免疫原和免疫球蛋白课件

免疫原和免疫球蛋白免疫原和免疫球蛋白Immunogen and Immunoglobulins免疫原和免疫球蛋白1免疫原免疫原免疫原的基本特性免疫原的基本特性影响免疫原特性的因素影响免疫原特性的因素其他重要的免疫细胞激活剂其他重要的免疫细胞激活剂免疫球蛋白的结构及装配免疫球蛋白的结构及装配免疫球蛋白的异质性及功能免疫球蛋白的异质性及功能免疫球蛋白的人工制备免疫球蛋白的人工制备免疫原免疫原的基本特性影响免疫原特性的因素其他重要的免2免疫原免疫原免疫原的概念免疫原的概念免疫原免疫原（immunogen）指能够启动、激发和诱导免疫应答（包括固有免疫和适应性免疫）的物质，由固有分子模式（innate molecular pattern,IMP）和抗原（antigen,Ag）组成。抗原抗原是指经由T、B细胞表面的抗原受体（TCR、BCR）识别，能激活T、B细胞产生特异性免疫应答，并与应答产物（特异性抗体和淋巴细胞）起反应的物质。免疫原的分类免疫原的分类 固有免疫识别由PAMP和DAMP等构成的固有分子模式（IMP）；适应性免疫识别的免疫原是抗原。免疫原(immunogen)固有分子模式(innate molecular pattern,IMP)抗原(antigen,Ag)启动和诱导固有免疫应答启动和诱导适应性免疫应答 免疫原命名 免疫原功能免疫原：固有分子模式与抗原免疫原：固有分子模式与抗原免疫原免疫原的概念免疫原固有分子模式抗原启动和诱导启动和诱导3 固有分子模式涵盖PAMP、DAMP及其它已发现或有待确认的各种模式成份。病原相关分子模式 损伤相关分子模式激活NK细胞的固有分子模式IMPIMP的分类的分类脂蛋白肽聚糖磷脂 磷壁酸 表面蛋白 脂磷壁酸 脂多糖(LPS)表面蛋白 G+菌 G-菌细胞膜外膜 G+和G-细菌胞壁中的多种PAMP 肽聚糖（peptidoglycan,PGN），磷壁酸（teichoic acid,TA）,脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,脂磷壁酸（lipoteichoic acid,LTA）固有分子模式涵盖PAMP、DAMP及其它已发4受损受损组织和坏死细胞等释放的多种组织和坏死细胞等释放的多种DAMP及其受体及其受体硫酸乙酰肝素透明质酸钠RNADNA尿酸结晶 HMGB1 ATP HSP IL-1 TLR4 CD44 TLR4TLR3 TLR9 NLRP3 TLR2/4 P2Y11/TLR4 IL-1R TLR4,SRB,CRP RAGE P2X7R 受损组织 坏死细胞 S100A8 饱和 S100A9 脂肪酸OxLDL OxCE活化细胞及其它 NLRP3：带PYD结构域的NOD样受体蛋白3；HMGB1：高速泳动族框蛋白1；RAGE：高度糖基化终末产物受体；P2Y11/P2X7R：嘌呤源受体；HSP：热休克蛋白；OXLDL:氧化低密度脂蛋白；OxCE:氧化胆固醇酯；CRP:C反应蛋白；S100A8/A9：S100家族蛋白;SRB:B型清道夫受体，即CD36。PAMP 核酸:CpG,dsRNA 脂类:lipid A 蛋白:PGN DAMP 核酸：ATP 脂类：OxLDL 蛋白：HSP,HMGB1 TLR NLR RLR CRP RAGE 血凝素 免疫原 IMP PRR 激活基因病原体受损细胞及胞外基质 TNF IL-6 IL-1 IL-18 IFN-固有分子模式固有分子模式 PAMP 和和 DAMP 经由经由 PRR 介导炎症效应介导炎症效应受损组织和坏死细胞等释放的多种DAMP及其受体硫酸透明RNA5激活激活NK细胞活化性受体的固有分子模式细胞活化性受体的固有分子模式（本图为第三章图3-10的一部分，可参阅原图）MICA/B,ULBP3,HAB7-H6,HAIgG FcHLA-EHLA-A,HLA-C NKG2D DAP10 NKp44 DAP12NKp30CD3-FcRNKp46CD3-FcRCD16CD3-FcRCD94/NKG2C/EDAP12KIR2DS4DAP12MICA/B：MHC I类链相关分子A和B；ULBP：U16结合蛋白；HA：血细胞凝集素；KIR：杀伤细胞免疫球蛋白样受体ITAMYxxM激活NK细胞活化性受体的固有分子模式MICA/B,ULBP36抗原的分类抗原的分类根据诱生抗体时是否需要根据诱生抗体时是否需要ThTh细胞参与分类细胞参与分类T细胞依赖性抗原（T dependent antigen,TD-Ag）T细胞非依赖性抗原（T independent antigen,TI-Ag）根据抗原与机体的亲缘关系分类根据抗原与机体的亲缘关系分类异嗜性抗原（heterophilic antigen）异种抗原（xenogenic