免疫分析3汇总课件

7免疫分析37免疫分析38.4.1 荧光标记物荧光标记物 FIA就就是是把把一一些些强强荧荧光光的的化化合合物物用用作作标标记记试试剂剂。常常用用的的荧荧光光标记物包括：标记物包括：荧光素类荧光素类(fluoresceins)标记物标记物 荧荧光光素素具具有有很很高高的的摩摩尔尔吸吸光光系系数数和和荧荧光光量量子子产产率率，因因而而它它是是荧光免疫分析中最常用的荧光标记物之一。荧光免疫分析中最常用的荧光标记物之一。罗丹明类罗丹明类(Rhodamine)标记物标记物 罗罗丹丹明明类类衍衍生生物物与与荧荧光光素素类类具具有有相相同同的的基基本本结结构构。与与荧荧光光素素类类化化合合物物相相比比，它它们们的的发发射射波波长长要要长长一一些些，但但荧荧光光量量子子产产率率要要低一些。低一些。8.4.1 荧光标记物荧光素类(fluoresceins)标香豆素类香豆素类(Coumarins)(Coumarins)标记物标记物 藻胆蛋白类藻胆蛋白类(Phycobiliproteins)标记物标记物 藻藻胆胆蛋蛋白白类类的的水水溶溶性性非非常常好好，它它们们是是蓝蓝绿绿细细菌菌的的光光合合成成器器的的一一部部分分。在在它它们们的的结结构构中中含含有有几几个个线线性性四四吡吡咯咯辅辅基基，因因而而具具合合很很高高的的吸吸光光能能力力。这这类类化化合合物物常常在在微微粒粒荧荧光免疫分析中被用作荧光探针。光免疫分析中被用作荧光探针。香豆素类(Coumarins)标记物 藻胆蛋白类(Phyco 8.4.2 在生物体液中进行荧光测定的局限性在生物体液中进行荧光测定的局限性(1)光散射干扰光散射干扰 由由于于蛋蛋白白质质、类类脂脂物物及及胶胶体体颗颗粒粒对对激激发发光光的的散散射射，将将会会出出现现瑞瑞利利散散射射、拉拉曼曼散散射射或或丁丁达达尔尔散散射射。瑞瑞利利散散射射和和丁丁达达尔尔散散射射与与激激发发光光波波长长相相同同，但但拉拉曼曼散散射射的的波波长长要要比比激激发发光的长。散射光无寿命，即随着激发光的终止而消失。光的长。散射光无寿命，即随着激发光的终止而消失。(2)背景荧光干扰背景荧光干扰 生生物物体体液液中中含含有有多多种种荧荧光光物物质质，其其荧荧光光光光谱谱覆覆盖盖很很宽宽的波长范围，因而会产生非常强的背景荧光。的波长范围，因而会产生非常强的背景荧光。8.4.2 在生物体液中进行荧光测定的局限性(1)光散射干(3)(3)淬灭效应淬灭效应 血清中的蛋白质、胆红素及血红蛋白等可以吸收激发血清中的蛋白质、胆红素及血红蛋白等可以吸收激发或发射光的能量而产生淬灭现象。荧光标记的抗原与血清或发射光的能量而产生淬灭现象。荧光标记的抗原与血清蛋白的结合也会产生荧光淬灭。蛋白的结合也会产生荧光淬灭。(4)(4)光漂白作用光漂白作用 当荧光分子受到激发光的连续照射时会产生光分解而当荧光分子受到激发光的连续照射时会产生光分解而使得荧光强度减小，特别是当激发光的波长短，而激发光使得荧光强度减小，特别是当激发光的波长短，而激发光的强度又非常大时更是这样的强度又非常大时更是这样(如采用激光光源时如采用激光光源时)。(3)淬灭效应8.4.3 荧光免疫分析的仪器荧光免疫分析的仪器 所所有有用用于于荧荧光光免免疫疫分分析析的的荧荧光光仪仪都都由由光光源源、激激发发和和发发射射滤滤光光片片或或单单色色器器、一一个个光光学学系系统统(可可以以是是棱棱镜镜、反反射射镜镜或或光光导导纤纤维维)和和一一个个检检测测系系统统组组成成。更更复复杂杂的的仪仪器器还还可可以以包包括括移移液液、洗洗涤涤、移移动动和和数数据据处处理理单单元元。时时间间分分辨辨荧荧光光仪仪有有一一个个电电子子回回路路用用于于控控制制测测定定时时间间。这这类类复复杂杂的的仪仪器器一一般般都都是是为为特特定定的的化化学学分分析析系系统统所所设设计计的的，所所以以所所有有的的测测定定参参数数都都已已经预先优化好了，并且是固定的。