能与酸成盐，且能与生物碱沉淀试剂或重金属离子反响。l与FeCl3反响l具有酚羟基或水解后能产生酚羟基对l乙酰氨基酚，可与FeCl3作用呈色。l紫外吸收l具有苯环结构，有紫外吸收。l二、对氨基苯甲酸酯类二、对氨基苯甲酸酯类l具有对氨基苯甲酸酯根本结构。l具有游离的芳伯氨基。1结构特点：l代表药物有：盐酸普鲁卡因苯佐卡因盐酸丁卡因l2性质：性质：具有芳伯氨基，发生重氮化或重氮化-偶合反响碱性具有脂烃胺侧链碱性，能与生物碱沉淀试剂发生反响。具有酯的结构，容易水解。紫外吸收具有苯环结构，有紫外吸收。三、鉴别反响三、鉴别反响1、重氮化、重氮化-偶合反响偶合反响具有芳伯氨基药物，如盐酸普具有芳伯氨基药物，如盐酸普鲁卡因等，在酸性溶液中与鲁卡因等，在酸性溶液中与NaNO2TS发生重氮化反响，发生重氮化反响，再与碱性再与碱性-萘酚偶合产生红萘酚偶合产生红色偶氮化合物。色偶氮化合物。具有潜在芳伯氨基，如对乙酰具有潜在芳伯氨基，如对乙酰氨基酚，水解后可得芳伯氨基，氨基酚，水解后可得芳伯氨基，能发生类似反响。能发生类似反响。盐酸丁卡因芳香第二胺结构与NaNO2作用生成乳白色N-亚硝基化合物沉淀。l2、三氯化铁反响、三氯化铁反响l具有酚羟基如对乙酰氨基酚，可具有酚羟基如对乙酰氨基酚，可l与与FeCl3TS作用显蓝紫色。作用显蓝紫色。l3、与生物碱沉淀试剂反响、与生物碱沉淀试剂反响l具有烃胺侧链，与生物碱沉淀试剂反响具有烃胺侧链，与生物碱沉淀试剂反响.l根据沉淀颜色或测定沉淀熔点进行鉴别。根据沉淀颜色或测定沉淀熔点进行鉴别。l常用生物碱沉淀试剂：氯化金试液常用生物碱沉淀试剂：氯化金试液,l碘试液碘试液,碘化汞钾试液碘化汞钾试液,苦味酸试液等。苦味酸试液等。l4、与重金属离子反响、与重金属离子反响l(1)与铜离子的反响l(2)与钴盐反响5羟肟酸铁的反响羟肟酸铁的反响l具有酰胺结构，被H2O2氧化成羟肟酸，羟肟l酸与FeCl3反响生成紫红色羟肟酸铁，随即l变为暗棕色至棕黑色。如盐酸普鲁卡因胺。具有酰胺结构的药物羟肟酸羟肟酸铁l6、水解产物的反响、水解产物的反响l(1)苯佐卡因的鉴别试验苯佐卡因的鉴别试验l(2).盐酸普鲁卡因的鉴别试验盐酸普鲁卡因的鉴别试验三杂质检查三杂质检查1、对乙酰氨基酚杂质检查、对乙酰氨基酚杂质检查对乙酰氨基酚中除检查酸度、氯对乙酰氨基酚中除检查酸度、氯化物、硫酸盐、重金属、水分、化物、硫酸盐、重金属、水分、炽灼残渣等一般杂质外，还需要炽灼残渣等一般杂质外，还需要检查：乙醇溶液的澄清度与颜色、检查：乙醇溶液的澄清度与颜色、有关物质对氯乙酰苯胺有关物质对氯乙酰苯胺、对、对氨基酚等特殊杂质。氨基酚等特殊杂质。对乙酰氨基酚以对硝基氯苯为原料合成。l(1)乙醇溶液的澄清度与颜色l对乙酰氨基酚易溶于乙醇中，如乙醇液不澄清或有颜色，那么说明有杂质存在。l生产工艺用铁粉作复原剂，如带入成品，那么导致对乙酰氨基酚乙醇溶液产生浑浊。l中间体对氨基酚有色氧化物在乙醇中显橙红色或棕色。2有关物质对氯乙酰苯胺副反应副副反应对硝基氯苯为原料合成对乙酰氨基酚时，如发生这样的副反响就能够引入对氯乙酰苯胺。副反响lTLC法l样品液l对照液l对氯乙酰苯胺乙醚溶液50g/mll别离系统l硅胶GF254l氯仿-丙酮-甲苯1352l限量:l点样量l样品液：200ll点于硅胶GF254薄层板上l对照液：40ll判断l在254nm波长紫外灯下观察，供试品与对照品主斑点Rf值相同的斑点比较,不得超过其大小与颜色。l(3)对氨基酚对氨基酚l制制备备中中乙乙酰酰化化不不完完全全或或贮贮存存不不当当发发生生水水解都能引入对氨基酚解都能引入对氨基酚l检查原理：检查原理：l对对氨氨基基酚酚在在碱碱性性条条件件下下，与与亚亚硝硝基基铁铁氰氰化化钠钠作作用用，生生成成蓝蓝色色络络合合物物，与与对对照照液液比较判断对氨基酚的限量。比较判断对氨基酚的限量。l检查方法：l限量：0.005%l四、含量测定四、含量测定l1亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法l原理原理l具具有有芳芳伯伯氨氨基基药药物物，在在酸酸性性条条件件下下与与NaNO2反反响响生生成成重重氮氮盐盐，根根据据消消耗耗NaNO2量，计算出含量。量，计算出含量。l潜潜在在芳芳伯伯氨氨基基药药物物，如如芳芳酰酰氨氨基基、硝硝基基等等，可可先先水水解解或或复复原原，得得芳芳伯伯氨基后，再进行测定。氨基后，再进行测定。