antigen）同种异型抗原（allogenic antigen）自身抗原（autoantigen）独特型抗原（idiotypic antigen）根据抗原进入抗原提呈细胞的方式分类根据抗原进入抗原提呈细胞的方式分类内源性抗原(endogenous antigen)外源性抗原(exogenous antigen)其他分类其他分类抗原的分类根据诱生抗体时是否需要Th细胞参与分类7抗原表位抗原表位 免疫细胞仅识别抗原大分免疫细胞仅识别抗原大分子上的一个特定的部分，称为子上的一个特定的部分，称为表位表位(epitope)(epitope)或抗原决定簇或抗原决定簇(antigenic determinant)(antigenic determinant)。抗原表位概念抗原表位概念抗原表位分类抗原表位分类半抗原半抗原-载体载体共同抗原表位与交叉反应共同抗原表位与交叉反应免疫原的基本特性免疫原的基本特性抗原表位 免疫细胞仅识别抗原大分子上的一个特定的部分，8 Ab、BCR和TCR对抗原表位的识别A.TCR对抗原T细胞表位的识别。TCR识别的表位是经过APC降解的序列表位。T细胞表位通常位于蛋白抗原内部，蛋白抗原经APC细胞摄取和降解后，抗原表位肽与自身MHC分子结合，并被提呈于APC表面，T细胞的TCR识别T细胞表位肽的同时，必须同时识别MHC分子。B.Ab（BCR）对抗原B细胞表位的识别。BCR或者抗体识别的表位有两种类型：序列表位和构象表位。BCR和抗体直接识别天然状态的B细胞表位。Ab(BCR)1Ab(BCR)2构象表位序列表位天然抗原T 表位APCMHC T 细胞细胞APC TCR MHC T表位天然抗原BATCR仅识别APC加工后经由MHC分子提呈的抗原肽，后者包含T细胞表位 9T细胞表位与细胞表位与B细胞表位的特性细胞表位的特性 T T细胞表位细胞表位细胞表位细胞表位 B B细胞表位细胞表位细胞表位细胞表位识别表位受体识别表位受体 TCRTCR BCR BCR MHCMHC分子的参与分子的参与 必需必需 无需无需表位性质表位性质 蛋白质蛋白质 多肽、多糖、脂多糖类和有机化合物多肽、多糖、脂多糖类和有机化合物表位大小表位大小 8-108-10个氨基酸残基个氨基酸残基5-155-15个氨基酸残基或单糖、核苷酸个氨基酸残基或单糖、核苷酸 12-18 12-18个氨基酸残基个氨基酸残基表位类型表位类型 线性表位线性表位 线性表位或构象表位线性表位或构象表位表位位置表位位置 抗原分子任意部位抗原分子任意部位 抗原分子表面抗原分子表面T细胞表位与B细胞表位的特性10A hapten-carrier conjugate contains multiple copies of the hapten-a small nonimmunogenic organic compound such as dinitrophenol(DNP)-chemically linked to a large protein carrier such as bovine serum albumin(BSA).Immunization with DNP alone elicits no anti-DNP antibodies,but immunization with DNPBSA elicits three types of antibodies.Of these,anti-DNP antibody is predominant,indicating that in this case the hapten is the immunodominant epitope in a hapten-carrier conjugate,as it often is in such conjugates.A hapten-carrier conjugate con11 不不同同抗抗原原之之间间存存在在的的相相同同或或相相似似抗抗原原表表位位称称为为共共同同抗抗原原表表位位(common(common epitope)epitope)。一一种种抗抗原原诱诱生生的的抗抗体体对对另另一一种种具具有有相相同同或或相相似似决决定基的抗原的反应，称为交叉反应（定基的抗原的反应，称为交叉反应（cross reactioncross reaction）。）。不同抗原之间存在的相同或相似抗原表位称为共同抗原表位12影响免疫原特性的因素影响免疫原特性的因素一、决定免疫原免疫原性的因素一、决定免疫原免疫原性的因素1.1.决定决定IMPIMP免疫原性的免疫原性的因素因素（核酸类核酸类IMPIMP的免疫原性的结构基础与核酸长度与化学修饰相关的免疫原性的结构基础与核酸长度与化学修饰相关）2 2.