枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶优选课件

枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶枯草杆菌枯草杆菌摇摇瓶瓶发发酵生酵生产产淀粉淀粉酶酶1（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶产淀粉酶（优选优选）枯草杆菌）枯草杆菌摇摇瓶瓶发发酵生酵生产产淀粉淀粉酶酶2 2二、实验原理二、实验原理酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶）和微生物（细菌、（如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶）和微生物（细菌、（如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶）和微生物（细菌、（如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶）和微生物（细菌、霉菌、酵母）产生，其中工业酶制剂大多数由微霉菌、酵母）产生，其中工业酶制剂大多数由微霉菌、酵母）产生，其中工业酶制剂大多数由微霉菌、酵母）产生，其中工业酶制剂大多数由微生物发酵法生产。生物发酵法生产。生物发酵法生产。生物发酵法生产。由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多由微生物发酵产生。由微生物发酵产生。由微生物发酵产生。由微生物发酵产生。产酶微生物的获得：产酶微生物的获得：产酶微生物的获得：产酶微生物的获得：1 1 1 1、从有关菌种保藏机构购买、从有关菌种保藏机构购买、从有关菌种保藏机构购买、从有关菌种保藏机构购买 2 2 2 2、从自然界分离筛选、从自然界分离筛选、从自然界分离筛选、从自然界分离筛选二、二、实验实验原理原理酶酶可由可由动动物（如胰蛋白物（如胰蛋白酶酶、胃蛋白、胃蛋白酶酶）、植物（如木瓜）、植物（如木瓜3 3产酶微生物的分离筛选方法产酶微生物的分离筛选方法1)1)1)1)样品的采集：从富含酶作用底物的场所采集样品。样品的采集：从富含酶作用底物的场所采集样品。样品的采集：从富含酶作用底物的场所采集样品。样品的采集：从富含酶作用底物的场所采集样品。2)2)2)2)富集培养富集培养富集培养富集培养:投其所好，取其所抗。投其所好，取其所抗。投其所好，取其所抗。投其所好，取其所抗。3)3)3)3)分离获得纯培养分离获得纯培养分离获得纯培养分离获得纯培养(pure culture)(pure culture)(pure culture)(pure culture)的微生物。的微生物。的微生物。的微生物。4)4)4)4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。初筛：选出产酶菌种，以多为主。初筛：选出产酶菌种，以多为主。初筛：选出产酶菌种，以多为主。5)5)5)5)复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。产产酶酶微生物的分离微生物的分离筛选筛选方法方法1)样样品的采集：从富含品的采集：从富含酶酶作用底物的作用底物的场场4 4产酶工艺条件及其调节控制产酶工艺条件及其调节控制保藏细胞保藏细胞保藏细胞保藏细胞细胞活化细胞活化细胞活化细胞活化细胞扩大培养细胞扩大培养细胞扩大培养细胞扩大培养发酵产酶发酵产酶发酵产酶发酵产酶分离纯化分离纯化分离纯化分离纯化酶酶酶酶固定化细胞固定化细胞固定化细胞固定化细胞原生质体原生质体原生质体原生质体固定化原生质体固定化原生质体固定化原生质体固定化原生质体培养基培养基培养基培养基预培养预培养预培养预培养无菌空气无菌空气无菌空气无菌空气产产酶酶工工艺艺条件及其条件及其调节调节控制保藏控制保藏细细胞胞细细胞活化胞活化细细胞胞扩扩大培养大培养发发酵酵产产酶酶5 5酶制剂的发酵生产过程图解酶制剂的发酵生产过程图解酶酶制制剂剂的的发发酵生酵生产过产过程程图图解解6 630升全自动发酵罐升全自动发酵罐30升全自升全自动发动发酵罐酵罐7 7大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。根据底物或产物的物理化学性质固液分离（离心、过滤）1)样品的采集：从富含酶作用底物的场所采集样品。-淀粉酶alpha-amylase产酶工艺条件及其调节控制外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水2)富集培养:投其所好，取其所抗。广泛应用于淀粉糖工业、酒精、啤酒、味精、酿造、烘焙、饲料、纺织退浆、医药等领域。1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。3)分离获得纯培养(pure culture)的微生物。盐酸溶液：c(HCI)=0.固液分离（离心、过滤）产品特性:(物理特性)产酶微生物的分离筛选方法碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。2、测定反应液中底物或产物的变化量。大大规规模液体深模液体深层发层发酵之前，首先在酵之前，首先在实验实验室室对对保藏的目的菌种保藏的目的菌种进进行活化行活化8 8枯草杆菌枯草杆菌摇摇瓶瓶发发酵生酵生产产淀粉淀粉酶酶优选课优选课件件9 9发酵工艺参数的控制发酵工艺参数的控制pH的调节控制的调节控制温度的调节控制温度的调节控制溶解氧的调节控制溶解氧的调节控制泡沫的控制泡沫的控制染菌的控制染菌的控制发发酵工酵工艺艺参数的控制参数的控制pH的的调节调节控制控制1010原理：-淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。