l操作中的主要条件操作中的主要条件l重氮化反响属于分子反响重氮化反响属于分子反响l滴滴定定液液NaNO2及及反反响响生生成成的的重重氮氮l盐都不稳定盐都不稳定l反响速度受多种因素影响反响速度受多种因素影响第一步反响速度比较慢，而后两步反响速度那么比较快。l反响速度与药物结构的关系反响速度与药物结构的关系重氮化反响机制：la.当苯环上特别是氨基邻位或对位上有吸电基时,如l吸电基通过诱导效应使氨基l上电子云密度降低，从而碱l性降低，游离芳伯胺浓度增l大，所以反响速度就快。等可使氨基的碱性降低，重氮化反响速度加快。lb.当在苯环上有供电基时，那么使反响速度降低。如等。l供电基能使氨基碱性增强，这样氨l基成盐的时机就增大，游离芳伯胺l的浓度就减小，所以反响速度就慢。l反响速度与酸及酸度的关系反响速度与酸及酸度的关系la.酸的种类酸的种类l重重氮氮化化反反响响在在HBr、HCl、H2SO4中中反响速度是反响速度是HBrHClH2SO4K1比K2大300倍l用HBr时，生成NOBr量大，反响速度快。l但HBr价格贵，用盐酸代替，为加快反响速度，需参加KBr催化剂。l产生HBr与HNO2反响，可生成大l量NOBr，加快反响速度。lb.盐酸的用量l理论上:芳胺盐酸11moll实际上:芳胺盐酸12.56moll原因：l强酸性可加速反响l重氮盐在酸性下稳定l酸性下防止副反响发生。ll如盐酸量增加，那么反响向左进行。l如盐酸浓度太大，反到会使游离芳伯氨的量减小成盐，而影响重氮化反响速度，使反响速度减慢。如酸度缺乏那么没反响的芳胺与生成的重氮盐产生偶氮氨基化合物，而影响测定结果。l反响速度与滴定时温度的关系反响速度与滴定时温度的关系l一般，温度升高反响速度加快。一般，温度升高反响速度加快。l但但重重氮氮化化反反响响所所生生成成的的重重氮氮盐盐不不稳稳定定，温温度度升升高高重重氮氮盐盐分分解解速速度度也也加加快。快。l另另外外，温温度度高高时时，滴滴定定液液亚亚硝硝酸酸钠钠也容易分解逸失，而影响测定结果。也容易分解逸失，而影响测定结果。l所所以以，重重氮氮化化反反响响应应在在低低温温条条件件下下进行。进行。l中国药典规定：在30C以下，把滴定管尖端插入液面下l处进行滴定。在滴定时一边搅拌一边参加大局部标准溶液。到近终点时把滴定管提出液面，用水冲洗后再继续滴定至终点。标准溶液在液面下参加，可避免NaNO2挥发。l反响速度与滴定速度的关系反响速度与滴定速度的关系l重重氮氮化化反反响响属属分分子子反反响响，反反响响速速度度比比较较慢，滴定速度不能过快。慢，滴定速度不能过快。l尤尤其其是是近近终终点点时时，更更要要慢慢慢慢地地滴滴定定。近近终终点点时时，游游离离芳芳伯伯胺胺浓浓度度非非常常低低，反反响响速度就更慢了。速度就更慢了。l所所以以，每每加加一一滴滴标标准准液液后后，要要搅搅拌拌15分钟后再判断终点。分钟后再判断终点。l指示终点的方法指示终点的方法l重氮化滴定法指示终点的方法有:永停法电位法外指示剂法内指示剂法l我国药典主要采用永停滴定法指示终点l永停法永停法l原理：原理：l在在被被测测溶溶液液中中插插入入两两个个相相同同铂铂电电极极，在在两两个个电电极极间间加加10200mV电电压压，并并且且在在回回路路中中串串联联一一个个灵灵敏敏的的检检流流计计10A9/格。格。l当当用用NaNO2滴滴定定时时，在在终终点点前前回回路路中中没没有有电电流流，电电流流计计指针指零。指针指零。l当当到到达达滴滴定定终终点点时时，由由于于溶溶液液中中有有微微过过量量的的NaNO2，使使得得在在两两个个电电极极上上发发生生氧氧化化复原反响复原反响阳极：l导致在两电极间有电子流动，从而回路中有电流产生，使得电流计指针发生偏转并且不再返回零点。阴极：l电位法电位法l在被测溶液中插入甘汞-铂电极，l到达滴定终点时，溶液中稍过量的NaNO2使电位产生突跃，从而指示终点。lUSP采用这个方法指示终点。l外指示剂法外指示剂法l淀粉-KI糊剂或试纸l原理：l当到达滴定终点时，溶液中稍过量l的NaNO2在酸性条件下氧化KI析出I2，lI2遇淀粉显蓝色。l使用方法：使用方法：l滴定时，把淀粉-KI试液滴在白磁板上，用玻璃棒蘸取少量被滴定的溶液，在白磁板上划，如果立即出现蓝色即已到滴定终点。l外指示剂法的缺点：外指示剂法的缺点：l 由由于于滴滴定定的的溶溶液液是是强强酸酸性性，KI遇遇光光能能被被空空气气氧氧化化析析出出碘碘，所所以以，在在没没有有到到达达终终点点时时，就就有有可可能能呈呈现现蓝蓝色色，而造成误判。而造成误判。l 由由于于经经常常蘸蘸取取溶溶液液进进行行试试验验，可可造造成滴定液的损失而带来误差。