决定决定AgAg免疫原性的因素免疫原性的因素抗原抗原分子的理化性质分子的理化性质机体机体的生物学特征的生物学特征抗原抗原进入机体的方式和途径等进入机体的方式和途径等二、决定免疫原反应原性的因素二、决定免疫原反应原性的因素影响免疫原特性的因素一、决定免疫原免疫原性的因素13n异物性异物性n化学性质化学性质n分子质量大小分子质量大小n结构的复杂性结构的复杂性n分子构象分子构象n易接近性易接近性n物理状态物理状态易接近性易接近性抗原分子的理化性质抗原分子的理化性质异物性易接近性抗原分子的理化性质14Reactivity of antisera with various haptens结构的复杂性结构的复杂性Reactivity of antisera with va15n宿主的遗传因素宿主的遗传因素(应答格局差异应答格局差异)n年龄、性别与健康状态年龄、性别与健康状态 机体机体的生物学特性的生物学特性抗原抗原进入机体的方式和途径等进入机体的方式和途径等宿主的遗传因素(应答格局差异)机体的生物学特性抗原进入机体16 MHCII类分子 抗原肽 TCR链APCThSAgII 类分子 TCR 链APCTh 超抗原超抗原激活激活T细胞机制示意图细胞机制示意图传统的蛋白质抗原在MHC抗原沟槽内被提交，与T细胞的TCR的抗原结合槽结合，从而激活特异性T细胞克隆（上图）；超抗原通过与TCR的V链外侧结合，交联TCR与MHC II类分子，从而活化众多的T细胞克隆，而不论TCR的抗原特异性如何（下图）。其他重要的免疫细胞激活剂其他重要的免疫细胞激活剂一、超抗原一、超抗原 某些抗原物质，只需要极低浓度（110 ng/ml）即可非特异性激活220之多的T细胞克隆，产生极强的免疫应答，这类抗原称之为超抗原（superantigen,SAg）。MHCII类分子 抗原肽 TCR链ThSAgI17免疫原和免疫球蛋白课件18二、佐剂二、佐剂 预先或与抗原同时注入体内可增强机体对抗原的免疫预先或与抗原同时注入体内可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质，称应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质，称为佐剂（为佐剂（adjuvant）。）。佐剂作用的佐剂作用的主要机制主要机制：改变改变抗原物理性状，帮助抗原缓释，延长抗原在体内潴抗原物理性状，帮助抗原缓释，延长抗原在体内潴 留留时间，如脂质体和矿物油等；时间，如脂质体和矿物油等；刺激刺激单核单核-巨噬细胞系统，增强其对抗原的加工和提呈；巨噬细胞系统，增强其对抗原的加工和提呈；刺激刺激淋巴细胞增殖分化，增强和放大免疫应答。淋巴细胞增殖分化，增强和放大免疫应答。TLR的天然配体和激动剂的天然配体和激动剂参见表参见表4-4二、佐剂TLR的天然配体和激动剂参见表4-419Postulated mode of action of some commonly used adjuvantsPostulated mode of action of s20人人小鼠小鼠T T细胞细胞B B细胞细胞T T细胞细胞B B细胞细胞ConA（刀豆蛋白（刀豆蛋白A）+PHA（植物血凝素）（植物血凝素）+PWM（商陆丝裂原）（商陆丝裂原）+LPS（脂多糖）（脂多糖）+SPA(葡萄球菌蛋白葡萄球菌蛋白A)+作用于人和小鼠作用于人和小鼠T T、B B淋巴细胞的丝裂原淋巴细胞的丝裂原三、丝裂原三、丝裂原 丝裂原丝裂原（mitogen）亦称有丝分裂原，因可致细胞发生）亦称有丝分裂原，因可致细胞发生有丝分裂而得名。有丝分裂而得名。T、B淋巴细胞表面表达多种丝裂原受体，淋巴细胞表面表达多种丝裂原受体，可对相应丝裂原刺激产生强烈增殖反应，被广泛应用于体可对相应丝裂原刺激产生强烈增殖反应，被广泛应用于体外免疫细胞活性的确证。外免疫细胞活性的确证。人小鼠T细胞B细胞T细胞B细胞ConA（刀豆蛋白A）+21一、免疫球蛋白的结构一、免疫球蛋白的结构二、免疫球蛋白的装配及分泌二、免疫球蛋白的装配及分泌免疫球蛋白的结构及装配免疫球蛋白的结构及装配 免免疫疫球球蛋蛋白白（immunoglobulin,Ig）即即抗抗体体（antibody,Ab），是是B细细胞胞被被B细细胞胞抗抗原原表表位位特特异异性性刺刺激激后后增增殖殖分分化化为为浆浆细细胞胞所所产产生生的的效效应应免免疫疫分分子子，介介导导体体液液免免疫疫。免免疫疫球球蛋蛋白白可可分分为为分分泌泌型型(secreted Ig,SIg)和和膜膜型型(membrane Ig,mIg)，前前者者主主要要存存在在于于血血液液及及组组织织液液中中，发发挥挥抗抗感感染染功功能能；后后者者是是B细胞表面的抗原受体（细胞表面的抗原受体（BCR,mIgM）。）。