经预先优化好了，并且是固定的。8.4.3 荧光免疫分析的仪器 所有用于荧光免疫分析的荧8.4.4 荧光免疫分析法示例荧光免疫分析法示例时间分辨荧光免疫分析法（时间分辨荧光免疫分析法（Time-Resolved Time-Resolved FluorescenceFluorescence，简称，简称TRFTRF）用用三三价价稀稀土土离离子子及及其其螯螯合合剂剂作作为为示示踪踪物物(代代替替荧荧光光物物质质、同同位位素素或或酶酶)，标标记记蛋蛋白白质质、多多肽肽、激激素素、抗抗体体、核核酸酸探探针针或或生生物物活活性性细细胞胞，待待反反应应体体系系（如如：抗抗原原抗抗体体免免疫疫反反应应、生生物物素素亲亲和和素素反反应应、核核酸酸探探针针杂杂交交反反应应、靶靶细细胞胞与与效效应应细细胞胞的的杀杀伤伤反反应应等等）发发生生后后，用用时时间间分分辨辨荧荧光光仪仪测测定定最最后后产产物物中中的的荧荧光光强强度度，以此来判断反应体系中被测物质的浓度。以此来判断反应体系中被测物质的浓度。8.4.4 荧光免疫分析法示例时间分辨荧光免疫分析法（TimTRF 分析法的优点：分析法的优点：标标记记物物体体积积很很小小(为为原原子子标标记记)，标标记记后后不不会会影影响响被被标标记记物物的的空空间间立立体体结结构构，保保证证了了被被检检测测物物质质的的稳稳定性定性(尤其对蛋白质影响更小尤其对蛋白质影响更小)；实实现现了了多多位位点点标标记记，这这不不仅仅使使检检测测更更灵灵敏敏，也也使使一一个个试试剂剂盒盒能能够够同同时时检检测测出出两两种种或或两两中中以以上上的的项项目目（如前列腺特异抗原（如前列腺特异抗原PSA的检测）的检测）；目目前前只只有有原原子子标标记记才才能能准准确确的的定定量量检检测测DNA、RNA。TRF 分析法的优点：稀土原子具有的荧光发射峰谱范围窄、激发光稀土原子具有的荧光发射峰谱范围窄、激发光波长范围宽的特点，有利于增强荧光的特异性，提波长范围宽的特点，有利于增强荧光的特异性，提高分辨率；激发光和发射光之间存在较大的高分辨率；激发光和发射光之间存在较大的STOKESSTOKES位移位移(激发光与发光之间的能量差激发光与发光之间的能量差)，有利于排除，有利于排除非特异性荧光的干扰、降低本底荧光强度；稀土离非特异性荧光的干扰、降低本底荧光强度；稀土离子螯合物产生的荧光强度高、寿命长，有利于消除子螯合物产生的荧光强度高、寿命长，有利于消除环境中其它荧光物质的影响，并可对样品进行多次环境中其它荧光物质的影响，并可对样品进行多次检测。检测。稀土原子具有的荧光发射峰谱范围窄、激发光波长范围宽的特 时时间间分分辨辨荧荧光光免免疫疫分分析析技技术术具具有有标标记记物物制制备备简简便便、有有效效期期长长、不不污污染染环环境境、操操作作流流程程短短、标标准准曲曲线线线线性性范范围围宽宽、有有效效期期长长、应应用用范范围围十十分分广广泛泛等等优优点点。虽虽然然问问世世仅仅十十余余年年，但但在在方方法法学学研研究究和和应应用用方方面面均均发发展展迅迅速速。国国外外(如如：WALLACWALLAC公公司司)已已有有商商品品化化试试剂剂盒盒4040余余种种，荧荧光光测测试试仪仪研研制制已已进进入入第第三三代代，分分析析技技术术也也已已实实现现高度自动化。高度自动化。时间分辨荧光免疫分析技术具有标记物制备简便、有效期8.5 免疫分析发展趋势免疫分析发展趋势 在在免免疫疫分分析析的的诸诸方方法法中中，放放射射免免疫疫分分析析是是第第一一个个定定量量方方法法，而而且且至至今今也也还还有有一一些些使使用用。放放免免分分析析准准确确而而灵灵敏敏，但但由由于于放放射射性性风风险险和和需需要要特特殊殊的的仪仪器器。因因此此，研研究究工工作作者者很很早早就就开开始始寻寻找找可可以以取取代代它它的的新新方方法法。