成滴定液的损失而带来误差。l 方法难掌握。方法难掌握。l内指示剂法内指示剂法l内指示剂法指示终点，操作简便，但生成重氮盐一般都带有颜色，干扰指示剂颜色变化的观察，尤其是颜色很深时，更是这样。l在重氮化滴定法中，内指示剂法应用不是很广泛。第二节第二节苯乙胺类药物分析苯乙胺类药物分析l一结构特点l具有烃胺侧链，属于芳烃胺类药物。l多数在苯环上有12个羟基取代基。l如在苯环3、4位上有羟基取代，那么为儿茶l酚胺类药物。l代表药物肾上腺素去甲肾上腺素l二二性质性质：l1.易被氧化l邻苯二酚或苯酚结构，易被氧化呈色。l3.具有旋光性具有手性碳原子，具有光学活性。l2.显碱性具有烃胺侧链，显弱碱性。能与酸成盐。l三鉴别试验l1.氧化反响区别肾上腺素和去甲肾上腺素。2.三氯化铁反响：在0.1mol/L盐酸中与Fe3+显翠绿色，加氨试液后，显紫色或紫红色四、肾上腺素中肾上腺酮的检查讲过五、含量测定一非水溶液滴定法二溴量法第三节第三节 氨基醚衍生物类药物的分析氨基醚衍生物类药物的分析盐酸苯海拉明一.代表药物1.结构l2.性质l白色结晶性粉末l水中极易溶解,醇或氯仿中易溶,乙醚或苯中极微溶.l见光分解l酸性溶液中易分解.l紫外吸收二、鉴别1、与硫酸反响：显色2、水解反响：3、与硝酸银反响形成白色凝乳状沉淀4、紫外、红外特征吸收三、含量测定三、含量测定一一非水溶液滴定法非水溶液滴定法原料原料二二酸性染料比色法酸性染料比色法片剂，见生物碱章片剂，见生物碱章三阴离子外表活性剂滴定法三阴离子外表活性剂滴定法其注射液其注射液四四HPLC片剂片剂第六章杂环类药物的分析第六章杂环类药物的分析TheAnalysisofHeterodrugs第一节概述第一节概述l杂环:环状有机化合物的碳环中夹杂有其他非碳原子的环状结构叫做杂环.l非碳原子,又称杂原子,如N,S,O.l共性:(1)杂环类药物是合成药物中所占比例最多的一大类药物.(2)多为五元环或六元环,单环或并合环.(3)杂环结构较稳定,不易开环,其性质受杂原子种类、数目、位置影响.(4)杂环上取代基性质较活泼,常用于分析.(5)含氮杂环,其碱性的强弱往往用于分析.本章重点介绍l吡啶类l吩噻嗪类l苯并二氮杂卓类.第二节第二节吡啶类药物分析吡啶类药物分析一、结构分析l1.结构：本类药物均有吡啶环吡啶异烟肼尼可刹米l2.性质：性质：l1母母核核能能与与金金属属盐盐反反响响生生成成有有色色沉淀沉淀l2碱碱性性:吡吡啶啶环环上上氮氮原原子子具具有有叔叔胺性质，胺性质，lpKb=8.8水中，非水滴定；水中，非水滴定；l3异异烟烟肼肼:酰酰肼肼基基有有强强复复原原性性,且且能与能与l羰羰基基缩缩合合,氧氧化化复复原原滴滴定定或或比比色测定；色测定；l4尼尼可可刹刹米米:酰酰胺胺基基碱碱性性下下可可水水解解,放放l出出NH(C2H5)2,用用于于鉴鉴别别或或凯凯氏定氏定Nl直接蒸馏测定。直接蒸馏测定。二、鉴别：二、鉴别：1.母核反响：母核反响：1与金属离子反响生成有色沉淀与金属离子反响生成有色沉淀a.异异烟烟肼肼,尼尼可可刹刹米米+HgCl2白白色色沉沉淀淀b.异异烟烟肼肼+CuSO4红红棕棕色色Cu2O尼尼可可刹刹米米+CuSO4+硫硫氰氰酸酸钾钾淡淡绿色絮绿色絮状状沉沉淀淀2开环反响：适用于a,a未取代，b,为烷基或羧基取代的。a.戊烯二醛反响knig反响b.2，4-二硝基氯苯反响Vongerichten反响2.酰肼基团的反响常用的氧化剂：I2、Br2、KBrO3、AgNO31复原反响：2缩合反响：与芳醛缩合形成腙，如香草醛、水杨醛、二甲氨基苯甲醛黄色max=380nml3.与酸碱共热，以降解产物鉴别用红色石蕊试纸检查1.氧化复原滴定法：常用氧化剂有：碘、溴、溴酸钾、高锰酸钾、重铬酸钾、NaNO2、硫酸铈等。其中碘量法，溴量法，溴酸钾法最常用。1剩余碘量法：三、含量测定：以异烟肼为例三、含量测定：以异烟肼为例。操作：原理：CONHNH2N+2I2+5NaHCO330min38-40度COONaN+N2+4NaI+5CO2+4H2OI2过+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6讨论：a.本法简便,但因碘氧化力较弱,反响不易完全。常因反响时间、温度不同有所差异；b.用于制剂分析时,含有复原性赋形剂时有干扰；c.