固液分离（离心、过滤）用途：耐高温-淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。0条件下，1h液化1g可溶性淀粉所需的酶量，即为1个酶活力单位，以u/g(u/mL)表示。中温-淀粉酶制剂和耐高温-淀粉酶制剂。2，酶活力定义：1ml酶液(1g酶粉)在60，pH6.液体为2000 u/ml酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。n样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。2、测定反应液中底物或产物的变化量。v=-dS/dt=dP/dt连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。原碘液：称取11.酶的反应速度的影响因素液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。2、从自然界分离筛选酶的提取与分离纯化的工艺流程酶的提取与分离纯化的工艺流程发酵液发酵液预处理（细菌絮凝）预处理（细菌絮凝）固液分离（离心、过滤）固液分离（离心、过滤）菌体（胞内酶）菌体（胞内酶）动植物源酶动植物源酶液体（胞外酶）液体（胞外酶）细胞破碎细胞破碎提取提取固液分离固液分离液体液体原理：原理：-淀粉淀粉酶酶制制剂剂能将淀粉分子能将淀粉分子链链中的中的-1,4-葡萄糖苷葡萄糖苷1111工业、食品、饲料工业、食品、饲料浓缩浓缩（蒸发、超滤、沉淀）（蒸发、超滤、沉淀）浓缩液浓缩液配方配方干燥干燥医药、分析、科研医药、分析、科研液体酶液体酶固体酶固体酶浓缩浓缩分离纯化分离纯化（离心、沉淀、膜分离、（离心、沉淀、膜分离、层析、电泳、萃取、结晶）层析、电泳、萃取、结晶）配方、制剂配方、制剂干燥干燥液体酶液体酶固体酶固体酶工工业业、食品、食品、饲饲料料浓缩浓缩浓缩浓缩液配方干燥医液配方干燥医药药、分析、科研液体、分析、科研液体酶酶固体固体1212酶活力的测定酶活力的测定酶活力：酶活力：也称酶活性，酶催化一定化学反应的能力。也称酶活性，酶催化一定化学反应的能力。酶活力大小可用在一定条件下，它所催化酶活力大小可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的起始速率的某一化学反应的起始速率V0表示，即用表示，即用反应起始阶段产物增加反应起始阶段产物增加(或底物减少或底物减少)的速率的速率表示。表示。v=-dS/dt=dP/dt酶酶活力的活力的测测定定酶酶活力：活力：v=-dS/dt=dP/dt1313酶活力测定方法酶活力测定方法酶活力测定的要求：快速、简便、准确。酶活力测定的要求：快速、简便、准确。包括两个阶段：包括两个阶段：1、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；下反应一段时间；2、测定反应液中底物或产物的变化量。、测定反应液中底物或产物的变化量。酶酶活力活力测测定方法定方法酶酶活力活力测测定的要求：快速、定的要求：快速、简简便、准确。便、准确。1414酶活力测定的基本步骤：酶活力测定的基本步骤：(1)(1)根据酶催化的专一性，选择适宜的底物，并配制根据酶催化的专一性，选择适宜的底物，并配制根据酶催化的专一性，选择适宜的底物，并配制根据酶催化的专一性，选择适宜的底物，并配制成一定浓度的底物溶液。成一定浓度的底物溶液。成一定浓度的底物溶液。成一定浓度的底物溶液。(2)(2)根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、pHpH值、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。值、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。值、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。值、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。(3)(3)在一定的条件下，将一定量的酶液和底物溶液混在一定的条件下，将一定量的酶液和底物溶液混在一定的条件下，将一定量的酶液和底物溶液混在一定的条件下，将一定量的酶液和底物溶液混合均匀，适时记下反应开始的时间。合均匀，适时记下反应开始的时间。合均匀，适时记下反应开始的时间。合均匀，适时记下反应开始的时间。(4)(4)反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减少量。少量。少量。少量。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。然后再测定。然后再测定。然后再测定。酶酶活力活力测测定的基本步定的基本步骤骤：(1)根据根据酶酶催化的催化的专专一性，一性，选择选择适宜的适宜的1515终止酶反应的方法：终止酶反应的方法：加热使酶失活；加热使酶失活；加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；调节调节pH值；值；低温终止反应。低温终止反应。