酶酶联联免免疫疫分分析析是是最最先先提提出出的的一一种种，并并在在进进入入八八十十年年代代后后首首次次占占据据主主导导地地位位其其方方法法覆覆盖盖了了一一半半以以上上的的文文献献。荧荧光光免免疫疫分分析析在在建建立立时时间间分分辨辨荧荧光光免免疫疫分分析析后后有有了了突突跃跃性性发发展展，占占目目前前工工作作的的1015，成成为为具具有有发发展展前前途途的的非非放放射射免免疫疫分分析析方方法法之之一一。非非同同位位素素标标记记分分析析中中另另一一个个值值得得重重视视的的方方向向是是发发光光免免疫疫分分析析法法，由由于于方方法法的的高高灵灵敏敏度度和和测测定定的的简简单单在在免免疫疫分分析析中中一一直直占占有有一一定定的的位位置置，每每年年约约占占5的工作。的工作。8.5 免疫分析发展趋势 在免疫分析的诸方法中，放 从从发发展展的的趋趋势势来来看看，在在今今后后比比较较长长的的一一段段时时间间内内，酶酶免免疫疫分分析析法法将将仍仍占占主主导导地地位位，特特别别是是在在应应用用方方面面更更将将是是如如此此；而而在研究方面，以下诸方面的工作将有待于进一步拓展和深入。在研究方面，以下诸方面的工作将有待于进一步拓展和深入。从发展的趋势来看，在今后比较长的一段时间内，酶免疫分析8.5.1 基因工程抗体基因工程抗体 从从被被免免疫疫的的动动物物血血清清中中获获得得的的抗抗体体是是多多克克隆隆抗抗体体，虽虽然然用用于于免免疫疫分分析析的的效效果果是是良良好好的的，但但缺缺点点是是抗抗体体不不均均一一，来来源源是不连续的而且有较大的批间差别。是不连续的而且有较大的批间差别。自自七七十十年年代代发发展展了了单单克克隆隆抗抗体体技技术术，到到现现在在已已经经很很成成熟熟。单单克克隆隆抗抗体体克克服服了了多多克克隆隆抗抗体体的的上上述述缺缺点点并并且且在在一一些些方方面面进进一一步步提提高高了了抗抗体体的的性性能能。近近年年来来、一一类类特特殊殊的的单单克克隆隆抗抗体体抗独特型抗体开始在应用中受到广泛的关注。抗独特型抗体开始在应用中受到广泛的关注。8.5.1 基因工程抗体 从被免疫的动物血清中获得的抗独特型抗体抗独特型抗体(Antiidiotypic antibody)免免疫疫系系统统的的抗抗独独特特型型反反应应可可以以导导致致产产生生一一类类特特殊殊的的抗抗体体抗抗独独特特型型抗抗体体。通通过过单单克克隆隆抗抗体体筛筛选选可可得得到到、和和等等型型抗抗体体。抗抗独独特特型型抗抗体体的的特特点点是是其其结结合合位位置置是是独独特特型型抗抗体体的的抗抗原原结结合合位位点点，即即抗抗独独特特型型抗抗体体的的结结合合反反应应性性质质类类似似抗抗原原。其其中中 型型反反应应性性与与抗抗原原完完全全相相向向，可可与与抗抗原原对对独独特特型型抗抗体体进进行行等等结结合合位位点点的的竞竞争争结结合合，因因而而在在目目前前分分析析中中应应用用较较多多。例例如如，利利用用雌雌二二醇醇受受体体的的抗抗体体的的结结合合位位点点可可模模拟拟雌雌二二醇醇的的结结构构，两两者相互竞争，可用于测定雌二醇。者相互竞争，可用于测定雌二醇。抗独特型抗体(Antiidiotypic antibody双特异性抗体双特异性抗体(Bispecific antibody)因因为为抗抗体体是是由由四四条条肽肽链链组组成成(HL2)型型结结构构，所所以以通通过过两两个个不不同同单单克克隆隆抗抗体体细细胞胞系系的的二二次次融融合合杂杂交交和和抗抗体体筛筛选选便便可可得得到到具具有有两两个个不不同同的的抗抗原原结结合合位位点点的的抗抗体体(L1H1-L2H2型型)。这这就是双特异性抗体。就是双特异性抗体。双双特特异异性性抗抗体体的的一一个个有有趣趣的的特特点点是是抗抗体体的的两两个个结结合合位位点点具具有有一一定定的的协协同同作作用用，除除了了研研究究意意义义外外，双双特特异异性性抗抗体体的的这这种协同作用已被用来设计均相免疫分析法。