化学计量关系：(1:4)0.1mol/LI23.429mgC6H7N3(2)剩余溴量法：原理：0.1mol/LBr2溴酸钾3g+溴化钾15g水1000ml在稀HCl反响条件下：KBrO3+5KBr+6HClBr2+6KCl+3H2O操作：Br2过+KII2+2KBrI2+Na2S2O32NaI+Na2S4O6讨论：ChP63版曾用本法测定异烟肼a.酸度0.700.86mol/L，所测结果一致，高、低都会使结果偏低；b.放置时间1530min；c.滴定温度30；d.测定应在25min内完成l(3)溴酸钾法：操作：原理：等当点:稍过量的Br2l讨论：la.缓缓滴定并充分振摇,防止局部浓度过高终点提前；lb.到终点后,补加一滴指示剂,如颜色褪去即可,否那么未到终点；c.ChP77、85、90、95、2000均采用本法测定异烟肼片；d.化学计量关系：3/2T=0.016673/2137.14=3.429l2.比色测定：l利用开环反响或酰肼基团与试l剂呈色测定l3.非水滴定法：l利用吡啶环的碱性，进行非水l滴定l第三节第三节吩噻嗪类药物分析吩噻嗪类药物分析一、结构分析共同点：1硫氮杂蒽母核；2含两个杂原子多环共轭体系，有UV吸收；3S被氧化生成砜或亚砜；4与金属离子络合，生成有色物，可比色测定l不同点：R，R取代基不同RR盐类药名-(CH2)3N(CH3)2-HHCl盐酸丙嗪-(CH2)3N(CH3)2-ClHCl盐酸氯丙嗪-CH2CH(CH3)N(CH3)2-HHCl盐酸异丙嗪l二、鉴别l1、特征的紫外吸收：l具有三个峰值205nm、254nm和 300nm附 近，两 个 谷 220nm和280nm附近；假设被氧化那么有四个吸收峰，可用于判断样品中有无氧化物。l2.显色反响：(1)氧化剂：H2SO4、溴水、FeCl3、H2O2(2)可用于比色测定三、含量测定三、含量测定1、非水碱量法：吩噻嗪类药物母核上氮原子碱性极弱,不能进行滴定,10位取代基上N原子为碱性,可在非水介质中以高氯酸标准液，以CV为指示剂。2、铈量法：原理:适当pH下,用硫酸铈氧化吩噻嗪进行测定开始时,吩噻嗪失去一个电子游离基红色等电点吩噻嗪失去2个电子无色，终点：红色无色条件：在硫酸性下优点：1赋形剂不干扰,复方制剂中咖啡因、苯丙胺、可待因、巴比妥类药物等不干扰；2反响为一价复原Ce4+Ce3+,对环上取代基无作用；3用于原料药，也可用于制剂分析。3、钯离子比色法：、钯离子比色法：原理：原理：吩吩噻噻嗪嗪类类药药物物可可与与一一些些金金属属离离子子如如Pd2+在在适适当当pH值值的的溶溶液液中中形形成成有有色色的的络络合合物物，借借以以进进行行比比色色测定。测定。讨论：讨论：1钯离子试剂：钯离子试剂：PdCl2和十二烷基硫酸酯钯盐和十二烷基硫酸酯钯盐.用用PdCl2时时，形形成成的的有有色色络络合合物物水水中溶中溶解度小解度小,样品量大时样品量大时,产生沉淀产生沉淀.十十二二烷烷基基硫硫酸酸酯酯钯钯盐盐,其其络络合合物物溶溶解度解度大大,吸收强度增大约吸收强度增大约2倍倍.2本法优点：氧化产物不干扰。本法优点：氧化产物不干扰。l4、UV法：法：l(1)直接分光光度法：l(2)萃取后分光光度法：l(3)二阶导数分光光度法：l(4)萃取-双波长分光光度法：直接分光光度法：直接分光光度法：操作：操作：取取10片片，除除去去糖糖衣衣后后，精精称称，研研细细称称取取粉粉末末适适量量加加水水、盐盐酸酸溶溶解解过过滤滤，取取滤滤液液于于249nm处测定。处测定。：盐酸异丙嗪：盐酸异丙嗪=910，即可计算，即可计算优点：不需标准品优点：不需标准品缺点：仪器精密度要求高缺点：仪器精密度要求高测测定定中中注注意意问问题题：避避光光、防防止止氧氧化。化。l萃取-双波长分光光度法：-用于校正样品中氧化产物对测定影响l氯丙嗪的最大吸收波长为254nm,其氧化产物在此波长也有吸收,同时在277nm处氧化产物也有吸收,且其吸收度与在254nm处吸收度相等,而氯丙嗪在此波长处无吸收.A=A254-A277l第四章第四章苯骈二氮杂卓类药物的分析苯骈二氮杂卓类药物的分析一.结构分析氯氮卓1955年合成地西泮1959年合成l共同点：共同点：l1二二氮氮杂杂卓卓环环为为七七元元环环，环环上上氮氮原原子子具具有有强强碱碱性性，苯苯基基的的取取代代使使碱碱性降低，可进行非水滴定法测定；性降低，可进行非水滴定法测定；l2UV吸收，用于含量测定；吸收，用于含量测定；3环比较稳定，在强酸性下水解，形成相应的二苯甲酮衍生物，可用于鉴别和比色测定。