终终止止酶酶反反应应的方法：的方法：1616酶活力测定方法酶活力测定方法根据测量操作过程根据测量操作过程终止反应法：在恒温反应系统中进行酶促终止反应法：在恒温反应系统中进行酶促反应，间隔一定时间取样，终止反应，进反应，间隔一定时间取样，终止反应，进行测定。行测定。连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。录结果。酶酶活力活力测测定方法根据定方法根据测测量操作量操作过过程程1717酶活力测定方法酶活力测定方法根据底物或产物的物理化学性质根据底物或产物的物理化学性质化学测定法、光学测定法、气体测定法等。化学测定法、光学测定法、气体测定法等。如化学滴定、比色法、紫外光吸收、荧光如化学滴定、比色法、紫外光吸收、荧光测定、同位素标记底物或称放射性化学法、测定、同位素标记底物或称放射性化学法、酶偶联法等。酶偶联法等。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。常用。酶酶活力活力测测定方法根据底物或定方法根据底物或产产物的物理化学性物的物理化学性质质1818酶的反应速度的影响因素酶的反应速度的影响因素酶的反应速度受到许多条件的影响：底物酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、浓度、温度、pH、金属离子等、金属离子等要准确地测定酶的活力，必须满足这些前要准确地测定酶的活力，必须满足这些前提条件。提条件。最适反应条件：最适底物浓度、最适最适反应条件：最适底物浓度、最适pH、最适温度、最适离子强度、必要的辅助因最适温度、最适离子强度、必要的辅助因子；保证测定的是子；保证测定的是V0，即线性部分，即线性部分酶酶的反的反应应速度的影响因素速度的影响因素酶酶的反的反应应速度受到速度受到许许多条件的影响：底物多条件的影响：底物浓浓1919酶活力单位酶活力单位国际单位：国际单位：国际单位：国际单位：19611961年国际生物化学与分子生年国际生物化学与分子生年国际生物化学与分子生年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件物学联合会规定：在特定条件物学联合会规定：在特定条件物学联合会规定：在特定条件下，每下，每下，每下，每1 min 1 min 催化催化催化催化1 mol 1 mol 的底的底的底的底物转化为产物的酶量定义为物转化为产物的酶量定义为物转化为产物的酶量定义为物转化为产物的酶量定义为1 1 个个个个酶活力单位。这个单位称为国酶活力单位。这个单位称为国酶活力单位。这个单位称为国酶活力单位。这个单位称为国际单位（际单位（际单位（际单位（IUIU）国际上另一个常用的酶活力单国际上另一个常用的酶活力单国际上另一个常用的酶活力单国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（位是卡特（位是卡特（位是卡特（KatKat）。在特定条件）。在特定条件）。在特定条件）。在特定条件下，每秒催化下，每秒催化下，每秒催化下，每秒催化1 mol1 mol底物转化为底物转化为底物转化为底物转化为产物的酶量定义为产物的酶量定义为产物的酶量定义为产物的酶量定义为1 1卡特卡特卡特卡特（KatKat）。）。）。）。酶酶活力活力单单位国位国际单际单位：位：2020酶的比活力酶的比活力酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（件下，单位重量（件下，单位重量（件下，单位重量（mgmg）蛋白质或）蛋白质或）蛋白质或）蛋白质或RNARNA所具有的酶所具有的酶所具有的酶所具有的酶活力单位数。活力单位数。活力单位数。活力单位数。酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。比活力：每比活力：每比活力：每比活力：每mgmg蛋白质中有多少个酶单位。蛋白质中有多少个酶单位。蛋白质中有多少个酶单位。蛋白质中有多少个酶单位。酶比活力酶活力（单位）酶比活力酶活力（单位）酶比活力酶活力（单位）酶比活力酶活力（单位）/mg/mg（蛋白或（蛋白或（蛋白或（蛋白或RNARNA）可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力愈高，表示酶愈纯。在酶纯化过程中，比活力增愈高，表示酶愈纯。在酶纯化过程中，比活力增愈高，表示酶愈纯。在酶纯化过程中，比活力增愈高，表示酶愈纯。在酶纯化过程中，比活力增高。高。高。高。酶酶的比活力的比活力酶酶的比活力是的比活力是酶酶纯纯度的一个指度的一个指标标，是指在特定条件下，是指在特定条件下，单单2121碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶5、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培养基中，接种量为5 mL，共接3 瓶（100ml/250ml瓶），做好标记。0 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液2.4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。温度范围：90-95产品特性:(物理特性)2、测定反应液中底物或产物的变化量。酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等化学测定法、光学测定法、气体测定法等。07 g柠檬酸(C6H8O7H2O)，用水溶解并定容至1 000 mL。酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶）和微生物（细菌、霉菌、酵母）产生，其中工业酶制剂大多数由微生物发酵法生产。能水解淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（Kat）。23 g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)和8.能水解淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。2，酶活力定义：1ml酶液(1g酶粉)在60，pH6.酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。3)分离获得纯培养(pure culture)的微生物。1，求得测试酶液的浓度。淀粉水解酶类淀粉水解酶类凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的片段中的-葡萄糖苷键水解的酶，统称为淀葡萄糖苷键水解的酶，统称为淀粉酶，包括粉酶，包括-淀粉酶，糖化酶，淀粉酶，糖化酶，-淀粉酶，淀粉酶，异淀粉酶，环状糊精生成酶，麦芽寡糖生异淀粉酶，环状糊精生成酶，麦芽寡糖生成酶等。成酶等。广泛应用于淀粉糖工业、酒精、啤酒、味广泛应用于淀粉糖工业、酒精、啤酒、味精、酿造、烘焙、饲料、纺织退浆、医药精、酿造、烘焙、饲料、纺织退浆、医药等领域。等领域。碘、碘化碘、碘化钾钾、-淀粉淀粉酶酶制制剂剂、磷酸、磷酸氢氢二二钠钠、柠柠檬酸、檬酸、盐盐酸、可溶酸、可溶2222-淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉酶alpha-amylasealpha-amylase 能水解淀粉分子链中的能水解淀粉分子链中的能水解淀粉分子链中的能水解淀粉分子链中的-1,4-1,4-葡萄糖苷键，将葡萄糖苷键，将葡萄糖苷键，将葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。产品分类产品分类产品分类产品分类 按产品的适用温度分为按产品的适用温度分为按产品的适用温度分为按产品的适用温度分为:中温中温中温中温-淀粉酶制剂和耐高温淀粉酶制剂和耐高温淀粉酶制剂和耐高温淀粉酶制剂和耐高温-淀粉酶制剂。淀粉酶制剂。淀粉酶制剂。淀粉酶制剂。按产品形态分为：按产品形态分为：按产品形态分为：按产品形态分为：液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。-淀粉淀粉酶酶alpha-amylase2323枯草杆菌枯草杆菌摇摇瓶瓶发发酵生酵生产产淀粉淀粉酶酶优选课优选课件件2424中温中温-淀粉酶淀粉酶中温中温中温中温 -液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus SubtilisBacillus Subtilis)经发酵提炼精制而成。经发酵提炼精制而成。经发酵提炼精制而成。经发酵提炼精制而成。用用用用 途：途：途：途：本产品适用于酒精、啤酒、味精、发酵工业的本产品适用于酒精、啤酒、味精、发酵工业的本产品适用于酒精、啤酒、味精、发酵工业的本产品适用于酒精、啤酒、味精、发酵工业的液化以及纺织退浆等。液化以及纺织退浆等。液化以及纺织退浆等。液化以及纺织退浆等。产品特性：产品特性：产品特性：产品特性：物理特性物理特性物理特性物理特性 外观：棕褐色液体外观：棕褐色液体外观：棕褐色液体外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水溶解性：易溶于水溶解性：易溶于水溶解性：易溶于水 比重：比重：比重：比重：1.15-1.25g/ml 1.15-1.25g/ml 中温中温-淀粉淀粉酶酶中温中温-液化型淀粉液化型淀粉酶酶系用枯草芽系用枯草芽孢孢杆菌（杆菌（Ba2525 化学物性化学物性化学物性化学物性 热稳定性：需热稳定性：需热稳定性：需热稳定性：需Ca Ca 2+2+150ppm 150ppm，最适作用温度，最适作用温度，最适作用温度，最适作用温度 60-7060-70，在，在，在，在70-9070-90之间，随着温度升高，其反之间，随着温度升高，其反之间，随着温度升高，其反之间，随着温度升高，其反应速度加快，但失活也加快，适用于最高达应速度加快，但失活也加快，适用于最高达应速度加快，但失活也加快，适用于最高达应速度加快，但失活也加快，适用于最高达9090的液化过程。的液化过程。的液化过程。的液化过程。pH 6.0-7.0pH 6.0-7.0较为稳定；最适作用较为稳定；最适作用较为稳定；最适作用较为稳定；最适作用pH 6.0pH 6.0，pH5.0pH5.0以下失活严重。以下失活严重。以下失活严重。以下失活严重。产品规格：产品规格：产品规格：产品规格：1 1，中温中温中温中温 -淀粉酶分为固体和液体两种剂型。淀粉酶分为固体和液体两种剂型。淀粉酶分为固体和液体两种剂型。淀粉酶分为固体和液体两种剂型。固体分为固体分为固体分为固体分为 20002000、4000u/g,6000u/g 4000u/g,6000u/g 三种。液三种。液三种。液三种。液体为体为体为体为2000 u/ml 2000 u/ml 2 2，酶活力定义：，酶活力定义：，酶活力定义：，酶活力定义：1ml1ml酶液酶液酶液酶液(1g(1g酶粉酶粉酶粉酶粉)在在在在60 60，pH6.0pH6.0条件下，条件下，条件下，条件下，1 1小时液化可溶性淀粉的克数。小时液化可溶性淀粉的克数。小时液化可溶性淀粉的克数。小时液化可溶性淀粉的克数。