种协同作用已被用来设计均相免疫分析法。双特异性抗体(Bispecific antibody)双功能抗体双功能抗体(Bi-functional antibody)双功能抗体主要是通过基因工程的方法，将酶结合到抗体双功能抗体主要是通过基因工程的方法，将酶结合到抗体重链部分的恒定区，使抗体同时具备酶的功能。其特点在于重链部分的恒定区，使抗体同时具备酶的功能。其特点在于抗体酶标记的效率达到抗体酶标记的效率达到100。双功能抗体(Bi-functional antibody)8.5.2 生物素生物素-亲和素体系的多重标记亲和素体系的多重标记 提提高高分分析析灵灵敏敏度度的的一一个个有有效效方方法法就就是是增增加加抗抗体体(或或抗抗原原)的的标标记记率率。小小分分子子探探针针不不存存在在空空阻阻效效应应，因因而而多多重重标标记记法法可可以以获获得得成成百百上上千千的的标标记记率率，尤尤其其是是镧镧系系螯螯合合物物探探针针，由由于于没没有有有有机机荧荧光光分分子子的的多多重重标标记记时时荧荧光光淬淬火火现现象象，加加上上多多重重标标记记荧荧光光增增强强效效应应，可以获得到可以获得到100010000倍的荧光增强。倍的荧光增强。8.5.2 生物素-亲和素体系的多重标记 提高分析灵敏度 为为了了避避免免标标记记对对抗抗体体结结合合活活性性的的影影响响同同时时也也可可以以进进一一步步提提高高探探针针的的偶偶联联数数量量，需需要要采采取取多多重重标标记记的的方方法法。在在诸诸多多方方法法中中，以以应应用用生生物物素素-亲亲和和素反应对的方法备受崇。素反应对的方法备受崇。为了避免标记对抗体结合活性的影响同时也可以进一步提高生物素生物素亲和素标记系统的优势在于：亲和素标记系统的优势在于：1.1.试剂来源广泛和较易提取，试剂来源广泛和较易提取，2.2.生物素与亲和素结合速度较快并且结合物的稳定性高；生物素与亲和素结合速度较快并且结合物的稳定性高；3.3.生生物物素素分分子子易易于于活活化化，然然后后再再与与蛋蛋白白质质分分子子相相偶偶联联，生生物物4.4.素标记可以达到较高的偶联率而不影响抗体的生物活性；素标记可以达到较高的偶联率而不影响抗体的生物活性；5.5.生生物物素素亲亲和和素素标标记记体体系系有有灵灵活活多多变变的的运运用用方方式式，以以适适应应不同的分析设计；不同的分析设计；6.6.标标记记体体系系采采用用分分别别标标记记的的方方法法(生生物物素素标标记记抗抗体体，探探针针标标记记亲亲和和素素)，经经过过探探针针标标记记的的亲亲和和素素使使之之成成为为通通用用试试剂剂，非非常适合于试剂的商品化。常适合于试剂的商品化。生物素亲和素标记系统的优势在于：8.5.3 自动化免疫分析法自动化免疫分析法早期免疫分析通过观察沉淀物形成，凝集及溶血早期免疫分析通过观察沉淀物形成，凝集及溶血现象发生来分析，如免疫扩散、免疫电泳、血凝现象发生来分析，如免疫扩散、免疫电泳、血凝试验、补体结合等试验、补体结合等上世纪上世纪5050年代末年代末6060年代初，利用年代初，利用AG-ABAG-AB复合物形复合物形成使浊度改变，再用比浊计来比浊，但因其敏感成使浊度改变，再用比浊计来比浊，但因其敏感性差未被接受性差未被接受7070年代初，开始有自动检测系统，但因其用的是年代初，开始有自动检测系统，但因其用的是激光为光源，固定波长，灵敏度较低，而且时间激光为光源，固定波长，灵敏度较低，而且时间一般要一般要2323小时小时8.5.3 