氯氮卓水解生成芳伯胺基；地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸；4本品多为游离碱，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。l二、鉴别二、鉴别l1、芳伯胺基反响：、芳伯胺基反响：l氯氯氮氮卓卓水水解解生生成成芳芳伯伯胺胺基基(重重氮氮化化偶偶合反响合反响)l2、茚三酮反响：、茚三酮反响：l地地西西泮泮水水解解生生成成甘甘氨氨酸酸茚茚三三酮酮反反响响l3、硫酸荧光反响：、硫酸荧光反响：l本本类类药药物物加加硫硫酸酸，在在紫紫外外灯灯下下，呈荧光。呈荧光。第七章生物碱类药物的分析第七章生物碱类药物的分析TheAnalysisofAlkaloidl第一节概述第一节概述l一、特点一、特点l1含氮碱性化合物含氮碱性化合物l2没有共同母核没有共同母核l3多数具有含氮杂环结构，少数氮多数具有含氮杂环结构，少数氮在侧链上如麻黄碱在侧链上如麻黄碱l4.绝大局部存在于植物体内；少数绝大局部存在于植物体内；少数存在于动物体内如蟾蜍碱存在于动物体内如蟾蜍碱l二、碱性与结构的关系l碱性氮原子结合状态和所处化学环境l电子效应:诱导效应和共轭效应l立体效应与质子结合能力大，碱性强与质子结合能力小，碱性弱lN连接供电基团，如-OR、-R时，碱性就强。lN连接吸电基团，如-NO2、-COOH等时，碱性就弱。电子效应:l1季铵类生物碱季铵类生物碱l以以季季铵铵形形式式存存在在，可可以以离离子子化化，有类似金属的性质，碱性最强。有类似金属的性质，碱性最强。l如：小蘗碱如：小蘗碱pKa=11.53l2.脂肪胺l碱性：仲胺伯胺叔胺脂肪胺碱性比NH3强l3芳胺类芳胺类lN与芳环相连，N未共享电子对与苯环的电子形成p-共轭，使N原子上的电子云向苯环方向移动，这样就使N原子周围的电子云密度降低，接受质子的能力减小，所以碱性就弱。l芳胺类药物碱性比NH3碱性弱。l碱性强弱取决于芳环上取代基的性质。l供电子取代基如-CH3等碱性强l吸电子取代基如-NO2等碱性弱芳胺类碱性：伯胺仲胺叔胺l4酰胺类酰胺类l呈酰胺结构，碱性非常弱呈酰胺结构，碱性非常弱l如：咖啡因如：咖啡因Kb=0.710-1419C立体效应立体效应如：苦参碱两个N原子N16为酰胺结构，几乎没有碱性N1为叔胺结构，它的立体结构便于接受质子，消弱了立体效应的影响，碱性较强。l再如：东莨菪碱和莨菪碱l三元氧环的存在，N上孤电子产生显著立体效应增强了空间位阻，使N原子不易给出电子，碱性较弱与莨菪碱比。东莨菪碱莨菪碱l生物碱碱性强弱一般规律是：l季铵碱类脂肪胺类NH3芳胺、N-芳杂环酰胺类l例外：l含-COOH、酚-OH的生物碱，属于两性生物碱。l如：吗啡l三、生物碱类药物的溶解性三、生物碱类药物的溶解性l一般情况下游离生物碱不溶或难溶于水，易溶于有机溶剂生物碱盐易溶于水，不溶于有机溶剂游离生物碱，可在稀酸水溶液中成盐而溶解。l例外：有的生物碱能溶于水，如麻黄碱、烟碱等具有酸碱两性的生物碱，可在碱的水溶液中成盐而溶解，如吗啡、茶碱等碱性较弱的生物碱不能与酸形成稳定的盐，如咖啡因、利血平等四、生物碱类药物的分类四、生物碱类药物的分类：1、苯烃胺类：氮原子不在环状结构内麻黄碱、伪麻黄碱、秋水仙碱2、托烷类莨菪烷类莨菪烷衍生的氨基醇和不同有机酸缩合成酯类的生物碱硫酸阿托品、氢溴酸山莨菪碱3、喹啉类硫酸奎宁、硫酸奎尼丁l4、异喹啉类l盐酸吗啡、磷酸可待因l5、吲哚类l硝酸士的宁、利血平l6、黄嘌呤类l咖啡因、茶碱l第二节鉴别反响第二节鉴别反响l一一测定理化常数测定理化常数1熔点和衍生物熔点2比旋度l二、光谱法二、光谱法l1UV吸收光谱吸收光谱la.比较最大小吸收波长和比较最大小吸收波长和相应的吸收度相应的吸收度lb.与对照品的吸收光谱比较一与对照品的吸收光谱比较一致性致性lc.比较吸收系数比较吸收系数2IR吸收光谱IR光谱信息丰富三、化学反响三、化学反响1沉淀反响：沉淀反响：酸性水溶液中，与重金属盐类和酸性水溶液中，与重金属盐类和大分子酸类等沉淀试剂发生沉淀大分子酸类等沉淀试剂发生沉淀反响。反响。常用试剂：常用试剂：I2KI鞣酸鞣酸碘化铋钾碘化铋钾硅钨酸硅钨酸碘化汞钾碘化汞钾l2显色反响l生物碱固体+显色试剂颜色l常用：CH2SO4、CHNO3、钼硫酸l3官能团反响四、色谱方法四、色谱方法TLC法：法：生物碱盐：拖尾，吸附牢固生物碱盐：拖尾，吸附牢固改进方法：改进方法：1、在展开剂中参加少量的碱性、在展开剂中参加少量的碱性试剂试剂如：氨、二乙胺如：氨、二乙胺2、硅胶板用碱处理、硅胶板用碱处理如：硅胶如：硅胶+NaOH0.1mol/L630mg60mll第三节第三节含量测定含量测定l一、非水碱量法一、非水碱量法l在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定滴定突跃不明显，难以判断滴定终点。