化学物性化学物性 2626耐高温耐高温-淀粉酶淀粉酶耐高温耐高温耐高温耐高温 -淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及其降解物内部的其降解物内部的其降解物内部的其降解物内部的-1-1，4 4葡萄糖苷健使得胶状淀粉葡萄糖苷健使得胶状淀粉葡萄糖苷健使得胶状淀粉葡萄糖苷健使得胶状淀粉溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。用途：用途：用途：用途：耐高温耐高温耐高温耐高温 -淀粉酶具有极好的耐热性，能淀粉酶具有极好的耐热性，能淀粉酶具有极好的耐热性，能淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。织退浆等工业上。织退浆等工业上。织退浆等工业上。产品特性产品特性产品特性产品特性 :(:(物理特性物理特性物理特性物理特性)外观：棕褐色液体外观：棕褐色液体外观：棕褐色液体外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水溶解性：易溶于水溶解性：易溶于水溶解性：易溶于水 比重：比重：比重：比重：1.15-1.25g/ml1.15-1.25g/ml耐高温耐高温-淀粉淀粉酶酶耐高温耐高温-淀粉淀粉酶酶采用地衣芽采用地衣芽孢孢杆菌杆菌经经深深层层培培2727 化学物性化学物性化学物性化学物性 钙离子对酶活稳定性的影响：较低浓度的钙离子钙离子对酶活稳定性的影响：较低浓度的钙离子钙离子对酶活稳定性的影响：较低浓度的钙离子钙离子对酶活稳定性的影响：较低浓度的钙离子存在，本品即可有很好的稳定性，对于淀粉的水存在，本品即可有很好的稳定性，对于淀粉的水存在，本品即可有很好的稳定性，对于淀粉的水存在，本品即可有很好的稳定性，对于淀粉的水解，推荐加入解，推荐加入解，推荐加入解，推荐加入50-100ppm50-100ppm钙离子。钙离子。钙离子。钙离子。pHpH范围：范围：范围：范围：5.5-7.0 5.5-7.0 最适最适最适最适6.06.0温度范围：温度范围：温度范围：温度范围：90-9590-95 在喷射液化工艺中瞬间温度达在喷射液化工艺中瞬间温度达在喷射液化工艺中瞬间温度达在喷射液化工艺中瞬间温度达 105-110105-110，仍能，仍能，仍能，仍能有效水解淀粉。有效水解淀粉。有效水解淀粉。有效水解淀粉。产品规格：产品规格：产品规格：产品规格：1 1，耐高温，耐高温，耐高温，耐高温-淀粉酶为液体酶制剂。酶活力：淀粉酶为液体酶制剂。酶活力：淀粉酶为液体酶制剂。酶活力：淀粉酶为液体酶制剂。酶活力：20000u/ml20000u/ml。2 2，酶活力定义：，酶活力定义：，酶活力定义：，酶活力定义：1ml1ml酶液在酶液在酶液在酶液在70 70，pH6.0pH6.0条件下，条件下，条件下，条件下，1 1分钟液化可溶性淀粉的毫克数。分钟液化可溶性淀粉的毫克数。分钟液化可溶性淀粉的毫克数。分钟液化可溶性淀粉的毫克数。化学物性化学物性 2828-淀粉酶制剂的理化要求淀粉酶制剂的理化要求-淀粉淀粉酶酶制制剂剂的理化要求的理化要求2929-淀粉酶制剂的卫生要求淀粉酶制剂的卫生要求-淀粉淀粉酶酶制制剂剂的的卫卫生要求生要求3030三、实验内容三、实验内容微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。发酵生微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。发酵生微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。发酵生微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。发酵生产中多用液体深层发酵法制备酶。产中多用液体深层发酵法制备酶。产中多用液体深层发酵法制备酶。产中多用液体深层发酵法制备酶。大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一定量的液体培养基，在摇床上以一定转速摇动进定量的液体培养基，在摇床上以一定转速摇动进定量的液体培养基，在摇床上以一定转速摇动进定量的液体培养基，在摇床上以一定转速摇动进行恒温培养。行恒温培养。行恒温培养。行恒温培养。摇瓶培养也是实验室模拟生产上进行发酵产酶的摇瓶培养也是实验室模拟生产上进行发酵产酶的摇瓶培养也是实验室模拟生产上进行发酵产酶的摇瓶培养也是实验室模拟生产上进行发酵产酶的一种模拟实验。（摇瓶发酵生产一种模拟实验。（摇瓶发酵生产一种模拟实验。（摇瓶发酵生产一种模拟实验。（摇瓶发酵生产-淀粉酶）淀粉酶）淀粉酶）淀粉酶）发酵液酶活力的测定。发酵液酶活力的测定。发酵液酶活力的测定。发酵液酶活力的测定。三、三、实验实验内容微生物内容微生物发发酵法是酵法是酶酶制制剂剂生生产产的主要方法。的主要方法。发发酵生酵生产产中多中多3131（一）摇瓶发酵产酶（一）摇瓶发酵产酶仪器和试剂仪器和试剂1、菌种：枯草芽孢杆菌、菌种：枯草芽孢杆菌 2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。试纸、玻棒等。（一）（一）摇摇瓶瓶发发酵酵产产酶酶仪仪器和器和试剂试剂3232实验步骤实验步骤1 1、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组1 1支）支）支）支）2 2、培养基的准备：、培养基的准备：、培养基的准备：、培养基的准备：查资料，自行设计查资料，自行设计查资料，自行设计查资料，自行设计3 3、工艺条件：、工艺条件：、工艺条件：、工艺条件：查资料，自行设计查资料，自行设计查资料，自行设计查资料，自行设计4 4、菌种的制备：将斜面菌种在无菌条件下接种至、菌种的制备：将斜面菌种在无菌条件下接种至、菌种的制备：将斜面菌种在无菌条件下接种至、菌种的制备：将斜面菌种在无菌条件下接种至液体种子培养基中，在一定温度、转速下培养。