自动化免疫分析法早期免疫分析通过观察沉淀物形成，7070年代未，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的年代未，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的反应在几十秒内出结果，可以说是免疫化学测定的反应在几十秒内出结果，可以说是免疫化学测定的革命的发展革命的发展随着标记技术的发展，免疫化学可以纳入临床化学随着标记技术的发展，免疫化学可以纳入临床化学检验范畴检验范畴现在，自动化免疫分析系统发展迅速现在，自动化免疫分析系统发展迅速自动化免疫分析的基础是抗原抗体的结合，具有高自动化免疫分析的基础是抗原抗体的结合，具有高特异性；手段多是利用标记技术而将检测信号放大，特异性；手段多是利用标记技术而将检测信号放大，具有高灵敏度。具有高灵敏度。70年代未，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的反应在几十秒内自动化免疫仪器种类（应用技术）自动化免疫仪器种类（应用技术）免疫比浊分析技术免疫比浊分析技术化学发光、电发光分析技术化学发光、电发光分析技术荧光免疫分析技术荧光免疫分析技术放射免疫分析技术放射免疫分析技术酶免疫分析技术酶免疫分析技术流式细胞术流式细胞术自动化免疫仪器种类（应用技术）免疫比浊分析技术免疫比浊免疫比浊利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的一种方法一种方法此法准确快速，已成为免疫诊断技术中重要的此法准确快速，已成为免疫诊断技术中重要的检测手段检测手段比浊法与比色法比浊法与比色法免疫比浊利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的一种方法散射免疫比浊分析法散射免疫比浊分析法 基本原理：抗原抗体复合物对一定波长的光产生折射、偏转，偏转角度及散射光强度与复合物粒子的大小和量有关散射免疫比浊分析法 基本原理：抗原抗体复合物对一定波长的光产免疫透射比浊免疫透射比浊基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角度与正前方夹角为度与正前方夹角为00，保持抗体过量，形成，保持抗体过量，形成可溶性可溶性AG-ABAG-AB复合物，使介质浊度发生改变。复合物，使介质浊度发生改变。实验要求：实验要求：选择亲和力高的抗体，抗原抗体复合物要选择亲和力高的抗体，抗原抗体复合物要大、数量要多，反应时间充分。大、数量要多，反应时间充分。免疫透射比浊基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角度与正前胶乳浊度测定法胶乳浊度测定法基本原理是：将抗体吸附在大小适中、均匀一基本原理是：将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，当遇到相应抗原时，则使胶致的胶乳颗粒上，当遇到相应抗原时，则使胶乳颗粒发生凝集。单个胶乳颗粒在入射光波之乳颗粒发生凝集。单个胶乳颗粒在入射光波之内不阻碍光线透过，两个或两个以上胶乳颗粒内不阻碍光线透过，两个或两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光减少，这种减少的程度与胶凝聚时则使透过光减少，这种减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，当然也与待测抗原乳颗粒凝聚的程度呈正比，当然也与待测抗原量呈正比（量呈正比（图图）胶乳浊度测定法基本原理是：将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶影响免疫比浊的因素影响免疫比浊的因素 抗原抗体比例抗体纯度和效价增聚剂（PEG）影响免疫比浊的因素 抗原抗体比例自动免疫浊度分析仪的要求自动免疫浊度分析仪的要求校准程序，使仪器处于正常的工作状态校准程序，使仪器处于正常的工作状态定标程序，保证检测结果的准确性定标程序，保证检测结果的准确性自动控制，保证实施实验条件中的抗原抗体反应体系自动控制，保证实施实验条件中的抗原抗体反应体系要求要求自动系统，障碍的检测和预警。