一、免疫球蛋白的结构免疫球蛋白的结构及装配 免22一、免疫球蛋白的结构一、免疫球蛋白的结构1.1.基本结构基本结构（重链、轻链及其结构域（重链、轻链及其结构域 可变区、恒定区和绞链区）可变区、恒定区和绞链区）2.2.其它成分其它成分3.Ig3.Ig的水解片段的水解片段一、免疫球蛋白的结构1.基本结构23重链、轻链及其结构域重链、轻链及其结构域 重链、轻链及其结构域 24Schematic diagram of complementary-determining region of antibody binding to antigenic epitope Structure of a complex between a peptide derived from HIV protease and an Fab fragment from an anti-protease antibody(left)and comparison of the Fab structure before and after peptide binding(right).In the right panel,the red line shows the structure of the Fab fragment before it binds the peptide and the blue line shows its structure when bound.There are significant conformational changes in the CDRs of the Fab on binding the antigen.These are especially pronounced in the light chain CDR1(L1)the heavy chain CDR3(H3).CH2 CH3 CDR1 CDR2 CDR3 CDR1 CDR2 CDR3 铰链区 VL -SS-SS-FR1 FR2 FR3 FR4 可变区（可变区（V V区）恒定区（区）恒定区（C C区）区）Variable region;Constant region高变区高变区：Hypervariable region(HVR);互补决定区互补决定区：Complement determining region(CDR)Schematic diagram of complemen25免疫原和免疫球蛋白课件26绞链区绞链区绞链区27J链链分泌片分泌片其它成分其它成分J链分泌片其它成分28木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶水解片段水解片段 木木瓜瓜蛋蛋白白酶酶（papain）水水解解IgG得得到到三三个个片片段段：两两个个相相同同的的部部分分即即抗抗原原结结合合片片段段（fragment antigen binding,Fab）一一个个结结晶晶片片段段（fragment crystalizable,Fc）。）。胃蛋白酶胃蛋白酶水解片段水解片段 胃胃蛋蛋白白酶酶（pepsin）水水解解IgG产产生生一一个个具具有有双双价价抗抗体体活活性性的的F(ab)2段段和若干小分子多肽片段（和若干小分子多肽片段（pFc）。IgIg的水解片段的水解片段木瓜蛋白酶水解片段Ig的水解片段29 Synthesis,assembly,and secretion of the immunoglobulin molecule.The heavy and light chains are synthesized on separate polyribosome(polysomes).The assembly of the chains to form the disulfide-linked immunoglobulin molecule occurs as the chains pass through the cisternae of the rough endoplasmic reticulum(RER)into the Golgi apparatus and then into secretory vesicles.The main figure depicts assembly of a secreted antibody.The inset depicts a membrane-bound antibody,which contains the carboxyl-terminal transmembrane segment.This form becomes anchored in the membrane of secretory vesicles and then is inserted into the cell membrane when the vesicles fuse with the membrane.