液体种子培养基中，在一定温度、转速下培养。液体种子培养基中，在一定温度、转速下培养。液体种子培养基中，在一定温度、转速下培养。5 5、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培养基中，接种量为养基中，接种量为养基中，接种量为养基中，接种量为5 mL5 mL，共接，共接，共接，共接3 3 瓶（瓶（瓶（瓶（100ml/250ml100ml/250ml瓶），做好标记。瓶），做好标记。瓶），做好标记。瓶），做好标记。实验实验步步骤骤1、菌种：枯草杆菌（已活化好，每、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组组1支）支）3333酶活力：20000u/ml。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。固液分离（离心、过滤）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶00 mL稀碘液为空白，于660 nm波长下，用10 mm比色皿迅速测定其吸光度(A)。国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（Kat）。中温-淀粉酶制剂的酶活力按下式计算:5、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培养基中，接种量为5 mL，共接3 瓶（100ml/250ml瓶），做好标记。对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力愈高，表示酶愈纯。1、菌种：枯草芽孢杆菌能水解淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。固液分离（离心、过滤）2、从自然界分离筛选可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。2，酶活力定义：1ml酶液在70，pH6.-淀粉酶制剂的理化要求07 g柠檬酸(C6H8O7H2O)，用水溶解并定容至1 000 mL。实验步骤实验步骤发酵结束后：检查是否染菌发酵结束后：检查是否染菌固液分离：方法自定；固液分离：方法自定；发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶活力。活力。酶酶活力：活力：20000u/ml。实验实验步步骤发骤发酵酵结结束后：束后：检查检查是否染菌是否染菌3434（二）酶活测定（二）酶活测定原理：原理：-淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕碘呈篮紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。（二）（二）酶酶活活测测定原理：定原理：-淀粉淀粉酶酶制制剂剂能将淀粉分子能将淀粉分子链链中的中的-13535酶活定义酶活定义 中温中温中温中温a a一淀粉酶活力：一淀粉酶活力：一淀粉酶活力：一淀粉酶活力：1g1g固体酶粉固体酶粉固体酶粉固体酶粉(或或或或1 mL1 mL液体酶液体酶液体酶液体酶)，于，于，于，于6060、pH=6.0pH=6.0条件下，条件下，条件下，条件下，1h1h液化液化液化液化1g1g可溶性淀粉所需的酶量，即为可溶性淀粉所需的酶量，即为可溶性淀粉所需的酶量，即为可溶性淀粉所需的酶量，即为1 1个酶活力单位，以个酶活力单位，以个酶活力单位，以个酶活力单位，以u/g(u/mL)u/g(u/mL)表示。表示。表示。表示。耐高温耐高温耐高温耐高温a-a-淀粉酶活力：淀粉酶活力：淀粉酶活力：淀粉酶活力：1g1g固体酶粉固体酶粉固体酶粉固体酶粉(或或或或1 mL1 mL液体酶液体酶液体酶液体酶)，于，于，于，于7070、pH=6.0pH=6.0条件下，条件下，条件下，条件下，1 min1 min液化液化液化液化 1 mg1 mg可溶性淀粉所需的酶量，可溶性淀粉所需的酶量，可溶性淀粉所需的酶量，可溶性淀粉所需的酶量，即为即为即为即为1 1个酶活力单位，以个酶活力单位，以个酶活力单位，以个酶活力单位，以u/g(u/mL)u/g(u/mL)表示。表示。表示。表示。酶酶活定活定义义 中温中温a一淀粉一淀粉酶酶活力：活力：3636实验仪器及试剂实验仪器及试剂仪器：仪器：分光光度计、恒温水浴锅（控温精度分光光度计、恒温水浴锅（控温精度0.1）、移液管、试管、烧杯、容量瓶、玻）、移液管、试管、烧杯、容量瓶、玻璃棒、秒表。璃棒、秒表。实验仪实验仪器及器及试剂仪试剂仪器：器：3737试剂及溶液试剂及溶液试剂：试剂：试剂：试剂：碘、碘化钾、碘、碘化钾、碘、碘化钾、碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。司）。司）。司）。溶液配制：溶液配制：溶液配制：溶液配制：原碘液：称取原碘液：称取原碘液：称取原碘液：称取11.0 g11.0 g碘和碘和碘和碘和22.0 g22.0 g碘化钾，用少量水碘化钾，用少量水碘化钾，用少量水碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至使碘完全溶解，定容至使碘完全溶解，定容至使碘完全溶解，定容至500 mL500 mL，贮存于棕色瓶中。