滴定突跃不明显，难以判断滴定终点。l在酸性非水介质中如在酸性非水介质中如gHAc中，那么能显中，那么能显示出较强的碱性，滴定突跃增大，可以顺利示出较强的碱性，滴定突跃增大，可以顺利地进行中和滴定。地进行中和滴定。l1测定方法供试品：以消耗标准液8ml计算。溶剂：gHAc，一般用量1030ml，滴定剂：0.1mol/LHClO4/无水gHAc溶液指示剂：结晶紫做空白试验l2讨论讨论l适用范围lKb10-8的有机碱盐。Kb为10-810-10选冰醋酸作溶剂Kb为10-1010-12选冰醋酸和醋酐作溶剂Kb10-12选醋酐作溶剂HA不同，对滴定反响的影响也不同。盐的滴定盐的滴定置换滴定，即用强酸HClO4置换出与生物碱结合的较弱的酸HA.HClO4、HBr、HCl、H2SO4、HNO3水中酸强度相等。gHAc中酸强度不相同.HClO4HBrHClH2SO4HNO3其它弱酸a.氢卤酸盐的测定氢卤酸盐的测定氢卤酸gHAc中酸性较强，对滴定有影响。排除方法：参加过量的HgAc2/gHAc溶液lb.硫酸盐的测定硫酸盐的测定l以以硫硫酸酸奎奎宁宁的的测测定定为为例例l直接滴定法直接滴定法l注注意意硫硫酸酸盐盐的的结结构构，正正确确判判断断反反响响的摩尔比。的摩尔比。两个N原子l喹啉N，属于芳环族N，碱性较弱l喹核N，属于脂环族N，碱性较强l在水中硫酸是二元酸，能够解离出两个氢离子，即l在冰醋酸中硫酸是一元酸，能够解离出一个氢离子，即l奎宁与硫酸结合时，一分子的硫酸能与两分子的奎宁结合，即：滴定反响如下：+3HClO4+l用HClO4直接滴定硫酸喹宁时，摩尔比是13l用HClO4直接滴定硫酸阿托品硫酸阿托品莨菪碱的结构如下：反响的摩尔比是11l参加高氯酸钡消除H2SO4的影响l参加高氯酸钡，摩尔比是12l练习题：硫酸奎宁的测定练习题：硫酸奎宁的测定l称称取取样样品品适适量量，加加gHAc7ml，醋醋酐酐3ml与与结结晶晶紫紫指指示示液液1滴滴，用用0.1mol/LHClO4液液滴滴定定至至终终点点，并将滴定结果用空白试验校正。并将滴定结果用空白试验校正。l：1ml0.1mol/LHClO4液液相相当当于于24.90mg的硫酸奎宁。的硫酸奎宁。l求求：硫硫酸酸奎奎宁宁的的分分子子量量。747.00lc.硝酸盐的测定硝酸盐的测定HNO3在gHAc中为弱酸，不影响滴定突跃。HNO3具有氧化性，应采用电位法指示终点或将HNO3破坏分解后再进行测定。ld.磷酸盐及有机酸盐的测定磷酸盐及有机酸盐的测定磷酸、有机酸为弱酸，不干扰滴定。l终点指示方法终点指示方法l最常用的指示剂是最常用的指示剂是l结结晶晶紫紫 Crystal VioletCV紫蓝蓝绿黄绿黄碱性区酸性区终点的颜色应用电位法校准。l本卷须知本卷须知la.水分的影响及排除水分的影响及排除lgHAc和和HClO4中中都都含含有有一一定定量量的的水水分分排除法：配制时，根据gHAc和HClO4含水量，参加计算量的醋酐。费休氏Fischer水分测定法准确测出gHAc和HClO4中含水量，准确参加醋酐。lb.标准溶液的稳定性水的膨胀系数是0.2110-3/CgHAc膨胀系数是1.110-3/C，较大，体积随温度变化较大，且还具有挥发性。测定样品与标定标准溶液时温度不同，应对浓度进行校正。l其中：l0.0011：gHAc的膨胀系数lt0和t1：标定标准溶液和测定样品时的温度lF0和F1：t0和t1所对应的标准溶液的F值l说明：lt1-t010Cl或贮存时间超过30天l那么在临用前必须重新标定标准溶液的浓度。校正公式：l二、提取中和法二、提取中和法l1根本原理根本原理l利利用用生生物物碱碱盐盐类类可可溶溶于于水水,游游离离生生物物碱碱不不溶溶于于水水而而溶溶于于有有机机溶溶剂剂的的性性质质进行提取，然后进行滴定的方法。进行提取，然后进行滴定的方法。l即即l2讨论讨论(1)碱化试剂常用的碱化试剂NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、Ca(OH)2、MgO等。对碱化试剂的要求碱化试剂碱性大于生物碱的碱性，即碱化试剂的pKb生物碱的pKbl选用碱化试剂时应考虑的因素选用碱化试剂时应考虑的因素l生物碱的化学性质生物碱的化学性质易水解或具两性，不能用强碱性碱化试剂。