二、免疫球蛋白的装配及二、免疫球蛋白的装配及分泌分泌 Synthesis,assembly,an30 Expression of membrane forms of and heavy chains by alternative RNA processing.(a)Structure of rearranged heavy-chain gene showing C and C exons and poly-A sites.(b)Structure of m transcript and m mRNA resulting from polyadenylation at site 2 and splicing.(c)Structure of m transcript and m mRNA resulting from polyadenylation at site 4 and splicing.Both processing pathways can proceed in any given B cell.Expression of membrane 31上图IgA二聚体J 链粘膜表皮细胞分泌IgA的浆细胞粘膜腔分泌片IgA二聚体pIgR固有层 IgA二聚体的胞吞转运二聚体的胞吞转运固有层浆细胞产生IgA和J链，二者聚合成二聚体而分泌至浆细胞胞外的粘膜表皮细胞固有层，该处与表皮细胞分泌的多聚Ig受体（pIgR）即分泌片相结合，在pIgR的引导下，通过表皮细胞的内吞和转运，使IgA二聚体得以穿越上皮细胞而分泌至粘膜腔，称为胞吞转运（transcytosis）。在粘膜腔中IgA二聚体与分泌片介离，行使效应功能。上图IgA二聚体J 链粘膜表皮细胞分泌IgA的浆细胞粘膜腔分32免疫球蛋白的异质性及功能免疫球蛋白的异质性及功能一、免疫球蛋白的类型一、免疫球蛋白的类型（类及亚类、型和亚型）（类及亚类、型和亚型）二、免疫球蛋白的血清型二、免疫球蛋白的血清型三、免疫球蛋白的功能和特性三、免疫球蛋白的功能和特性四、各类免疫球蛋白的生物学特性四、各类免疫球蛋白的生物学特性免疫球蛋白的异质性及功能一、免疫球蛋白的类型33免疫球蛋白的类型免疫球蛋白的类型 在在同同种种属属的的所所有有个个体体内内，根根据据免免疫疫球球蛋蛋白白重重链链C C区区的的氨氨基基酸酸组组成成和和抗抗原原特特异异性性不不同同，将将免免疫疫球球蛋蛋白白的的重重链链分分为为5 5种种：、，与与此此对对应应的的IgIg分分为为IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、IgDIgD、IgE IgE 5 5类类（classclass）。在同一类在同一类IgIg中，根据其重链抗原性和二硫键的数目和位置的不同，又可分为亚类（中，根据其重链抗原性和二硫键的数目和位置的不同，又可分为亚类（subclasssubclass）。）。免疫球蛋白的类型 在同种属的所有个体内，根据免疫球蛋白34IgG有IgG1IgG4四个亚类；IgA有IgA1和IgA2两个亚类；IgM有IgM1和IgM2两个亚类；IgD和IgE尚未发现亚类。IgG有IgG1IgG4四个亚类；IgA有IgA1和IgA35Chain composition of the five immunoglobulin classes in humans 正常人血清免疫球蛋白正常人血清免疫球蛋白:约约2:12:1，而小鼠为，而小鼠为20:120:1。亚型亚型:链链190AA190AA为亮氨酸时称为亮氨酸时称OZ(+);OZ(+);为精氨酸时称为精氨酸时称OZ(+)OZ(+)在在同同种种属属的的所所有有个个体体内内，根根据据IgIg轻轻链链C C区区的的氨氨基基酸酸组组成成和和抗抗原原特特异异性性的的不不同同，可可将将IgIg的的轻轻链链分分为为2 2型型（typetype）：和和，与与此此对对应应的的IgIg也也分分为为 和和 两两型型。在在同同一一型型IgIg中中，根根据据其其轻轻链链C C区区N N端端氨氨基基酸酸排列的差异，可分为亚型（排列的差异，可分为亚型（subtypesubtype）。）。M1,M2Chain composition of the five 36免疫原和免疫球蛋白课件37 免疫球蛋白分子上有三种不同的免疫球蛋白分子上有三种不同的抗原决定簇，即同种型、同种异型和抗原决定簇，即同种型、同种异型和独特型抗原决定簇独特型抗原决定簇。同种型同种型（isotypeisotype）是指同一种属）是指同一种属所有个体的所有个体的IgIg分子共有的抗原特异性分子共有的抗原特异性标志。