自动系统，障碍的检测和预警。自动免疫浊度分析仪的要求校准程序，使仪器处于正常的工作状态化学发光自动免疫分析化学发光自动免疫分析化学发光是指在化学反应过程中产生光的发射化学发光是指在化学反应过程中产生光的发射现象现象基本原理：标记在抗原或抗体上的发光物质在基本原理：标记在抗原或抗体上的发光物质在碱性介质中氧化时产生激发态的中间体，中间碱性介质中氧化时产生激发态的中间体，中间体回基态时产生辐射，多余的能量为发射光子，体回基态时产生辐射，多余的能量为发射光子，产生发光现象，再对光信号进行接收转化，可产生发光现象，再对光信号进行接收转化，可得检测物浓度得检测物浓度发光物质须具备：氧化致发光、光量子产额高、发光物质须具备：氧化致发光、光量子产额高、理化性能好理化性能好化学发光自动免疫分析化学发光是指在化学反应过程中产生光的发射化学发光自动免疫分析类型化学发光自动免疫分析类型 化学发光免疫分析（化学发光免疫分析（CLIACLIA）是是一一种种用用发发光光剂剂直直接接标标记记抗抗体体的的一一类类免免疫疫分分析析法法，用用来来标标记记的的发发光光物物必必须须能能参参与与发发光光反反应应、标标记记和和偶偶联联后后能能稳稳定定、理理化化性性质质和和免免疫疫特特性性不不改改变变，多多用用吖吖啶啶酯酯类和苯酚类化合物。类和苯酚类化合物。化学发光自动免疫分析类型 化学发光免疫分析（CLIA）化学发光酶免疫分析（化学发光酶免疫分析（CLEIACLEIA）以催化反应的酶为标记物，抗原抗体结合后，以催化反应的酶为标记物，抗原抗体结合后，其中的酶可对发光体系产生催化作用，产生发其中的酶可对发光体系产生催化作用，产生发光效应。发光信号与抗原抗体的量成正比。多光效应。发光信号与抗原抗体的量成正比。多用的发光体系是用的发光体系是HRP-HRP-鲁米诺。鲁米诺。化学发光酶免疫分析（CLEIA）微粒子化学发光免疫分析（微粒子化学发光免疫分析（ECIAECIA）也是一种酶免疫分析，用磁珠作为固相载体，也是一种酶免疫分析，用磁珠作为固相载体，增加反应体积和分离效率。标记的酶多为增加反应体积和分离效率。标记的酶多为ALPALP。微粒子化学发光免疫分析（ECIA）电化学发光免疫分析（电化学发光免疫分析（ECLIAECLIA）一种在电极表面由电化学引发的特异性化学一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程个过程,其中应用了其中应用了“亲和素亲和素-生物素生物素”放大系放大系统，使检测的灵敏度大大提高统，使检测的灵敏度大大提高以双抗体夹心法为例之图示（以双抗体夹心法为例之图示（图图）电化学发光免疫分析（ECLIA）化学发光免疫分析是免疫技术、发光技术和计化学发光免疫分析是免疫技术、发光技术和计算机系统的结合，具有特异性强、灵敏度高算机系统的结合，具有特异性强、灵敏度高（pg/ml)pg/ml)、精密度好、准确度好等特点，越来、精密度好、准确度好等特点，越来越多的人体微量指标应用这种方法来检测，已越多的人体微量指标应用这种方法来检测，已渐渐代替了渐渐代替了RIARIA。