，贮存于棕色瓶中。，贮存于棕色瓶中。，贮存于棕色瓶中。稀碘液：吸取原碘液稀碘液：吸取原碘液稀碘液：吸取原碘液稀碘液：吸取原碘液2.00 mL2.00 mL，加，加，加，加20.0 g20.0 g碘化钾用碘化钾用碘化钾用碘化钾用水溶解并定容至水溶解并定容至水溶解并定容至水溶解并定容至500 mL500 mL，贮存于棕色瓶中。，贮存于棕色瓶中。，贮存于棕色瓶中。，贮存于棕色瓶中。试剂试剂及溶液及溶液试剂试剂：3838试剂及溶液试剂及溶液溶液配制：溶液配制：溶液配制：溶液配制：可溶性淀粉溶液可溶性淀粉溶液可溶性淀粉溶液可溶性淀粉溶液(20 g/L)(20 g/L)：称取：称取：称取：称取2.000 g(2.000 g(精确至精确至精确至精确至0.001 g)0.001 g)可溶性淀粉可溶性淀粉可溶性淀粉可溶性淀粉(以绝干计以绝干计以绝干计以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边于烧杯中，用少量水调成浆状物，边于烧杯中，用少量水调成浆状物，边于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入搅拌边缓缓加入搅拌边缓缓加入搅拌边缓缓加入70 mL70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL100 mL。溶液现配现用。溶液现配现用。溶液现配现用。溶液现配现用。磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液(pH=6.0)(pH=6.0)：称取：称取：称取：称取45.23 g45.23 g磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠(Na(Na2 2HPOHPO4 412H12H2 2O)O)和和和和8.07 g8.07 g柠檬酸柠檬酸柠檬酸柠檬酸(C(C6 6H H8 8OO7 7HH2 2O)O)，用水溶，用水溶，用水溶，用水溶解并定容至解并定容至解并定容至解并定容至1 000 mL1 000 mL。用。用。用。用pHpH计校正后使用。计校正后使用。计校正后使用。计校正后使用。盐酸溶液：盐酸溶液：盐酸溶液：盐酸溶液：c(HCI)=0.1 mol/Lc(HCI)=0.1 mol/L。试剂试剂及溶液溶液配制：及溶液溶液配制：3939实验方法实验方法待测酶液的制备：待测酶液的制备：待测酶液的制备：待测酶液的制备：称取称取称取称取1 g 2 g1 g 2 g酶粉酶粉酶粉酶粉(精确至精确至精确至精确至0.000 1 g)0.000 1 g)或准确吸取或准确吸取或准确吸取或准确吸取酶液酶液酶液酶液1.00 mL1.00 mL，用少量磷酸缓冲液充分溶解，将上，用少量磷酸缓冲液充分溶解，将上，用少量磷酸缓冲液充分溶解，将上，用少量磷酸缓冲液充分溶解，将上清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。用四层纱布过滤，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。用四层纱布过滤，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。用四层纱布过滤，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。用四层纱布过滤，滤液待用。滤液待用。滤液待用。滤液待用。注注注注:待测中温待测中温待测中温待测中温a-a-淀粉酶酶液酶活力控制酶浓度在淀粉酶酶液酶活力控制酶浓度在淀粉酶酶液酶活力控制酶浓度在淀粉酶酶液酶活力控制酶浓度在3.4 3.4 u/mL4.5 u/mLu/mL4.5 u/mL范围内，待测耐高温淀粉酶活力控制酶浓范围内，待测耐高温淀粉酶活力控制酶浓范围内，待测耐高温淀粉酶活力控制酶浓范围内，待测耐高温淀粉酶活力控制酶浓度在度在度在度在60u/mL65u/mL60u/mL65u/mL范围内。范围内。范围内。范围内。实验实验方法待方法待测测酶酶液的制液的制备备：40402、测定反应液中底物或产物的变化量。0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。根据底物或产物的物理化学性质固液分离（离心、过滤）外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。耐高温a-淀粉酶活力：温度范围：90-951、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。热稳定性：需Ca 2+150ppm，最适作用温度 60-70，在70-90之间，随着温度升高，其反应速度加快，但失活也加快，适用于最高达90的液化过程。称取1 g 2 g酶粉(精确至0.001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多由微生物发酵产生。2、测定反应液中底物或产物的变化量。用途：耐高温-淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。固液分离（离心、过滤）00 mL稀碘液的试管中，摇匀，并以0.