标志。同种异型同种异型（allotypeallotype）指同一种）指同一种属不同个体间的属不同个体间的IgIg分子所具有的不同分子所具有的不同抗原特异性标志，为遗传性标志。抗原特异性标志，为遗传性标志。独特型独特型（idiotypeidiotype）指同一个体）指同一个体不同不同B B细胞克隆产生的细胞克隆产生的IgIg分子所特有分子所特有的抗原特异性标志，其表位又称为独的抗原特异性标志，其表位又称为独特位特位 (Idiotope)(Idiotope)，主要存在于，主要存在于V V区，区，为遗传性标志。为遗传性标志。免疫球蛋白的血清型免疫球蛋白的血清型 免疫球蛋白分子上有三种不同的抗原决定簇，即同种型、同38 同种型差异 同种异型差异 独特型差异抗体的血清型示意图抗体的血清型示意图Ig有3种血清型：同种型，指同一种属所有个体Ig分子共有的抗原特异性标志，其表位存在于Ig C区；同种异型，指同一种属不同个体间Ig分子所具有的不同抗原特异性标志，其表位主要存在于Ig C区，少部分存在于V区；独特型，指每个Ig分子所特有的抗原特异性标志，其表位存在于V区的CDR区域。同种型差异 同种39免疫球蛋白的功能和特性免疫球蛋白的功能和特性1.识别和结合抗原识别和结合抗原2.激活补体激活补体3.调理作用调理作用4.抗体依赖细胞介导的细胞毒作用抗体依赖细胞介导的细胞毒作用5.介导超敏反应介导超敏反应6.免疫调节作用免疫调节作用免疫球蛋白的功能和特性识别和结合抗原40抗体的四项主要功能抗体的四项主要功能免疫球蛋白（抗体）具有多种生物学功能，首先，其可变区特异性结合与病原体或毒素表面与介导感染或者毒力相关的表位结合，使病原体或毒素失去感染和毒力，称为中和作用。其次，抗体与相应抗原表位结合，可激活补体经典激活途径，从而形成攻膜复合物溶裂解病原体。第三，抗体与相应病原体结合后，其恒定区Fc段通过结合 Fc受体（FcR）与具有FcR表达该受体的吞噬细胞结合，此为调理作用，增强吞噬细胞对病原体的吞噬杀伤作用。如调理的免疫细胞是NK细胞，则可增强NK细胞的ADCC作用。毒素受体毒素抗体细胞 中和作用中和作用 调理作用调理作用 激活补体杀伤作用激活补体杀伤作用 参与参与ADCCFcRAb吞噬细胞吞噬溶酶体激活补体系统 抗体攻膜复合物表面抗原IgG表面抗原 FcRIII杀伤靶细胞 NK 抗体的四项主要功能毒素受体毒素抗体细胞 中和作用 41各类免疫球蛋白的生物学特性各类免疫球蛋白的生物学特性参见表参见表4-7各类免疫球蛋白的生物学特性参见表4-742免疫球蛋白的人工制备免疫球蛋白的人工制备一、多克隆抗体一、多克隆抗体二、单克隆抗体二、单克隆抗体三、基因工程抗体三、基因工程抗体四、嵌合抗体和改型抗体四、嵌合抗体和改型抗体五、抗体片段及其衍生形式五、抗体片段及其衍生形式免疫球蛋白的人工制备一、多克隆抗体43 The conventional polyclonal antiserum produced in response to a complex antigen contains a mixture of monoclonal antibodies,each specific for one of the four epitopes shown on the antigen(inset).In contrast,a monoclonal antibody,which is derived from a single plasma cell,is specific for one epitope on a complex antigen.The outline of the basic method for obtaining a monoclonal antibody is illustrated here.多克隆抗体多克隆抗体 The conventional polyclo44上为 A 抗原（含3 个不同表位）免疫小鼠后的脾细胞，产生针对不同表位的抗体；下为不产生抗体和 HGPRT酶的骨髓瘤细胞。两种细胞混合后，以PEG进行融合。在加有HAT的培养基中，融合细胞生长，其余未融合的细胞死亡。稀释至每孔单个细胞后，检测上清中抗体的特异性，选择能分泌抗表位1 抗体的杂交瘤。通过腹腔注射，对选择出的杂交瘤细胞作克隆扩增，获取针对表位1的单抗。