化学发光免疫分析是免疫技术、发光技术和计算机系统的结合，具有流式细胞仪流式细胞仪流式细胞仪（流式细胞仪（FCMFCM）是以激光为光源，检测生）是以激光为光源，检测生物学颗粒理化性质的仪器物学颗粒理化性质的仪器生物学颗粒包括免疫复合物、生物学颗粒包括免疫复合物、DNADNA、RNARNA、蛋白、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细胞、染色质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细胞、染色体、真核细胞等体、真核细胞等理化性质则为细胞大小、形状、胞浆颗粒、理化性质则为细胞大小、形状、胞浆颗粒、DNADNA含量、酶活性等含量、酶活性等流式细胞仪流式细胞仪（FCM）是以激光为光源，检测生物学颗粒FCM综综合合了了激激光光技技术术、电电子子技技术术、流流体体力力学学、细胞化学及计算机技术，被称为实验室细胞化学及计算机技术，被称为实验室“CT”FCM现现正正广广泛泛应应用用于于细细胞胞生生物物学学、免免疫疫学学、肿肿瘤瘤学学、血血液液学学、病病理理学学、遗遗传传学学、临临床床检检验验学学等等FCM综合了激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学及计算机技流式细胞仪基本原理流式细胞仪基本原理基基本本原原理理：单单个个经经荧荧光光染染料料染染色色的的细细胞胞经经过过激激光光激激发发后后，发发射射的的荧荧光光在在不不同同的的角角度度进进行行测测量量，并对其信号进行综合分析（并对其信号进行综合分析（图图）细细胞胞分分选选原原理理：通通过过测测量量区区的的细细胞胞若若其其参参数数符符合合实实验验设设计计的的条条件件，在在经经过过偏偏转转板板时时被被充充上上相相应的电荷并被偏转收集（应的电荷并被偏转收集（图图）流式细胞仪基本原理基本原理：单个经荧光染料染色的细胞经过激光液流系统：样本和鞘流液组成（液流系统：样本和鞘流液组成（图图）光学系统：光源可为汞灯或光学系统：光源可为汞灯或激光激光信号接收系统：散射光和荧光的检测信号接收系统：散射光和荧光的检测流式细胞仪基本组成液流系统：样本和鞘流液组成（图）流式细胞仪基本组成荧光测量荧光测量荧光染料染色的细胞通过测量区时，细胞中特荧光染料染色的细胞通过测量区时，细胞中特异性荧光物质受激发产生荧光信号，后者强弱异性荧光物质受激发产生荧光信号，后者强弱表示待测物质的多少表示待测物质的多少荧光的检测系统由滤光片和检测器组成，滤光荧光的检测系统由滤光片和检测器组成，滤光片的作用是使激发光波长尽可能接近荧光染料片的作用是使激发光波长尽可能接近荧光染料的激发光谱峰值，滤除非荧光信号，提高荧光的激发光谱峰值，滤除非荧光信号，提高荧光的检测强度的检测强度荧光测量荧光染料染色的细胞通过测量区时，细胞中特异性荧光物质流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求仪仪器器性性能能指指标标：荧荧光光分分辨辨率率、荧荧光光灵灵敏敏度度、前前向向角角散散色色光光灵灵敏敏度度、前前向向角角散散光光分分辨辨率率、分分析析/分分选选速速度、分选纯度、分选收获率度、分选纯度、分选收获率检测样品要求要单细胞悬液检测样品要求要单细胞悬液荧荧光光标标记记常常用用的的染染料料有有异异硫硫氰氰基基荧荧光光素素、藻藻红红蛋蛋白白类类全程质量控制全程质量控制流式细胞仪免疫分析的技术要求仪器性能指标：荧光分辨率、荧光灵流式细胞仪的临床应用细胞生物学：周期分析细胞生物学：周期分析免疫学：与单克隆抗体结合应用，在免疫分型、免疫学：与单克隆抗体结合应用，在免疫分型、分选、肿瘤细胞的免疫监督、机体免疫状态的分选、肿瘤细胞的免疫监督、机体免疫状态的监测、免疫细胞的系统发生及特性等方面都起监测、免疫细胞的系统发生及特性等方面都起着相当重要的作用着相当重要的作用肿瘤学：基因水平的分析，为肿瘤的诊断、治肿瘤学：基因水平的分析，为肿瘤的诊断、治疗及预后评价提供重要的信息疗及预后评价提供重要的信息血液学：分析正常细胞与肿瘤细胞血液学：分析正常细胞与肿瘤细胞流式细胞仪的临床应用细胞生物学：周期分析此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力