-淀粉酶alpha-amylase酶活力测定酶活力测定吸取吸取吸取吸取10.0 mL10.0 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液冲液冲液冲液2.5 mL2.5 mL，摇匀后，置于，摇匀后，置于，摇匀后，置于，摇匀后，置于60600.20.2(耐高温耐高温耐高温耐高温-淀粉淀粉淀粉淀粉酶制剂置于酶制剂置于酶制剂置于酶制剂置于70700.20.2)恒温水浴中预热恒温水浴中预热恒温水浴中预热恒温水浴中预热8 min8 min；加入；加入；加入；加入0.5 mL0.5 mL稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反应应应应5 min5 min；立即用移液管吸取立即用移液管吸取立即用移液管吸取立即用移液管吸取1.0 mL1.0 mL反应液，加到预先盛有反应液，加到预先盛有反应液，加到预先盛有反应液，加到预先盛有0.5 0.5 mLmL盐酸溶液和盐酸溶液和盐酸溶液和盐酸溶液和5.00 mL5.00 mL稀碘液的试管中，摇匀，并稀碘液的试管中，摇匀，并稀碘液的试管中，摇匀，并稀碘液的试管中，摇匀，并以以以以0.5 mL0.5 mL盐酸溶液和盐酸溶液和盐酸溶液和盐酸溶液和5.00 mL5.00 mL稀碘液为空白，于稀碘液为空白，于稀碘液为空白，于稀碘液为空白，于660 660 nmnm波长下，用波长下，用波长下，用波长下，用10 mm10 mm比色皿迅速测定其吸光度比色皿迅速测定其吸光度比色皿迅速测定其吸光度比色皿迅速测定其吸光度(A)(A)。根据吸光度查表根据吸光度查表根据吸光度查表根据吸光度查表A.1A.1，求得测试酶液的浓度。，求得测试酶液的浓度。，求得测试酶液的浓度。，求得测试酶液的浓度。2、测测定反定反应应液中底物或液中底物或产产物的物的变变化量。化量。酶酶活力活力测测定吸取定吸取10.0 4141枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。产品特性:(物理特性)中温a一淀粉酶活力：(4)反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减少量。这个单位称为国际单位（IU）（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶酶活力测定的要求：快速、简便、准确。001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。也称酶活性，酶催化一定化学反应的能力。产酶工艺条件及其调节控制0条件下，1分钟液化可溶性淀粉的毫克数。温度范围：90-95由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多由微生物发酵产生。发酵结束后：检查是否染菌加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；层析、电泳、萃取、结晶）凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的-葡萄糖苷键水解的酶，统称为淀粉酶，包括-淀粉酶，糖化酶，-淀粉酶，异淀粉酶，环状糊精生成酶，麦芽寡糖生成酶等。1、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；耐高温-淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及其降解物内部的-1，4葡萄糖苷健使得胶状淀粉溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。可溶性淀粉溶液(20 g/L)：称取2.中温-淀粉酶制剂和耐高温-淀粉酶制剂。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。称取1 g 2 g酶粉(精确至0.碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。2)恒温水浴中预热8 min；固液分离（离心、过滤）碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶活力。酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。称取1 g 2 g酶粉(精确至0.发酵结束后：检查是否染菌根据底物或产物的物理化学性质0 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液2.1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。酶活力测定的要求：快速、简便、准确。产酶工艺条件及其调节控制要准确地测定酶的活力，必须满足这些前提条件。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。用四层纱布过滤，滤液待用。（蒸发、超滤、沉淀）n样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。热稳定性：需Ca 2+150ppm，最适作用温度 60-70，在70-90之间，随着温度升高，其反应速度加快，但失活也加快，适用于最高达90的液化过程。枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶1、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。1g固体酶粉(或1 mL液体酶)，于60、pH=6.中温-液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)经发酵提炼精制而成。最适反应