阿托品具有酯结构，与强碱接触时分解；吗啡具有酚羟基，和NaOH形成酚盐溶于水，难以用有机溶剂提取。l脂肪性物质的共存脂肪性物质的共存l有脂肪性物质共存时，不能用强碱性的碱化试剂，以免形成乳化而难以用有机溶剂提取。lNH3优点l氨水是最常用的碱化试剂。l氨Kb值：1.7510-5l一般生物碱Kb：10-610-9l氨碱性适当，能使大局部生物碱游离，又不能使具酯结构或两性生物碱水解或成盐。l(2)提取溶剂提取溶剂l提取溶剂要求提取溶剂要求l不与水相混溶不与水相混溶l沸点低，容易挥散除去沸点低，容易挥散除去l对所提取生物碱有极大的溶解度，对所提取生物碱有极大的溶解度，l而而对对其其它它共共存存物物质质不不溶溶或或极极少少溶溶解解l与与碱碱化化试试剂剂或或生生物物碱碱不不起起任任何何化化学学l反响反响l常用的提取溶剂常用的提取溶剂l氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂l氯仿：氯仿：l比重大，易于别离比重大，易于别离l对对大大局局部部生生物物碱碱都都有有较较大大的的溶溶解解度度l不燃烧，使用平安不燃烧，使用平安l氯氯仿仿在在碱碱性性下下受受热热很很容容易易分分解解，尤其是碱性较强时更容易分解。尤其是碱性较强时更容易分解。乙醚：沸点太低，极易挥发容易被氧化，着火在水中的溶解度较大在乙醚中溶解的生物碱不多乙醚的应用不如氯仿广泛。l三、酸性染料比色法三、酸性染料比色法l1原理原理:l在适当在适当pH溶液中溶液中,有机碱有机碱B可以与氢可以与氢离子成盐离子成盐,酸性染料酸性染料HIn可解离成阴离可解离成阴离子子,阴离子可与有机碱盐阳离子定量地结阴离子可与有机碱盐阳离子定量地结合成有色离子对，而进入到有机相。通过合成有色离子对，而进入到有机相。通过测定有机溶剂提取液的吸收度测定有机溶剂提取液的吸收度;或将有机或将有机溶剂提取液酸化或碱化，使与有机碱结合溶剂提取液酸化或碱化，使与有机碱结合的酸性染料释放出来，测定染料的吸收度的酸性染料释放出来，测定染料的吸收度来测得有机碱的含量。来测得有机碱的含量。l溴麝香草酚蓝(BTB)lbromthymolbluelpH 6.07.6黄蓝2常用酸性染料磺酞类指示剂l溴甲酚绿(BCG)lbromcresolgreenlpH3.65.2黄蓝l溴酚蓝(BPB)lbromophenolbluelpH3.84.6黄紫l3主要条件主要条件l最主要条件是水相的最主要条件是水相的pH。l要求：要求：l能能使使有有机机碱碱全全部部以以盐盐的的形形式式存存在在，酸酸性性染染料料能能够够解解离离成成离离子子，以以便便它它们们定定量量地地结结合合成成离离子子对对而而转转溶溶于于有有机机相相，且且又又能能将将剩剩余余的的染染料料完完全全保保存在水相。存在水相。pH酸性BH+，InBH+In-，有机溶剂提取的是HInpH碱性In-，BH+BH+In-，有机溶剂提取的是Bl水相pH的选择方法：l理论计算。l实验求得。l用待测的有机碱参加一定的酸性染料，配制成一系列不同pH值的溶液，分别用有机溶剂提取后测定有机溶剂提取液的吸收度，吸收度值最大的溶液所对应的pH值就是水相的最正确pH值。四、凯氏定氮法凯氏定氮法药物分析杜马氏法元素定量分析范斯莱克法生化分析氨基氮测定l1、原理、原理含含氮氮供供试试品品与与浓浓硫硫酸酸共共热热，供供试试品品中中所所含含氮氮转转变变成成氨氨，并并与与硫硫酸酸结结合合为为硫硫酸酸氢氢铵铵和和硫硫酸酸铵铵，用用氢氢氧氧化化钠钠碱碱化化后后，释释出出氨氨，随随水水蒸蒸气气馏馏出出，用用硼硼酸酸溶溶液液或或定定量量的的酸酸吸吸收收后后，用用标标准准酸酸液液或或标标准准碱碱液液滴滴定定，用用空空白白试验校正。试验校正。l凯氏定氮法分为3个步骤。l(1)消解消解l在凯氏烧瓶中进行。l将 样 品、Con.H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凯氏烧瓶中一起加热，有机含N化合物中的N全部转变成NH3并以铵盐的形式固定(NH4)2SO4、NH4HSO4。H2SO4：氧化剂和炭化剂。SO2和SO3消解一般在通风橱中进行。K2SO4：提高H2SO4的沸点，使消解时间缩短。CuSO4：催化剂，使消解速度加快。