单克隆抗体制备流程单克隆抗体制备流程单克隆抗体单克隆抗体上为 A 抗原（含3 个不两种细胞混合后，在加有HAT的培稀45 To make antibodies with fully human protein sequences is to use transgenic strains of mice in which mouse antibody gene expression is suppressed and effectively replaced with human antibody gene expression.In these transgenic mice,the mouse genes for creating antibodies have been inactivated and replaced by human antibody genes.the HuMAb-Mouse transgenic strains contain key gene sequences from unrearranged human antibody genes that code for both the heavy and light chains of human antibodies.Because genes determine what proteins are made,the transgenic mice make human antibody proteins.基因工程抗体基因工程抗体 To make antibodies with46 Chimeric and hybrid monoclonal antibodies engineered by recombinant DNA technology.(a)Chimeric mouse-human monoclonal antibody containing the VH and VL domains of a mouse monoclonal antibody(blue)and CL and CH domains of a human monoclonal antibody(gray).(b)A chimeric monoclonal antibody containing only the CDRs of a mouse monoclonal antibody(blue bands)grafted within the framework regions of a human monoclonal antibody is called a“humanized”monoclonal antibody.(c)A chimeric monoclonal antibody in which the terminal Fc domain is replaced by toxin chains(white).(d)A heteroconjugate in which one half of the mouse antibody molecule is specific for a tumor antigen and the other half is specific for the CD3/T-cell receptor complex.嵌合抗体和改型抗体嵌合抗体和改型抗体 Chimeric and hybrid mon47 FR:人鼠 嵌合 鼠源抗体 人源化抗体 100人源化 嵌合抗体 半人源化抗体 人源化抗体 改型人源化抗体 66人源化 90人源化CDR HLHLHLH：重链L:：轻链CDR：互补决定区FR：骨架区FR人源化抗体的种类人源化抗体的种类鼠源抗体对于人具有很强的免疫原性，限制了临床使用；将鼠源抗体可变区以外部分换成人源，为嵌合抗体；仅保留可变区CDR区为鼠源氨基酸的抗体为人源化抗体；为改善CDR区域的空间构象，将部分人源FR区域氨基酸置换为鼠源，可增强抗体亲和力。FR:鼠源抗体 人源化抗体 嵌合抗体 48抗体活性片段衍生的多种基因工程抗体抗体活性片段衍生的多种基因工程抗体 根据Fv抗体(VH,VL)(A)、Fab抗体(B)和单链抗体(ScFv)(C)分别构建的多种基因工程抗体。ABC抗体片段及其衍生形式抗体片段及其衍生形式抗体活性片段衍生的多种基因工程抗体ABC抗体片段及其衍生形式49p经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量pStudyConstantly,AndYouWillKnowEverything.TheMoreYouKnow,TheMorePowerfulYouWillBe写在最后经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量写50感谢聆听不足之处请大家批评指导Please Criticize And Guide The Shortcomings结束语讲师：XXXXXX XX年XX月XX日 感谢聆听结束语讲师：XXXXXX 51