l消解产物：(NH4)2SO4、NH4HSO4l(2)蒸馏与吸收蒸馏与吸收l用40%的NaOH溶液l水蒸气蒸馏(NH4)2SO4+2NaOHNa2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3+H2Ol(3)测定测定l直接滴定法l吸收液：用2%硼酸溶液l滴定液：0.005mol/LH2SO4液l每1ml的0.005mol/LH2SO4液0.1401mg的Nl指示剂：甲基红-溴甲酚绿混合指示剂l终点颜色：灰紫色lNH3+H3BO3NH3.H3BO3l2NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3BO3l剩余滴定法l用标准盐酸或硫酸作吸收液。l将蒸馏出来的NH3吸收于定过量的标准酸溶液中，过量的酸用标准碱溶液滴定。五高效液相色谱法：l1特点：l8090%反相色谱别离，最常用十八烷基硅烷键合硅胶ODS。l硅胶外表仅有2550%硅醇基可与硅烷化试剂作用，在别离极性化合物特别是碱性药物和生物碱时，裸露的硅醇基和碱性药物发生吸附或离子交换作用，而使色谱峰拖尾，保存时间过长，甚至长期保存在色谱柱上。ll2三种主要方法：l1加扫尾剂法：以十八烷基硅烷ODS键合的硅胶为固定相，在流动相中参加扫尾剂，以抑制或掩蔽固定相外表的游离硅醇基的活性。最常用的扫尾剂是三乙胺TEA。l2用硅胶作固定相法：在不改性的普通硅胶柱上，利用碱性成分与硅醇基相互作用，以高浓度极性有机溶剂，碱性水相缓冲液为流动相别离碱性药物。l3用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相法：这种固定相外表被一根根短的烃链乙基连着的烃球金刚烷将硅胶外表上未反响的硅醇基全部覆盖，使其不能与极性物质作用。六阴离子外表活性剂滴定法原理：阴离子外表活性剂:十二烷基磺酸钠、磺基丁二酸钠二辛酯在水和有机溶剂所组成的二相中用十二烷基磺酸钠或磺基丁二酸钠二辛酯的标准溶液为滴定剂，滴定碱性药物的盐类。当滴定至等当点时，滴定剂与碱性药物完全反响，生成可溶于有机溶剂的有色配位化合物，溶解进入有机相，使有机相突然变色而指示终点。本法简便易行，而且药物制剂中的附加剂对测定无干扰。七、四苯硼钠双相滴定法滴定前：R4N+In-R4N+In(蓝色)滴定中：R4N+TPB-R4N+TPB-无色等当点(浅紫色)TPB-+R4N+In-R4N+TPB-无色原理：水相有机相In-酸性染料如溴酚蓝或溴麝香草酚蓝TPB-四苯硼钠的阴离子本法适用于季铵类生物碱第八章维生素类药物的分析第八章维生素类药物的分析TheAnalysisofVitaminesl概述维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质。如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。例如:VA缺乏夜盲症VB1缺乏脚气病脂溶性：水溶性：按溶解性分类VA、VD、VE、VK等B族VB1、VB2等、VC、烟酸、叶酸、泛酸等第一节第一节维生素维生素A的分析的分析l一结构与性质l1化学结构lR=HVA醇VA1lR=COCH3VA醋酸酯lR=COC15H31VA棕榈酸酯l结构特点：l1环己烯+共轭多烯侧链；l2天然VA侧链为全反式；l3天然来源主要是鱼肝油，为醋酸酯，棕榈酸酯等,目前多由人工合成。ll2.性质a.紫外吸收具有共轭多烯侧链紫外吸收。最大吸收波长在325328nm，随VA存在状态以及所用的溶剂，最大吸收波长的位置有所不同b.溶解性：不溶于水溶于乙醚，氯仿，异丙醇，环己烷，脂肪和油。共轭多烯侧链性质非常活泼.c.不稳定性维生素A的氧化产物：环氧化物维生素A醛维生素A酸ord.与SbCl3作用Carr-Price反响鉴别含量测定l二二.鉴别试验鉴别试验l1.三氯化锑反响三氯化锑反响l无水l2.紫外吸收光谱紫外吸收光谱VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。3、TLC：确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：例：VA和其标准品用环己烷溶解和其标准品用环己烷溶解展开剂：环己烷展开剂：环己烷乙醚乙醚80：20板：硅胶板：硅胶G显色：显色：SbCl3T.S.Rf：VA醇醇0.08VA醋酸酯醋酸酯0.41VA棕榈酸酯棕榈酸酯0.75l三三含量测定含量测定l紫外分光光度法三点校正法1.概述共轭多烯的结构具有特征的紫外吸
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